Введение к работе
Актуальность проблемы. Благодаря проведению широкого комплекса профилактических мероприятий в нашей стране достигнуты значительные успехи в области снижения заболеваемости брюшным тифом. Однако, в некоторых регионах эта инфекция продолжает удерживаться на определенных уровнях, не проявляя тенденции к дальнейшему снижению. На отдельных территориях страны удельный вес брюшного тифа в общей структуре кишечной патологии остается высоким и превышает общесоюзные показатели в 5-10 раз (Бургасов П.Н., 1987, Покровский В.В., 1981, Кондрусев А.И.. 1989).
Брюшной тиф распространен повсеместно. Ежегодно в мире регистрируется до 33 млн случаев (Levine М.М.. 1989). Однако, фактическая заболеваемость значительно превышает регистрируемую в связи с тем, что зачастую инфекция протекает атипично и высокий процент случаев остается нерасшифрованным (Вюлл. 303, 1980, Хрон. ВОЗ, 1976, 1984. Edelman R.E. et al, 1984).
Одной из характерных особенностей брюшного тифа в настоящее время 'зляется высокая заболеваемость и тяжелое течение инфекции у детей первых ;-.ч жизни и лиц молодого возраста. Все более широкое распространение почучзю'г устойчивые к антибиотикам и химическим препаратам формы возбудителя. Часты случаи формирования длительного, трудно поддающегося лечениіс бактерионосительства, являющегося, как известно, основным источником инфекции. После перенесения заболевания примерно в 20% случаев возникает сстрое и в 12-33% - хроническое бактерионосительство, длящееся иногда многие годы (Билибин А.Ф. и др., 1965-1978; Килессо В.А. и др., 1976, Погорельская Л.В.. 1986. Поставит В.А., 1983. Levine М.М. et al, 1983).
Снижение заболеваемости брюшным тифом не может быть достигнуто гс:'-*о противоэпидемическими мероприятиями.
3 сьйзп с этим создание вакцин против брюшного тифа с целью имму-нпп^офі-.'іа^гики и иммунотерапии продолжает оставаться актуальной задачей здравоохранения и является необходимым звеном в общей системе мер борьбы с этим заболеванием. Несмотря на накопленный большой опыт, до сих пор -": су'Кс-улйует брюшнотифозных вакцин, полностью удовлетворяющих требова-
ниям здравоохранения (Кондрусев А.И.. 1989, Edelman R.E. et al, 1986, Germanier R., 1984, Levine MM. et al, 1987, Isibasi A. et al, 1988.). Применяемые с целью специфической профилактики пзрэнтеральные вакцины реактогенны и не обеспечивают развития полноценного иммунитета.
Проведенные ВОЗ контролируемые испытания брюшнотифозных вакцин различных методов приготовления (1954-1964, 1976 гг) и накопленные к настоящему времени материалы свидетельствуют о том, что для создания полноценного иммунитета против брюшного тифа недостаточно наличия в вакцинах только О-, Ви- и Н-антигенов. Необходимо присутствие также дополнительного "защитного" антигена, близкого по лабильности к Н-антигену (Бюлл. ВОЗ, 1979, 1980, Joo I., 1971).
При исследовании антигенной структуры сальмонелл, в том числе брюшнотифозных бактерий, был идентифицирован и иммунологически охарактеризован поверхностный К-антиген. Установлено, что К-антиген обладает высоко выраженными антигенными свойствами и протективнои активностью, стимулируя антибактериальную устойчивость макрофагов к внутриклеточному размножению возбудителей (Степанова Л.К. и др., 1976,1978).
Исходя из новых данных об антигенном составе сальмонелл, в НИИЭМ им.Гамалеи АМН СССР разработан принцип щадящего одномоментного извлечения поверхностных О-, Ви- и Н-антигенов (Геккер З.Д., Сергеева КС, 1973). В последующих работах в нашей лаборатории было показано, что при этом способе выделяется также протективный К-антиген (Степанова Л.К. и др., 1976, 1978).
Этот метод был использован для получения из производственной реакторной спиртовой массы брюшнотифозных бактерий (Горьковский НИИЭМ) нового химического комплексного препарата, содержащего О-, Ви и К-энтигены (Степанова Л.К. и др., 1986).
Цель работы. Целью настоящей работы являлось экспериментальное исследование иммунологической эффективности и безвредности (нового комплексного брюшнотифозного препарата.
Залами исследования.
-
Изучить антигенный состав, иммуногенные свойства и протективную активность нового комплексного брюшнотифозного препарата.
