Введение к работе
Актупльность проблемы. В настоящее время мнение о роли Listeria monocytogenes в инфекционной патологии человека значительно изменилось. Наблюдается расширение как удельного веса этой инфекции, так и спектра ее клинических проявлений (Покровский В.И., 1993; Тартаковский И.С. с соавт., 1994).
В последние годы в США листериоз по числу смертельных исходов лидирует среди других пищевых инфекций, а L.monocytogenes внесены в список четырех типов микроорганизмов, являющихся основной проблемой для обеспечения эпидемической безопасности пищевых продуктов в "Системе анализа факторов риска и критических контрольных точек" (Speber Willian Н., 1991).
Наибольшей опасности подвергаются беременные женщины, их плод и новорожденные, а также лица с ослабленной иммунной системой, хотя возможны случаи заболеваний у людей, не имеющих предрасполагающих факторов к данной инфекции. Смертность при некоторых формах листериоза, несмотря на активную антибиотикотерапию, достигает 90-100% (Хеприч Пол Д., 1983).
Сложившаяся ситуация во многом связана с имевшейся ранее недооценкой экологической гибкости и потенциала изменчивости микроорганизмов в природе, а также экологической детерминированности факторов их патогенности и персистенции. Сегодня вполне ясно, что понятие "патогенность микроорганизмов" включает и патогенность потенциальную. Сапрофиты, к которым относятся и листерии, способны проявлять патогенные свойства в организме человека и животных (Бухарин О.В., Литвин В.Ю., 1997).
Обладая значительными экологическими возможностями,
листерии имеют широкий круг хозяев, существенно отличающихся друг от друга как филогенетически, так и экологически. Все это дает основание рассматривать вопрос о биологических особенно-стях L.monocytogenes, позволяющих им успешно переживать в различных эконишах. В первую очередь это касается специализации листерии к паразитическому существованию, обязательными атрибутами которого являются факторы персистенции. При этом пер-систентные потенции таких микроорганизмов экологически многопрофильны (Бухарин О.В., Литвин В.Ю., 1997).
Хотя в литературе имеется достаточно сведений о путях внедрения возбудителя в потенциального хозяина, метаболических изменениях, с помощью которых он вызывает повреждение тканей, влиянии специфического иммунитета и "неспецифической" резистентности, тем не менее еще не всегда можно преломить всю накопленную информацию в целях объяснения специфических функций, позволяющих листериям успешно переживать в организме хозяина. Поэтому обнаружение факторов персистенции у листерии актуально не только в целях эпидемиологического прогноза, но и для знания того, какой из защитных механизмов поврежден, что важно для разработки эффективной клинической стратегии, прогнозирования исхода инфекции, а также оптимального плана терапевтических и профилактических мер. Рабочей группой ВОЗ по проблемам листериоза рекомендовано проведение исследований по изучению патогенності! и вирулентности L.monocytogenes, что зафиксировано включением в список рекомендаций (Бюллетень ВОЗ, 1988).
Не менее актуальным представляется и определение некоторых биохимических свойств L.monocytogenes, так как листерии
представляют собой относительно малоизученный род. Необходимо учитывать, что окружающая среда (местообитание) оказывает на паразита сильное воздействие, в силу чего он приобретает каче-ства, позволяющие ему успешно адаптироваться в новых условиях (Бухарин О.В., Литвин В.Ю., 1997). В настоящее время при выделении и идентификации этих микроорганизмов возникают сложности, обусловленные недостаточностью критериев их дифференцирования в смешанной культуре, что связано с несовершенством существующих сред. Несмотря на значительное количество иссле-дованин, посвященных онологии листерии и различным методам их выделения и идентификации, "многоликий" листериоз остается во многом малоизученным и редко диагностируемым заболеванием в России (Тартаковский И.С. с соавт., 1994).
В связи с вышеперечисленными данными возникает научно-практический интерес в изучении вопроса метаболических возможностей L.monocytogenes, определении неизвестных ранее перси-стентных и биохимических свойств листерии, которые могут служить в качестве маркеров при диагностике заболеваний, расшифровке эпидемиологических ситуаций, проведении микробиологического мониторинга и экологических исследований.
Цель исследования. Оценка биологических особенностей L.monocytogenes, факторов их патогенности и персистенции, совершенствование методов выделения из различных биосубстратов.
Достижение этой цели планировалось путем решения следующих задач:
1. Провести выявление факторов патогенности и персистенции у L.monocytogenes, выделенных из различных объектов окружающей среды и из материала от больных.
-
Определить качественные и количественные различия в распределении факторов патогенности и персистенции у листерий различной экотопической принадлежности.
-
Выявить значимость отдельных тестов для идентификации листерий и эпидемиологического анализа.
-
Изучить влияние различных факторов на рост L.monocyto-genes и на этой основе сконструировать питательную среду для их выделения.
-
Провести сравнительную оценку эффективности новой и общепринятой сред для выделения листерий.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. С помощью ряда тестов установлено наличие у L.monocy-
togenes свойств, обеспечивающих им персистенцию в макроорга
низме и способствующих широкому распространению в природе
данного вида бактерий.
2. На основании изучения биохимических особенностей
L.monocytogenes разработана новая питательная среда для их выде
ления из различных объектов.
Научная новизна работы. Впервые проведено исследование активности ряда факторов патогенности и персистенции у L.monocytogenes (лизоцимная, антилизоцимная, РНК-азная, липаз-ная, антинтерфероновая, антикомплементарная активность), выделенных из различных субстратов. Определена диагностическая значимость этих факторов, что позволит более полно охарактеризовать эпидемическую опасность обнаруженных штаммов. Разработана новая питательная среда для выделения листерий из различных субстратов, отличающаяся более высокой чувствительностью.
Практическая значимость работы. Сконструированная среда может быть рекомендована для использования в бактериологических лабораториях санитарно-эпидемиологического и ветеринарного надзора, больниц и в научно-исследовательских учреждениях как для целей диагностики инфекционных заболеваний у человека и животных, так и для целей сертификации продуктов питания.
Предложен ряд дополнительных тестов для идентификации листерий и эпидемиологического анализа.
Внедрение р практику. Новая среда была апробирована и использовалась в лаборатории микробиологической диагностики инфекций Астраханского филиала ЦНИИ эпидемиологии для выделения L.monocytogenes от людей и животных, а также из продуктов питания. Биологические характеристики вновь выделенных и полученных из других учреждений штаммов были оценены и с учетом их персистентных свойств.
По результатам разработки среды подана заявка, признанная изобретением, и получена приоритетная справка № 95109695X13(016875).
Апробация работы и публикации.
Материалы диссертации доложены на конференции "Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика важнейших инфекционных болезней" гг. Тамбов - Астрахань 1994 г., Международном симпозиуме, посвященном году Пастера "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями". 6-10 июня 1995 г. Институт Пастера, Санкт-Петербург, Россия., 11 Всероссийской научной конференции "Персистенция микроорганизмов". 7 - 9 октября 1997 г., Оренбург.
По теме диссертации опубликовано 9 работ в различных из-
даниях.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 45 отечественных и 131 иностранный источник. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц и 8 рисунков.