Введение к работе
Актуальность проблемы.
Заболевания органов пищевареїшя широко распространены среди населения Республики Узбекистан и в других странах, особенно им подвержены лица молодого и трудоспособного возраста. Наибольший удельный вес среди них имеют хронический гастрит (ХГ), язвенная болезнь желудка (ЯБЖ) и 12-перстной кишки (ЯБДПК) (У.А.Аскаров с соавт., 1985; А.Т.Алимов с соавт., 1994; Ю.И.Калган, В.В.Вахидов, 1994; АЛ.Гребнев, А.А.Шептулин, 1995; S.Caldwell, R. McCallum, 1988; J.Smith, B.Garner, 1993). Однако, несмотря на длительный период изучения этих заболеваїшй, многие аспекты их этиологии, патогенеза, клиники, лечения и профилактики остаются недостаточно исследованными, а получегапые результаты - спорными.
В последние годы появились многочисленные публикации, посвященные спиралевидному микрооргагагзму Helicobacter pylori (HP), частота обнаружения которого при указанных гастродуоденальных заболеваниях (ГДЗ) достигает 70-95% (Л.И.Аруин, 1990; И.М.Байбеков с соавт., 1992; Ф.Ю.Гариб с соавт., 1993; И.Э.Нарбаева, 1994; В.М.Бондаренко с соавт., 1995; S.Caldwell, R.McCallum, 1988; G.Gasbarrini et al., 1995). Результаты бактериологических, гистологических и иммунологических исследований достаточно убедительно доказывают важную роль HP в этиологии и патогенезе ГДЗ, об этом свидетельствуют также опыты по успешному самозараженню добровольцев чистой культурой HP (М.А.Рожавин, В.И.Струк, 1989; C.Bohemen et al., 1989; M.Blaser, 1990; J.Holton, 1995). Описанные случаи выявления хеликобактеров у практически здоровых лиц не противоречат сведениям об их патогенності!, а говорят лишь о возможности инаппаратного или легкого течения болезни, что имеет место при большинстве инфекционных заболеваний (Л.И.Аруин, 1990; C.Goodwin et al., 1985; A.Lee, S. Hazell, 1988).
Однако, несмотря на значительное число публикаций, проблема взаимосвязи HP с болезнями органов пищеварения далека еще от своего окончательного решения и требует проведения дальнейших исследований. В частности, основополагающим в этиологической диагностике хеликобактериоза остается вопрос усовершенствования имеющихся, а также разработки и внедрения новых методов обнаружения HP и определения их антибиотикограммы, более простых и экономичных. В связи с опасностью для больного частого проведешш гастродуодено-скопий и взятия биоптатов слизистой оболочки желудка (СОЖ) для исследования, предпочтительнее будут менее инвазивные методики. Весьма актуальным является дальнейшее изучение вирулентности выделяемых культур HP и корреляции ее с тяжестью вызываемых этими микроорганизмами ГДЗ.
Недостаточно изученным является состояние местных защитных механизмов в желудке и 12-иерстной кишке при наличии HP в слизистой оболочке, особенно в динамике, хотя именно их повреждение играет, по-видимому, основную роль в ульцерогенезе и заживлении язвы наряду с другими факторами.
Практически отсутствуют работы, посвященные изучению микроэкологии HP, в частности, их взаимодействию с другими микроорганизмами, обнаруживаемыми в желудке.
Весьма противоречивы данные о хронобиологических аспектах HP-инфекции, частоты выделения и обсемененности этими микроорганизмами СОЖ, тогда как такие данные очень важны для прогнозирования обострений ГДЗ и проведения своевременных профилактических мероприятий.
Необходимо продолжение изучения чувствительности клинических штаммов HP к различным антимикробным средствам, а также другим антимикробным факторам для повышения эффективности антимикробной терапии хеликобактериоза и проведения оперативной ее коррекции при появлении резистентных культур возбудителя.
Следует также отметить, что в Республике Узбекистан до сих пор не было сообщешш о выделении чистых культур HP от больных с ГДЗ и, следовательно, изучении их биологических свойств и сравнении этих данных с результатами исследователей из других стран.
