Выявление антидиабетической активности вновь разработанных нейропротекторных препаратов Озерова Ирина Витальевна

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы 11

1.1. Сахарный диабет 11

1.1.1. Распространенность сахарного диабета 11

1.1.2. Классификация сахарного диабета 12

1.1.3. Сахарный диабет 2 типа, характеристика, факторы развития 13

1.1.4. Осложнения сахарного диабета 2 типа 16

1.1.5. Лечение сахарного диабета 21

1.1.5.а. Основные группы антидиабетических препаратов 21

1.1.5.6. Новые направления антидиабетической терапии 29

1.2. Экспериментальные модели диабета 32

1.3. Вовлечённость некоторых общих механизмов в патогенез диабета и БА. 41

1.4. Общность механизмов регуляции функций нейронов и панкреатических р-клеток

1.4.1. Инсулинорезистентность 45

1.4.2. Дефицит нейротрофических факторов (НГФ) при СД 48

1.4.3. Роль окислительного стресса в патогенезе СД 2 51

1.4.4. Роль провоспалительных цитокинов в патогенезе СД 2 53

1.5. Обоснование цели исследования 55

1.5.1. Дипептидные миметики нейротрофинового фактора, ГК-2 и ГК-2 (Н) 56

1.5.2. Афобазол и его метаболит М-11 58

1.5.3. Ноопепт 59

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 64

2.1. Препараты и вещества, используемые в экспериментах 64

2.2. Животные 65

2.3. Дизайн эксперимента 66

2.4. Определение фонового уровня глюкозы в крови и толерантности к глюкозной нагрузке 67

2.5. Взвешивание животных 68

2.6. Тест на болевую чувствительность tail-flick - метод «отдергивания хвоста» 68

2.7. Биохимические исследования (количественное определение HbAlc, инсулина, ГПП-1, ДПП-4 и содержание МДА в плазме крови) 68

2.8. Морфометрические исследования поджелудочной железы

2.9. Методы определения влияния ГК-2 на коагуляционные свойства крови 70

2.10. Статистическая обработка результатов 72

ГЛАВА 3. Результаты экспериментов 73

3.1. Изучение отобранных нейропротекторных веществ на модели начальных фаз диабета 74

3.1.1. Оригинальный димерный дипептидный миметик ГК-2 74

3.1.2. Афобазол и его метаболит М-11 76

3.1.3. Ноопепт 81

3.2. Изучение отобранных нейропротекторных веществ на модели развитого диабета 85

3.2.1. Оригинальные димерные дипептидные миметикиГК-2 86

3.2. La. Изучение антидиабетического эффекта 86

3.2.1.6. Влияние ГК-2 на динамику изменения показателей систем гемостаза и фибринолиза у крыс 90

3.2.2. Ноопепт 94

3.3. Механизм действия Ноопепта 99

3.3.1. Влияние Ноопепта на содержание МДА в плазме крови крыс с СТЗ-диабетом. 100

3.3.2. Сравнение антигипергликемического эффекта Ноопепта в условиях перорального и внутрибрюшинного введения 101

3.3.3. Сравнение антигипергликемических эффектов Ноопепта и Ситаглиптина 103

3.3.4. Биохимические и морфметрические исследования 107

3.3.4.а. Биохимические исследования 108

3.3.4.6. Морфометрические исследования 111

ГЛАВА 4. Заключение 115

Итоги 137

Выводы 138

Практические рекомендации 140

Список сокращений 141

Список публикаций по теме диссертации 143

Список литературы

• Осложнения сахарного диабета 2 типа
• Дипептидные миметики нейротрофинового фактора, ГК-2 и ГК-2 (Н)
• Определение фонового уровня глюкозы в крови и толерантности к глюкозной нагрузке
• Влияние ГК-2 на динамику изменения показателей систем гемостаза и фибринолиза у крыс

Введение к работе

Актуальность проблемы. Сахарный диабет (СД) относится к числу основных причин смертности населения в большинстве стран мира, и каждые 10-15 лет количество больных диабетом удваивается (Дедов, ИИ. Сахарный диабет: развитие технологий в диагностике, лечении и профилактике (пленарная лекция) // Сахарный диабет. 2010. № 3. С. 6-13). По данным Международной федерации диабета (DDF) в настоящее время более 382 миллионов человек в мире больны этим заболеванием, а к 2035 году их количество возрастёт до 592 млн. По числу больных диабетом Россия занимает 5-ое место в мире.

Самым распространенным видом СД (90-95% от общего числа случаев) является сахарный
диабет второго типа (СД 2) - сложное гетерогенное расстройство, характеризующееся
сочетанием прогрессирующего снижения чувствительности к инсулину

(инсулинорезистентность, ИР) и неадекватной компенсационной секреции инсулина (в начале болезни она не только не снижена, а часто и повышена), что является результатом дисфункции Р-клеток поджелудочной железы. СД прогрессирует, что способствует развитию осложнений, таких, как сердечно-сосудистые заболевания (Мкртумян, A.M. Уровень гликемии как фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний // Сахарный диабет. 2010. №3. С. 80-82; Дедов И.И., Шестакова М.В. Сахарный диабет и сердечно-сосудистые заболевания: состояние проблемы // Сахарный диабет. 2004. № 4. С. 2-6), нефропатия (Шестакова М.В., Шамхалова М.Ш. Диабетическая нефропатия: клиника, диагностика, лечение; Ред. академика И.И. Дедов. Москва, 2009. 28 с), ретинопатия (Aiello, L.M. Perspectives on diabetic retinopathy II Am J Ophthalmol. 2003. V. 136, № 1. P. 122-135) и нейропатия (Мкртумян, А.Ф. Лечение сахарного диабета и его осложнений. РМЖ. 2002. Т. 10, №17. С. 773-7). Перечисленные осложнения регистрируются у 40—55% больных и являются причиной роста смертности от СД (Сунцов Ю.И., Болотская Л.Л., Маслова О.В., Казаков И.В. // Сахарный диабет. 2011. № 1. С. 15-18).

