Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 18
1.1 Ишемическая болезнь сердца. Эпидемиология и этиология заболевания 18
1.2 Биохимические основы патогенеза атеросклероза 26
1.3 Жирные кислоты 35
1.3.1 Структура и свойства жирных кислот 35
1.3.2 Транспорт и метаболизм жирных кислот 39
1.3.3 Диагностическое значение жирных кислот в патогенезе атеросклероза 54
1.3.4 Коррекция содержания жирных кислот 58
1.4 Применение статинов при лечении ишемической болезни сердца 63
1.5 Применение -адреноблокаторов при лечении ишемической болезни сердца 72
1.6 Применение нестероидных противовоспалительных средств при лечении ишемической болезни сердца 79
Заключение 97
Глава 2. Материал и методы исследования 99
2.1 Общая характеристика обследуемых групп 99
2.1.1 Описание обследуемых пациентов 99
2.1.2 Общая характеристика использованных в работе лабораторных животных 106
2.2 Основные этапы исследования 106
2.2.1 Основные этапы работы с пациентами 106
2.2.2 Основные этапы работы с лабораторными животными 108
2.3 Методы обследования 109
2.3.1 Клиническое исследование пациентов 109
2.3.2 Клинико-инструментальные методы исследования пациентов 110
2.3.3 Лабораторные исследования 112
2.3.4 Хромато-масс-спектрометрические методы анализа .114
2.4 Статистический анализ результатов исследования 119
Глава 3. Результаты исследования 122
3.1 Изменение содержания липидов больных ишемической болезнью сердца при лечении симвастатином 122
3.1.1 Изменение спектра липопротеидов сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца при лечении симвастатином 122
3.1.2 Влияние симвастатина на спектр жирных кислот плазмы крови у больных ишемической болезнью сердца 138
3.2 Изменение липидов крыс на фоне терапии .263
3.2.1 Изменение спектра липопротеидов и холестерина плазмы крови и тканей у крыс на фоне терапии 264
3.2.2 Изменение спектра жирных кислот в плазме крови, миокарде и печени крыс на фоне терапии 272
Обсуждение .391
Выводы 462
Практические рекомендации .465
Список используемых сокращений .467
Список литературы .470
- Транспорт и метаболизм жирных кислот
- Изменение спектра липопротеидов сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца при лечении симвастатином
- Изменение спектра липопротеидов и холестерина плазмы крови и тканей у крыс на фоне терапии
- Изменение спектра жирных кислот в плазме крови, миокарде и печени крыс на фоне терапии
Введение к работе
Актуальность темы исследования. На сегодняшний день ишемическая
болезнь сердца (ИБС) в экономически развитых странах является одной из основных
причин смертности и потери трудоспособности [WHO, 2015]. Современная стратегия
вторичной профилактики сердечно-сосудистых осложнений предусматривает
адекватное воздействие на модифицируемые факторы риска ИБС, одним из которых
является дислипидемия [Корягина Н. А., 2013]. Наиболее эффективными
представителями лекарственных средств, обладающих гиполипидемическим
действием, являются ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы – статины. Терапия статинами
снижает риск развития осложнений ИБС на 25–42% [Оганов Р. Г., 2013].
Эффективность терапии ингибиторами ГМГ-КоА-редуктазы напрямую связана с
достижением целевого уровня общего холестерина (ОХС) и липопротеидов низкой
плотности (ЛПНП), которые играют ведущую роль в формировании
атеросклеротической бляшки [Карпов Ю. А., 2016, EAS/ESC, 2016]. Искомые
значения ЛПНП наблюдаются преимущественно при использовании средних и
высоких доз препаратов [Марцевич С. Ю., 2013]. Однако в России большинство
больных получают только начальную дозу статинов [Задиоченко В. С., 2012].
В нашей стране врачи преимущественно (69% случаев) назначают симвастатин
в дозе 20 мг/сут [Беленков Ю. Н., 2010]. При этом остаются малоизученными
гендерные особенности эффективности гиполипидемической терапии
[Скибицкий В. В., 2013]. В то же время известно, что эстрогены обусловливают различия у мужчин и женщин параметров фармакокинетики и фармакодинамики лекарственных препаратов [O’Meara J. G., 2004; Gandhi M., 2006].
Механизм действия статинов на жирные кислоты (ЖК) связан с
интенсивным поглощением клетками транспортеров ЖК – липопротеидов (ЛП),
а также со способностью статинов оказывать влияние на экспрессию десатураз
и элонгаз – ферментов, активирующих синтез длинноцепочных ЖК [Титов В. Н.,
2013]. Информативная значимость показателей ЖК в развитии и формировании
заболеваний считается давно доказанной. Известно, что поли- (ПНЖК),
мононенасыщенные (МНЖК) и насыщенные жирные кислоты (НасЖК),
обеспечивая целостность биомембран, регулируя активность клеточных функций,
участвуя в процессах энергообразования и воспаления, способны играть важную
роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний [Natvig H., 1968;
Погожева А. В., 1996; Albert C. M., 2002; Bemelmans W. J., 2002; Das U. N., 2005; Бирюкова Е. В., 2007; Davidson M. H., 2007; Kang J. X., 2011; Kuapers R. S., 2011; Lee S. IL., 2011; Scattolin M. A., 2011; Tchernof A., 2013]. При этом известно, что в ходе переноса в составе разных классов ЛП и активного поглощения клетками, непосредственно метаболизма ЖК в крови не происходит [Титов В. Н., 2014].
Кроме того, известно об использовании 3 ПНЖК в профилактике и комплексной терапии целого ряда заболеваний у людей [Коркушко О. В., 1986]. Добавление 3 ПНЖК к гиполипидемической диете снижало смертность и число повторных случаев инфаркта миокарда у больных ИБС [GISSI, 1999].
-Адреноблокаторы (БАБ) являются основным средством вторичной
профилактики ИБС [Оганов Р. Г., 2013]. При отсутствии прямых
противопоказаний БАБ должны назначаться всем больным ИБС, особенно после
инфаркта миокарда [Лупанов В. П., 2014]. При этом самой высокой
селективностью из современных препаратов обладает бисопролол
[Остроумова О. Д., 2013].
Ацетилсалициловая кислота (АСК) – наиболее востребованный и широко применяемый антиагрегант, используемый для вторичной профилактики ИБС [Оганов Р. Г., 2013]. Клиническая эффективность и безопасность данного препарата подтверждена многочисленными контролируемыми исследованиями и мета-анализами практически у всех групп пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями [Antithrombotic Trialists Collaboration Group, 2002; Лагута П. С., 2005]. Салицилаты способны предотвращать развитие резистентности к инсулину у животных с ожирением [Kim J. K., 2001; Yuan M., 2001].
