Введение к работе
. Актуальность темы. Хламидийный аборт овец распространен поч ти во'Всех странах мира, занимающихся разведением этого вида :сі "ьот'ннх, а такие зарегистрирован и в ряде овцеводческих районов назіей страны.
Эта инфекция наносит больной экономический улерб хозяйствам, ЕЬ'ралаюзіийея в недополучении и гибели приплода (ь отдельккх случаях с гиОдью маточного поголовья). снижением жвоп массы тела .тавотных, ухудшением шерстной продуктивности, нарушением селекционной и племенной работы, затратами на проведение ветеринарно-санитарных и профилактических мероприятий ( КІЛ. даравзев. i'JCV !.
Проблема лечения и профилактики хламидипноге аоорта сгец не нашла окончательного решения. Как показал опит capyCe.vj:L:x .; отечественных учених, эффект от актибиотикотерапии достигается і:о всегда . (К. Henmng et al. , 198G; А. А. Шатісин и др., 1905)- Единственная возможность профилактики хламидиозов - специфическая сак цинация (D. Bowen, 1983; Т. Попов, С.Мартинов, 1905; j. 'htloz. 19S6).
В налей стране широко применяется инактивированная эмульсин -вакцина против хлачидиозного аборта, овец. Культивирование и накопление антигенов хламидий для ее изготовления в производствен ных условиях осуществляется на развивакяихся куриных эмбрионах (Ю.Д. Караваев, 198?).
Существующий метод трудоемок, требует сложной очистки препарата (J. Harper, St. Dvryer et ai. , 1967); отрицательными факторами являются сезонные колебания чувствительности куриных эмб рионов к хламидиям ( Е. Jawet" et al. , 1962 ), необходимость использования эмбрионов от птицы, не подвергавшие воздействию ап-
- 2 - .
тикотиков и иммунизации живыми противовирусными вакцинами (. А. А. Авакян, ЕЛ. Попов, 1976) и др.
Определенные преимущества имеет метод культивирования хлами^ дий в культурах клеток,* обладающих большей однородностью и дающих возможность ускоренного завершения опытов. Поскольку при моделировании персиотентной хламидийной инфекции в условиях целостного организма невозможно учесть множество взаимодействующих факторов, ,\ то изучение персиотентной инфекции в культуре клеток позволяет \ раскрыть некоторые механизмы взаимодействия возбудителя и клетки-:. хозяина (А. А. Шаткин, 1986).
Для культивирования хламидий предложены первичнотрипсини-эированные культуры клеток ( J. Bland, 1935; E.Weiss et al. , 1954; А. А. Авакян, ЕЛ. Попов, 1965; J. V. Harris, 1984; T.E Щербань и др.,1984), диплоидные культуры клеток сельскохозяйственных животных (Г. П. Панкова и др., 1977), перевиваемые клеточные линии лабораторных животных (V. М. Весегга et al. , 1974; I.E. Anderson, 1986), культура клеток зеленой мартышки (J. Tessler et al. ,1983) и человека (L. Schindarov et al., 1964).-
Однако все эти поиски, за исключением некоторых, не привели-к разработке стабильной технологии . выращивания хламидий' (С. psittacl). в культуре клеток.
Цель работы.
Разработка метода культивирования С. psittacl ( пггамм К- 8 ВИЭВ) в культуре клеток млекопитающих и получение "культураль-ного" антигена для изготовления вакцин и диагностикумов.
Задачи исследования:
осуществить подбор культур клеток для вьіраоївания хламидлй;
адаптировать "эмбриональный" штамм С. psittaci К- Q ВИЭВ к перевиваемой линии клеток;
разработать метод длительного культивирования перснстентно (хронически) инфицированной хламидиями линии клеток почки сайги
(ПО);
- изучить развитие возбудителя в первично зараженной и пер
снстентно инфицированной хламидиями культуре клеток ПС и биологи
ческие свойства "культурального" итамма К- 3 ВИЭВ.
- изучить возможность использования реакции нейтрализации с '
применением "культурального" антигена для ретроспективной диаг
ностики хламидиоза.
Научная новизна.
1. Осуществлена адаптация возбудителя хлзмидийного аборта
овец (штамм К- 8 ВИЭВ) к перевиваемой клеточной линии ПС, в ре
зультате чего получена линия клеток, перснстентно инфищірованная
С. ps і ttac і.
-
Изучены биологические свойства "культурального" штамма К-8 ВИЭВ и особенности развития возбудителя в первично и перснстентно инфицированной линиях клеток ПС. Установлено, что адаптированные к культуре клеток хламидии сохраняют вирулентность и имму-ногенные свойства для куриних эмбрионов и лабораторных .тавотных.
-
Проведены цитологические и электронномикроскопические.ис-
следования взаимодействия С. psittaci с.клеткой. Предложена схема развития хламидий в первично инфицированной и персистентно инфицированной линиях клеток ПС.
Практическая значимость работы.
-
Разработан метод длительного культивирования хламидий в персистентно инфицированной культуре клеток ПС с целью получения "культурального" антигена для диагностики хламидиозов и изготовления вакцинного препарата
-
Материалы диссертационной работы включены в "Методические рекомендации по культивированию возбудителя хламидийного аборта овец в перевиваемой клеточной линии почки сайги".
-
"Культуральный" хламидийный антиген может быть испольво-ван в иммунологических реакциях.
Апробация работы. '
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Конференции молодых ученых ВИЭВ (1990г.);. на III Всесоюзном совещании " Культивирование клеток животных и человека", г. Пушино (1990 г); на Всесоюзной научно- технической конференции, "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной ин^ женерии в ветеринарной медицине", г. Нижний Новгород (1990г.); на заседании секции Всесоюзного биохимического общества,МВД (1990г.)
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в двух работах.
- Б -
Объем и структура работы.