Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 9
1.1. Полимерные микросферы в качестве носителей биолигандов в реакциях латексной агглютинации 10
1.2. Методы синтеза полимерных суспензий 14
1.3. Полимерные микросферы, содержащие на поверхности специфические лиганды, для аффинного связывания с биолигандами 21
Глава 2. Экспериментальная часть 34
2.1. Исходные вещества 34
2.2. Методы исследования 37
2.2.1. Получение полистирольных хлорметилированных микросфер 37
2.2.2. Определение содержания полимера в суспензиях 37
2.2.3. Получение ПГМА-ЭГДМА полимерных микросфер методом затравочной полимеризации 37
2.2.4. Определение размеров частиц 37
2.2.5. Определение скорости седиментации полимерных микросфер 38
2.2.6. Определение краевого угла смачивания 39
2.2.7. Определение агрегативной устойчивости полимерных частиц 39
2.2.8. Анализ наличия функциональных групп 39
2.2.9. Получение диагностической тест-системы путем ковалентной иммобилизации дифтерийного анатоксина на поверхность полимерных частиц через карбодиимид 40
2.2.10. Постановка и учет результатов реакции латексной агглютинации 40
2.2.11. Исследование структуры полимерных частиц методом электронной сканирующей микроскопии 41
2.2.12. Исследование структуры полимерных частиц методом электронной просвечивающей микроскопии 41
2.2.13. Исследование структуры полимерных частиц с помощью метода ионного травления 42
2.2.14. Проведение реакции Майяра между аминогруппами полимерных микросфер и глюкозой, декстранами разной молекулярной массы 42
2.2.15. Проведение реакции Майяра между аминокислотой – глицином и глюкозой и декстранами разной молекулярной массы 43
2.2.16. Исследование диффузии молекул флуоресцентных производных декстранов и глюкозы в поры полимерных микросфер 43
2.2.17. Оценка флуоресценции продуктов реакции Майяра в различных средах методом конфокальной микроскопии 44
2.2.18. Получение диагностической тест-системы на основе полимерных микросфер, модифицированных продуктами реакции Майяра и танином 44
Глава 3. Результаты и их обсуждение 45
3.1. Физико-химические свойства модифицированных полистирольных микросфер 45
3.2. Изучение структуры полимерных микросфер 52
3.3. Полиглицидилметакрилатные микросферы в качестве носителей биолигандов 67
3.3.1. Модификация и физико-химические свойства сополимерных глицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных (ПГМА-ЭГДМА) микросфер 67
3.3.2. Проведение реакции латексной агглютинации с использованием полимерных микросфер 74
3.4. Роль ПАВ при формировании отрицательного контроля в лунках плашки при протекании реакции латексной агглютинации 89
Выводы 93
Список литературы 95
- Методы синтеза полимерных суспензий
- Изучение структуры полимерных микросфер
- Модификация и физико-химические свойства сополимерных глицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных (ПГМА-ЭГДМА) микросфер
- Роль ПАВ при формировании отрицательного контроля в лунках плашки при протекании реакции латексной агглютинации
Методы синтеза полимерных суспензий
Кратко рассмотрим основные методы синтеза полимерных суспензий:
Эмульсионная полимеризация.
Методом эмульсионной полимеризации получают полимерные суспензии с широким распределением по размеру с диаметрами, не превышающими 0,2 мкм. Это обусловлено формированием частиц по разным механизмам: из мицелл ПАВ, микрокапель мономера и по механизму гомогенной нуклеации [41,44,55-58]. Узкое распределение частиц по размерам получают при полимеризации мономеров в присутствии нерастворимых в воде ПАВ [53] или при использовании специальных методов полимеризации, таких как дробное введение компонентов рецепта полимеризации (мономера, ПАВ) по ходу процесса [41,42,51].
Суспензионная полимеризация.
Сущность метода суспензионной полимеризации состоит в том, что мономер или смесь мономеров диспергируют в жидкой фазе, главным образом в водной, путем механического перемешивания в присутствии стабилизаторов таких как: крахмал, желатин, ацетилцеллюлоза, натриевые и калиевые соли полиакриловой и полиметакриловой кислот, сополимеры гидрофобных мономеров с малеиновым ангидридом и др. Эффективность защитного действия стабилизатора невысокая из-за их низкой концентрации, и образование частиц протекает по коагуляционному механизму. Размер полученных при этом полимерных дисперсий идентичен размеру исходных капель мономера и колеблется от десятков микрон до нескольких миллиметров.