На сегодняшний день предупреждение и терапия СД 2 затруднено недостаточной эффективностью применяемых средств в отношении защиты секреторной функции Р-клеток и наличием побочных эффектов: для производных сульфонилмочевины характерно развитие вторичной резистентности, для бигуанидов - гепатотоксичность и повышение риска развития кардиоваскулярной патологии. Применение ингибиторов дипептидил-пептидазы-ГУ (ДПП-4) повышает частоту развития панкреатита и рака поджелудочной железы (Шестакова Е.А., Галстян Г.Р. Ингибиторы ДПП-4: сравнительный анализ представителей группы // Проблемы эндокринологии. 2012. № 1. С. 61-66). Для многих антидиабетических веществ характерно развитие гипогликемии, нарушений функций желудочно-кишечного тракта. Вышеизложенные факторы определяют необходимость продолжения активного поиска новых терапевтических стратегий, в частности, обеспечивающих воздействие одновременно на несколько основных звеньев заболевания, и, при этом, направленных на предотвращение прогрессирования диабета на стадии его развития (Спасов, А.А., Петров В.И., Чепляева Н.И., Ленская К.В. Фундаментальные основы поиска лекарственных средств для терапии сахарного диабета 2-го типа // Вестник РАМН. 2013. № 2. С. 43-49; Тюренков, И.Н., Куркин Д.В., Болотова Е.В., Бакулин Д.А., Ломкина Е.М. Десять новых мишеней для разработки лекарственных средств для

лечения СД2 и метаболического синдрома // Сахарный диабет. 2015. №1. С. 101-109; Сахарный диабет 2 типа. Проблемы и решения: учеб. пос. 2-е издание, переработанное и дополненное. Аметов АС. //Москва. ГЭОТАР-Медиа, 2014. 1032 с).

Внимание исследователей последних лет привлекает вопрос о сходстве патогенетических механизмов нейродегенеративных заболеваний и диабета: развитие инсулинорезистентности, дефицит нейротрофических факторов, нарушение метаболизма глюкозы, накопление свободных радикалов, дефицит антиоксидантных систем, накопление провоспалительных цитокинов, мисфолдинг протеинов (P-amyloid в нейронах, islet amyloid polypeptide, IAPP, в поджелудочной железе), избыточная активность глюкокортикоидов и дефицит холинергических процессов (De la Monte, S.M. Brain Insulin Resistance and Deficiency as Therapeutic Targets in Alzheimer's disease II Current Alzheimer Research. 2012. V. 9, № 1 № 35-66; Островская P.У., Ягубова С.С. Общность механизмов болезни Альцгеймера и диабета: пути фармакологической коррекции. Психиатрия 2014. Т. 61, №1. С. 35-43).

Наряду с этим, в литературе имеются немногочисленные, но весьма убедительные данные о существенной общности механизмов регуляции функций нейронов и Р-клеток поджелудочной железы: наличие общих факторов роста и дифференцировки, электрическая возбудимость, наличие сходных энзимов, пептидов. Это сходство нейронов и Р-клеток поджелудочной железы проявляется также в механизмах их повреждения, включающих дефицит нейротрофических факторов и недостаточность антиоксидантных систем при болезни Альцгеймера (БА) и при СД 2 (Toth, С. Diabetes and neurodegeneration in the brain II Handbook of Clin Neurol. 2014. V. 126. P. 489-511). Это, в свою очередь, может быть основанием для использования общих подходов к лечению этих заболеваний. Вопрос о целесообразности использования антидиабетических препаратов для замедления прогрессирования нейродегенеративных процессов при Б А до сих пор остается открытым. Ведутся отдельные экспериментальные исследования, но подведение итогов клинической оценки инкретиномиметиков у пациентов с БА, первоначально анонсированное на июль 2014 года, отложено до июля 2016 года (Bristol Myers Squibb, протокол NCT01255163).

Вопрос о том, могут ли нейропротекторные вещества проявлять защитные свойства в отношении функции панкреатических Р-клеток и обладать вследствие этого антидиабетической активностью, ранее не исследовался. В нашей работе в качестве таких потенциальных антидиабетических соединений были изучены оригинальные нейротропные препараты, сконструированные в ФГБНУ «НИИ фармакологи имени В.В. Закусова». Эти препараты при всём различии их химической структуры и типа нейротропной активности объединяет общее свойство - наличие нейропротекторного эффекта, в основе которого лежит способность ослаблять проявления оксидативного стресса и усиливать экспрессию нейротрофических факторов в нейрональных клетках.

Степень разработанности проблемы. Роль пептидов в качестве многокомпонентных регуляторов широкого спектра функций организма привлекает в последние годы нарастающее внимание исследователей. Однако, практическое применение пептидов в качестве медицинских препаратов, в том числе для лечения диабета, затруднено их низкой биологической устойчивостью. Развиваемая в ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» дипептидная

концепция создания нейротропных препаратов продемонстрировала свою эффективность созданием таких оригинальных препаратов, как дипептидныи ноотроп Ноопепт, дипептидныи нейролептик Дилепт, дипептидныи анксиолитик ГБ-115. Однако, созданные в Институте нейропротекторные дипептиды, такие как Ноопепт (Seredenin, S.B., Voronina Т.A., Gudasheva Т.A., Ostrovskaya R.U., Rozantsev G.G., Skoldinov А.Р., Trophimov S.S., Halikas J.A., Garibova T.L. II US Patent. 1995. No. 5,439,930), дипептидные НГФ-миметики (Середенин СБ., Гудашева Т.А. 2010. Патент РФ №2410392), с точки зрения наличия антидиабетической активности ранее не изучались. Это же относится и к созданному в Институте оригинальному селективному анксиолитику с нейропротекторными свойствами на основе бензимидазола Афобазолу (Середенин СБ., Бледнов А.Ю., Савельев В.Л. Патент РФ 2061686; Бюл. изобрет., № 16. 1996). Выявленная в нейрорецепторных исследованиях способность Афобазола связываться с <5\-рецепторами привлекает особый интерес к этому веществу в свете известных литературных данных о роли дефицита этих рецепторов в патогенезе диабета.

Цель исследования. Изучение на стрептозотоциновых моделях СД 2 эффектов мультитаргетных нейропротекторных препаратов, сконструированных в НИИ фармакологии имени В.В. Закусова: дипептидных миметиков НГФ на основе 4-ой петли молекулы НГФ крысы и человека, ГК-2 и ГК-2 (Н), селективного анксиолитика Афобазола и его основного метаболита М-11, ноотропного препарата Ноопепт.

Основные задачи исследования.