-
Провести сравнительное изучение протективной активности полученного брюшнотифозного препарата и коммерческой спиртовой вакцины, обогащенной этим комплексом.
-
Разработать модель длительного сальмонеллезного бактерионосительства.
-
Определить иммунотерапевтическую и иммунопрофилактическую эффективность нового препарата на модели длительного сальмонеллезного, в том числе брюшнотифозного, бактерионосительства.
-
Определить безвредность препарата на различных экспериментальных моделях.
Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые охарактер.' зован полученный из реакторной спиртовой массы брюшнотифозных бактерий методом мягкой экстракции новый комплексный брюшнотифозный препарат, содержащий, наряду с Ви- и незначительным количеством О-антигена, поверхностный протективный К-антиген.
установлены безвредность, нетоксичность, отсутствие аллергизирующих и колейкемогенных свойств нового препарата, а также вакцины спиртовой брюшнотифозной, обогащенной этим комплексом.
показана высокая иммунизаторная и протективная активность комплекса Ви- и К-антигенов и значительное (в 40 и более раз) усиление протективной эффективности коммерческой спиртовой брюшнотифозной вакцины при обогащении ее этим комплексом в экспериментальных условиях.
- разработана модель длительного сальмонеллезного бактерионосительст
ва (АС N1412500 от 22 марта 1988 г). Выявлены выраженные санирующие свой
ства брюшнотифозного комплексного препарата с К-антигеном,
обеспечивающего полное и стойкое очищение организма животных от
инфицирующих микробов. Установлена важная роль К-антигена в развитии
антиинфекционного поствакцинального иммунитета.
Теоретическая и практическая значимость работы. В работе решались задачи, связанные с использованием нового химического брюшнотифозного препарата, полученного из коммерческой спиртовой биомассы, и содержащего, наряду с Ви- и О-антигенами, протективный поверхностный К-антиген, в целях иммунопрофилактики и иммунотерапии брюшного тифа и бактерионосительства.
на различных экспериментальных моделях, в соответствии с требованиями, предъявляемыми к новым вакцинам, и при испытании 20 серий препарата проведен первый этап доклинических испытаний препарата: установлена безвредность, практическая ареактогенность, высокие иммуногенные и протективные свойства комплекса Ви- и К-антигенов, а также коммерческой спиртовой брюшнотифозной вакцины, обогащенной этим комплексом. Полученные данные являются обоснованием для перехода к следующему этапу - испытанию вакцины на добровольцах.
впервые показана принципиальная возможность использования комплекса Ви- и К-антигенов брюшнотифозных бактерий с иммунотерапевтической целью для лечения бактерионосительства.
по материалам диссертации защищено 2 изобретения: "Штамм бактерий Salmonella typhimurium, используемый для моделирования длительной перси-стенции сальмонелл", АС N1412500 от 22 марта 1988 г. и "Способ профилактики брюшного тифа", положительное решение от 27 апреля 1990 г. на заявку N 4692768/13/069754.
Работа выполнялась в соответствии с отраслевой программой С-30, межведомственными программами "Фундаментальные науки медицине" и "Профилактика острых кишечных заболеваний".
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных конференциях лаборатории иммунологии энтеральных инфекций и лаборатории генетики вирулентности бактерий НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи АМН СССР. По материалам диссертации опубликовано 11 работ. Диссертационная работа апробирована на научной конференции лаборатории иммунологии энтеральных
инфекций НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи АМН СССР 4 июля 1990 г
Разработанная экспериментальная модель длительного сзльмонеллезного бактерионосительства, защищенная авторским свидетельством, используется в ряде лабораторий, что подтверждено актами о внедрении.
Материалы диссертационной работы легли в основу "Инструкции по изготовлению и контролю вакцины спиртовой брюшнотифозной, обогащенной комплексом Ви- и К-антигенов". Инструкция утверждена Комитетом МИБП для дальнейшего испытания обогащенной вакцины в клинике.
Проведение исследований нового комплексного брюшнотифозного препарата, содержащего Ви- и К-антигены, включено в "Целевую комплексную программу НИР по разработке новых и усовершенствованию имеющихся вакцин на 1990-1995 гг" АМН СССР.
Структура и обьем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (3 главы), описания материалов и методов, результатов собственных исследований (6 глав), заключения, вы_адов и списка использованной литературы, содержащего 249 источников, из которых 112 - зарубежных.
Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и содержит 27 таблиц и 15 рисунков.