Введение к работе
Актуальность проблемы. За последние десятилетия роль бактерий рода Enterobacter в этиологии гнойно-воспалительных заболеваний существенно возросла. Повышается удельный вес внутрибольничних инфекций, обусловленных зтии возбудителей. Наиболее часто пораваятся больные с иыыунодепрессивными состояниями - хирургические (Антипенко В.П., Куницкая С.А., Рудницкая Л.С., 1990; Еремин СР. с соавт., 1992: Леванов А.В. с соавт., 1993; Синицина Г.Г. с соавт., 1935), ожоговые (Белоусов її.Б., Моисеев B.C., Лепахин.В.К,, 1993; Сологуб В.К. с соавт., 1985), урологические (Белоусов В.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К., 1993; Иванова К,И. с соавт., 1985; Киселева Б.С, Цванг М.Б., Теблоева Л.Г., 1982; Тири З.И., Тюри М.З., 1988; Тюри 3.И., ТириМ.З., ЛанцнерА.А., 1991), онкологические больные (Ерастова Е.И., Киселева Б.С., Сиоланская Й.З., 1982), а такає дети первого года жизни (Абрикосова Н.В., Костюкова Н.Н., 1991; Апейкина М.Д. с соавт., 1991; Белокрысенко С.С, 1990; Васильева Л.И.. 1991; Воротннцева Н.В. с соавт., 1989; Гизатулина С.С.. 1988; 1992; Егорова И.П. с соавт., 1991; Мазурина Н.А, с соавт., 1991; Corretger З.Н., Canetuz Е., Uris S., 1379; John I.F., Sharbaudh R.I., Bannister E.R., 1982).
Для лечения гнойно-септических заболеваний, вызванных условно-патогенними бактериями E.coli, Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella наряду с антибиотиками успешно используют препараты бактериофагов (Брашина Н.П.. Саасыгина Г.А., Буслаева Г.Н., 1984; Ворошилова Н.Н. с соавт., 1991; 1993; Галеев Ф.С. с соавт., 1993; Галеев М.А., Нустафин Т.И.. 1993; Красноголовец В.Н., 1989; Келадзе Г.Д., 1984; Тимербулатов В.М. с соавт., 1993; шарипов Р.А., Бикбаева А.И., Габдуллин Н.Т., 1993; Slopek S. et al., 1983; 1985). Данных о применении для лечения
гнойно-септических заболеваний бактериофагов Enterobacter в доступной
нам литературе не обнаружено, несмотря на высокую частоту
неэффективности антибиотикотерапии из-за множественной
антибиотикорезистентности возбудителя (Іукова З.В. с соавт., 1992; Иванова К.И. с соавт., 1985; Лувсандагва 3. с соавт.. 1930; Семина Н.А.. Ковалева Е.П.. Генчиков Л.А., 1989; Brenner D.3., 1981); или невозможности её из-за токсичности антибиотика іВенцел Р.П., 1990; Канцеров Р.Ю.. 1992).
Сведения по бактериофагам рода Enterobacter немногочислен!) и касаются в основном изучения биологических и серологических свойств умеренных фагов. использующихся для фаготипирования штаммов (Гайрабеков Р.Х., Похил СИ.. ЛиснякЮ.В.. 1930; Лотиев К.П.. 1990; 1992; Не Xiaoqing. Pan Ruonan, 1992; Popouici M. et al., 1976). Данные по культивировании бактериофагов Enterobacter и очистке фаголизатов в в доступной литературе отсутствуит.
Цель и задачи исследования.
Цель исследования - селекция и изучение биологических свойств вирулентных бактериофагов Enterobacter; разработка научных основ культивирования и очистки при получении препарата бактериофагов.!1
Достижение поставленной цели требует решения ряда задач.