1. Разработка режимов моделирования начальной и развитой формы стрептозотоцинового
(СТЗ) диабета у крыс

2. Оценка антигипергликемических эффектов дипептидных миметиков НГФ: ГК-2
(гексаметилендиамид бис-(К-моносукцинил-Ь-глутамил-Ь-лизина), (HOOC-(CH2)2-CO-Glu-Lys-
№Г>2(СН2)б и ГК-2 (Н) (гексаметилендиамид бис-М-моносукцинил-глицил-Ь-лизина), (НООС-
(CH₂)2-CO-Gly-Lys-NH-)2(CH₂)6.

1. Исследование влияния НГФ-миметика ГК-2 на показатели гемостаза и фибринолиза у интактных и диабетических животных в экспериментах ex vivo.

2. Изучение антигипергликемического действия анксиолитического препарата Афобазола (5-этокси 2-[2-(морфолино)этилтио]-бензимидазола дигидрохлорид) и его основного метаболита М-11 (92-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этоксибензилимидазола гидрохлорид).

5. Исследование антидиабетического эффекта дипептидного ноотропного препарата
Ноопепт (этиловый эфир ІМ-фенилацкетил-Ь-пролилглицина; ГВС-111).

6. Изучение механизма антидиабетического действия Ноопепта, проявившего наиболее
выраженную антидиабетическую активность.

Научная новизна. Впервые на модели начальных фаз диабета, или преддиабета, создаваемой путём повторного введения подпороговых доз СТЗ, выявлены антидиабетические свойства оригинальных нейропротекторных препаратов: дипептидных миметиков НГФ, ГК-2 и ГК-2 (Н), ноотропа Ноопепта и селективного анксиолитика Афобазола. Показана их способность нормализовать базовый уровень гликемии и ослаблять выраженность нарушений толерантности к глюкозе. НГФ-миметик ГК-2 и дипептидныи ноотропныи препарат Ноопепт показали быстро развивающуюся активность, вследствие чего были изучены на модели

развитого диабета, в условиях которой они предотвращали такие признаки заболевания, как гипергликемия, снижение прироста массы тела и изменения болевой чувствительности.

В экспериментах ex vivo впервые выявлен гипокоагуляционный эффект оригинального низкомолекулярного системно-активного аналога НГФ, ГК-2.

Впервые показано, что по выраженности антигипергликемических свойств и влияния на толерантность к глюкозной нагрузке на экспериментальной модели преддиабета, Ноопепт не уступает эталонному препарату Ситаглиптину.

Получены доказательства цитопротекторного действия Ноопепта. Выявлен новый механизм антигипергликемического действия Ноопепта - способность восстанавливать уровень инкретина Г1Ш-1 и инсулина, сниженных при диабете.

Научно-практическая значимость.

Данные об эффективности Ноопепта на моделях начальных фаз диабета и развитого диабета и новые данные о механизмах его антидиабетического действия могут быть включены в регистрационное досье для получения разрешения на проведение клинических исследований эффективности препарата у больных СД 2. Полученные в работе данные делают целесообразным дальнейшее изучение дипептидных миметиков НГФ в качестве потенциальных средств фармакотерапии сахарного диабета. Учитывая тот факт, что стрессогенные воздействия служат одним из факторов возникновения диабета, дальнейшее изучение антигипергликемических свойств анксиолитика Афобазола может иметь особую научно-практическую значимость.

Методология и методы исследования. Для моделирования стадии начальных форм диабета использовали низкую дозу СТЗ (30 мг/кг, Sigma), вводимую в течение трёх последовательных дней, а для моделирования развитого диабета - среднюю дозу (40-45 мг/кг), вводимую однократно. В экспериментах применяли различные режимы внутрибрюшинного (в/б) и перорального введения соединений: профилактическое, терапевтическое и их комбинация. Используя глюкометр One Touch Ultra (USA), проводили определение фонового уровня глюкозы (натощак) в крови (обе модели диабета) и толерантности к глюкозной нагрузке (стадия начальных фаз диабета) после введения в/б раствора глюкозы в дозе 1000 мг/кг. Массу тела измеряли каждые 3-4 дня. Болевую чувствительность в тесте tail-flick исследовали с помощью прибора Analgesia test, Tail-flick, Type 812 фирмы "Hugo Sachs Elektronik" (Germany). Проводили биохимические исследования - определяли содержание малонового диальдегида (МДА), гликированного гемоглобина (HbAlc), инсулина, ГПП-1, активность ДПП-4 в плазме крови и post mortem морфометрический анализ образцов поджелудочной железы с определением доли и инсулиновой активности Р-клеток. Для исследования показателей гемостаза (запись тромбоэластограммы (ТЭГ) на тромбоэластографе Хеллиген) и фибринолиза (фибринолиз в эуглобулиновой фракции) проводили эксперименты ex vivo.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Общность механизмов регуляции функций панкреатических Р-клеток и нейронов,

сходство патогенетических основ их повреждения свидетельствуют о целесообразности изучения нейропротекторных веществ на предмет наличия у них антидиабетического действия.

Для изучения отобраны оригинальные нейропротекторные препараты, созданные в ФГБНУ «НИИ фармакологи имени В.В. Закусова».

2. Используемые режимы введения диабетогенного токсина СТЗ позволяют моделировать различные фазы развития диабета: начальную (стадия глюкозотолерантности на фоне практически нормального фонового уровня сахара в крови) при повторном введении малой дозы СТЗ (30 мг/кг) и развернутую формы (повышенный фоновый уровень глюкозы в крови и потеря массы тела) при введении средней дозы СТЗ (40-45 мг/кг). По нашим данным содержание инсулина в плазме составляет 48% от контрольного уровня - доказательство развития СД 2. Введение высоких доз СТЗ (50-70 мг/кг) в поисковых фармакологических исследованиях нецелесообразно ввиду существенной гибели животных.

3. Изученные соединения (НГФ-миметики, Ноопепт, Афобазол и его метаболит М-11) восстанавливают фоновый уровень глюкозы, улучшают толерантность к глюкозной нагрузке на моделях преддиабета и развитого диабета. Оригинальный дипептидный миметик НГФ, ГК-2, сочетает антигипергликемический эффект с антитромботическим, что может иметь важное научно-практическое значение в свете известных представлений о повышенном риске тромбообразования в условиях множественной микрососудистой патологии, характерной для диабета.