Таким образом, представляется интересным изучение влияния статинов во всем терапевтическом диапазоне доз, применяемых для вторичной профилактики ИБС с учетом гендерной принадлежности пациентов, на содержание ЖК в плазме крови и тканях с целью достижения целевых норм ЛП и ОХС и предупреждения возникновения или минимизации их побочных эффектов. Интересным видится изучение особенностей влияния ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы на активность систем транспорта, антиоксидантной защиты, депонирования, окисления и эндогенного образования ЖК. Практически значимым является изучение взаимодействия статинов и препаратов других групп, применяемых для вторичной профилактики ИБС в отношении спектра ЖК не только в плазме крови, но и в других тканях организма, где они реализуют свой непосредственный биологический эффект.
Степень разработанности. Из предыдущих исследований известно, что статины снижают циркуляцию ЖК в крови [Sposito A. C., 2003]. Механизм действия данных препаратов на ЖК связан с усилением поглощения клетками транспортеров ЖК – ЛП, а также со способностью статинов оказывать влияние на экспрессию десатураз и элонгаз – ферментов, активирующих синтез длинноцепочных ЖК [Berge R. K., 2002; Rise P., 2003; Deepak L., 2006].
Симвастатин снижал содержание ЖК в липидах плазмы крови и одновременно повышал уровень арахидоновой (С20:4) 6 ненасыщенной жирной кислоты (НЖК) [Лиходед В. Г., 2010]. Вместе с тем, было показано, что статины повышают в спектре ЖК липидов сыворотки крови относительное содержание данной ПНЖК и снижают долю линолевой (С18:2) НЖК [Mauro S. Di, 2010]. Это происходит за счет активации фермента 5 десатуразы, участвующего в образовании арахидоновой (С20:4) 6 ПНЖК из линолевой (С18:2) 6 ПНЖК [Notarbartolo A., 1995; Ferretti A., 1997; Zhou G. S., 2010]. Имеются данные об увеличении содержания данной ПНЖК в мембране эритроцитов при лечении симвастатином [Dwight J. F. et al., 1996].
Вместе с тем, был установлен снижающий эффект статинов на относительное содержание 3 НЖК [Титов В. Н., 1997].
Статины изменяют активность синтеза НЖК, усиливают функцию пероксисом и повышают эндогенный синтез арахидоновой (С20:4) НЖК в культуре гепатоцитов и моноцитов человека [Бойцов С. А., 2012; Hrboticky N., 1994].
В то же время скорость образования эйкозаноидов на уровне тканей определяется не количеством субстрата, а функциональной активностью ферментативных систем (оксигеназ и фосфолипаз), действие которых подавляется статинами [Thompson P. D., 2002; Galli C., 2005].
В ранее проводимых исследованиях установлено снижение при приеме статинов содержания олеиновой (С18:1) 9 ЖК. Кроме того, симвастатин уменьшал количество пальмитиновой (С16:0) и стеариновой (С18:0) НасЖК [Jula A., 2005].
Таким образом, многочисленными работами был доказан положительный эффект статинов в стабилизации уровня атерогенных липидов в плазме крови, однако практически отсутствуют исследования, в которых проводился комплексный анализ влияния статинов на спектр ЖК плазмы крови с учетом пола пациентов и диапазона используемых доз препарата (минимальная, средняя, максимальная). Остается неясной основная точка приложения влияния статинов на показатели спектра ЖК, особенности влияния препарата на активность систем транспорта, антиоксидантной защиты, депонирования, окисления, эндогенного образования ЖК. Отсутствуют исследования особенностей взаимодействия статинов и препаратов других групп, применяемых для профилактики ИБС в отношении спектра ЖК не только в плазме крови, где происходит их транспорт, но и в других тканях организма, где они реализуют свой непосредственный биологический эффект.
Цель исследования: изучить дозозависимое влияние ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы и механизмы индуцированного изменения количественных и качественных характеристик липопротеидов, жирных кислот, холестерина плазмы крови и тканей при вторичной профилактике ИБС.
Задачи исследования
-
Провести комплексную оценку обусловленного полом пациентов и дозой препарата влияния статина на содержание жирных кислот и холестерина в плазме крови, а также в печени и миокарде в эксперименте.
-
Оценить обусловленное полом пациентов и дозой препарата воздействие статина на систему микросомального и митохондриального окисления жирных кислот.
-
Выполнить оценку обусловленного полом пациентов и дозой препарата воздействия статина на систему антиоксидантной защиты полиненасыщенных жирных кислот.
-
Оценить обусловленное полом пациентов и дозой препарата воздействие статина на систему эндогенного образования поли-, моно- и насыщенных жирных кислот из экзогенных и эндогенных предшественников.
-
Провести качественную и количественную оценку взаимодействия статина, препаратов 3 полиненасыщенных жирных кислот и комбинации бисопролола и ацетилсалициловой кислоты при влиянии на жирные кислоты, холестерин плазмы крови и тканей, а также активность систем, осуществляющих транспорт, депонирование, антиоксидантную защиту, образование и окисление жирных кислот.
Научная новизна. Впервые в эксперименте (плазма крови, ткани печени и сердца) и клинике были изучены эффекты терапевтического диапазона доз статина и гендерной принадлежности в отношении влияния лекарственного средства на липидный статус и метаболизм ЖК при вторичной профилактике ИБС.
Показано, что ингибитор ГМГ-КоА-редуктазы, независимо от пола и дозы, перераспределяет содержание ЖК и холестерина в плазме крови и тканях,
стимулируя их поглощение в составе липопротеидов гепатоцитами и снижая их содержание в плазме крови и миокарде. При этом на малой дозе в эксперименте имело место снижение ЖК плазмы крови и ткани миокарда, преимущественно за счет НЖК, неблагоприятно качественно изменяя состав ЛП и увеличивая вероятность возникновения электрической нестабильности кардиомиоцитов, тогда как в клинике средние и большие дозы препарата пропорционально снижали НЖК и НасЖК.
В клинике и эксперименте было продемонстрировано, что минимальные дозы статина обеспечивали снижение НЖК плазмы крови, преимущественно за счет МНЖК, средние – как результат пропорционального снижения МНЖК и ПНЖК, а максимальные дозы – за счет ПНЖК. При медикаментозной нагрузке в эксперименте сопоставимая динамика содержания НЖК сопровождалась увеличением доли ПНЖК в тканях сердца.
Увеличение поглощения ПНЖК (3 и 6 НЖК) из плазмы крови, выявленное для всего диапазона доз статина, в эксперименте и при использовании средних доз лекарственного средства у мужчин снижало долю ПНЖК в ЛПНП и повышало в ЛПВП. Высокие дозы лекарственного средства у женщин снижали выраженность перераспределения ПНЖК в липопротеидах.
Показано, что статин у лиц обоего пола и во всем диапазоне доз активирует 5 десатуразу. При этом имела место индукция эндогенного образования ПНЖК из экзогенных предшественников с более выраженным образованием ЖК семейства 6, преимущественно при использовании малых и средних доз статина, тогда как усиление эндогенного образования 3 НЖК было выявлено только у лиц женского пола. Только у женщин при максимальной дозе препарата изменялось соотношение 3 / 6 ПНЖК в сторону 6 ПНЖК плазмы крови за счет усиления поглощения 3 ПНЖК в составе ЛПНП. У мужчин, принимавших препарат в средней дозе, эффект был противоположным за счет более выраженного поглощения ЛПОНП.
