Фимбриальные адезины 3 типа K. pneumoniae и разработка способа их определения Землянихина, Людмила Петровна

Введение к работе

Актуальность проблем. Проблема оетрих китечянх ;:иСекций (ОКИ) до настоящего времени остается одной из актуальных. 3 последние года отмечается рост этах заболеваний у дєтеіі раннего возраста, обусловленный такими условно-патогекки.'.и кшкрооргавязнати (УІЕ.І) как кие (Зоя вялы, протей, энтеробактер, ситробактер я др. (С.С. Газатула-на и соавт., І9Є8; А.Г. Лосева и соавт., IS88; А.А. Порукова, 1920; Е.И. Хубка и соавт., 1990; ЗЛІ. Кузнецов л соавт., ISSI; А.Г. Боковой, Е.И. Кисевяч, 1992), характеркзушіЕііся тяїелимг осложнениями, вплоть до летальних исходов. З структуре смертности дат?," рав-яего возраста доля ОКИ среДп инфекционных нрачг.н составляет 5G-70/S (В.Ф. Учайоа, 1991). Несмотря на наличие високої! смертности от килечных заболевание, от 15 до 80S* случаев ОДІ остаются этвояогя-чеохи квраспшфрованкьидд (С.С. Гизатулана я соавт., 1888; В. 2. УчаЙ:-кан, I9SI; СБ. Позняк я соавт., 1992).

Одной из причин низкою пропокта раезпфровкг. Олії латается отсут-ствяв доступных я надеалнх г.'.зтодоэ ди$фрепяяагкп этиологических агентов от представителен нормальной иахро'рлорг казечпика.

Пра опенке этиологической ролл УІЕ.Ї гаянеє значеш'.е врэдается выявления среди них итаииов, ойдадаяцах ^аетораія патогенності], в . том чзеле и адгззавкостьа (СТ. Мшшакааов а соавт., ISS3; Ю.З. 2зе-дчук, 1985; В.ІЛ. Бондаренко я соавт., 1987; 2.И. Яолапук я соавт., 1989; М.М. Баркус, 1990; С.С Глзатулааа а.соавт;, І99Ї).

3 связи с этяи представляет интерес изучение' екгезивностп.п адгезннов, микроорганизмов, являщахся возбудителями ОКИ, среди которых Klebsiella pneumoniae занимает одно і:з ведуэтх мест (ОЛ. Кодоткова, 1938; С.С Бвлокрнеенко, 1920"; А.З. Алошукнна"я соавт., 1991; В.К. Кузнецов а ооавт., 1991),

Большинство исследователе? главным структуршм 'кегампеатои,

ответственны!! за адгезквну» способность грамотрипатвльннх микро
организмов, считают фимбрии ( J.P.Duguid et al. , 1955; D.Q.Evans,
D.J. Evano , 1978). У кяебсивлл описаны адгезЕЯЫ штаммов, вы-

дела Екнх при заболеваниях мочевыводядих путай и представляющие собой фкмбрпв I а 3 тапов (D.c.oid et al., 1985). Имеются однако данные, указывающие на зависимость адгезивной способности клебси-елл.от локалдзагЕя патологического процесса ( a.m. Mesta et al., IS35; E.H. Полащук и соавт., 1989).

До настоящего времени к.pneumoniae, изолированные- при кишеч- . них заболеваниях, остаются недостаточно изученными как в отношении биологических свойств и антигенной отруктуры, так и в отношении наличия адгазинов.

Для выявления адгезяваости и наличия фиыбрий гликроорганизмов существует ряд методических приемов, включающих использование эря-тропитов человека а животных ( j.p.Duguid et al,, 1955), эпителиальных клеток ( R.Tuller , 1973), формалиннзированшх эпителиальных клазок < т. Yamaaoto et al. , 1990), ткане зых и органных культур С K.H.Aldridge et al,I978), синтетических микрочастиц ( B.Weter-bund, 1991).

Вместе о теы в современней литературе имеются лишь единичные сообщения о наличии и свойотвах фимбриіі клебсиелл (D.c.oid et al., 1983, IS85; G.Coear , 1990), выделенных от больных с заболеваниями мочеполовой системы, и отсутствуют сведения о фимбриях клебсиелл, выделанных от больных ОКИ.

3 связи с этим изучение фамбрий и фамбриальных адгезияов штаммов клебсиелл, выделенных от больных ОКИ, получение препаратов фиыбрай я их применение представляет не только теоретический инта-рэо для изучения патогенетической роли при кишечных инфекциях клеб-сиеллезяой этиологии, но и практическое значение для разработки и

_ 3 -конструирования тест-си с тени, которая котла би бить исполмоЕана в практической здравоохранении.

