Введение к работе
Актуальность проблемы. Инфекционно-аллергические и гнойно-воспалительные заболевания составляет значительный процент в общей патологии человека. Причиной их являются антибиотико-резистентные формы микроорганизмов, а возникновению способствуют выраженные дефекты в иммунном и микроэкологическом статусах больного (Навашин СМ., 1989).
Стратегию и тактику.лечения гнойно-воспалительных и инфек-ционно-аллергических заболеваний на современном этапе характеризует поиск и использование препаратов, одновременно обеспе-_ чиваицих эффективное.влияние на этиологический и ведущий патогенетический факторы. Наряду с интенсивным синтезом и внедрением в медицинскую практику новых антимикробных средств в последние годы значительное внимание уделяется изучению ухе используе-. мых в клинике препаратов.с целью их применения по новому назначению (Бэзанов Г.А., 1987).
Одной из широко используемых в инфекционной патологии групп лекарственных препаратов, помимо антибиотиков, являются антигис-таминные средства - блокаторы Нт-рецепторовгистамина, обладающие сосудосуживающим, анестезирующим. и_другими фармакологическими--, эффектами. Имеются единичные сведения, что наряду с этим, отдельные антигистаминные препараты способны оказывать антибактериальный и.антимикотический эффекты (Шендеров Б.А., 1975;.Курнатов- . ски П., 1981). Опубликованы данные о том, что эти препараты также способны элиминировать R-факторы и ингибировать.экспрессию плазмидных генов у кишечных бактерий (Шендеров Б.А., 1975; . Molnar J. et ai.J99l). В то же время многие вопросы, синергизма антибиотиков с антигистаминными препаратами в литературе практи-
чески не освещены. Неизвестны механизмы их антимикробного действия, хиииотерапєвтическая эффективность, влияние на микроэкологив хозяина и некоторые другие показатели, связанные с перспективами применения по новому назначению.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение антимикробного действия антигистаминных препаратов-блокаторов H-r-рецепторов, выяснение возможности и обоснование их применения как своеобразных.химиотерапевтических средств, разработка рациональных схем их применения отдельно и в сочетании с антибиотиками.
В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования:
-
охарактеризовать различные блокаторы Hj-гистаминовых рецепторов по наличию, уровню и спектру антибактериальной и антифунгаль-ной активности, оценить возможность применения по новому назначению;
-
изучить некоторые биохимические механизмы действия антигистаминных препаратов на микробную клетку;
-
на моделях стафилококковой и синегнойной.генерализованных инфекции белых мышей определить химиотерапевтическую эффективность антигистаминных препаратов; . . .
-
в опытах in vitro и in vivo отобрать наиболее перспективные комбинации антибиотиков и.блокаторов H-r-гистаминовых.рецепторов с целью их'рекомендации для клинического применения;
-
исследовать некоторые микроэкологические.последствия орального применения некоторых блокаторов Hj-рецепторов гистамина.
Научная новизна. Впервые.показано наличие у блокаторов Нт-гистаминовых рецепторов сочетанной антибактериальной и анти-
фунтальной активностей.
Установлены синергидные, индифферентные и антагогистические комбинации антигистаминных препаратов с антибиотиками.
Впервые на модели генерализованной инфекции выявлена отчетливая химиотерапевтическая эффективность антигистаминных препаратов как противомикробных средств.
Установлено, что антимикробный эффект этих соединений обус-. ловлен ингйбированием синтеза белка-и ДНК в бактериальной.клетке. . Микробиологическими-и биохимическими..методами, продемонстрировано влияние.блокаторов Hj-рецепторов гистамина на микробную экологии толстой кишки.
По.материалам.работы оформлены.две заявки на изобретение.
Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют рекомендовать определенные блокаторы Hj-рецепторов гистамина как эффективные химиотерапевтические. препараты.
Разработаны рациональные сочетания антигистаминных препаратов и антибиотиков в отношении возбудителей гнойно-воспалительных и инфекционно-аллергических заболеваний различной, этиологии.
Доказана потенциальная способность этих.соединений вызывать' микроэкологические нарушения в толстой кишке.
Результаты исследований оформ^ны в виде информационного. письма "Применение антигистаминных.препаратов как противомикробных средств",. утвержденного.РПК-'-,Фармация"-МЗ.УОСР, 1939.
Основные положения, выносимые на защиту.
I. Антигистаминные препараты - блокаторы Н-г-рецепторов гистамина обладают антибактериальной и противогрибковой активностью в отношении возбудителей инфекционно-аллергических и гнойно-воспалительных заболеваний.
-
Противомикробные свойства антигиста мииных препаратов реализуются за счет ингибирования синтеза белка и ДНК в бактериальной клетке.
