Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Бруцеллез до настоящего времени остается одним из зоонозов, причиняющих значительный экономический н социальный ущерб (Черкасский Б.Л., Иванова А.Л., 1996). По данным ВОЗ заболевания людей отмечаются в 73 странах Азии, Африки, Америки и Европы. 11а территории Российской Федерации ежегодно регистрируется около 500 случаев впервые выявленного бруцеллеза (Онищенко Г".Г. с соант., 1999). Начавшийся в конце 80-ых годов рост заболеваемости был обусловлен ухудшением эшпоотологической ситуации по бруцеллезу вследствие формального подхода при проведении ветеринарно-санитарных мероприятий, увеличения доли сельскохозяйственных животных в неконтролируемом ветеринарной службой частном секторе, отсутствия надлежащего контроля за свободно реализуемыми продуктами животноводства (Федоров Ю.М., Горошепко В.В., 1989).
Ликвидация в 60-ые годы очагов козье-овечьего бруцеллеза во многих областях России привела к относительному увеличению удельного веса больных, заразившихся от крупного рогатого скота (КРС) (Вершнлова ПА. с соавт., 1972). В Саратовской области с конца 70-ых годов, как и в большинстве регионов страны, основным источником инфекции стал КРС, а возбудителем -Brucella abortus, что способствовало изменению эпидемиологических особенностей бруцеллеза (Коротков В.Б., 1998). Наличие "прозрачных" границ с Западным Казахстаном и близость Северо-Кавказского региона, где до настоящего времени регистрируются очаги бруцеллеза мелкого рогатого скота (МРС), усуіубляют сложную ситуацию по данной инфекции. Эпидемиологии бруцеллеза в Саратовской области посвящено ограниченное число исследований (Лохов М.М., 1961; Селин В.Н., 1990; Коротков В.Б., 1998). Часть вопросов, имеющих теоретическое и практическое значение, не решена до настоящего времени. Так, районирование территорий области проводилось только но интенсивности эпидемических проявлений бруцеллеза без учета эпизоотического фона. Нет данных о значении отдельных методов лабораторной диагностики для решения задач борьбы с этим заболеванием. Сложная ситуация по бруцеллезу и области определяет необходимость углубленного изучения особенностей эпидемиологической обстановки по этой инфекции в целях определения конкретных путей совершенствования системы эпидемиологического надзора, в том числе и методов лабораторной диагностики.
Преобладание первично-хронических, латентных и стертых форм бруцеллеза часто является причиной неверной или поздней диагностики болезни (Беклемишев Н.Д., 1965). По нашим данным в последние годы около 70% больных направляются в инфекционный стационар не после профилактического осмотра, а в связи с наличием жалоб на снижение трудоспособности. При профилактических обследованиях на бруцеллез до настоящего времени применяются реакции Хеддльсона и Райта, которые не позволяют выявлять всех инфицированных. Используемые в стационарных условиях методы лабораторной диагностики (бактериологический и РНГА) тоже не оказывают существенного влияния на верификацию диагноза. Поданным ЦГЭСП по Саратовской области
за все время существования па территории региона очагов бруцеллеза КРС от больных не было выделено пи одной культуры В. abortus. Высокая вариабельность, диссоциативная изменчивость и существование I,-вариантов бруцелл создают определенные сложности при их обнаружении (Нершилова П.А. с со-авт., 1972). Положительный результат внутрнкожной аллергической пробы Бгорие, на которую опираются клиницисты при постановке диагноза, доказыва-ег существование сенсибилизации но отношению к бруцеллезному антигену, но не отражает степень компенсации процесса, и может длительно сохранятся после выздоровления (Беклемишев П.Д., 1965). При повторных постановках бру-целлин усиливает сенсибилизацию организма и может вызывать возникновение очаговых и общих реакций (Первушин Б.П., 1937; ІЦербак Ю.Ф., 1967).
Пп один из используемых в настоящее время лабораторных тестов не удовлетворяет современным требованиям медицинской службы. В связи с вышеизложенным очевидна актуальность совершенствования приемов лабораторной диагностики бруцеллеза у людей для решения практических задач лечебно-профилактических учреждений н Центров ГСЭП. Разработка рационального сочетания лабораторных тестов при обследовании людей на бруцеллез с целью наиболее раннего и полного выявления инфицированных позволит повысить эффективность лечения н обеспечить своевременное проведение необходимых противоэпидемических мероприятий.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - получение новых сведений о современных особенностях бруцеллеза в Саратовской области, разработка рациональной схемы лабораторной диагностики заболевания па основе определения клинико-эпидемиологическоп значимости традиционных и новых лабораторных методов.
1. Обобщить и проанализировать статистические материалы ио заболеваемости бруцеллезом людей п сельскохозяйственных животных в Саратовской области за 1978-1999 гг.
2.Определить основные эипзоотологнческис и эпидемиологические особенности бруцеллеза, характерные для Саратовской области в 1978-1999 гг. Провести эпидемиологическое районирование Саратовской области по величине показателя эпидемической опасности территории ио бруцеллезу.
-
Провести оптимизацию схемы ПЦР-анализа при диагностике бруцеллеза у людей, определить чувствительность метода при исследовании различного клинического материала.