Впервые выявлено, что малые дозы статина в плазме крови обеспечивают приоритет 6 субстратов синтеза эйкозаноидов в отношении 3 производных, а максимальная доза лекарственного средства вызывает инверсию этого соотношения в сторону 3 производных. По данным эксперимента, статин изменял соотношение С20:5 / С20:4 (непосредственных субстратов синтеза эйкозаноидов) в сторону арахидоновой (С20:4) НЖК в плазме крови, тогда как в клинике средняя доза препарата обозначенный паритет не изменяла, а максимальная изменяла соотношение в сторону тимнодовой (С20:5) НЖК.
Впервые было показано, что вызванное средней дозой статина поглощение МНЖК печенью преобладало над их образованием у женщин. У мужчин максимальная доза препарата обеспечивала уравновешенность поглощения и эндогенного образования МНЖК.
Получены новые данные, свидетельствующие об активации
инсулинозависимых ферментов и повышенном эндогенном образовании 9 МНЖК при действии средних и максимальных доз статина. При этом только у мужчин и на максимальной дозе лекарственного средства зарегистрировано образование 7 НЖК. Минимальная доза препарата снижала активность как инсулинозависимых, так и независимых ферментов эндогенного синтеза МНЖК.
Впервые для ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы в отношении влияния на систему антиоксидантной защиты ПНЖК в плазме крови был выявлен дозозависимый эффект, где малые терапевтические дозы лекарственного средства в эксперименте вызывали прирост прооксидантной активности за счет уменьшения соотношения субстрата окисления и антиоксиданта (олеиновой МНЖК), а средние и высокие дозы в клинике обеспечивали прогредиентное повышение антиоксидантного статуса за счет увеличения данного соотношения в сторону антиоксиданта.
Впервые показано, что под воздействием статина во всем терапевтическом диапазоне доз поглощение НасЖК тканями (преимущественно печенью) преобладало над их эндогенным образованием и выделением в плазму крови в составе ЛПОНП. Обнаружено, что в минимальной и средней дозах препарат увеличивал образование НасЖК, а в случае максимальной дозы, напротив, понижал. При использовании средней и максимальной доз препарата эндогенное образование НасЖК уступало образованию МНЖК. В эксперименте в плазме крови, тканях печени и миокарда соотношение НасЖК к МНЖК сдвигалось в сторону преобладания НасЖК. При этом только в средней и максимальной дозах статин усиливал нейтрализацию патологического влияния пальмитиновой (С16:0) НасЖК путем превращения ее в олеиновую (С18:1) МНЖК.
Впервые определено, что ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы в
терапевтическом диапазоне доз неоднозначно изменяют качественный состав эндогенно образованных ЛПОНП, в малых дозах приводя к преобладанию в них НасЖК, а в средних и больших – к прогредиентному дозе преобладанию МНЖК.
Независимо от дозы, статин повышал окисление ЖК в пероксисомах тканей с большей выраженностью у женщин. Мужской пол и максимальная доза препарата, как два независимых фактора, обеспечивали смещение соотношения в сторону образования олеиновой (С18:1) 9 НЖК, тогда как женский пол и средняя доза, напротив, – в сторону -окисления данной НЖК. В эксперименте для ткани сердца также определено преобладание окисления олеиновой (С18:1) 9 НЖК. Следствием этого для всего диапазона доз явилось снижение абсолютного значения суммы ЖК-энергетических субстратов в плазме крови, а в эксперименте – и в тканях сердца.
Впервые в эксперименте показано, что эффекты 3 ПНЖК в отношении влияния на ЛП, холестерин и ЖК плазмы крови, тканей печени и миокарда, уступая по силе влияния, были сонаправлены таковым ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы. Эффекты комбинации БАБ (бисопролола) и антиагреганта (АСК) в отношении изменения количественных характеристик ЛП, ЖК, холестерина плазмы крови и тканей были диаметрально противоположны эффектам ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы.
На основании полученных данных была впервые разработана и
апробирована система формальной двухступенчатой оценки
(позитивное / негативное) влияния статина на спектр ЖК и их комплексов в плазме крови. Впервые был определен доверительный интервал возрастной нормы для каждого анализируемого показателя. Установлена связь между содержанием отдельных ЖК и их комплексов (относительно определенной возрастной нормы) и ИБС. Кроме того, было определено наличие связи между содержанием ЖК и достижением при лечении симвастатином нормальных (общепопуляционных и целевых) значений ЛП и ОХС.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты проведенного исследования имеют фундаментальную и прикладную значимость. Впервые была выполнена комплексная оценка (качественная и количественная) влияния статина не только на липопротеиды и холестерин плазмы крови, но и на содержание ЖК, транспортной формой которых они являются. Таким образом, были изучены изменения не только количественного, но и качественного состава ЛП под влиянием статина.
Установлено влияние симвастатина на содержание 24 ЖК с известной биологической значимостью. Впервые было проведено исследование изменения как абсолютного, так и относительного содержания данных ЖК. Для изучения механизмов изменения отдельных ЖК под воздействием статина было установлено также изменение содержания комплексов ЖК (15 – абсолютное содержание; 17 – относительное) с известным биологическим эффектом. Через изменение соотношений (21 пара показателей) отдельных ЖК между собой и с их комплексами выполнялась оценка изменения активности как отдельных ферментов, отвечающих за их метаболизм, так и функционирования целых систем транспорта, антиоксидантной защиты, депонирования, окисления и эндогенного образования данных ЖК.
В клиническом исследовании и в эксперименте с лабораторными животными
впервые было изучено влияние пола пациентов и всего диапазона доз статина
(минимальная, средняя, максимальная), применяемых для вторичной
профилактики ИБС. Это позволило определить гендерные и дозовые особенности положительных и отрицательных эффектов статина при влиянии на спектр ЖК.
Впервые была дана комплексная оценка эффекта статина на ЖК и их комплексы не только в плазме крови (где не происходит непосредственный метаболизм ЖК), но также в печени и миокарде крыс, где реализуются их основные биологические эффекты.
В исследовании на лабораторных животных были изучены особенности (качественные и количественные) взаимодействия симвастатина с препаратом 3 ПНЖК, -блокатором и антиагрегантом, применяемыми при вторичной профилактике ИБС при их влиянии на ЛП, холестерин и ЖК плазмы крови, печени и миокарда.
На основе исследования были оформлены 6 патентов (RU) на изобретение:
№ 2237245 «Способ оценки спектра жирных кислот»; № 2298793 «Способ
определения и разделения жирных кислот»; № 2503405 «Способ индивидуальной
количественной оценки развития ишемической болезни сердца»; № 2550664
«Способ индивидуальной оценки принадлежности пациентов к хронической
сердечной недостаточности»; № 2599350 «
»; № 2642923 «Способ индивидуальной количественной оценки развития ишемической болезни сердца».