-
Антигистаминные препараты и антибиотики.при сочетанном применении могут проявлять синергидное, индифферентное и антагонистическое действие на патогенные микроорганизмы, что необходимо учитывать при их клиническом применении, и в терапевтических дозах, оказывают.незначительное влияние на фекальную микрофлору.
Апробация работы. Результаты .исследований.доложены на конференциях молодых ученых Харьковского фармацевтического.института (1988-1990 гг.), Областной научно-практической.конференции . молодых ученых-медиков "Научно-технический прогресс в медицине", на 1-ой Областной конференции "Вторичные иммунодефициты инфекционной и неинфекционной природы" (1989 г.., Харьков), на Ц-ой . . Областной межинститутской конференции молодых ученых."микробиология, иммунология и биотехнология-», практике здравоохранения" (1989 г., Харьков), научной конференции молодых ученых и. специалистов ХНИИ эндокринологии и химии гормонов (1990 г., Харьков), на Ш съезде.фармацевтов Туркмении (1989 г., Ашхабад). . . . .
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных ра
бот в.журналах и сборниках. .......
Структура и обьем диссертации. Диссертационная работа со- -стоит из введения, обзора литературы, 5 собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы. Диссертация изложена на 163- страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 7 рисунками. Указатель литературы включает 151 отечественный и 66 зарубежных источников.
В работе изучены восемь коммерческих антигистаминных препаратов - блокаторов Нт-рецепторов гистамина (таил. і).и антибиотики: тетрациклин, гентамицин, канамицин, ампициллин, эритромицин, а также диски с антибиотиками для определения чувствительности микроорганизмов, выпускаемые, в СССР.
В исследованиях по изучению антимикробной активности, антигистаминных препаратов или их..сочетаний.с антибиотиками.использовано 175 музейных.и клинических штаммов микроорганизмов, из них 164 штамма бактерий относились к родам: staphylococcus
(32 штамма),ягспегіспіа ( б) .Cltrobacter ( 2) , Enterobacter (26),
Klebsiella (П)» Proteus (5l), Shigella (5), Salmonella
(26), Pseudomonas (5) И II ШТЭММОВ ГрибоВ: рода Candida
(6 ШТЭММОВ), Trichophyton (2), Epidermophyton (2),
Microsporum - (I)» Музейные культуры получены из. ГИСК им. Л.А.Тарасевича, клинические штаммы получены из 8-*й детской инфекционной больницы г.Харькова, ВШИ А, ХНИИДиВ в течение 1980-1990 гг.
Бактериальные культуры хранили в столбиках.полужидкого .. _ (0,4%). ША под слоем-вазелинового.масла. Культуры патогенных грибов поддерживали на полужидкой (0,15.среде Сабуро. . ..
В исследованиях применяли также другие питательные среды для различных целей: I).бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120-140 мг/# а минного азота и рН 7,2-7, Ч имясопептонный.. агар для определения антибактериальной активности препаратов методом серийных разведений; 2).бульон и агар Сабуро для изучения противогрибковых свойств препаратов (рН 6,5-7,0).
Для выделения культур при бактериологическом исследовании
Таблица I
Препараты - блокаторы Нт-рецепторов гистамина, использованные ав работе
Название
Формула соединения
коммерческое (международное)
химическое
^фсН- 0 - С^-С^-^ССНз^ н&
^ Tjc-ctft
^^у-сн2 - щ-Ксм^ на
/Г і,
а\-сн-у/(сн3)і-на
:СШ"
WsoA
Ч-о
Димедрол (СССР) (дифенги драми н)
Тавегил
(ВНР)
( клема стин)
Счастии (хлорпирамин)
Пипольфен
(ВНР) N
(прометазин)
Фенкарол (СССР)
Диазолин.
(СССР)
(мебгидролин)
Д-ди мети ла ми но-этилового эфира бензгидрола гидрохлорид
1-метил-2[2-*-метил-парахлор-дифенилметиокси этил]пирроли дина гидрофумарат
к-диметиламино-зтил-и-(парахлор бензил) -амино-пиридина гидрохлорид
Ю-(2-Диметил. аминопропил)-фенотиазина гидрохлорид
хинуклидил-3-ди-
фенилкарбинола
гидрохлорид
9-бензил-1,2, 3,4-тетрагидро 3-метилкарболи на дисульфат
Димебон (СССР)
Пепитол
(ВИР)
(ципрогептадин)
9- [2(2-мети лпири дил-5)-этил]-З.б-диметил-l, г | 2,3,4-тетрагидро^і гаммакарболина дигидрохлорид'
4-5-дибензо[а,аТ ци кло(гепта три е-нилиден)-1-метил-пиперидина гидоо-хлорид
'-СН*
СНі-СН.