Задачи исследования;
-
селекция вирулентных бактериофагов E.aerogenes, Е.cloacae. E.agglonerans; изучение их биологических свойств;
-
конструирование препарата бактериофагов Enterobacter;
-
изучение зависимостей репродукции бактериофагов Enterobacter от способа и условий культивирования; разработка оптимизировании* рейхов культивирования бактериофагов;
-
изучение закономерностей и разработка способа очистки препарате бактериофагов Enterobacter от бактериальных клеток и балластныэ веществ культуральной среды;
5. получение экспериментальных серий препарата и экспериментальное изучение его биологических СБОЙСТЗ.
Научная новизна работы.
Селекционированы новые вирулентные бактериофаги E.aerogenes, Е.cloacae. E.agglonerans; изучены их биологические свойства и сконструирован препарат бактериофагов Enterobacter.
Впервые изучена зависимость репродукции бактериофагов Enterobacter от способа культивирования. Установлено, что оптимальным для получения биомассы фагов является использование способа периодического динамического гомогенного глубинного культивирования.
Изучены закономерности репродукции бактериофагов Enterobacter в условиях периодического динамического гомогенного глубинного культивирования и определены оптимальные значения факторов, влияющих на виход биомассы бактериофага - резни аэрации, содераание в питательной среде аиинного азота и глюкозы, концентрация бактериальных клеток штаммов - продуцентов бактериофагов.
Впервые разработан способ очистки бактериофагов Enterobacter от бактериальных клеток и балластных веществ с использованием методов мембранного разделения.
Установлено. что разработанные технологические режимы культивирования и очистки позволяют получить препарат бактериофагов Enterobacter, обладающий широким диапазоном антибактериальной активности и нетоксичный при парэнтеральном введении.
Практическая значимость работы.
Впервые создан и экспериментально изучен новый антибактериальный препарат бактериофагов Eaterobacter поливалентный, обладающий широким диапазонои и высокой степенью литической активности в отношении бактерий E.aerogenes. Е.cloacae. E.agglomerans.
Разработана технология оптимизированного управляемого культивирования и очистки препарата.
Получены и экспериментально изучены три серии препарата бактериофагов Enterobacter.
Результати выполненных исследований использованы при подготовке следующих нормативно-технических документов:
- Инструкция по изготовлении и контролю препарата бактериофагов
Enterobacter поливалентного очищенного гидкого, цтверяденная Ученым
Советом Уфимского НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова НПО
"Иммунопрепарат" (протокол Н2 от 01.03.94).
- Программа клинических испытаний препарата бактериофагов
Enterobacter поливалентного очищенного жидкого для оценки
реактоганности. безопасности и терапевтической эффективности,
утвержденная Комитетом ИИБП КЗ РФ (протокол N4 от 23.06.94).
На защиту выносятся следующие положения:
-
Селекционированы и изучены бактериофаги E.aerogenes, Е.cloacae, E.aeslomerans. Сконструирован поливалентный препарат бактериофагов, активный в отношении 71,2-84,ОХ штаммов E.aerogenes. 73,5-78,9% штаммов Е.cloacae и 77,5-82,7% штаммов E.aggloierans.
-
Способ периодического динамического гомогенного глубинного культивирования на экспоненциально размнояапцеися бактериальной популяции в концентрации 1-4x10 бакт.кл./мл; в условиях 70-802 насыщения культуральной среды кислородом: при содеріании аминного азота 40мг% и глюкозы в пределах 1-2мг/мл - является оптимальным при получении биомассы бактериофагов Enterobacter.
-
Способ очистки препарата бактериофагов Enterobacter от бактериальных клеток и балластных веществ методами ультрафильтрации в тангенциальном потоке и проточной микрофильтрации позволяет получить высокоочищенный ареактогенный препарат, обладающий широким диапазоном антибактериальной активности.
Структура диссертации. Диссертационное исследование состоит из введения. двух глав 'обзора литературы, четырех глав собственных исследовании, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа излоаена на листах машинописного текста, иллюстрирована 24 рисунками и 15 таблицами. Список литературы содервит 175 отечественна и 36 зарубевных источников.