Методология и методы исследования. Диссертационное исследование состоит из экспериментального и клинического разделов.
В эксперименте разработана модель для изучения влияния минимальной дозы статина, применяемой при вторичной профилактике ИБС, на ЛП, холестерин и ЖК плазмы крови печени и миокарда. Детально изучены качественные и
количественные особенности взаимодействия статина с другими препаратами, применяемыми при лечении ИБС (БАБ, АСК, препаратом 3 ПНЖК).
Клинический раздел содержит исследование особенностей влияния средней и максимальной доз статина, назначаемых при вторичной профилактике ИБС, на ЛП, холестерин и ЖК плазмы крови, с учетом пола пациентов.
Основные методы исследования: хромато-масс-спектрометрический анализ
ЖК и холестерина (плазмы крови, печени и миокарда); развернутый
биохимический анализ крови (активность липазы, панкреатической амилазы,
аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ),
креатинкиназы, -амилазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы и холинэстеразы, тимоловой пробы, уровень ХС-ЛПВП, ТГ и ОХС); клинико-инструментальные методы исследования (электрокардиография, ультразвуковое исследование (УЗИ) сосудов шеи, эхокардиография, велоэргометрия).
Положения, выносимые на защиту:
-
Эффекты ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы, применяемых в пределах доз терапевтического диапазона, позволяя контролировать количественный состав циркулирующего пула липопротеидов, жирных кислот и холестерина, были неоднозначными в отношении изменения их качественных характеристик и межтканевого перераспределения, зависящего от дозы и гендерной принадлежности.
-
Ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы в терапевтическом диапазоне доз неоднозначно изменяют качественный состав эндогенно образованных ЛПОНП, в малых дозах приводя к преобладанию в них НасЖК, а в средних и больших – к прогредиентному дозе преобладанию МНЖК.
-
Одним из внедозовых эффектов ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы явилась индукция образования ПНЖК из экзогенных предшественников с более выраженным образованием ЖК семейства 6. При этом на малых терапевтических дозах в плазме крови был установлен приоритет 6 субстратов синтеза эйкозаноидов в соотношении с 3 производными, и только максимальная доза лекарственного средства обеспечивала инверсию этого соотношения в сторону 3 производных.
-
Индуцированное ингибиторами ГМГ-КоА-редуктазы перераспределение (плазма/ткани) ЖК и их катаболизм через механизмы пероксисомального и митохондриального окисления, вне зависимости от дозы препарата, привели к количественному снижению пула ЖК-субстратов энергии в плазме крови, а в эксперименте – и к истощению эндогенного энергетического резерва кардиомиоцитов. В то же время было отмечено позитивное прогредиентное качественное изменение ЖК-субстратов энергии при применении средних и максимальных доз препарата, а также негативное – при использовании минимальных доз.
-
Для ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы, в отношении их влияния на систему антиоксидантной защиты ПНЖК в плазме крови, выявлен дозозависимый эффект, где малые терапевтические дозы лекарственного средства в эксперименте вызывали прирост прооксидантной активности за счет уменьшения соотношения субстрата окисления и антиоксиданта (олеиновой МНЖК), а средние и высокие дозы в клинике обеспечивали прогредиентное повышение антиоксидантного статуса за счет увеличения данного соотношения в сторону антиоксиданта.
-
В эксперименте изменения количественных характеристик липопротеидов, холестерина и жирных кислот (тканей) под действием 3 НЖК, уступая по силе
эффекта, были сонаправлены таковым, вызванным приемом малых доз ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы.
7. В эксперименте эффекты комбинации бисопролола и ацетилсалициловой кислоты в отношении изменения количественных характеристик липопротеидов, жирных кислот, холестерина плазмы крови и тканей были диаметрально противоположны эффектам малых доз ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы.
Степень достоверности и апробация результатов работы. Высокая
степень достоверности полученных данных подтверждается объемом выборки в
клинике и эксперименте, использованием современного оборудования и
реактивов, применением современных лабораторных, клинико-инструментальных
методов обследования и методологических подходов, соответствующих
поставленным задачам. Выводы, сформулированные в диссертации,
подтверждены лабораторными данными, анализом литературы, точностью статистической обработки полученных результатов.
Материалы диссертации изложены и обсуждены на международных и
российских научных конференциях: VI Российском национальном конгрессе
«Человек и лекарство» (Москва, 1999), «Современные проблемы
экспериментальной и клинической медицины» (Бангкок, 2009), VII Всероссийской
научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная
диагностика» (Москва, 2010), II Международной научно-практической
конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: геномика, протеомика, биоинформатика» (Новосибирск, 2011), «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2011), «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Дубай, 2012). VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика» (Москва, 2014).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 печатные работы, из них 20 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура работы. Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, изложенных в третьей главе, обсуждения результатов работы и выводов. Работа изложена на 578 страницах машинописного текста, содержит 193 таблицы и 98 рисунков. Библиографический список включает 1021 источник, в том числе 307 отечественных и 814 иностранных.
Транспорт и метаболизм жирных кислот
Существование живого организма зависит от экзогенного поступления субстратов энергии. Клетки для выполнения своих функций используют экзогенный и эндогенный пул липидов, одним из элементов которых выступают ЖК [508, 749, 779]. Биологическая функция экзотрофии (обеспечения организма экзогенными субстратами) является в организме одной из основных [264]. Жирные кислоты выступают в качестве основного источника энергии таких тканей, как скелетные мышцы, кора почек, печень и миокард. При возникновении потребности в энергии в адипозацитах происходит активация липолиза, что повышает биодоступность ЖК. Базальное содержание свободных ЖК в организме человека составляет 250-500 мкмоль, при этом большая их часть поступает из абдоминальной подкожно-жировой клетчатки и только малая часть - из интра-абдоминальной жировой ткани [652].
Метаболизм ЖК представляет собой сложный многоступенчатый процесс, включающий транспорт ЖК специальными переносчиками из цитоплазмы клетки через наружную и внутреннюю мембраны внутрь митохондрий и следующее за этим Р-окисление. Неотъемлемым участником трансмембранного переноса ЖК является карнитин, который обеспечивает образование ацилкарнитинов с длинной углеродной цепью и последующий транспорт сквозь мембрану митохондрий [478, 988].
По современным представлениям, метаболизм миокард в большой степени определяет именно сбалансированность ЖК [560, 577, 732]. Являясь основным источником ацетил-КоА, они обеспечивают при физиологических концентрациях до 80% всего аденозинтрифосфата (АТФ) сердца. В то же время, по сравнению с глюкозой, на выработку одного и того же количества АТФ требуется примерно на 10% больше кислорода [735].
Таким образом, основной пул ЖК преимущественно вовлечен в окислительные энергетические процессы и поддержание мембранного гомеостаза кардиомиоцитов, способствуя нормальной физиологической активности мембран и сохранению сократительной активности миокарда [481]. В качестве субстратов энергии выступают в основном НасЖК и МНЖК.