Средний диаметр частиц полимерной дисперсии, образующихся при суспензионной полимеризации, распределение их по размерам, устойчивость реакционной системы и конечной суспензии полимерных частиц определяются множеством факторов, таких как природа инициатора и стабилизатора, температура процесса, вязкость системы, рН среды, массовое соотношение мономерной и водной фаз, а также скорость перемешивания, тип перемешивающего устройства и форма реакционного сосуда [42]. Обычно распределение частиц полимерной суспензии широкое [51,52,66].
Осадительная полимеризация.
Получение полимерных суспензий с узким распределением по размерам возможно при использовании специальной методологии проведения синтеза: дробного введения компонентов по ходу полимеризации, полимеризации в условиях синтеза стабилизатора на границе раздела фаз и т.д.
Обычно полимеризацию проводят в средах, в которых образующийся при синтезе полимер нерастворим. Недостатком этого способа синтеза является плохая воспроизводимость результатов и невысокая устойчивость в буферных растворах [63,64,66].
Дисперсионная полимеризация.
Неотъемлемыми компонентами дисперсионной полимеризации являются мономер, растворитель/нерастворитель, инициатор и стерический стабилизатор [104,109]. Основное требование, предъявляемое к мономеру- растворимость в дисперсионной среде и, напротив, нерастворимость в ней образующегося из него полимера. Используемый растворитель обычно имеет низкую диэлектрическую константу, поэтому нельзя использовать обычные ПАВ, обеспечивающие создание электростатической стабилизации частиц. Для получения устойчивых полимерных суспензий применяют стерические стабилизаторы. Чтобы стабилизатор был эффективным, он должен быть амфипатным, т.е. должен содержать как «якорь»- сегмент, обладающий сродством к поверхности частицы конечного полимера, так и сегмент, растворимый в реакционной среде. Используемые алифатические стабилизаторы делятся на три класса: 1) гомополимеры 2) блок- и графт - сополимеры 3) макромономеры. Для дисперсионной полимеризации используются как полярные, так и неполярные растворители. Во многих случаях полимеризацию проводят в спиртах, вода добавляется для регулирования растворимости олигомера в дисперсионной среде и, таким образом, для регулирования размеров частиц. Несмотря на большое количество публикаций по изучению механизма и кинетических закономерностей полимеризации мономеров, исследования в этой области продолжаются с целью изучения начальной стадии процесса для понимания механизма образования полимерных частиц [107-109]. На рис. 1.2.1 приведен схематично механизм дисперсионной полимеризации, принятый многими исследователями.
Рис.1.2.1. Механизм дисперсионной полимеризации (а) Гомогенный раствор мономера, инициатора и стабилизатора. При распаде инициатора и образующихся радикалов образуются (в) олигомерные радикалы, которые, при достижении критической длины высаживаются из раствора, начинается прививка на молекулы стабилизатора. (с) Самонуклеация и агрегация первичных частиц-стадия. (d) Рост частиц за счет набухания мономера и последующей полимеризации внутри частиц-стадия. (е) Продолжение роста частиц может происходить за счет поглощения полимера с образованием конечных частиц. Этим методом получают полимерные суспензии с узким распределением по размерам в широком интервале значений диаметров (3-20 мкм).
Затравочная полимеризация.
Данный метод удобен тем, что позволяет регулировать как размер частиц полимерной суспензии, так и природу функциональных групп на их поверхности [63,66,110]. Важной особенностью затравочной полимеризации является создание частиц с морфологией типа "ядро-оболочка», что открывает возможность синтеза полимерных микросфер, содержащих на поверхности функциональные группы, которые способны образовывать ковалентную связь с функциональными группами биолиганда. Для получения полимеров с различными функциональными группами в широких пределах варьируют концентрацию функционального сомономера [63,66].
Каждым из этих способов синтеза при определенных условиях можно получить полимерные суспензии с определенным диаметром частиц, узким распределением частиц по размерам, стабильностью в физиологических растворах и при хранении, наличием функциональных групп определенной природы и их концентрации на поверхности частиц.
