Введение к работе
Актуальность темы. Ферменты микробного происхождения приобретают все большее значение в различных областях народного хозяйства, они имеет ряд преимуществ по сравнению с Ферментными препаратами, которые могут быть получены из животного и растительного сырья. Высокая скорость госта и способность к усвоению широкого круга субстратов делает микроорганизмы пенным объектом для исследование направленных на получение высокоактивных Ферментных препаратов, в настоящее Егемя многие бактериальные и грибные культуры хороыо известны как активные продуценты Ферментов и применяются для их получения в про-шшленном иасштабе. Постоянная потребность промышленности и медицины в Ферментных препаратах требует проведения исследований, нэпраьлен-кых на поиск ноеых продуцентов Ферментов среди микроорганизмов, а такхе на еоЕРРЕРНств'.'Рание методов их выделения и очистки.
сапрофитные бактегии рода akthpobactsr привлекает внимание исследователей в связи со способностью усваивать еирокип круг субстратов и нетребовательностью к условиям культивирования, в і.астояшее время эти микроорганизмы сироко используются для получения биологически активных веяеетв. стегеоселективноя трансформации органических соединения, а также для биологической очистки сточных вод и контроля их загрязненности отходами химических производств. Особенный интерес вызывают исследования, направленные на получение лейрамиии-дазы с помоиью артробактегий- поскольку в настсяаее время в нашей стране для получения этого перспективного для ыедишшм и биохимии Фермента используются патогенные и условнолатогенные культуры.
Микроорганизмы Рода АРТРОбактеР избраны нами в качестве объекта исследования в связи с тем. что они недостаточно изучены в отношении синтеза гидролитических Ферментов при выроди вами на разбавленной молочной сыЕосотке- отходе сыродельной промышленности, известно, что молочная сыворотка содержит комплекс ценных биологически активных еєеє'.те. которые при Рациональней использовании могут служить инлук-тораіи биосинтеза ьиогих Фег-ментов. Однако, в настоящее время при централизованной переработке молока большие количества сыворотки сбрасываются в канализацию, нанося большой вред водоемам, изыскание новых путей утилизации молочной сыворотки является важным экологическим аспектом современных исследовании, в том числе и предлагаемой работы. Данная работа выполнена по координационным планчм научно-исследовательских работ АН ссе*- "Хроматограїия. электрофорез"
и "Микробиология" (N госрегистрашш работ 01Є8. 053943).
пели и задачи исследования
изучить возможности биосинтеза артробактериями внеклеточных гидролаз при культивировании на разбавленной подсырной молочной сыворотке;
определить условия культивирования продуцентов, приводящие к максимальному накоплению гидролаз в культуральной жидкости, и оптимизировать минеральный состав питательной среды;
изучить возможность выделения Ферментов из культуральной жидкости методами ионообменной хроматографии;
определить основные Физико-химические характеристики выделенных Ферментов, а также исследовать их действие на различные субстраты с целью выяснения перспектив практического использования.
научная новизна работы. В результате проведенных исследований установлено, что сапрофитные бактерии рода АРТРобактер при культиви-роваии на среде, приготовленной на основе разбавленной подсырной молочной сыворотки, синтезируют внеклеточную протеиназу. Изучено влияние условий культивирования на биосинтез протеиназы. -и оптимизирован минеральный состав питательной среды.
протекназа. синтезируемая культурой Arthrobacter luteus 21606. вьшелена из нативного раствора методом препаративной ионообменной хроматографии, определены1 ее основные Физико-химические характеристики. Изучено действие протеиназы на Фибгиллярные белки животного происхождения.
Изучена возможность биосинтеза нейраминидазы артробактериями при культивировании на среде, содержащей индуктор ее биосинтеза -гликомакропептид «-казеина. Показано, что высокая протеолитичес-кая активность артробактерий не позволяет определить активность других гидролаз. синтезируемых культурой.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные в результате исследований данные дополняют имеющиеся сведения о способностях микроорганизмов рола АРТРобактер к снтезу гидролитически Ферментов. Показано, что для получения протеолитических ФЄІ>МЄг(ГОН с помошьс
агтробактерий может быть использована разбавленная молочная сыворотка, что является одним из путей утилизации этого еше недостаточно используемого биологически ценного побочного продукта сыродельной промышленности. Разработан сорбиионный метод выделения из подсыгной молочной сыворотки сиалсодержашего компонента - гликомакропептида "У--казеина, защищенный авторским свидетельством, показано, что про-теиназа. синтезируемая культурой Arthrobacter luteus 21606. облапает Фибркнолитической активностыз. сравнимой с активностью трипсина.
Апробация работы, материалы исследования были доложены на конференции молодых ученых "Творчество молодых - научно-теучическоыу пгогрєссу" (Ленинград. 1968). на Всесоюзном симпозиуме "Актуальные проблемы переработки молока и производства молочных продуктов" <ео-логяа. 1939) и на всесоюзной конференции "Молекулярная сорбция биологически активных вешеств" (Пенза. 1990).
Публикации. По материалам диссертации имеется 5 публикаций и авторское свидетельство.
Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, списка цитированной литега-т'/оы. Работа изложена на 123 стр. машинописного текста, содержит 12 рисунков и 18 таблиц, список литературы включает 131 источник.