4. Высокая антигипергликемическая активность, близкая по выраженности эффекту стандартного антидиабетического препарата Ситаглиптина, выявлена у Ноопепта. Большая выраженность его эффекта в условиях перорального введения по сравнению с внутрибрюшинным позволила предположить наличие у Ноопепта инкретиномиметического действия. Это предположение подтверждено в экспериментах с определением содержания инкретина ГПП-1 и инсулина в плазме крови: Ноопепт устраняет характерный для диабета дефицит этих эндогенных факторов контроля гликемии. Инкретиномиметический эффект Ноопепта может составить основу его цитопротекторного действия в отношении Р-клеток поджелудочной железы.

Степень достоверности. Работа выполнена на большом экспериментальном материале с использованием адекватных методов исследования; статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием современных методов математической статистики и анализа полученных данных.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены на IV съезде фармакологов России (Казань, 2012) и конференции «Инновации в фармакологии: от теории к практике» (Санкт Петербург, 2014).

Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии в получении исходных данных, систематизации и апробации результатов исследования. Автором лично выполнена экспериментальная часть диссертации, сформулированы основные положения и выводы. При активном участии автора подготовлены публикации по результатам диссертационного исследования.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 7 статей в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, 2 тезисов

докладов. 1 заявка на Патент «Вещества, обладающие антидиабетической активностью (ГК-2)» (per. номер 2013129711, заявлено 28.06.13).

Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 168 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментов, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 28 рисунками. Библиографический указатель включает 249 публикаций, из них 64 отечественных.

Осложнения сахарного диабета 2 типа

Сахарный диабет 2 типа, характеристика, факторы развития. СД 2 является сложным и гетерогенным расстройством, характеризующимся прогрессирующим снижением чувствительности к инсулину (ИР) в печени и периферических тканях, за которым следует неспособность Р-клеток компенсировать резистентность к инсулину (дисфункция Р-клеток) и, как следствие, дефект секреции инсулина, приводящий к его относительному, а не абсолютному, дефициту, ведущему к гипергликемии, которая в той или иной степени выраженности обнаруживается у каждого больного (Cheng, D. Prevalence, predisposition and prevention of type II diabetes II Nutr Metab. 2005. № 18. P. 2-29). К основным симптомам гипергликемии относят полиурию, полидипсию, потерю веса, иногда сочетающуюся с полифагией (Старкова, Н. Т. Клиническая эндокринология: Руководство / Н. Т. Старкова. Вздание 3-е, переработанное и дополненное. Санкт-Петербург: Питер, 2002. С. 225-253. 576 с. («Спутник Врача»). Отмечается повышение восприимчивости к инфекции в связи с нарушением выработки антител. Острыми, опасными для жизни последствиями неконтролируемого диабета являются гипергликемия с кетоацидозом, гиперосмолярныи синдром. К вторичным симптомам относятся более медленно развивающиеся состояния: зуд кожи и слизистых оболочек (вагинальный зуд), общая мышечная слабость, сухость во рту, нарушение зрения, головная боль, а также воспалительные поражения кожи, трудно поддающиеся лечению (Строев Ю. П.: Сахарный диабет: Учебное пособие / Петербург, педиатр, мед. ин-т- Санкт-Петербург, ППМИ, 1992. 56 с).

Развитию этих симптомов способствуют такие факторы, как возраст, повышение веса и ожирение, недостаток физической нагрузки, потребление пищи с высоким содержанием жиров, сердечно-сосудистые заболевания (гипертония, дислипидемия), курение (Manson, J.E., Ajani, U.A., Liu, S., Nathan D.M., Hennekens C.H. A prospective study of cigarette smoking and the incidence of diabetes mellitus among US male physicians II Am J Med. 2000. V. 109. P. 538-542), стрессогенные (Hu, F.B., Sigal, R.J., Rich-Edwards, J.W., Colditz G.A., Solomon C.G. et al. Walking compared with vigorous physical activity and risk of type 2 diabetes in women: a prospective study II JAMA. 1999. V. 282, № 15. P. 1433-1439) и, наконец, генетические факторы. При этом ожирение является основным фактором риска у людей с СД 2. Чем больше Индекс Массы Тела (ИМТ), тем выше степень ИР (Cheng, D. Prevalence, predisposition and prevention of type II diabetes II Nutr Metab. 2005. № 18. P. 2-29). При ожирении повышается уровень свободных жирных кислот. Увеличение жировых запасов, особенно депо висцерального жира, приводит к высвобождению молекул адипокинов, которые, в свою очередь, действуют на инсулиновые сигнальные пути, приводя к прогрессированию ИР. Как только человек начинает терять вес, у него наблюдается улучшение ИР (Masiello, P. Animal models of type 2 diabetes with reduced pancreatic beta-cell mass II Int J Biochem Cell Biol. 2006. V. 38(5-6). P. 873-893).

Фундаментальными патогенетическими особенностями СД 2 являются прогрессирующая дисфункция Р-клеток и их частичное разрушение, вследствие чего развивается дефицит инсулина, увеличивается уровень глюкозы в крови. Однако, в течение долгого времени, пока не погибнут 70-80% инсулин продуцирующих клеток, в плазме крови наблюдается нормальный фоновый уровень глюкозы. Единственным фактором, позволяющим прогнозировать развитие диабета в этот период, является наличие избирательного нарушения толерантности к глюкозной нагрузке (Fernandes, N.P., Lagishetty С.V., Panda V.S., Naik S.R. An experimental evaluation of the antidiabetic and antilipidemic properties of a standardized Momordica charantia fruit extract II BMC Complement Altern Med. 2007. V. 7. P. 29-36). Уровень глюкозы остается нормальным при условии, что Р-клетки островков Лангерганса в состоянии обеспечить выход достаточного количества инсулина, чтобы преодолеть снижение чувствительности к инсулину (ИР). При прогрессировании нарушения компенсации Р-клеток начинает развиваться базовая гипергликемия. ИР влияет на основные ткани-мишени инсулина: скелетные мышцы, печень и жировую ткань. ИР и секреция инсулина могут ухудшаться из-за снижения эффективного реагирования Р-клеток и снижения сенсибилизации тканей-мишеней к инсулину. Секреция инсулина зависит от множества факторов, в том числе от мощности базовой секреции, активности системы инкретинов, содержания глюкозы и свободных жирных кислот в продуктах питания (Спасов А.А., Петров В.И., Чепляева Н.И., Ленская К.В. Фундаментальные основы поиска лекарственных средств для терапии сахарного диабета 2-го типа // Вестник РАМН. 2013. № 2. С. 43-49). Состояние СД 2, кроме того, связано с повышением уровня холестериновых липопротеинов низкой плотности, увеличением уровня холестериновых липопротеинов очень низкой плотности, повышением общего холестерина, повышением уровня триглицеридов и снижением уровня холестериновых липопротеинов высокой плотности (Rizzo, М., Rini, G.B., Berneis, К. The clinical relevance of LDL size and subclasses modulation in patients with type 2 diabetes II Clin Endocrinol Diabetes. 2007. V. 115, № 8. P. 477-482; Keating, G.M., Croom, K.F. Fenofibrate: A review of its use in primary dyslipidemia, the metabolic syndrome and type 2 diabetes mellitus //Drugs. 2007. V. 67, № 1. P. 121-153).