Впервые были успешно применены поливинилтолуольные и полистирольные микросферы в качестве носителей антител при создании тест-систем для выявления антигенов ревматоидного артрита [43]. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с -глобулином, адсорбированным на поверхность микросфер суспензии, привело к слипанию (агглютинации) полимерных частиц с образованием крупных агломератов, легко различимых невооруженным глазом. Вслед за этим появились публикации по использованию полистирольных микросфер, на поверхность которых физически адсорбировали биолиганды при создании диагностических тест-систем на другие виды заболеваний [1-24].
Однако, удачные лабораторные разработки таких тест-систем часто не могли быть воспроизведены при масштабировании. Многие исследователи ориентировались на универсальность полимерного носителя при физической адсорбции на его поверхность биолигандов различной природы, строения, молекулярной массы и т.д. Однако ряд серьезных недостатков, среди которых следует выделить возможную десорбцию биолиганда с поверхности полимерных микросфер, обуславливают невысокую диагностическую эффективность тест-систем, недостаточное время их хранения, а также невоспроизводимость результатов анализа [63,66].
Свободными от указанных недостатков оказались полимерные суспензии с функциональными группами на поверхности, способными к ковалентному взаимодействию с функциональными группами биолигандов [31,32,43,44,46]. Проведенные исследования позволили сформулировать требования к полимерным частицам, используемым в качестве носителей биолигандов [63,66]:
1. размер полимерных микросфер от 0,2 до 0,8 мкм для слайдовых агглютинационных тестов; от 1,0 до 5,0 мкм для седиментационных агглютинационных тестов;
2. полимерная суспензия должна содержать частицы с узким распределением по размерам для обеспечения высокой чувствительности тестов, работающих по принципу реакции латекс-агглютинации;
3. полимерные микросферы должны на поверхности содержать функциональные группы, способные ковалентно связываться с функциональными группами молекул белка при максимальном сохранении их специфической и функциональной активности;
4. полимерные микросферы должны сохранять устойчивость в процессе их очистки, получении тест-систем и при длительном их хранении в буферных растворах.
Изучение структуры полимерных микросфер
Изучение структуры частиц проводили, используя сополимерные микросферы (ПСТ-ДВБ-ХМ), полученные методом затравочной полимеризации при разном массовом соотношении мономеры/затравочные частицы. Частицы I-при массовом соотношении стирол:затравочные полистирольные частицы, равном 10:1 соответственно, частицы II – при массовом соотношении стирол:затравочные полистирольные частицы, равном 26:1 соответственно.
Условия набухания частиц мономерами были одинаковыми: температура 40С, время 3 часа. Затравочную сополимеризацию стирола инициировали перекисью бензоила (2% масс. в расчете на мономер) и проводили при Т=80С в течение 6 часов.
После окончания полимеризации полимерные микросферы подвергали многократной экстракции дихлорметаном, промывали ацетоном, хлорметилировали и модифицировали диаминами. Физико-химические свойства сополимерных суспензий приведены в табл. 3.2.1.
Полимерные микросферы различались плотностью упаковки из-за разного соотношения между количеством сшитого и линейного сополимеров, практически несовместимых, вследствие разного содержания мономеров в частицах I и II.
В процессе экстракции дихлорметаном несшитый полистирол из объема полимерных частиц удалялся и на поверхности частиц образовывались пустоты. В полимерных микросферах II распределение сшитого полимера более равномерное, так как концентрация несшитого полистирола меньше.
Образование более рыхлой структуры полимерных частиц I благоприятствует ориентации аминогрупп на поверхности полимерных микросфер и высокому значению -потенциала.
Это заключение подтверждается данными по определению количества аминогрупп, приходящихся на одну полимерную частицу (табл. 3.2.2): в частицах I оно составляет 46 108, а в частицах II-16 108. Об этом же свидетельствует более интенсивный желтый окрас частиц после проведения реакции Майяра между аминогруппами модифицированного полистирола и альдегидными группами глюкозы (эти результаты будут рассмотрены далее). На рис. 3.2.1, 3.2.2 показана кинетика седиментации исследуемых полистирольных микросфер со средним диаметром dср= 4 мкм (I). хлорметилированных аминированных сополимерных ПСТ-ДВБ микросфер во времени. Скорость седиментации полимерных частиц сопоставима со скоростью седиментации эритроцитов и составляет 3,6 мм/час-для частиц I и 5,5 мм/час-для частиц II. Полное расслоение суспензии частиц I наблюдалось через 8 часов выдерживания системы, а частиц II-через 6 часов.