Наличие вышеперечисленных нерешенных вопросов данной проблемы и обусловило актуальность и необходимость выполнения настоящей работы.
Цель работы:
Разработка эффективной системы микробиологической диагностики хеликобактериоза и на ее основе изучение микроэкологии возбудителя и его чувствительности к антимикробным факторам.
Задачи исследования:
-
Изучить частоту обнаружения и обсеменешюсть HP СОЖ и желудочного сока при гастродуодеиалыюи патологии при использовашш традиционных методов и провести сравнительную оценку их эффективности.
-
Модифицировать известные и разработать новые методы определения HP применительно к условиям практических лабораторий.
-
Оценить эффективность модифицированных и разработанных методов по сравнению с известными при исследовшпш патологического материала от больных с ГДЗ и в модельных опытах с лабораторными штаммами HP ин витро.
-
Провести анализ частоты выявления HP при гастродуоденальной патологии в зависимости от различных факторов (вида материала, пола и возраста больных, нозологии, состояния неспецифической резистентности, сопутствующей микрофлоры, месяца исследовашш).
-
Изучить микроэкологические связи HP с некоторыми эндоген-
ными н экзогенными факторами (структуры СОЖ, факторы неспецифической резистентности, сорбенты), а также основные биологические свойства этих микроорганизмов и их вирулентность.
6. С помощью разработанного методического обеспечения изучить чувствительность выделенных штаммов HP к антимикробным факторам (антибиотики, эубиотики, химически модифицированные материалы, лазерное излучение, умеренная гипертермия, электроактивированные водные растворы) и предложить наиболее перспективные из них для лечения и профилактики хеликобактериоза.
Научная новизна.
Разработана эффективная система микробиологического определения HP при ГДЗ, которая, благодаря усовершенствованию всех звеньев микробиологического анализа (забор и доставка материала, экспресс-диагностика, культивирование, идентификация, тестирование антимикробной чувствительности) и рациональному их применению, позволила не только достоверно повысить высеваемость HP, но и получить количественную характеристику обсеменешюсти исследуемого материала.
Доказана пригодность исследования желудочного сока больных с ГДЗ для определения их пораженное HP. Установленная высокая обсемененность этого материала хеликобактерами обусловила постановку вопроса об его потенциальной опасности в качестве фактора передачи НР-инфекцни.
Впервые изучена частота обнаружения и степень обсеменешюсти HP желудочного сока у больных с ГДЗ и влияние на эти показатели различных факторов (пол и возраст больных, вид заболевания, сопутствующая флора, хронобиологические факторы, содержание лизоцима в слюне и соке).
Впервые проведено комплексное изучение микроэкологических связей HP, включающее их взаимодействие с морфологическими структурам! СОЖ, факторами неспецифической резистентности, грибами рода Кандида, угольными сорбентами.
Впервые в Республике Узбекистан (1989 г.) выделены чистые культуры HP и изучены их основные биологические свойства, включая определение вирулентности.
Впервые произведено комплексное изучение чувствительности клинических штаммов HP к широкому ряду антимикробных факторов при использовании оригинального метода определения резистентности HP (Патент № 2346 РУз). Протестированы антимикробные препараты, биологически активные вещества, эубиотики, лазерное излучение, химически модифицированные материалы, умеренная гипертермия, электроактивированные водные растворы (ЭАВР), на основании чего предложены перспективные пути для лечения и профилактики хеликобактериоза (Патент № 2731 РУз).
Практическая значимості*.
Разработанная система микробиологического определения HP и его антибиотикограммы позволяет усовершенствовать диагностику ГДЗ, ассоциированных с HP, делает ее более доступной для практических лабораторий.
Представленные данные о чувствительности HP к широкому ряду антимикробных факторов могут быть использованы для проведения адекватной антимикробной терапии хеликобактериоза.
Учет полученных данных о влиянии хронобиологических факторов и неспецифической резистентности на течение хеликобактериоза позволяет целенаправленно планировать и проводить профилактические и лечебные мероприятия н контролировать их эффективность.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Разработанная система микробиологической диагностики хеликобактериоза проста, доступна и эффективна.