н
.2нсг
Ь\ъ
фекалия крыс использовали: I) среду Эндо; 2) бактоагар Плоскире-ва; 3) маннито-солевой агар фирмы Ыо Merieux ; 4) азидовый
агар фирмы Ио Merieux ; 5) срвДу TSIT фирмы Ыо Merieux .'
-
селективную среду для энтерококков фирмы Ыо Merieux ;
-
среду mes фирмы serva ; 8) анаэробный агар с кровью типа Bremer фирмы Difco . Идентификацию культур проводили на основании изучения.роста бактерий в аэробных, и анаэробных условиях, отношения, к. окраске.по Граму,, характеру роста на.се-„ лективных средах, продукции каталазы, цитохромоксидазы,- продукции индола, сероводорода, утилизации цитрата натрия, определения подвижности и др. (Готтшалк Г., 1982).
Эксперименты проведены на 620 белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-20 г и 90 белых нелинейных крысах - самцах массой 180-200 г.
Определение антибактериальной активности испытуемых лекар
ственных препаратов проводили методом серийных разведений в
плотных и жидких питательных средах в соответствии с "Методиче-..
скими указаниями по применению унифицированных методов определе
ния чувствительности микроорганизмов к химическим препаратам"
(І98Г). Для дополнительной оценки активности.лекарственных
средств использовали полученные.рассчетным. путем показатели . ...
МШЦ0 и MIIKqq - концентраций, подавляющих рост 50$ и 90$ штаммов
одного вида соответственно. ...
Изучение противогрибковых свойств лекарственных препаратов проводили также методом серийных разведений в соответствующих . средах. Микробную нагрузку рассчитывали по бактериальному стан-. дарту мутности: с учетом того, что размеры.клеток дрожжеподобных грибов и клеточных элементов.нитчатых грибов превышают бактериальные, для грибов инокулят содержал 10-3« I05 КОЕ/мл. Инкубация
при культивировании дрокжеподойных грибов составляла. Ц8 часов. За ростом дерматофитов наблюдали в течение 7-Ю дней.
Для оценки химиотерапевтической эффективности препаратов использовали модели стафилококковой и.синегнойной генерализованной инфекции белых мышей.(Перший Г.Н., 1976). Испытуемые препараты вводили .однократно и одновременно с .внугрибрюшинным заражением в дозах, рассчетно соответствующих.максимальным одноразовым, для человека с учетом межвидовой экстраполяции данных .(Рыболов-лев.Ю.П., 1981). Химиотерапевтический эффект лекарственных . средств оценивали на основании показателей выживаемости животных в течение 10 дней на фоне гибели контрольных.мышей, а также по суммарной продолжительности жизни мышей на протяжении срока наблюдения и высеваемости возбудителей из паренхиматозных органов в различные сроки после заражения.
Действие блокаторов Нт--гистаминовых рецепторов на. синтез ДНК и белка исследовали на модели золотистого стафилококка АТСС 25923 радиоизото.пным методом с использованием меченых 3Н-тимидина, ^ТІ-глицина и смеси -^Х-амино кислот. Обработку радиоактивных проб, проводили по методу Д.Кеннела (1970). Радиоактивность проб определяли на сцинтилляционном спектрофотометре
SL _ZfO " Intertecknique " В ТОЛуОЛОВОМ СЦИНТИЛЛЯТОре. -
Для оценки влияния пипольфена на микробную экологию и колонизационную резистентность толстой кишки белых крыс, использова-. ли. различные.методы. Действие.препарата-на просветную микрофлору изучали в процессе бактериологического .исследования испражнений ._ крыс по методу, разработанному в лаборатории гигиены и экологической микробиологии ВШИА ("Методические указания ...", 1989).
Эффект пипольфена на антагонистическую активность фекалий
определяли по методу s. p. Borrieiio (1986) в модификации
С.Д.Митрохина и Б.А.Шендерова. (1990). Для характеристики изменения метаболической активности анаэробных микроорганизмов применяли метод газо-жидкостной хроматографии, методику н. Hidaca (1986) в модификации С.Д.Митрохина и Б.А.Шендерова (1990). Исследования проведены на газовом хроматографе ском -5 (ЧСФР).
Пипольфен вводили животным интрагастрально однократно в дозах,.соответствующих максимальной терапевтической и.субтокси-ческой: 3 мг/кг и 12 мг/кг массы тела. Микроэкологические эффекты пипольфена определяли на 2-й день восстановительного периода.
Результаты исследований обработаны методами вариационной, статистики по критерию Стьюдента (Ашмарин И.П., Воробьев А.А., 1962; Налета Ю.С., Тарасов В.В., 1982).