Для изучения морфологии поверхности хлорметилированных аминированных полистирольных микросфер использовали метод электронной микроскопии и ионного травления ионизированным воздухом, при воздействии которого на полимер сначала разрушаются наименее упорядоченные, более рыхлые участки частиц. В предварительных исследованиях было выяснено,что при увеличении времени травления до 30 минут наблюдается заметное изменение морфологии частиц. Анализ полученных фотографий показывает, что в качественном соотношении травление всех частиц проходит одинаково, частицы неоднородны по плотности и состоят внутри из набора субъединиц, которые проявляются после разрушения верхнего слоя частиц уже в течение первых минут травления. С увеличением времени травления наблюдается увеличение рыхлости упаковки субъединиц и появление пустот. Анализ полученных данных показал, что все исследованые микросферы характеризуются неоднородной структурой, которая обусловлена особенностями их формирования в процессе дисперсионной и затравочной полимеризации, а также их модификации (рис.3.2.3) [108].
Модификацию поверхности аминированных сополимерных микросфер декстранами разной молекулярной массы проводили, используя впервые для ковалентного связывания декстрана с поверхностью полимерных частиц реакцию Майяра между аминогруппами сополимера и альдегидными группами декстранов. Реакцию проводили в фосфатно-солевом буфере при объемном соотношении полимерная суспензия/раствор сахарида, равном 1:2 соответственно при 600С в течение 72 часов.
Кратко остановимся на описании реакции Майяра. Известно, что эта реакция протекает при взаимодействии аминогрупп различных веществ и альдегидных групп сахаров в кислой среде с образованием окрашенных продуктов, способных флуоресцировать. В настоящее время о реакции Майяра известно [112], что это не единичная реакция, а целый комплекс процессов, которые протекают последовательно и параллельно и придают реакционной массе коричневый цвет. Главное, чтобы в реакционной смеси присутствовали карбонильные (C=O) группы (в составе сахаров, альдегидов и жиров) и аминогруппы (белки, полимеры). Продукты реакции в научной литературе называют «конечные продукты гликирования». В эту группу продуктов входят алифатические альдегиды и кетоны, гетероциклические производные имидазола и пиразина.
Темную окраску продуктам реакции придают высокомолекулярные вещества, меланоидины, которые образуются на последней стадии реакции Майяра.
По литературным данным [112,114,115] меланоидины-это широкий спектр полимеров разнообразного строения, включая гетероциклические и хиноидные структуры. Образование меланоидинов сопровождается появлением множества ароматических веществ: фурфурола, оксиметилфурфурола, ацетальдегида, формальдегида, изовалерианового альдегида, метилглиоксала, диацетила и др.
Точного описания последовательности стадий, приводящих к образованию в поверхностных слоях полимерных микросфер веществ с функциональными группами, способными ковалентно связываться с функциональными группами биолиганда, не предоставляется возможным ввиду значительного разнообразия перечня возможных химических превращений, но сделать вывод о том, что такое связывание имеет место, можно. Ниже приведены в виде схем литературные данные по некоторым возможным реакциям, протекающим при проведении реакции Майяра за счет взаимодействия аминогрупп полимерных микросфер с альдегидными группами глюкозы и декстрана (рис. 3.2.4) и общая схема реакции (рис. 3.2.4).
Согласно литературным данным [112] при добавлении танина протекает реакция альдегидных групп декстрана с электронноизбыточными полигидроксилированными бензойными кольцами танинов. После иммобилизации танинов они способны связывать белки за счет наличия карбоксильных групп. Возможно также взаимодействие альдегидных групп продуктов распада декстрана с аминогруппами белка за счет образования оснований Шиффа. В общем виде все стадии протекающих реакций, описанных в литературе, показаны на следующей схеме (схема 3.2.1).