В данную группу входят: миристиновая (С14:0), пентадекановая (С15:0), пальмитиновая (С16:0), маргариновая (С17:0), стеариновая (С18:0), пальмитоолеиновая (С16:1), олеиновая (С18:1) ЖК. При это важным преимуществом короткоцепочных ЖК (до С14) данной группы, по сравнению с другими ЖК, является то, что им не нужен карнитин для поступления в митохондрии [35].
Таким образом, основной биологической ролью НасЖК является окисление с образованием АТФ. Данные ЖК поступают в организм с пищей либо эндогенно синтезируются в клетках [147].
Основной НасЖК в липидах человека является пальмитиновая (С16:0) ЖК (до 35%). Находясь в составе большинства животных жиров, растительных масел и восков, она является конечным продуктом ресинтеза ЖК из ацетил-КоА. При этом если физиологически оправданной считается пища, содержание данной НасЖК в которой не превышает 15%, то «fast food» содержит ее до 60% [275]. Стеариновая (С18:0) НасЖК также является распространенной, в виде глицеридов входит в состав липидов, выполняющих функцию энергетического депо [49, 153]. Синтез данных НасЖК в организме происходит в клетках печени, кишечника, легочной и жировой ткани, в тканях мозга, почках, лактирующей молочной железе [35].
В организме ЖК представлены в виде двух пулов (этерифицированные и свободные), что отражает разнонаправленное движение субстратов энергии in vivo [266]:
– этерифицированные ЖК – это перенос экзогенных ЖК пищи от энтероцитов к печени и далее ко всем клеткам, в том числе к адипоцитам (внешнее питание);
– неэтерифицированные (свободные) ЖК – перенос эндогенных субстратов энергии от жировых депо, адипоцитов к клеткам (внутреннее питание).
Свободные ЖК традиционно рассматриваются как основной метаболический ресурс для миокарда [380, 457]. Большое количество свободных НасЖК поглощают так же миоциты, адипоциты и клетки костного мозга.
Установлено, что при ишемии миокарда накопление неэтерифицированных ЖК в плазме крови обусловлено сдвигом утилизации субстратов энергии в сторону гликолиза [380]. При этом встраивание в мембрану эндотелия избыточного количества НасЖК само по себе способно нарушить структуру мембраны и функцию клеток [870]. Данные ЖК, представленные короткими и среднецепочными ЖК, после потребления с пищей могут поступать сразу в кровь [640]. Среди свободных ЖК плазмы доминируют пальмитиновая (С16:0) и стеариновая (С18:0) НасЖК, липолиза ТГ адипозацитов жировой ткани [695]. После выхода в плазму крови они переносятся в ассоциации с альбумином с коротким временем полусуществования (до 4 минут) [968].
Транспорт этерифицированных ЖК по лимфатической системе и токе крови осуществляется благодаря системе липидотранспортных белков, формирующих образование хиломикронов (ХМ), ЛПОНП, липопротеидов промежуточной плотности (ЛППП), ЛПНП, ЛПВП. Следует заметить, что в организме человека система ЛП реализует две основные функции [271]:
1) участвует в переносе и поглощении (активном и пассивном) клетками ЖК;
2) обеспечивает реверсный отток от клеток в печень холестерина в составе ЛПВП.
После поступления эгзогенных ЖК в энтероциты, начинается процесс ресинтеза насыщенных, моно- и диеновых ЖК в ТГ с последующим формированием ХМ. Последние через ток крови или лимфы поступают в гепатоциты, где экзогенные чужеродные ЖК проходят оптимизацию по длине углеводородной цепи. Повторно ресинтезированные в клетках печени ТГ уже в составе ЛПОНП содержат преимущественно пальмитиновую (С16:0), стеариновую (С18:0), моно- и диеновые ЖК [104]. Преобладание в ТГ именно такого состава ЖК определено тем, что их перенос в ассоциации с альбумином в плазме крови, транспорт белками через цитозоль, перенос через мембрану митохондрий является наиболее эффективным [651]. При этом если расположить ТГ, содержащие пальмитиновую (С16:0) или олеиновую (С18:1) ЖК (в положениях 1, 2, 3), в порядке увеличения скорости реакции гидролиза и высвобождения ЖК из ЛПОНП под воздействием постгепариновой липопротеидлипазы, получится последовательность: трипальмитат дипальмитат-олеат пальмитат-олеат-пальмитат олеат-дипальмитат диолеат-пальмитат триолеат. Этот спектр не содержит стеариновые, линолевые и линоленовые ТГ, которые также переносятся ЛПОНП [366, 902].
Для обеспечения биологической функции локомоции в филогенезе был сформирован направленный перенос НасЖК и МНЖК к миоцитам в ТГ, включенных в состав ЛПОНП за счет апоЕ / В-100-эндоцитоза [123]. Инсулин, способствуя реализации данной функции, активирует трансформацию эндогенно синтезированной пальмитиновой (С16:0) НасЖК в олеиновую (С18:1) МНЖК. Необходимость в этом обусловлена тем, что -окисление олеиновой (С18:1) МНЖК митохондриями происходит с более высокой константой скорости реакции [955]. Олеиновая (С18:1) МНЖК, в силу своих физико-химических особенностей ускоряя гидролиз ТГ, нормализует поглощение клетками НасЖК и НЖК в форме ТГ в составе ЛПОНП; способствует восстановлению нормального поглощения клетками ПНЖК в составе ЛПНП, нормализуя их содержание в тканях [470]. ЛПНП, обогащенные МНЖК, менее подвержены окислительной модификации и атаке со стороны клеток иммунной системы, в отличие ЛПНП, содержащих ПНЖК [848, 849]. Вместе с тем, было установленно, что под действием активных форм кислорода in vitro окисление олеиновой (С18:1) МНЖК происходит с константой скоростью реакции, которая на порядок выше, чем у остальных ЖК [151]. Поэтому данная МНЖК является более эффективным эндогенным «захватчиком» активных форм кислорода (антиоксидантом), чем -токоферол, каротин и аскорбиновая кислота [269].
Олеиновая (С18:1) МНЖК, так же способна снижать уровень ОХС, ЛПНП, и проявлять защитный эффект в отношении ССЗ [539, 853]. Согласно одним исследованиям, уменьшение ЛПНП за счет диеты, богатой олеиновой (С18:1) ЖК, происходит в меньшей степени, чем при потреблении ПНЖК [760, 1014], тогда как по другим данным изменения в обоих случаях сопоставимы [541, 677, 797]. Избыток олеиновой (С18:1) МНЖК инициирует апоптоз -клеток островков Лангерганса намного реже, чем пальмитиновая (С16:0) НасЖК [405].
Изменение спектра липопротеидов сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца при лечении симвастатином
Для выявления гендерных различий значения показателей в спектре ЛП сыворотки крови пациентов группы контроля сравнивали две независимые выборки методом Манна-Уитни (Таблица 13). Полученные результаты свидетельствуют о том, что у женщин более высоким было содержание ЛПВП. В то же время у мужчин значение КА превышало таковое у женщин.