Для дифференцировки типа диабета используются следующие приёмы. Для СД 1 существуют специфические антитела, которые доступны для измерения: GAD-антитела, инсулин аутоантитела, антитела тирозин фосфатазы IA2 или 1С А 512 и антитела транспортера цинка. GAD-антитела являются наиболее чувствительными и наблюдаются примерно у 70-90% пациентов с СД 1. Для постановки диагноза СД 2 необходимо основываться на результатах нескольких специализированных тестов, проводимых повторно: измерение уровня глюкозы в крови натощак (отсутствие приема пищи в течение не менее 8 часов); измерение уровня глюкозы через два часа после глюкознои нагрузки в 75 грамм и измерение уровня гликированного гемоглобина НЬАІс (Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Диагностика и классификация сахарного диабета // Сахарный диабет. 1999. V. 3, № 4. С. 1-17).

Пациенты с нарушенной толерантностью к глюкозе, диагностируемой по замедлению восстановления уровня гликемии после глюкознои нагрузки, имеют повышенный риск развития СД 2 и, следовательно, являются важной целевой группой для мероприятий, направленных на предотвращение развития диабета (Tuomilehto, J., Tuomilehto-Wolf, Е., Zimmet, P., Alberti К, Knowler, W. Primary prevention of diabetes mellitus II International textbook of diabetes mellitus. 1997. P. 1799-1827).

Дипептидные миметики нейротрофинового фактора, ГК-2 и ГК-2 (Н)

В работе использован стандартный "tail flick"est (метод отдергивания хвоста), реализуемый с помощью анальгезиметра Analgesia test, Tail-flick, Type 812 фирмы "Hugo Sachs Elektronik" (Germany). На проксимальную треть хвоста направляли сфокусированный пучок световых лучей, при этом животное удерживалось рукой на экспериментальной установке. Замерялся латентный период отдергивания хвоста в секундах. Измерения проводились за несколько дней до и после введения токсина. Для вычислений использовали усредненные значение 3-х последовательных измерений латентного периода отдергивания хвоста (с интервалами в 5 минут).

Биохимические исследования (количественное определение HbAlc, инсулина, ГПП-1, ДПП-4 и содержание МДА в плазме крови) . А) Для количественного определения HbAlc в плазме крови использовали набор для лабораторной диагностики крыс методом иммуноферментного анализа (Rat Glycated hemoglobin Ale, GHbAlc ELISA Kit, CSB-E08140 r, Cusabio). Метод позволяет определять от 1.25 до 80 pg/ml, при чувствительности 0.625 pg/ml. Перед определением готовили требуемое по инструкции разведение образца. Оптическую плотность измеряли при 450 нм в микропланшетном ридере (MR580 Microelisa autoreader, Dynatech product). Б) Для количественного определения содержания инсулина в плазме крови использовали набор для лабораторной диагностики крыс методом иммуноферментного анализа (Rat Insulin, INS ELISA Kit, CSB-E05070 r, Cusabio). Метод позволяет определять от 15.6 до 1000 nIU/ml, при чувствительности 3.9 nIU/ml. Перед определением готовили требуемое по инструкции разведение образца. Оптическую плотность измеряли при 450 нм в микропланшетном ридере (MR580 Microelisa autoreader, Dynatech product). В) Для количественного определения ГПП-1 использовали набор для лабораторной диагностики крыс методом иммуноферментного анализа (Rat glucagon-like peptide-1, ГПП-1 ELISA Kit, CSB-E08117 r, Cusabio). Метод позволяет определять от 0.62 до 40 pg/ml, при чувствительности 0.16 pg/ml. Оптическую плотность измеряли при 450 нм в микропланшетном ридере (MR580 Microelisa autoreader, Dynatech product). Г) Активность дипептидилпептидазы-IV (ДПП-4) оценивалась в двух версиях экспериментов: in vitro и in vivo. Определение активности ДПП-4 осуществляли на основании определения продуктов гидролиза субстрата 01у-Рго-7-амино-4-метилкумарина (Bachem) флуорометрически на спектрофлуорометре LS-5B (Perkin-Elmer) при длинах волн 380 нм (возбуждение) и 460 нм (флуоресценция) (Золотов Н.Н., Кутепова О.А., Воронина Т.А., Позднев В.Ф., Смирнов Л.Д. и соавт. О возможном участии пептидаз мозга в регуляции функции памяти при старении // ДАН СССР. - 1991. - Т. 317, № 1. - С. 234-237). Д) Для определения МДА к 50 мкл плазмы добавляли 20 мкл 0,485 М соли Мора и инкубировали при 37С в течение 30 мин. Затем к образцам добавляли 1030 мкл 0,9% раствора 2-тиобарбитуровой кислоты (Serva) в 50% уксусной кислоте, и инкубировали при 80С в течение 60 мин. После охлаждения измеряли оптическую плотность образцов на спектрофотометре DU-50 (Beckman-Coulter, США) в полумикрокювете при 532 нм. Расчет количества МДА проводили на основании значения коэффициента молярной экстинкции 1,56-10 М" cm" . Все измерения проводили в 3-х параллелях.