Исходя из анализа cнимков продуктов реакции Майяра, полученных с помощью конфокального микроскопа, возможно определение мест их нахождения. Если реакция проходит на поверхности частицы, то должна образовываться светящаяся оболочка вокруг полимерной микросферы. Если реакция проходит во всем объеме частицы, то флуоресценция продуктов должна наблюдаться по всему объему частицы, что говорит о наличии аминогрупп во всем объеме частицы и о возможности проникновения молекул декстрана через поры, что свидетельствует о том, что размер пор превышает размер молекулы декстрана и составляет величину порядка 30 нм. Определение размеров пор в полимерных микросферах проводили, используя флуоресцентные продукты реакции Майяра между аминогруппами полимера и глюкозой, по следующей методике. Хлорметилированные аминированные полистирольные микросферы смешивали с глюкозой при перемешивании. Количество глюкозы, израсходованной в реакции Майяра определяли с помощью глюкометра по ее концентрации в супернатанте. Расчет проводили, используя калибровочную кривую глюкометра (рис. 3.2.5 ).
Модификация и физико-химические свойства сополимерных глицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных (ПГМА-ЭГДМА) микросфер
Жесткость требований, предъявляемых к полимерным микросферам, используемым в качестве носителей биолигандов, является причиной поиска в каждом конкретном случае своих условий формирования полимерных микросфер, определяющих их свойства (определенный диаметр частиц, узкое распределение их по размерам, наличие функциональных групп на поверхности, устойчивость полимерных микросфер в процессе полимеризации и модификации, хранении и применении), а также формирования поверхностного слоя, обеспечивающего иммобилизацию биолигандов без изменения их функциональной активности.
Как и в случае синтеза хлорметилированных аминированных полистирол-дивинилбензольных микросфер затравочная сополимеризация была выбрана как наиболее общий и удобный метод получения полимерных ПГМА-ЭГДМА частиц .
Для получения затравочных полиглицидилметакрилатных частиц проводили дисперсионную полимеризацию ГМА, инициированную (ДАК) (3% масс.), в качестве стабилизаторов использовали диоктилсульфосукцинат натрия (АОТ) (2,6% масс.) и поливинилпирролидон (ПВП) (3% масс.).
Электронная микрофотография полученной полимерной дисперсии и гистограмма распределения частиц по размерам (РЧР) приведены на Рис.3.3.1.1. Видно, что полимерная суспензия характеризуется узким распределением частиц по размерам и средним диаметром частиц, равным 1,8 мкм.
Затравочные полиглицидилметакрилатные частицы набухали смесью мономеров ГМА и ЭГДМА и проводили затравочную сополимеризацию в присутствии ПБ в качестве инициатора и ПВС в качестве стабилизатора. Концентрация ПВС составляла 1% масс. в расчете на мономер. Были синтезированы затравочные сополимерные суспензии ГМА/ЭГДМА при разном массовом содержании ЭГДМА (5,25,50 и 75%) . Распределение по размерам всех полимерных микросфер было узким. На рисунке 3.3.1.2 в качестве примера показана электронная микрофотография частиц, полученных затравочной сополимеризацией ГМА и ЭГДМА при концентрации ЭГДМА, равной 50% массовых, и гистограмма распределения частиц по размерам (РЧР).
Сополимерные микросферы модифицировали – гексаметилендиамином (ГМДА) и этилендиамином (ЭДА). Схема модификации приведена ниже.
В первом случае (при аминировании ГМДА) получали суспензию полимерных микросфер (10г) в н-пропиловом спирте и ГМДА (30г), которую выдерживали в течение 2-х часов при перемешивании и температуре 900С, затем охлаждали, промывали на фильтре Шотта водой. При аминировании полимерных микросфер ЭДА суспензию, содержащую 10г полимерных частиц и 40г ЭДА выдерживали при температуре 900С в течение 2-х часов при перемешивании.
Замена ЭДА на ГМДА (Рис. 3.3.1.4) приводит к гидрофобизации поверхностного слоя полимерных микросфер из-за появления значительного количества метиленовых групп аминирующего агента. В этом случае соотношение гидрофильных-гидрофобных групп составляет 1:2. Такое соотношение полярных/неполярных групп обеспечивает достаточную устойчивость полимерной суспензии, но не приводит к образованию высоко гидратированных слоев на поверхности.
Количество аминогрупп, содержащихся в полимерных микросферах, определяли по содержанию азота в сополимере методом элементного анализа. (табл.3.3.1.1 и табл.3.3.1.2).
Видно, что аминирование ПГМА-ЭГДМА микросфер протекает эффективно, причём с увеличением содержания ЭГДМА содержание азота в сополимере снижается, видимо, из-за увеличения степени сшивания полимерных цепей.
