Введение к работе
Актуальность исследования. В практике работы баклабораторий шитарно-эпидемиологических учреждений (СЭУ) и госпиталей евозможно обойтись без музейных штаммов микроорганизмов, эддерживаемых в жизнеспособном состоянии, которые используются в икробиологической диагностике и, в частности, для проверки качества ітательньїх сред. Отсутствие во многих СЭУ наборов музейных культур грицательно сказывается на качестве их работы (Максимов А.Н. Обухов ).И., 1995). Причиной этого служит то, что в распоряжении іклабораторий нет достаточно совершенного метода сохранения узейных культур в физиологически и генетически неизменном состоянии, спользуемые практическими лабораториями метод периодических їресевов и хранение под слоем минерального масла имеют ряд ^достатков, к которым относятся большие материальные и временные ітратьі, необходимость соблюдения регламента пересевов, недостаточная :зопасность для персонала лабораторий (Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. >61,ИваницкаяЛ.Пссоавт. 1982, Сидякина Т.М. 1988,Heckly R.J. 1978, apage S.P. с соавт. 1973), и, самое главное, эти методы не гарантируют хранение всех культуральных особенностей микроорганизмов при яогократных пассажах (Сидякина Т.М. 1988, Heckly R.J. 1978). овременные же методы хранения культур (криоконсервировакие, блимационное высушивание), несмотря на их всеобщее признание и )фективность, не могут быть использованы в условиях практических ібораторий, так как требуют специального дорогостоящего юрудования и сложного технологического обслуживания.
Разработанный в последнее время метод контактно-сорбциошюго іезвоживания (КСО) с использованием влагоемких сорбентов (А.с. SU(||) 30138 А! С 12N 1/04.1992г.) для сохранения туляремийного вакцинного гамма №15, Е. Coli НВ 101 и S. enteritidis var. Isatchenko в отличие от ;тодов сублимационного высушивания и криоконсервации прост в :ализации, не требует специального оборудования, особых >офессиональных навыков и'позволяет длительно сохранять ікроорганизмьі в жизнеспособном состоянии с одновременной абилизацией их свойств. В доступной нам литературе отсутствуют стематические исследования по изучению вопросов длительного хранения различных штаммов микроорганизмов, высушенных методом НО, и не имеется сведений о возможности высушивания этим методом ізбудителя дифтерии, токсигенные штаммы которого должны держаться в баклабораториях любой категории. Для определения ксигенности С. diphtheriae необходим заведомо токсигенный штамм
данного вида с воспроизводимыми показателями экспресс дифтерийного токсина. Сохранение тест-культуры возбудителя дифтер методом пересевов и подслоем минерального масла, регламентированы методическими указаниями, недостаточно надежно и может привести потере культурой токсигенности. Это может создать определенні трудности в диагностике, особенно в отдаленных СЭУ, госпиталях, г нет возможности быстрой доставки нового токсигенного штамма.
Сохраняемость микроорганизмов в процессе высушивания последующего хранения связана с их различной реакцией на воздейств внешних факторов окружающей среды (Голдовский A.M. 1986). завис от множества факторов (Сидякина Т.М. 1988, Heckly R.J. 1978). Мет КСО для хранения музейных культур опробован лишь на нескольких вид микроорганизмов и показал, в принципе, перспективность е использования. Применение этого метода высушивания для друг; микроорганизмов требует проведения дополнительных исследований ] изучению ряда факторов, влияющих на выживаемость конкретно микроорганизма при высушивании и последующем хранении.
Исходя из этого целью нашей работы явилось разработка и научн обоснование условий получения контактно-сорбционным методом сухі дифтерийной культуры, обладающей высокой стабильность биологических свойств при длительном хранении.
В соответствии с поставленной целью были определены следующ задачи:
-
Оценить возможность получения методом КСО сухі жизнеспособной культуры возбудителя дифтерии.
-
Определить зависимость выживаемости культуры п] высушивании от возраста, концентрации клеток, времени экспозиции среде высушивания и выбрать оптимальный режим подготовки культуї к высушиванию.
-
Выявить стабилизирующий эффект компонентов ере; высушивания на культуру в процессе обезвоживания и хранения п] различных температурных режимах.
-
Изучить влияние химического состава и температуї регидратирующей жидкости на восстанавливаемость сухой культуры.
[ 5. Изучить выживаемость клеток, сохранность ими юрфологических, культуральных, биохимических и токсигенных свойств процессе длительного хранения.
В качестве отдельной задачи:
6. Оценить возможность использования КСО для сохранения [екоторых типовых диагностических и вирулентных штаммов шкроорганизмов, необходимых для работы в практических аклабораториях, а также изолятов патогенных бактерий.
Впервые получена культура Corynebacterium diphtheriae, высушенная онтактно-сорбционным методом, сохраняющая в полном объеме ультурально-биохимические и токсигенные свойства при длительном ранении.
Впервые исследованы и определены оптимальные условия ехнологического процесса, связанные с подготовкой, обезвоживанием, ранением и восстановлением культуры коринебактерий дифтерии.
Показана принципиальная возможность использования метода КСО ля создания набора музейных культур и сохранения изолятов патогенных актерий.
Доказано, что выживаемость при высушивании зависит от возраста леток, их концентрации, времени экспозиции в среде высушивания, гмпературы сорбента, состава и температуры регидратирующей идкости, условий и сроков хранения. Показана необходимость спользования в составе среды высушивания высоких концентраций їхаров.
Результаты исследований отражены в 2 рационализаторских редложениях и опубликованы в виде 2 статей.
Разработаны технологические условия высушивания возбудителе diphtheriac методом КСО, позволяющие длительно сохранять эти штамд Данный метод может быть использован в практике рабо баклабораторий СЭУ госпиталей любого уровня, а также в сист< здравоохранения. Метод КСО позволяет значительно снизить затраты поддержание музейного штамма традиционным методом и обеспечив, надежное длительное хранение. Полученные результаты исследовак реализованы в "Методических рекомендациях по контакті сорбционному обезвоживанию токсигенного штамма С. diphtheriae ' внедрены в работу баклабораторий Омского областного ЦСЭ Самарского ВМФ, используются в учебном процессе Омск государственной медицинской академии. Теоретическое значеь представляют результаты исследований сохраняемости жизнеспособно! коринебактерий и их свойств в зависимости от условий подготовю высушиванию, обезвоживания, сроков и условий хранения последующего восстановления культуры С. diphtheriae.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертациони работы доложены на расширенной научной конференции кафед микробиологии Омской государственной медицинской акадсмиї участием врачей-микробиологов г. Омска.
Положения, выносимые на защиту:
-
Выживаемость коринебактерий дифтерии, высушенн контактно-сорбционным методом, зависит от возраста культур концентрации клеток, времени эквилибрации, состава среды высушиваг и условий последующего восстановления.
-
Культурально-биохимические и токсигенные свойства сух культуры после ее восстановления сохраняются полностью и независи от длительности и температурного режима хранения.
-
Метод КСО позволяет консервировать и длительно сохраю штаммы дифтерии в условиях обычной бактериологической лаборатор]
-
Метод может быть применен для консервации музейных штам^ других видов микроорганизмов, а также для сохранения изоляї патогенных бактерий.
Работа изложена на 111 страницах машинописного текста, шюстрнрована 17 таблицами и 11 рисунками.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о тгериалах и методах исследований, 5 глав собственных исследований, Осуждения результатов, выводов. Библиография содержит 122 источника, ! них 82 отечественных и 40 иностранных.