Индивидуальные значения показателей ЛП спектра сыворотки крови сравнили с общепопуляционными нормами. Результаты соответствия общепопуляционным нормам показателей спектра ЛП сыворотки крови у мужчин и женщин в группе контроля представлены в Таблице 14.
Наличие связи между полом пациентов (дозой препарата) и количеством лиц с отклонением значений спектра ЛП от общепопуляционных норм определялось методом 2с поправкой Йейтса на непрерывность. Направление и величина взаимосвязи были оценены методом Тау-b Кендалла. Установлено наличие статистически значимой положительной взаимосвязи между полом и повышенным значением КА (+0,276). Это свидетельствует о том, что у мужчин группы контроля более высокий уровень КА наблюдался статистически значимо чаще, чем у женщин.
Представляло интерес определить соответствие значений спектра ЛП сыворотки крови у мужчин и женщин в группе контроля целевым нормам в соответствии с категорией сердечно-сосудистого риска, определенного индивидуально для каждого конкретного пациента (Таблица 15).
Не выявлено наличие статистически значимой связи между полом пациентов и количеством лиц с отличным значением показателей спектра ЛП от целевых норм.
Известно, что клинические проявления ИБС зависят от степени атеросклеротического поражения венечных артерий сердца [130].
Современная первичная профилактика ССЗ направлена в первую очередь на борьбу с факторами риска этих заболеваний [514]. Наиболее значимыми из них являются: курение, злоупотребление алкоголем, АГ, атеросклероз, дислипидемия, сахарный диабет, характер питания, недостаточная физическая активность, ожирение, а также половая принадлежность [39, 50, 69, 247, 303, 507, 872].
Анализируя гендерные отличия значения показателей спектра ЛП сыворотки крови у больных ИБС, мы видим, что у женщин отмечалось более высокое содержание ОХС и ЛПНП (Таблица 16). Таким образом, картину ЛП-спектра у женщин можно назвать более неблагоприятной, чем у лиц мужского пола.
Был также проведен анализ особенностей изменения абсолютных значений спектра ЛП у больных ИБС в сравнении с группой контроля. Результаты представлены в Таблице 17.
Известно, что одним из основных факторов развития атеросклероза является дислипидемия [44], которая сопровождается повышенным уровнем ОХС, ЛПНП и ЛПОНП, нередко гипертриглицеридемией и снижением уровня ЛПВП [152, 557].
В группе больных ИБС у представителей обоего пола отмечалось статистически значимо более высокое, чем в контроле, содержание ЛПОНП. Кроме того, у женщин имело место более высокое содержание ТГ и низкое значение содержания ЛПВП.
Известно, что, вне зависимости от этиологии, основу патогенеза гипертриглицеридемии составляет нарушение переноса НасЖК в составе ЛПОНП путем апоЕ/В-100-эндоцитоза, в первую очередь к инсулинзависимым клеткам (скелетным миоцитам, кардиомиоцитам, адипоцитам и перипортальным гепатоцитам) [266, 717]. Наиболее важной целью данного векторного переноса является энергетическое обеспечение функции локомоции [123]. Таким образом, повышенные значения ЛПОНП и ТГ у больных ИБС свидетельствует о нарушении работы липаз (постгепариновой и печеночной) и замедлении поглощения тканями ЛП.
В то же время сниженное содержание ЛПВП может отражать активность формирования атероматоза и связано с малым количеством ПНЖК, которые подвергаются гидролизу в лизосомах клеток, поскольку больший пул данных ЖК участвует в формировании атеросклеротических бляшек. Существует мнение, что увеличение в крови уровня ТГ – есть симптом атеросклероза, который указывает на одновременное нарушение поглощения клетками НасЖК и НЖК [266, 367].
В исследовании у мужчин уровени ЛПНП, ОХС и КА были статистически значимо ниже, чем в группе контроля.
Известно, что особенностью атерогенной дислипидемии является увеличение количества мелких, плотных ЛПНП, обладающих большим атерогенным потенциалом [118, 280, 867, 868, 931, 1009]. Можно заключить, что в проведенном исследовании группа больных ИБС была относительно скомпенсированной.
В группе больных ИБС было определенно соответствие значений спектра ЛП сыворотки крови у мужчин и женщин общепопуляционным нормам. Результаты представлены в Таблице 18.
При этом четко прослеживалась значимая положительная связь между полом пациентов и количеством лиц со сниженным содержанием ЛПВП (+0,191). Полученные данные свидетельствуют о том, что в группе женщин, больных ИБС, число лиц со сниженным содержанием ЛПВП относительно общепопуляционного уровня было больше, чем в группе мужчин.
Изучение наличия связи между отклонением показателей ЛП спектра от общепопуляционных нормальных значений и наличием ИБС у лиц одного пола позволило выявить ряд закономерностей. Так, у женщин наблюдалось наличие статистически значимой положительной взаимосвязи между болезнью и повышенным содержанием ТГ (+0,282), была обнаружена статистически значимая отрицательная связь между наличием ИБС и повышенным содержанием ЛПНП (–0,211). У мужчин также была выявлена аналогичная взаимосвязь между наличием ИБС и повышенным содержанием ЛПНП (–0,329), имелась взаимосвязь между наличием ИБС и уровнем ОХС (–0,323), наличием болезни и значением КА (–0,388).
Изменение спектра липопротеидов и холестерина плазмы крови и тканей у крыс на фоне терапии
Для выполнения экспериментального раздела работы методом случайной выборки было сформировано пять групп крыс по 20 животных в каждой. Крысы 1-й группы (контроль) получали обычное питание на протяжении всего времени эксперимента. Животным четырех остальных групп в течение 2 мес в питание добавляли холестерин в дозе 2,5 г/сут на 100 г корма (ООО «Холдинговая компания “Сигма”», Россия).
Крысы 3-й, 4-й и 5-й групп после первого месяца эксперимента начинали получать терапию БАБ (бисопролол «Конкор» в дозе 0,02 мг/сут («Мерк КГаА», Германия) и антиагрегантом (ацетилсалициловая кислота «Кардиомагнил» фирмы «Такеда ГмбХ» (Германия), 0,2 мг/сут). Эквивалентная доза препаратов рассчитывалась исходя из ежедневной дозировки бисопролола 10 мг/сут и АСК 75 мг/сут, принимаемой пациентом массой тела 80 кг пересчитанной на среднюю массу тела крысы, принятую за 200 г.
Дополнительно крысы 3-й и 4-й групп получали симвастатин («СимваГЕКСАЛ» фирмы Hexal AG (Германия), 0,1 мг/сут). Эквивалентная доза препарата рассчитывалась исходя из пересчета ежедневной дозировки 40 мг/сут принимаемой пациентом массой тела 80 кг на среднюю массу тела крысы, принятую за 200 г. В конце эксперимента масса тела крыс составляла 400 г и, соответсвенно, доза статина была равна 20 мг/сут.