Так, сополимерные суспензии, содержащие 75% массовых ЭГДМА и 25% массовых ГМА, содержали 0,76% азота масс., а сополимерные суспензии, содержащие 25% массовых ЭГДМА и 75% массовых ГМА, 3, 12% масс. При содержании в полимерных микросферах азота выше 4% масс. поверхность полимерных микросфер становится гидрофильной и при их седиментации не образуются плотные осадки (табл. 3.3.1.1).
Полимерные частицы, модифицированные ЭДА, во всех случаях седиментируют с образованием рыхлого осадка и характеризуются гидрофильной поверхностью, что, видимо, связано с гидратацией поверхностных групп и групп, находящихся в приповерхностном слое. В результате контакта гидратированных полимерных микросфер в процессе их седиментации формируется осадок, характеризующийся невысокими значениями энергии взаимодействия между частицами. В результате происходит частичная пептизация осадка, он становится легкоподвижным и можно визуально фиксировать легкость его взмучивания.
При аминировании полимерных микросфер гексаметилендиамином (табл. 3.3.1.4) распределение аминогрупп между приповерхностным слоем полимерной частицы и близлежащим объемом изменяется. С увеличением длины углеводородного радикала конформационная подвижность молекул диамина повышается и возрастает вероятность взаимодействия двух его аминогрупп с эпоксигруппами глицидилметакрилата. Это приводит к уменьшению концентрации первичных аминогрупп в поверхностном слое полимерных микросфер, его гидрофобизации (увеличению угла смачивания). При седиментации частиц образуется плотный осадок.
Роль ПАВ при формировании отрицательного контроля в лунках плашки при протекании реакции латексной агглютинации
Латексные диагностикумы-это препараты, которые представляют собой монодисперсные полимерные частицы с иммобилизованными на их поверхности специфическими антителами. При смешивании их с исследуемой сывороткой, при наличии в последней соответствующих антигенов, они специфически взаимодействуют с антителами, сорбированными на поверхности полимерных частиц, что приводит к их агглютинации.
При реализации специфического взаимодействия «антиген-антитело», то есть при положительном результате, полимерные частицы, несущие антиген, равномерно выстилают дно U-образной лунки (планшета) в форме «зонтика», в отсутствие специфического иммунологического взаимодействия они скатываются на дно U-образного пространства в виде плотной «пуговки».
Для того, чтобы улучшить контроль, необходимо обеспечить осаждение полимерных микросфер, которые образуют ореол вокруг пуговки, в центр дна лунки.
Движение полимерных микросфер к центру лунки и образование «пуговки» (отрицательного результата РЛА) может быть заторможено коагуляционными контактами, возникающими между полимерными микросферами. Величина энергии коагуляционного контакта зависит как от гидрофильности поверхности полимерных микросфер, так и от наличия на поверхности частиц адсорбционного защитного слоя из гидратированных молекул ПАВ.
Наиболее простым способом предотвращения нежелательной коагуляции частиц является формирование на их поверхности гидратированного слоя полимера, создающего плоскости скольжения между полимерными частицами.
Такое пластифицирующее действие адсорбционного слоя, создаваемого на поверхности полимерных частиц, может быть образовано введением в систему ПАВ. Для этой цели целесообразно использовать ПАВ, которые не способны образовывать комплексы с белком. В качестве таких ПАВ были выбраны неионные ПАВ - Твин 20, Твин 80, тритон Х100 при концентрациях порядка 1,3 10-5 моль/г. Согласно литературным данным при этих концентрациях ПАВ не будут нарушать функциональную активность белка [113]. Результаты постановки контроля реакции в присутствии выбранных ПАВ представлены на Рис. 3.4.2. В качестве полимерных микросфер использовали модифицированные ПСТ-ДВБ микросферы, содержащие на поверхности антитела к дифтерийному анатоксину.
Видно, что качество контроля РЛА повышается в присутствии Твина 20, Твина 80 и Тритона Х100 (рис. 3.4.2).
Функцию дополнительного пластификатора могут выполнять и другие неионные ПАВ. Было показано, что пластифицирующее действие раствора Твин 80 (рис. 3.4.4) проявляется при его концентрации порядка 1,310-5 моль/г.
Таким образом, использованные для улучшения контроля полимерных микросфер неионные ПАВ при проведении РЛА в фосфатном буфере позволяют улучшить четкость проявления отрицательного контроля РЛА.