Введение к работе
Актуальность проблеми.
В настоянеє время туберкулез сохраняет значительный удельный в группе инфекционных заболеваний. Это подтверждают неблаго-учные цифры эпидемиологического и эпизоотологического плана, для ряда регионов нашей страна, так и для развивающихся стран, этом свидетельствуют и терапевтические неудачи во вполне квали-ированных клиниках (А.Г.Хоменко, 1975, 1981; В.Я.Сагалович, . Должанский, 1984, М.С.Беленький, Л.А.Лукьянов, 1980).
Однако, вышесказанное не значит, что ресурсы терапии туберкуло-полностью исчерпаны и всякая исследовательская работа в данном екте бесперспективна. Работами школи А.Г.Хоменко и его сотрудии-доказана высокая пластичность микобактерий туберкулеза, их ве-ационнан способность, что убеждает в целесообразности поиска но-путей лечения, с обязательным изучением морфофункциональных, энений микробных клеток после воздействия лечебных факторов . Хоменко, 1981}.
Проблему эффективного лечения туберкулезных процессов, преду-кдения осложнений,' Изменений возбудителя заболевания туберкуле-невозможно решить без комплексного исследования морфофункцио-ьной организации микобактерий туберкулеза.
Особое внимание привлекает изучение механизма воздействия на )бактерии туберкулеза всех используемых медикаментозных средств їтодов, то есть повреждающих факторов физической, биологической шической природы, применяемых в клинической практике.
К ним, в частности, относятся биологические антиоксиданти и :оэнергетическое лазерное излучение, используемое и клиникз IT. В клинической практике применяются преимущественно Л- тско»
форол и его синтетический аналог дибунол с хоровими.результатами. (В.Д.Пушкарева, 1968). Помимо предупреждения формирования избыточной соединительной ткани, .содействия боле^е полноценному заживлению воспалительного очага, а - токоферол обладает и бактериостатической активностью (Е.В.Старостенко, Н.А.Смирнова, А.М.Салпагаров, 1989, Г.М.Сардалы, Л.И.Калинина, У.К.Лликперов, 1983). Однако, механизм его действия a, главное, структурные изменения самого возбудителя, происходящие при этом, но изучены.
За последнее десятилетие заметно активизировалось использование света низкоэнергетических лазеров в лечебных целях. Экспериментальными и клиническими исследованиями установлено, что низкоинтексивное излучение гелий-неонового лазера (ИГНЛ) оказывает противовоспалительное действие, нормализует трофику, стимулирует регенерацию тканей и местный иммунитет (Н.в.Гамалей, 1972, С.Н.Садовый, Л.В. Казаков, Г.К. Бадалов, 1986, Н.И.Штельмах, 1983). .
Во фтизиатрии ИГКЛ не нашло еще достаточно широкого применения, что можно объяснить отсутствием' единого мнения у немногочисленных исследователей, занимавшихся изучением влияния красного лазерного, света на возбудитель туберкулезного заболевания, полностью не изученной является проблема механизма влияния лазерного красного света на анатомию микобактерий.
Цель настояаего исследования.
Комплексное изучение ультраструктурной организации МБТ с применением современных методов на новом методическом уровне электронной микроскопии как в норме, так и под действием некоторых терапевтических физических и химико-биологических факторов.
Задачи исследования.
С помощью оовргмеМ&лх методов электронной микроскопии: высоковольтной, просвечивающей, растровой, метода криоультратомии изучить
інатомию МВТ в норме и в условиях воздействия биологических Фактороз зыворотки больных, получавших К- токоферол или дибунол.
Изучить действие сыворотки крови больных, получавших биологические антиоксздэнты, на жизнеспособность МБТ.
Изучить анатомию МБТ в условиях воздействия излучения гелий-кео-ювого лазера (ИГНЛ).
Оценить эффективность влияния ИГНЛ на жизнеспособность МБТ штам-дов HJ7RV и чувствительного к лекарственным препаратам штамма 8926, звделенного от больного и провести изучение вирулентности МБТ, облу-<енных ИГНЛ, для лабораторных животных.
Положения, выносимые на защиту:
-
Уточнены морфометрические параметры ультраструктурных элементов МБТ при использовании криоультратомической методики подготовки ірепаратов.
-
Установлено повреждающее действие сыворотки крови больных посів введения им ос- токоферола и дибунола на анатомию и биологические :войства возбудителя туберкулеза.