Образцы поджелудочной железы животных опытных групп фиксировали в жидкости Буэна в течение 12 часов, после чего проводили обезвоживание в восходящем ряду спиртов с последующей заливкой в парафин. Срезы толщиной 7 мкм окрашивали параформальдегид фуксином (ПАФ) по Гомори в модификации Майоровой (Майорова, В.Ф. К методике выявления нейросекреторных гранул в нервных клетках гипоталамуса // Архив анатомии. 1960. № 8. С. 101-109). Площадь каждого препарата поджелудочной железы составляла в среднем 36-38 мм . Изучали срезы в световом микроскопе Leitz Aristoplan GMBH, оснащенном цифровой фотокамерой DCM 800 («Shangaro Tele View Optical Instruments Co»), при увеличении 1600 (8x16x12.5). Полученные микрофотографии обрабатывались в программе Image J, v. 1.45; определяли среднюю интенсивность окрашивания островков, передающую информацию о количественном содержании инсулина в Р-клетках. Активность Р-клеток оценивали также по интенсивности окрашивания ПАФ в условных единицах: от 1 до 3 на один островок Лангерганса (ОЛ). Методом точечного счета определяли среднюю площадь (мкм ) ОЛ в каждой группе, оценивали в них площадь окрашенной части ОЛ, т.е. активной части островков, для определения процентного содержания Р-клеток (доли Р-клеток) путем вычисления соотношения площади, занимаемой Р-клетками, к общей площади островка, принятой за 100% (Гимнема лесная (ботаника, фармакогнозия, фармакология, клиническая эффективность): Монография / А.А. Спасов, М.П. Воронкова, Г.Л. Снигур, Д.Ю. Агарков; под общей редакцией академика РАМН А.А. Спасова. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2012. 200 с).

Кровь для исследования брали из яремной вены животных групп активного и пассивного контролей при помощи шприца, содержащего 3,8% раствор цитрата натрия (соотношение 9:1) через 4, 10, 18 и 45 суток от начала эксперимента. С помощью глюкометра One touch Ultra (USA) измеряли концентрацию глюкозы. (Рис.8). Фибринолиз ТЭГ

Кровь, взятую у крысы, центрифугировали в течение 10 минут при 2000 об/мин. От каждого образца полученной плазмы отделяли 0,2 мл для определения фибринолиза, а оставшуюся плазму делили на 2 равные части (по 0,7 мл). К одной части плазмы крыс из группы активного контроля добавляли 0,035 мл дистиллированной воды (серия 1), к другой — 0,35 мл свежеприготовленного раствора пептида ГК-2 в дистиллированной воде в концентрации 10" М (серия 2). Аналогичным образом обрабатывали кровь, взятую у крыс группы пассивного контроля (серии 3 и 4 соответственно). Все образцы инкубировали в течение 10 минут при 37 С. Затем в них определяли основные показатели состояния гемостаза по расшифровке данных ТЭГ (Рис. 9), записанной на тромбоэластографе фирмы Hellige. 0,735 мл плазмы крови, проинкубированной с водой или пептидом, помещали в кювету прибора, добавляли 0,03 мл 1,29% раствора хлорида кальция, перемешивали 3 раза плазму крови в кювете при помощи стержня тромбоэластографа, отмечали время введения Са и производили запись тромбоэластограммы. Рисунок 9. Образец тромбоэластограммы.

Определение фонового уровня глюкозы в крови и толерантности к глюкозной нагрузке

Как следует из представленных данных, 3-х-кратное введение СТЗ в дозе 30 мг/кг (активный контроль, N=9) ведёт к нарастанию фонового содержания сахара в крови и выраженному нарушению толерантности к глюкозной нагрузке. В отдалённые сроки после введения СТЗ фоновый уровень глюкозы в крови восстанавливается, однако толерантность к нагрузке остаётся нарушенной. Ноопепт при обоих использованных путях введения проявляет антигипергликемическую активность, при этом он нормализует фоновый уровень гликемии и достоверно ослабляет выраженность нарушений толерантности к глюкозе. Сравнение антигипергликемического эффекта Ноопепта в условиях перорального и внутрибрюшинного введения указывает на то, что при пероральном введении он выражен максимально как по показателю фоновой гипергликемии, так и по толерантности к глюкозной нагрузке (Островская Р.У., Золотов Н.Н., Озерова И.В., Иванова Е.А., Капица И.Г. и соавт. Ноопепт восстанавливает показатели инкретиновой системы при моделировании диабета у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2014. Т. 157, № 3. С. 321-327). При внутрибрюшинном введении Ноопепта его антигипергликемический эффект был менее выраженным, как по величине, так и по длительности. Большая выраженность антигипергликемической активности Ноопепта в условиях перорального введения по сравнению с таковым при внутрибрюшинном позволила предположить возможность вовлечения в реализацию его действия инкретиновых механизмов.

В связи с этим представилось интересным сравнить Ноопепт по эффективности с общепринятым «золотым стандартом» - современным перорально активным препаратом Ситаглиптином (Янувия). Этот препарат имеет преимущества перед другими ингибиторами ДПП-4 (фермента, расщепляющего инкретины): обладает большой длительностью эффекта, высокой селективностью действия в отношении ингибирования ДПП-4 и вызывает за счёт этого стабилизацию инкретинов. Препарат нашел широкое применение во всём мире для лечения СД 2. В 2007 Ситаглиптин был зарегистрирован в США, а с 2008 г. успешно применяется в России.

Эксперименты выполнены на 4-х группах крыс (N= 12 в каждой). 1.Крысам из группы пассивного контроля ФР вводился в/б в течение трёх последовательных дней, в тот же период и в последующие 16 дней ФР вводили крысам внутрь через желудочный зонд. 2. Крысам из группы активного контроля вводили СТЗ в/б в дозе 30 мг/кг в течение 3-х последовательных дней. За 5 минут до СТЗ вводили ФР внутрь; введение ФР дальнейшем продолжали в течение 16 дней. 3. Первая опытная группа, в которой СТЗ вводили в/б в дозе 30 мг/кг в течение 3-х последовательных дней. За 5 минут до СТЗ крысам вводили Ноопепт внутрь в дозе 5 мг/кг; введение препарата продолжали после трёхкратного введения СТЗ ещё в течение 16 дней. 4. Животным второй опытной группы СТЗ вводили в/б в дозе 30 мг/кг в течение 3-х последовательных дней. За 5 минут до СТЗ вводили Ситаглиптин внутрь в дозе 5 мг/кг; введение препарата продолжали в дальнейшем в течение 16 дней. Выбор этой дозы Ситаглиптина был сделан на основании многочисленных данных литературы.