Животные 4-й и 5-й групп дополнительно получали препарат, содержащий 3 НЖК («Омакор» фирмы «Солвей Фармасьютикалз ГмбХ» (Германия), 3,6 мг/сут). Эквивалентная доза препарата, содержащего 3 НЖК, рассчитывалась исходя из пересчета ежедневной дозировки 1420 мг/сут, принимаемой пациентом массой тела 80 кг на среднюю маау тела крысы, принятую за 200 г.
Через 2 мес эксперимента, после 12-часового голодания, производился забой животных под фторотановым наркозом.
Рассмотрение спектра ЛП плазмы крови крыс в группах наблюдения позволило обнаружить более высокое содержание ТГ в группах 3 (обычное питание + холестерин + симвастатин + бисопролол + ацетилсалициловая кислота) и 4 (обычное питание + холестерин + симвастатин + бисопролол + АСК + препарат 3 НЖК) в сравнении с группами 1 (обычное питание) и 2 (обычное питание + холестерин) (Рисунок 29).
Наибольшее количество ТГ было зафиксировано в 5-й группе (обычное питание + холестерин + бисопролол + АСК + препарат 3 НЖК). Говоря о содержании ЛПНП, следует отметить более высокий их уровень в группе контроля в сравнении с 4-й группой, а ЛПОНП – в группе 3 и 4 в сравнении с группой 1 и 2. В то же время их уровень в 5-й группе оказался статистически значимо выше, чем в группах 1, 2 и 4.
Известно, что в плазме крови крыс содержание ЛПВП преобладает над другими ЛП (ЛПНП, ЛПОНП) [271]. Это было подтверждено проведенным нами исследованием. Вместе с тем, известно, что у всех позвоночных прослеживается следующие закономерности:
1) НасЖК и МНЖК в составе ЛПОНП переносятся к тканям в форме неполярных ТГ;
2) ПНЖК (3 и 6 НЖК) в составе ЛПВП переносятся к клеткам в форме полярных ФЛ;
3) ПНЖК (3 и 6 НЖК) в составе ЛПНП переносятся к клеткам в форме неполярных эфиров холестерина [271].
Таким образом, симвастатин понижал содержание ТГ, ЛПНП и ЛПОНП, ХС-ЛПНП, препарат 3 НЖК, отрицательно действовал на количество ЛПНП, ЛПОНП (Таблица 125).
В то же время препараты БАБ + АСК (бисопролол + ацетилсалициловая кислота) положительно влияли на содержание ТГ, ЛПНП, ЛПОНП.
Известно, что все нутриенты (глюкоза, ЖК, аминокислоты, витамины), кислород, альбумин, вторичные медиаторы воспаления – белки острой фазы воспаления, а также гормоны, которые все эндокринные железы секретируют в кровь, клетки эндотелия трансцитозом переносят во все межклеточные пулы организма [414, 516]. Однако в наибольшей степени увеличение объема протеогликанового пула межклеточной среды происходит при атеросклерозе за счет ЛПНП [273, 923, 945]. В проведенном исследовании у крыс было отмечено снижение содержания ЛПНП под воздействием симвастатина. Это свидетельствует об усилении поглощения данных ЛП тканями.
Из литературы известно, что синтез гепатоцитами апоВ-100 и формирование ЛПОНП при действии статинов не меняется [198]. В то же время следует предположить, что менялось не образование ЛПОНП печенью, а количество данных ЛП в плазме крови. Симвастатин в проведенном исследовании у крыс понижал содержание ТГ и ЛПНП. Этот факт говорит о преобладании поглощения ЛП над процессом их образования.
В предыдущих исследованиях было доказано, что холестерин пищи и холестерин в атеросклеротических бляшках – два совершенно разных типа холестерина [173]. С пищей усваивается в среднем 50–60% холестерина [626]. Его всасывание и реабсорбция играют важную отрицательную роль в организации скорости синтеза эндогенного холестерина клетками печени [648].
Влияние экзогенного холестерина на содержание ЛПНП в плазме крови крыс в нашей работе было отрицательным.
Ранее проведенные исследования показали, что потребление 3 ПНЖК в составе морской рыбы, мяса и жира морских животных, рыбьего жира сопровождается изменениями спектра липидов сыворотки крови, преимущественно снижением уровней ТГ и ЛПНП [676]. В других исследованиях отмечалось, что прием ПНЖК семейства 3 способствовал снижению уровней ТГ на 25% и ЛПОНП на 36% [584, 585]. Эффективность «Омакора» в терапии гипертриглицеридемии была показана в плацебо-контролируемых исследованиях [582].
В проведенном нами исследовании препарат 3 НЖК отрицательно действовал на уровень ЛПНП и ЛПОНП в плазме крови крыс.
В ряде клинических исследований было отмечено отсутствие достоверного влияния бисопролола на метаболизм липидов даже при длительном лечении [509, 521]. На фоне приема бисопролола существенно не менялось содержание ОХС и ТГ [521, 631, 820, 918]. В то же время, в нашей работе препараты БАБ + АСК (бисопролол + ацетилсалициловая кислота) положительно влияли на содержание ТГ, ЛПНП, ЛПОНП, увеличив их содержание. Эффект этих препаратов был сильнее эффекта симвастатина в отношении ТГ, ЛПОНП.
Известно, что холестерин нерастворим в воде и плазме, транспортируется в ткани и обратно с помощью ЛП и частично альбумином [671]. В нашем исследовании препараты не изменили содержание ОХС плазмы крови крыс.
Говоря об уровне глюкозы, необходимо подчеркнуть, что значение данного показателя в группах 3, 4 и 5 оказалось статистически значимо выше, чем в группе 2. В то же время в группе контроля обнаруживалось более высокое содержание, чем в группах 2 и 4 (Рисунок 30).
Изменение спектра жирных кислот в плазме крови, миокарде и печени крыс на фоне терапии
Анализ содержания 3 НЖК в плазме крови крыс (Рисунок 33) показал, что уровень абсолютного содержания -линоленовой (С18:3) НЖК в группе 4 (обычное питание + холестерин + симвастатин + БАБ + АСК + препарат 3ЖК) оказался статистически значимо выше, чем в группах 1 (обычное питание) и 2 (обычное питание + холестерин). Уровень данной ЖК в группе 5 (обычное питание + холестерин + БАБ + АСК + препарат 3 НЖК) превышал таковое во всех остальных. Содержание тимнодовой (С20:5) НЖК в группах 1 и 4 статистически значимо превышало таковое в группе 3 (обычное питание + холестерин + симвастатин + БАБ + АСК), а в группе 5 данный показатель статистически значимо повышался относительно его значений в группах 1, 2 и 3. Количество цервоновой (С22:6) НЖК в группе 5 было выше такового во всех остальных группах наблюдения. В свою очередь значение суммы 3 НЖК в группе 4 превышало описанное в группах 2 и 3. Уровень данного показателя в группе 5 также оказался выше, чем в остальных группах.
