Введение к работе
Актуальность проблеми. Биологические инсектициды на основе энтомопатогенных бактерий Baciilus thuringiensis iBt) широко используются а системе мер борьбы с вредными насекомыми. Выделенные к настоящему времени штаммы Bt патогенны лишь для части вредных насекомых, что диктует необходимость поиска новых штаммов со специфической инсектицидной активностью. Кроме того, расширение масштабов производства экономически зажных инсектицидов выдвигает ряд технологических задач, а том числе и борьбу с фаговой инфекцией.
В связи о этим становится актуальным как изучение лизоге-нии штаммов Bt - потенциальных источников эндогенной фаговой инфекции, так и сравнительная характеристика фагов из культур Bt, выделенных в различных климато-географических зонах мира.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение фагов, источником которых лвляются типовые штаммы Bt. В связи с этим были сформулированы следующие задачи :
оценить степень распространенности лизогении среди типовых штаммов Bt, выделенных в отдаленных зонах мира;
с использованием различных методов индукции выделить из типовых штаммов, не изученных по признаку лизогении, фаги и провести их сравнительный анализ;
характеризовать выделенные фаги по морфологии, физико-химическим параметрам і'мол. массы ДНК, чувствительность фаговых ДНК к зндонуклеазам рестрикции, число кодируемых фаговым геномом белков и их мол.массы);
использовать коллекцию выделенных из типовых культур фагов для выявления систем рестрикции-модификации у типовых штаммов Bt;
- с помощью новых фагов предложить схему фаготипирования Bt.
Научная новизна и практическая значимость работы.
- установлена лизогенность Ц ранее не исследованных штаммов
Bt. По классификации Аккерманна фаги относятся к морфологичес
кой группе Б1. Но ультраструктуре выделенные .рати отнесены к
двум подгруппам. Лз штаммов Bt var.tochigiensis,- vunnanensis.
Shandongіensіз и mexicanensls выделены фаги с поперечными дис
ками на хвостовом отростке, несвойственные для фагов, выделен-
них ранее из культур BL. По морфологии эти Фаги не отличаются от ранее описанного Фага ТЫО, выделенного при производстве биологического инсектицида "Битоксиоациллина";
на основе рестрикшюнного анализа и морфологических характеристик, изученные фаги разделены на 5 групп. ДНК фагов каждой группы образуют равное число фрагментов с одинаковой электрофо-ретической подвижностью при гидролизе рядом использованных рестриктаз;
геномы разных фагов кодируют от 4 до 8 белков с молекулярными массами, рассчитанными по электрофоретической подвижности, от 12 кДа до 210 кДа. Обнаружена корреляция между морфологией фагов, характером рестрикции их ДНК и набором фаговых белков;
с использованием коллекции новых фагов и на основе их спектра литического действия составлена схема фаготипирования. 5о типовых штаммов Bt, принадлежащих к 45 серовариантам, распределены между 37 фаготипами;
показано, что фаги, выделенные из штаммов Bt var. tochigi-ensis, yunnanensis и shandongiensis, преодолевают иммунитет бактерии-хозяина и образуют негативные колонии на культурах, из которых они были выделены;
обнаружено наличие системы модификации у двух штаммов Bt var. Japonensis и var. leesis и продемонстрирована их специфичность .
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит ив введения, обзора литературы, описания материалов и методов, экспериментальной части, заключения и выводов. Диссертация изложена на -/^страницах машинописного текста, включает^бтаблии и ^рисунков. Библиография состоит из /^-наименований.