Если в группе пассивного контроля исходный уровень глюкозы составлял 4,9 ммоль/л, а при нагрузке через 1 час уже достоверно не отличался от контрольного (5,28 ммоль/л), то в группе животных, которым вводился СТЗ (активный контроль), на следующий день после третьего введения СТЗ имело место не только нарастание спонтанного уровня глюкозы (до 10,84 ммоль/л), но и снижение толерантности к глюкозе - через 1 час после нагрузки уровень глюкозы в крови составлял 17,15 ммоль/л, а через 2 часа - 17,93±2,05 ммоль/л (Рис.21.А). На 12-ый день эксперимента фоновый уровень глюкозы начинал снижаться, но толерантность к глюкозе оставалась нарушенной (Рис.21.Б), а на 19-ый день эксперимента в этой группе наблюдалась полная нормализация фонового уровня при ещё сниженной толерантности к глюкозной нагрузке (Рис.21.В). В группе крыс, которым вводился Ноопепт, уже на следующий день после окончания введения СТЗ отмечалось, во-первых, выраженное снижение показателя фонового уровня глюкозы (до 5,54 ммоль/л), что соответствует расчётному показателю относительной антигипергликемической активности Аг 90,4 %. Кроме того, что очень важно, Ноопепт уже в начале эксперимента улучшал переносимость глюкозной нагрузки - показатель толерантности глюкозы достоверно не отличался от такового в группе пассивного контроля. Показатели фоновой гликемии и первого часа после нагрузки представлены на Рис 21.А. Через 9 суток после окончания воздействия диабетогенного токсина (12-ый день эксперимента), в группе крыс, леченых Ноопептом, все показатели не отличались от группы пассивного контроля, т.е. Ноопепт восстановил базальный уровень гликемии и нормальную толерантность глюкозы в условиях нагрузки (Рис.21.Б). Это соответствовало нарастанию показателей Аг как для фоновой гликемии, так и для нагрузочной (97% и 103% соответственно). Наконец при тестировании через 16 дней после окончания введения СТЗ в группе активного контроля имело место восстановление спонтанного уровня гликемии при некотором улучшении толерантности к глюкозной нагрузке, а показатели в опытной группе, леченой Ноопептом не отличались от таковых в группе пассивного контроля (Рис.21.В).

на толерантность к глюкозной нагрузке, особенно в первый час, было менее выраженным, чем у Ноопепта (Рис.21.А). На 12-ый день эксперимента (9 дней после окончания введения токсина), когда в группе активного контроля началось снижение фонового уровня гликемии, но толерантность к глюкозной нагрузке была сниженной (15,6 и 9,8 ммоль/л через 1 и 2 часа после нагрузки соответственно), в группе крыс, леченых Ситаглиптином, фоновое содержание глюкозы было ниже и толерантность к глюкозе была лучше, чем в группе активного контроля (Рис.21.Б). На 19-ый день эксперимента (16 дней после окончания введения токсина) в группе активного контроля имело место восстановление фонового уровня гликемии, но толерантность к глюкозной нагрузке через 1 час оставалась сниженной, что нашло отражение в высоком уровне глюкозы (12 ммоль/л) через 1 час после нагрузки (Рис.21.В). В группе крыс, леченых Ситаглиптином, содержание глюкозы в крови на фоне нагрузки снижалось до 8,8 ммоль/л и показатель Аг составлял только 43,6 %, т.е. был почти в два раза меньше, чем таковой в группе, леченой Ноопептом (84,2 %).

Влияние ГК-2 на динамику изменения показателей систем гемостаза и фибринолиза у крыс

Анализируя возможные причины выявленного антидиабетического действия Ноопепта, следует указать, что хотя каждый из этих факторов может в принципе стать мишенью действия Ноопепта, доказательства такой активности получены лишь для некоторых из них. Например, известно, что антиоксидантная система в поджелудочной железе представлена значительно слабее, чем в других органах и это определяет важнейшую роль оксидативного стресса в патогенезе диабета (Fonseca, S.G., Burcin М., Gromada J., Urano F. Endoplasmic reticulum stress in beta-cells and development of diabetes II Curr Opin Pharmacol. 2009. V. 9, № 6. P. 763-770). У Ноопепта выявлена способность активировать антиоксидантные системы на широком наборе объектов: начиная от плазмы крови крыс (Менджерицкий A.M., Лысенко А.В, Демьяненко СВ., Прокофьев В.Н., Гудашева Т.А. и соавт. Процессы перекисного окисления липидов в коре больших полушарий головного мозга и плазме крови молодых крыс с высоким уровнем тревожности при эмоциональном стрессе: защитный эффект ноотропного дипептида ГВС-111 // Нейрохимия. 2003. Т. 20, № 4. С. 281-286) и кончая плазмой крови добровольцев (Островская Р.У., Федорова Т.Н., Ус К.С. Оценка антиоксидантного действия ноотропного дипептида ноопепт на модели Fe -индуцированной хемилюминесценции липопротеинов сыворотки крови человека in vitro II Нейрохимия. 2007. № 1 С. 69-73). Антиоксидантная активность Ноопепта показана на культуре человеческих нейронов (Pelsman, A., Hoyo-Vadillo, С, Gudasheva, Т., Seredenin S.B., Ostrovskaya R.U. et al. GVS-111 prevents oxidative damage and apoptosis in normal and Down s syndrome human cortical neurons II Int.J. Devi. Neuroscience. 2003. V. 21, № 3. P. 117-124) и культуре нейробластомы SH-SY5Y (Jia, X., Gharibyan A.L., Ohman A., Liu Y., Olofsson A. al. Neuroprotective and nootropic drug noopept rescues a-ynuclein amyloid cytotoxicity II J Мої Biol. 2011. V. 414, №5. P. 699-712). Что касается влияния на токсичность панкреатического амилоида амилина, этот эффект Ноопепта не исследовался, хотя наличие цитопротекторного действия в отношении Р-амилоидной токсичности на культуре феохромоцитомы (Ostrovskaya R.U., Vakhitova Y., Kuzmina U., Salimgareeva M., Zainullina L. et all. Neuoprotective effect of novel cognitive enhancer noopept on AD-related cellular model involves the attenuation of apoptosis and tau hyperphosphorylation II Journal of Biomedical Science. 2014. V 21, №1. P. 74) делает такое предположение вероятным.