-
Провести сравнительный анализ чувствительности и специфичности традиционных методов лабораторной диагностики бруцеллеза (РХ, РА, РИГА, РБ), непрямого варианта ИФА и ПЦР.
-
Определить возможность использования ПЦР-аналнза в комплексе методов лабораторной диагностики при проведении эпидемиологического обследования очага инфекции.
Определены основные эпизоотологическне и эпидемиологические особенности бруцеллеза в Саратовской области в 1978-1999 гг.: доминирующая роль крупного рогатого скота в качестве основного источника инфекции для людей; регистрация заболеваний животноводов в хозяйствах, являющихся по данным ветеринарной службы благополучными по бруцеллезу; основное значение в заболеваемости контактного пути заражения на фоне снижения роли алиментарного; сохранение преимущественного поражения бруцеллезом женского населення и лиц трудоспособного возраста. Показано, что улучшение эпизоотологической ситуации привело к снижению заболеваемости населения.
Впервые проведено эпидемиологическое районирование территории области по величине показателя эпидемической опасности. Выявлено, что 39 % административных районов относятся к территориям высокой эпидемической опасности.
Впервые доказана высокая специфичность и чувствительность ПЦР-тест-системы с праймерами Bru31-Bru32 и ВшЗ-Вш4 при лабораторної'! диагностике бруцеллеза у людей. Показано, что наибольшая эффективность ПЦР-анализа при бруцеллезе достигается при исследовании образцов цитратной крови больных.
Впервые в медицинской практике показано, что ПЦР в сочетании с непрямым вариантом ИФА при диагностике заболевания у людей и проведении эпидемиологического обследования обладают максимальной диагностической точностью.
Показана возможность применения ПЦР для обнаружения ДНК бруцелл в объектах окружающей среды при эпидемиологическом обследовании очага инфекции.
Результаты исследований вошли в отчет о государственных приемочных испытаниях тест-системы для обнаружения бруцелл методом ПЦР и послужили основанием для рекомендации ее внедрения в практику здравоохраненпя (Акт внедрения использования ПЦР-анализа при обследовании людей на бруцеллез. Утвержден директором ГИСК им. Л.А. Тарасевича 17.05.2000 г.). Разработанные методические подходы лабораторной диагностики бруцеллеза у людей применяются в ММУ "2-ая клиническая больница" (Акт внедрения сочетанного использования ИФА и ПЦР-анализа при обследовании людей на бруцеллез. Утвержден главным врачом ММУ "2-ая клиническая больница" 26.05.2000 г.) и ЦГСЭН по Саратовской области (Акт внедрения сочетанного использования ИФА и ПЦР-анализа при обследовании людей на бруцеллез. Утвержден главным врачом ЦГСЭП по Саратовской области 26.05.2000 г).
Материалы диссертации используются при чтении лекций на курсах первичной специализации и повышения квалификации врачей по особо опасным инфекциям при Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб".
г.
основные положения, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. Основные эиизоотологические и эпидемиологические особенности
бруцеллеза в Саратовской области в 1978-1999 гг. заключаются в доминирую
щей роли крупного рогатого скота в качестве основного источника инфекции
для люден; регистрации заболеваний животноводов в хозяйствах, являющихся
по данным ветеринарной службы благополучными но бруцеллезу; npeoftilttflfl»
нии контактного нуги заражения; преимущественном те»р:іжешш Г'руцелле'ЮМ
женского населения и лиц трудоспособного возраста.
-
Оптимальная схема проведения ПЦІ'-диапюстики бруцеллеза у людей включает исследование нитратной крови с использованием тест-системы, основанной на двухетадиііной ГИДР с праймерами Вш31-32 и ВшЗ-4.
-
При лабораторной диагностике бруцеллеза по чувствительности ПЦР-анализ сопоставим с непрямым вариантом ИФА и превосходит традиционные методы диагностики этой инфекции.
Материалы диссертации доложены и представлены на: научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997); II Всероссийской конференции "Полиме-разная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний" (Москва, 1998); И Всероссийской конференции "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 1998): Международной научно-практической конференции "Проблемы санитарно-эпидемиологической охраны территорий стран СНГ" (Саратов, 1998); научной конференции учреждений но борьбе и изучению нриродно-очаговых инфекций Министерства Здоровья и Социальной Защиты (Улан-Батор, Монголия, 1999); научно-практической конференции областной ассоциации инфекционистов (Саратов, 1999), итоговой научно-практической конференции РосІІИПЧИ "Микроб" (Саратов, 2000); VI Республиканской научно-практической конференции "Зоонозы: актуальные вопросы в клинике и эксперименте" (Махачкала, 2000).
Диссертация обсуждена и одобрена на межлабораторной научной конференции РосНИПЧИ "Микроб" (протокол № 35 от 13.06.2000 г.).
Основное содержание работы отражено в 9 научных публикациях.
Работа состоит из введения; 1 главы обзора литературы; 4 глав собственных исследований, включающих описание материалов и методов исследований, изучения эпидемиологических и эпизоотологических особенностей проявления бруцеллеза; экспериментальной части: заключения; выводов; списка литературы, включающего 194 цитируемые работы. Общий объем диссертации 127 страниц. Текст иллюстрирован 12 таблицами и 15 рисунками.