Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛВИ. Борьба с инфекционными заболеваниями, повышение качества эпиднадзора требуют совершенствования методов микробиологической диагностики инфекционных заболеваний и индикации их возбудителей в объектах окружающей среды. Классические методы бактериологической диагностики, основанные на выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации, не могут сегодня удовлетворить запросам практического здравоохранения.
В этой связи разработаны и внедряются в практику новые поколения методик, не связанных с выделением чистой культуры. Это физико-химические, генетические и иммунологические методы анализа. Именно последние являются в настоящее время наиболее распространенными. Высокая специфичность, достаточная простота реализации делают методики, основанные на реакции взаимодействия антиген-антитело (АГ-АТ), конкурентноспособными, а возможность получения результатов в течение короткого промежутка времени создает им неоспоримые преимущества /Бойд У., 1969; Петров Р.В., 1982; Томпсон Р.А., 1983; Фримель X., Брон Й., 1986/.
Отличаясь простотой постановки, доступностью компонентов, экспрессностыо, экономичностью, что не мало важно в современных условиях, эти реакции занимают достойное место в арсенале методов микробиологической диагностики. Основным недостатком методик, основанных на реакциях иммунитета осадочного типа (РА, РПГА, РТПГА, латекс-, коагглютинации и др.), является субъективный характер учета результатов. Предложенный еще в конце прошлого века принцип "4-х плюсов" не может сегодня удовлетворить ни исследователей, ни практических работников, использующих агглютинационные тесты. Приводимая далее выписка из наставления по применению эритроци-тарных диагностикумов:"... титром антител испытуемой сыворотки считается последнее разведение сыворотки, которое еще дает четко выраженную агглютинацию эритроцитов с интенсивностью не менее, чем на 2+, при условии, что в предыдущих лунках реакция шла на 4+ и на 3+"- наглядно иллюстрирует сказанное.
В то же время достижения современной оптики и электроники позволили создать устройства, регистрирующие результаты реакции агглютинации (РА) на основе изменения размеров ее компонентов. Одним из таких приборов является телевизионная микрометрическая система для серологической диагностики инфекционных заболеваний и иммуноиндикации их возбудителей, разработанная на одном из предп-
риятий города Саратова в содружестве с кафедрой микробиологии Саратовского медицинского университета.
Показана принципиальная возможность использования этой системы для регистрации различных вариантов РА (бактериальной РА, РИГА и др.) /Иванов Н.Р., Тупикин Д.В., Шуб Г.М., 1988; Тупикин Д.В., Шуб Г.М., 1988/.
Существуют и зарубежные технические аналоги этой системы, основанные на принципе анализа видеоизображения: SYSTEM 3 фирмы ANALYTICAL MEASURING SYSTEMS LTD (Великобритания), "Видас" фирмы KONTRON ELEKTRONIK (Германия), ОРТОМАХ 5 и VIDS 3 фирмы AI ТЕКТ-R0N (Германия), LEITZ MIAMED MF фирмы WILD LEITZ (Германия), которые однако для регистрации результатов РА не использовались.
ЦЕЛЬ РАБОТИ. Разработка и апробация в условиях практической работы конкретных методик оценки состояния иммунной прослойки населения, серодиагностики инфекционных заболеваний и иммуноиндика-ции их возбудителей, основанных на принципе телевизионного микрометрического анализа (ТМА) результатов РА.
-
Применить метод ТМА для оперативного текущего контроля качества эритроцитарных диагностикумов.
-
Применить метод ТМА для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотках крови различных возрастных групп населения города Саратова.
-
Применить метод ТМА для серодиагностики сальмонеллеза и бруцеллеза.
4.. Применить метод ТМА для индикации патогенных энтеробакте-рий в молоке.
В работе получены следующие основные результаты:
метод ТМА позволяет проводить оперативный текущий контроль качества эритроцитарного дифтерийного антигенного диагностикума;
метод ТМА с успехом использован для объективной оценки РИГА по выявлению дифтерийного антитоксина в сыворотках крови;
метод ТМА сокращает сроки получения результатов и позволяет существенно увеличить объем проводимых исследований, что особенно важно в условиях массовых эпидемических обследований;
метод ТМА позволяет объективно оценивать состояние иммунной прослойки и отбирать контингенти, подлежащие ревакцинации;
метод ТМА обладает большей чувствительностью, титры выявляемо-
- 5 ~
го антитоксина в 2-8 раз превышают таковые в сравнении с визуальным методом учета результатов РПГА;
показано, что особую группу риска по дифтерии составляют иностранные студенты, прибывшие для обучения в г.Саратов.
метод ТМА эффективно использован для серодиагностики сальмо-неллеза и бруцеллеза. Показаны его экономичность, простота, высокая чувствительность и специфичность.
разработан, комиссионно испытан и апробирован метод индикации патогенных энтеробактерий в молоке, который по своей чувствительности (5*103 м.т./мл), специфичности и экономичности не уступает другим методам иммуноиндикации и позволяет обнаруживать не Аг, а клетки возбудителей.
Таким образом, разработаны и использованы в практическичес-кой работе оптимальные режимы применения метода ТМА для решения широкого круга диагностических задач. Показаны преимущества учета результатов агглютинационных тестов методом ТМА перед традиционными визуальными методами.
Впервые показана возможность использования метода ТМА для контроля качества эритроцитарных диагностикумов и отбраковга некондиционных серий препаратов.
Впервые метод ТМА использован для оценки напряженности противодифтерийного иммунитета.
Метод ТМА впервые применен при серодиагностике сальмонеллеза и бруцеллеза. Показаны его преимущества перед традиционными методами.
Впервые разработана и апробирована методика, основанная на использовании метода ТМА для индикации патогенных энтеробактерий в молоке.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧЖЖСТЬ РАБОТЫ.
-
Метод ТМА использован для оперативного текущего контроля качества эритроцитарного дифтерийного антигенного диагностикума.
-
Метод ТМА использован в практической работе Саратовского городского центра санэпиднадзора для оценки напряженности противодифтерийного иммунитета различных возрастных групп населения города Саратова.
-
Метода ТМА использован в практической работе по серодиагностике бруцеллеза и сальмонеллеза у больных, находившихся на ле-
чении в стационаре клиники инфекционных болезней второй городской клинической больницы имени В.И.Разумовского.
4. Метод ТМА использован в практической работе в баклабора-тории Саратовского городского центра санэпиднадзора для индикации патогенных энтеробактерии в молоке.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы обсуждались на научно-практической конференции "Современные проблемы медицинской науки" /Саратов, 1994 г./, научной конференции молодых ученых и студентов Саратовского медицинского университета /Саратов, 1995 г./, на 56-й научно-технической конференции "Диагностика, информатика и метрология - 95" /Санкт-Петербург, 1995 г., 4-6 июль/, на Международном симпозиуме "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями" /Санкт-Петербург, 1995 г., 6-10 июнь/.
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка используемой литературы, включающего /^отечественных и ^зарубежных авторов. Она изложена на і73 страницах машинописи, содержит 29 таблиц и 21 рисунок.