-
Доказано, что низкоэнергстическое излучение гелий-неонового іазера в изученных тёрапезтичёских режимах- нарушает ультраструктур -іую организацию возбудителя туберкулеза, снижает интенсивность ого >оста на искусственных питательных .средах и степень вирулентности Шя чувствительных лабораторных животных.
Научная новизна.
Принципиально новым является то, что впервые при использовании іетода криоультратоыии при изучении ультраструктурно?, организации !БТ выявлены ранее не описанные структуры конусообразной и глсбуло-ібразной формы, то есть различные по своей конфигурации у вирулент-шх и авирулентных штаммов. Возможна связь указанных структур с со-іержаниек антигенов и корд-фактора в бактериальных клетках.
Доказано повреждающее действие сыворотки крови брльных.получавип биоактиоксиданты, на ультраструктуру МБТ.Бактериостатическая активної сыворотки крови больных, получавших и - токоферол, достигат максим; ыа к 40 минутам инкубации.
По способу ле'чекия инфильтративного туберкулеза легких получено авторское свидетельство 1577795 от 1990 р. на изобретение.
Установлена биологическая активность ИГНЛ в отноизнии МБТ о раз ми биологическими свойствами. Степень анатомических изменевий ультра структур МБТ коррелировала с нарушением других биологических свойств интенсивностью роста на питательных средах, и вирулентностью.
Установлена прямая зависимость степени анатомических нарушений времени воздействия квантового излучения гелий-неонового л зера.
Практическая значимость.
Полученные данные существенным образом дополняют и по-новому об ясчяют действие биологических антиоксидантов в качестве противотубер кулезных препаратов при лечении этого заболевания.- Получены новые да ные, касающиеся интерпретации действия антиоксидантов в качестве ком нентов терапии, используемой при лечении инфильтративного туберкулез
Установлено бактериостатическое действие ИГНЛ (ЛГ-75) на МВТ tip изученных режимах воздействия, что подтверждает необходимость примен ния квантового излучения при клинических показаниях.
Выполненная работа решила актуальную научную проблему по исслея ванию ульграструхтурной организации микэбактерий с разными биилогиче кими свойствами з норме и при воздействии на них сыворотки крови бол чих,получавших биологические антиоксиданти - « - токоферол или диб> нол, а также при воздействии излучения низкоэнергетического гелий-нс нового лазера - ЛГ-7Е в разных диапазонах непосредственно на культуру КЇБТ.
Полученные в процессе выполнения исследования данные по ультраструктурним изменениям микобактерий верифицировали стандартными микробиологическими методами: определением бактєриостатичєскпіі активности (рови больных,характеристикой макроростр микобактернальних колоний на їлотннх питательных сродах и изучением Ечрулентности интачтных и под-іергшихся воздействию низкоэнергетического квантового излучения культур возбудителя туберкулеза.
Данные исследования используются в учебных педагогических процес-lax при обучении студентов, ординаторов, аспирантов и практикуючих вра-іей в Московском НИИ туберкулеза МЗ РСФСР, Центральної.! НИИ туберкулеза UW, на кафедре патологической анатомии Московского стоматологического шетитута им. Н.А.Семашко, на кафедре дртиьиспульмэчологии Московской :едицинской Академик, о чом имеется соответствующая документация.
Результаты работы каои отражения е следующих документах: Методи-сские рекомендации IP 21-08/11--166."Способ лечения ипфильтративного ту-еркулеза легких", ИЗ. РСФСР, 1990.
вторское свидетельство на изобретение № 1577795 "Способ лечения ин-ильтративного туберкулеза легких".
Апробация работы.'
Основные положения диссертации доложены .на: научных конференциях 1990, 1991 в Московском НИИ туберкулеза, на межлаборатеркей конференції НИИЭМ им. К.Ф.Гамалеи 1990 , на X Всесоюзном съезда Фтизиатров в . Киеве 1980 ,' на УІ Всероссийском съездо фтизиатров в r.KeMepoDo [987 , на Международном симпозиуме по лазерной хирургии и медицине t .Самарканде 1988 , на ХШ Всесоюзной конференции по электронной микро-{опии в г.Звенигороде 1986 , на обществе микробиологов-фтизиатров в .Москве 1989 . По теме диссертации опубликовано 14 работ.
Структура и объем диссертации.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания иатч-іала и методов исследования, собственных данных, изложенных в 3' ма«
ос, заключения, выводов и библиографии, содержащей 101 наименование
..:ечествекных и 126 - иностранных авторов. Объем диссертации составля-
.". 152 страницы машинописи, -диссертация иллюстрирована таблицами,іра-
тикаыи, электроннограммами. .