Цель и задачи исоледоваигя. Пельв яастояцеП работа явилось определение значимости Яимбриалышх адгезянов 3 типа K.pneuaoniae з адгезивном процесое, получение антигенов адгозик и разработка на их во нове иииунсіїериентіїой тес т-оис теми для обнаружения адгезпяоз 3 типа.

В задачи работы входгло:

1. Изучить роль клебсиелл з этиологии ОКИ.детей первого года

ЖИЗНИ.

1. Изучить роль клебсиелл, иыепиих 3 тип втикбхглії, в этиологии ОКИ детей первого года іизни.

2. Определить адгезивные свойства клебсиелл и разработать критерии оценки адгезивнеетп.

3. Определить ?иибрик клебсиелл, изучить биологические езояства

КЛебоїіеЛЛ И уСТанОВИТЬ ВОЗИОЖНуИ СВЯЗЬ «Є«ДУ НИШ!.

5. Определить роль ?имбрнй 3 типа клебсиелл в адгезивной процессе.

6. Разработать иимунс^ериенткуп тест-систему для определений ?и-мбркй 3 типа у штампов клебсиелл,

7. Оценить эффективность использования разработанного способа для определения антигенов адгезии.

Научная новизна. Показана роль

Практическая значимость работа. Ланч критерии оиекіи адгезивных свойств клебсиелл. Разработан способ получе?пгя ^инбриальных йнти«г генов ( натавных $иг<бшЯ и ^яибриальяого адгезйкз.О 3 'лпа тслеб"-.

спелл. Разработана охелга игдаунязашп кпвогянх с цельго получения спецяфпчвзкюс антисывороток. Впервые сконотруирОЕана тест-система на основе Е;.ї.уко«!вриентного анализа для определения антигенов адгезии клабоявлл.

Штам.з-лродуцант фимбрай заделошрозан в Государственной коллекции под коморо;,'. 2С6. Получено авторское свидетельство Я 1777607 на пзобретеїше "Штамм бактерий Klebsiella pneumoniae- 2С6, используе-кый для получения фнмбрий ЇЙА-Ї", приоритет от 30.05.91.

Утверядено рационализаторское предложение на местном уровне & 16/90 от 26.04.90. "Модибишрованшй способ определения адгезивных ОЗОЙСТВ КЛ2бСЕЄЛЛ^и.

"Инструкция по изготовление и контролю ингредиентов иммунойвр-мантной тест-оистеш для определения фиыбряальных адгезинов клебснелл" 2 "Инструкция по применении тмунойврментнои тест-системы для определения фикбриальных адгезинов клебснелл" утЕерддвны Ученым советом КЗШ кикробиолоіии а паразитологии 3 октября 1992 г., протокол й о. Информационно-методическое письмо "Определение адгезивных свойств грамотрицательных бактерии и их оценка" утверджено заместителем председателя Госкомсанэниднадзора России 20 января 1993 года.

Положения, выносимые на запиту.

1. Изучение этиологической структуры ОКИ детей первого года екзнк свидетельствует о значительной рола УПМ в качество этиологических агентов, среда; которых ведущими.являются клебсиеллы.

2. Показана роль шимбрий 3 типа клебснелл в адгезивном продессо и отпечена корреляционная зависимость меяду адгезивными и энтеро-эоксиганикми свойствами у штаммов клзбсиелл, имеющих 3 тип йимбрий, что может бить дополнительным критерием оиапки этиологической значимости выделенных при ОКИ штаммов клебснелл.

3. Показана принципиальная возможность использования ИМ для

- 5 -обнаружения фимбрип 3 типа клебсиелл. Разработана технология получения всех ингредиентов ТвОТ-СИСТвМЫ.

Апробация, работ. Основные полозеидя диссертации долотакн на конференциях молодых учених їоетовсюго противочумного института (I9S9), института им. Габричевского (Москва, IS9I), лабораторных коа~;еренщіях РШШШ (1987-1993 гг.), Л Всероссийской съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (г. РІиглій Новгород,1991).

По ііатериалам диосертапяи опубликовано 9 работ, из них в центральной печати - 7.

Объем и структура диссертации. Работа пэлоазяа на 152 страян-. пах машинописного текста, иллюстрирована 19 таблицам, 19 рисунками. . Состоит из взвде?пя, обзора литературы, описания пспользуешх материалов и методов, 3 глав собственных исследовании, закккчеидя и вы-, водов, а такіа указателя лятзратурн, вклшаэдзгс 2IG работ, из них 107 зарубежных авторов.