Задача облегчения дифференциации и ослабления апоптоза Р-клеток поджелудочной железы может быть решена либо непосредственным включением нейротрофических механизмов, либо активацией инкретиновой системы, которая также активирует процессы неогенеза Р-клеток и препятствует их апоптозу (Tarabra, S. Pelengaris, М. Khan. A Simple Matter of Life and Death —The Trials of Postnatal Beta-Cell Mass Regulation II International Journal of Endocrinology. 2012. V. 2012. Article 516718).

В последние годы получило развитие новое направление в лечении СД 2, основывающееся на использовании инкретинового эффекта, суть которого сводится к стимуляции секреции инсулина гастроинтестинальными гормонами. Ещё в начале XX века было обнаружено, что вытяжка из слизистой оболочки кишечника обладает способностью стимулировать секрецию инсулина. Более поздние исследования показали, что в желудочно-кишечном тракте образуется ряд гормонов, которые выделяются в ответ на прием пищи и потенцируют глюкозостимулированную секрецию инсулина: ГПП-1 и ГИП (Elliott, R.M., Morgan L.M., Tredger J.A., Deacon S., Wright J. Et all. Glucagon-like peptide-1 (7-36)-amide and glucose-dependent insulinotropic polypeptide secretion in response to nutrient ingestion in man: acute post-prandial and 24-h secretion patterns II J Pediatr Endocrinol Metab. 1993. V. 138, №1. P. 159-166). Поиск инкретинов был особенно простимулирован наблюдениями, показавшими, что оральное введение глюкозы стимулирует секрецию инсулина в большей степени, чем ее внутривенное введение. Этот феномен был обозначен, как инкретиновый эффект (Perley, M.J., Kipnis, D.M. Plasma insulin responses to oral and intravenous glucose: stadies in normal and diabetes subjects IIJ Clin Invest. 1967. V. 46, № 12. P. 1954-1962).

Тот выявленный нами факт, что антидиабетическая активность Ноопепта была более выражена при пероральном, чем внутрибрюшинном введении, и что по ее выраженности Ноопепт не уступал Ситаглиптину, позволил высказать предположение о возможном участии инкретиновых механизмов в реализации действия Ноопепта.

Для проверки этого предположения, были выполнены эксперименты на модели преддиабета, в которых определялось влияние Ноопепта в сравнении с Ситаглиптином на содержание в плазме гликированного гемоглобина, инсулина, ГПП-1 и активность ДПП-4. Эквиэффективность использованных доз Ноопепта и Ситаглиптина по антигипергликемической активности была подтверждена проведенными ранее экспериментами (Островская Р.У., Озерова И.В., Гудашева Т.А., Капица И.Г., Иванова Е.А. и соавт. Сравнительная активность пролинсодержащего дипептида "Ноопепт" и ингибитора дипептидил-пептидазы-4 Ситаглиптина на модели развивающегося диабета у крыс // Бюллетень эксп. биол. мед. 2013. Т. 156, № 9. С. 317-321). Показано, что диабетогенный токсин вызывает повышение уровня HbAlc и снижает уровень инсулина. Ноопепт, как и Ситаглиптин, при пероральном введении диабетическим крысам полностью устраняет повышение уровня HbAlc и снижение инсулина в плазме. При морфометрической оценке проводился анализ средней активности инсулин продуцирующих клеток по двум параметрам: по окрашиванию островков с помощью ПАФ: у диабетических крыс она была равна 0,76±0,12 (р 0,05), а в группах, принимающих Ноопепт и Ситаглиптин - 1,79±0,23 (р 0,05) и 2,18±0,28 (р 0,05) соответственно; и по измерению плотности полученных микрофотографий с помощью программы Image J, v. 1.45. Полученные результаты свидетельствуют о протекторном эффекте исследуемых препаратов по отношению к инсулин продуцирующим клеткам: активность Р-клеток в обоих опытных группах восстанавливается. Эти данные подтверждены также результатами точечного анализа: доля Р-клеток у активного контроля уменьшена в 3 раза по сравнению с группой пассивного контроля, тогда как у животных, которым вводился Ноопепт или Ситаглиптин, она восстанавливается и даже несколько превышает таковые для группы пассивного контроля.

В полном соответствии с литературными данными о дефиците ГПП-1 при СД 2 (Wajchenberg, B.L. P-Cell Failure in Diabetes and Preservation by Clinical Treatment II Endocrine Reviews. 2007. V. 28, № 2. P. 187-218; Bays, H., Mandarino L., DeFronzo R.A. Role of the adipocyte, free fatty acids, and ectopic fat in pathogenesis of type 2 diabetes mellitus: peroxisomal proliferator-activated receptor agonists provide a rational therapeutic approach II J Clin Endocrinol Metab. 2004. V. 89. P. 463-478) мы наблюдали снижение содержания этого инкретина на модели СТЗ диабета. Ноопепт устранял снижение содержания ГПП-1 у диабетических крыс, не уступая по выраженности этого эффекта Ситаглиптину. Причины повышения содержания этого инкретина в крови для Ситаглиптина и Ноопепта различны, т.к. для Ситаглиптина причиной накопления ГПП-1 является известное ранее (Lotfy, М., Singh, J., Kalasz, Н., Tekes К., Adeghate Е. Medicinal Chemistry and Applications of Incretins and DPP-4 Inhibitors in the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus II Open. Med. Chem. J. 2011. V. 5, № 2. P. 82-92) и воспроизведённое в наших экспериментах угнетение активности Д1111-4, которое отсутствовало в экспериментах с Ноопептом in vitro и было слабо выражено в экспериментах in vivo.

Ранее был описан нейротрофический эффект Ноопепта, притом показано, что усиление экспрессии NGF и BDNF наиболее выражено в гиппокампе и гипоталамусе (Островская Р.У. и соавт., 2010). С другой стороны, известно, что рецепторы ГГШ-1 представлены не только в кишечнике и поджелудочной железе, но также в мозге, особенно в гипоталамусе (Harkavyi A., Whitton P. S. Glucagon-like peptide 1 receptor stimulation as a means of neuroprotection //British J of Pharmacology. 2010. V. 159. P. 495-501). Можно предположить, что причиной инкретиномиметического действия Ноопепта является взаимодействие этих систем на центральном уровне. В наших экспериментах определение содержания инкретинов проводилось только в плазме крови; очевидно, что для заключения о соотношении центральных и периферических механизмов инкретиномиметического действия Ноопепта необходимо дальнейшие исследования содержания инкретинов и нейротрофических факторов в органах-мишенях: мозговой ткани и поджелудочной железе.