-
Исследование желудочного сока больных с ГДЗ позволяет получить полноценную информацию о наличии и степени обсеменен-ности пилорическими хеликобактерами и состояиш факторов неспецифической резистентности, а также контролировать эффективность проводимой антимикробной терапии.
З.Частота обнаружения и обсемененность HP желудочного сока больных с ГДЗ связаны с уровнем факторов иеспецифической резистентности и изменяются под влиянием хронобиологических факторов
4. Высокая чувствительность HP к ряду антимикробных факторов (эубиотики, лазерное излучение, умеренная гипертермия,ЭАВР) расширяет возможности для повышения эффективности и адекватности антимикробной терашш и профилактики ГДЗ, ассоциированных с HP.
Апробация работы.
Материалы и основные положения диссертационной работы доложены: на межотделенческой конференции Ташкентского филиала ВНЦХ (Ташкент, 1988 ), семинаре врачей-бактериологов (Ташке-нт,1989), научно-практической конференции "Хроническое воспалешіе и заболевшшя органов пищеварения" (Харьков,1991), научной конференции "Профилактика и диагностика инфекционных заболевании" (Ташкент,1991), научной конференции "Микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика инфекционных заболеваний" (Ташкент, 1991), научной конференции Института медицинской микробиологии Университета г.Галле (Галле,ФРГ,1991), конференции по химии и физике высокомолекулярных соединений (Ташкент,1993), международной конференции "Современные проблемы науки о полимерах"(Таш-кент,1995), Республиканской конференции "Медицинское обеспечение населения в чрезвычайных ситуациях" (Ташкент,1995), заседаниях Ученого совета НЦХ им.академика В.Вахидова (Ташкент, 1992,1996), научной конференции научно-лабораторного отдела НЦХ им.академика В.Вахидова (Ташкент,1996), Республиканской научной конференции с международным участием "Новые аспекты диагностики,
лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения" (Ташкент, 1996). Республиканской научной конференции с международным участием "Новое в диагностике и лечении заболеваний органов пищеварения" (Ташкент, 1997), межлабораторном семинаре ТашНИИВС (Ташкент, 1997), Ученом совете НИИ микробиологии АН РУз (Ташкент, 1997), научном семинаре II ТашГосМИ (Ташкент, 1997), апроба-ционном совете НИИЭМИЗ МЗ РУз (Ташкент, 1997).
Публикации.
По материалам диссертации опубликованы 62 печатные работы.
Внедрение а практику.
По результатам исследований подготовлены, утверждены Минздравом Республики Узбекистан и изданы методические рекомендации "Выделение и идентификация Хеликобактер гашори при гастродуо-деналыюй патологии", которые внедрены в процесс преподавания и практическую деятельность I ТашГосМИ (кафедра микробиологии, кафедра госпитальной терапии), ИТашГосМИ (лаборатория научно-диагностического центра), ТашИУВ (кафедра микробиологии), НЦХ пм.академика В.Вахидова (бактериологическая лаборатория, отделение желудочно-кишечной хирургии), Центральной клинической больницы N2 МСО при МЗ РУз, Бухарской областной клинической больницы, Хорезмской областной больницы.
На разработанные методы получено 3 патента Республики Узбекистан и 14 удостоверений на рационализаторские предложения. Результаты исследований были отражены в приказе МЗ РУз № 42 от 30.01.97 г. (Приложение 2).
Настоящая работа выполнена в соответствии с планом НИР Научного центра хирургии пм.академика Вахидова МЗ РУз в рамках комплексной темы: "Морфологические основы барьерно-защитной функции органов пищеварительной системы, их изменения при патологии, эн-теросорбщш и лазерном воздействии" (номер гос.регистрации 0192.00063) и входит в Программу фундаментальных исследований 6ФО: "Исследования актуальных проблем совремешюй биологии (молекулярной, клеточной биологии, микробиологии, биохимии, физиологии, генетики, ботаники, зоологии) и почвоведения в части задания 2.36.5.2.
Объем и структура диссертации.