Следовательно, на абсолютное содержание НЖК данного семейства симвастатин и холестерин влияли однонаправлено (Таблица 129). В отношении всех показателей, за исключением тимнодовой (С20:5) НЖК, препарат 3 НЖК и препараты БАБ + АСК показали однонаправленный эффект, противоположный таковому у симвастатина.
Минимальное абсолютное значение суммы 3 НЖК в плазме крови было получено при совместном воздействии холестерина и симвастатина, а максимальное – при сочетании эффектов препарата 3 НЖК и БАБ + АСК.
Эффект симвастатина оказался равносильным описанному для препаратов БАБ + АСК, но уступал отмеченному при применении препарата 3 НЖК. При взаимодействии симвастатина, холестерина и препаратов БАБ + АСК, их суммарное действие на сумму 3 НЖК был отрицательным. В случае совместного применения симвастатина, холестерина и препарата 3 НЖК разнонаправленные эффекты взаимно нивелировались. При введении препарата 3 НЖК и холестерина или симвастатина, их суммарный эффект оказался положительным.
Анализ относительного содержания 3 НЖК позволил обнаружить более высокий уровень -линоленовой (С18:3) НЖК в группе 4 по сравнению с группой 2 (Рисунок 34).
В то же время значение данного показателя в группе 5 было статистически значимо выше такового в группах 1, 2 и 3. Содержание тимнодовой (С20:5) НЖК в группах 2, 4 и 5 превышал таковоеое в группе 3, при этом его значение в группе 1 превышало описанную в группах 2 и 3. Уровень цервоновой (С22:6) НЖК в группе 4 оказался выше, чем в группе 3, а в группе 5 превышал таковое во всех экспериментальных группах группах (Рисунок 34).
Обращал на себя внимание также тот факт, что в группе 1 значение суммы 3 НЖК было выше такового в группе 3, в группе 4 превышало отмеченное в группах 1, 2 и 3, а в группе 5 оказалось самым высоким.
Следовательно, симвастатин и холестерин влияли однонаправлено отрицательно и на относительное содержание НЖК данного семейства, а препарат 3 НЖК, напротив, повышал уровень данных НЖК (Таблица 130).
Минимальное процентное значение суммы 3 НЖК было зафиксировано при сочетанном применении симвастатина и холестерина, а максимальное - в случае введения препарата 3 НЖК. При использовании препаратов 3 НЖК, холестерина и симвастатина их суммарный эффект оказался положительным.
Таким образом, применение симвастатина приводило к уменьшению абсолютного и относительного содержания -линоленовой (С18:3) и цервоновой (С22:6) НЖК, значения суммы 3 НЖК и абсолютного количества тимнодовой (С20:5) НЖК. Добавленный в пищу холестерин снижал абсолютное и относительное содержание тимнодовой (С20:5) НЖК, значение суммы 3 НЖК , а также относительный уровень -линоленовой (С18:3) НЖК. Препарат 3 НЖК увеличивал абсолютное и относительное содержание всех ЖК данного семейства (за исключением цервоновой (С22:6) НЖК) и значение их суммы. Отмечался рост относительного содержания цервоновой (С22:6) НЖК. В то же время БАБ + АСК показали положительное влияние на абсолютное и относительное количество -линоленовой (С18:3) НЖК, абсолютное значение цервоновой (С22:6) НЖК, суммы 3 НЖК, при этом отрицательно влияя на относительное содержание тимнодовой (С20:5) НЖК.
Изучение абсолютного содержания 6 НЖК показало увеличение уровня линолевой (С18:2) НЖК в группе 4 по сравнению с отмеченным в группах 1 и 2. Значение данного показателя оказалось максимальным в группе 5 (Рисунок 35). Уровень дигомо--линолевой (С20:2) НЖК в группах 3 и 4 превышал таковой в группах 1 и 2, а наибольшая величина содержания данной НЖК обнаруживалась в группе 5. Во многом схожие данные были получены относительно дигомо--линоленовой (С20:3) НЖК: в группе 3 и 4 ее уровень был выше описанного в группе 1, а в группе 5 – статистически значимо выше, чем во всех группах наблюдения. Абсолютное содержание арахидоновой (С20:4) НЖК в группе 5 превышало таковое в группе 3.
Что касается абсолютного содержания суммы 6 НЖК, то в группе 5 оно превышало таковое во всех экспериментальных группах.
Относительное содержание дигомо--линолевой (С20:2) НЖК в группе 3 значительно превышало таковое в группах 1 и 2, а в группе 5 было максимальным. Уровень дигомо--линоленовой (С20:3) НЖК в группах 3 и 4 превосходил таковой в группе 1, а в группе 5 был выше, чем в группах 1 и 2. Количество арахидоновой (С20:4) НЖК в группе 2 превышало отмеченное в группах 3 и 5, а в группе 1 оказалось выше, чем в группах 3, 4 и 5 (Рисунок 36).
Таким образом, было обнаружено однонаправленное влияние симвастатина и препарата 3 НЖК и противоположное по направленности действие холестерина и препаратов БАБ + АСК (Таблица 132). Эффект симвастатина оказался менее сильным, чем препаратов БАБ + АСК. В то же время все препараты изменяли лишь показатели относительного содержания отдельных НЖК, не влияя на значение их суммы.
Из всего вышесказанного следовало, что прием симвастатина отрицательно вляял на абсолютное и относительное содержание линолевой (С18:2), дигомо--линолевой (С20:2), дигомо--линоленовой (С20:3) НЖК, а также на абсолютное количество арахидоновой (С20:4) НЖК и значение суммы 6 НЖК. В то же время статин оказывал положительное влияние на относительноеное содержание арахидоновой (С20:4) НЖК. Холестерин проявлял положительный эффект в отношении абсолютного и относительного содержания дигомо--линоленовой (С20:3) и относительного содержания линолевой (С18:2) НЖК. При этом его эффект оказался отрицательным на относительное количество арахидоновой (С20:4) НЖК. Препарат 3 НЖК отрицательно действовал на абсолютное и относительное содержание линолевой (С18:2) НЖК и положительно – на уровень арахидоновой (С20:4) НЖК. Препараты БАБ + АСК оказывали положительное влияние на абсолютное и относительное содержание линолевой (С18:2), дигомо--линолевой (С20:2) и дигомо--линоленовой (С20:3) НЖК, а также на абсолютное значение суммы 6 НЖК. При этом аа относительное содержание арахидоновой (С20:4) НЖК они влияли отрицательно.
При изучении абсолютного содержания 7 НЖК были выявлены следующие закономерности: уровень пальмитолеиновой (С16:1) НЖК в группе 4 оказался выше, чем в группе 2, а в группе 3 превышал таковой в группах 1 и (Рисунок 37); в группе 5 содержание данной НЖК значения во всех группах наблюдения.
Количество вакценовой (С18:1) НЖК и абсолютное значение суммы 7 НЖК в группах 3 и 4 значительно превосходило таковые в группах 1 и 2. В то же время значение данных показателей в группе 5 превысило описанное в остальных группах наблюдения.
Таким образом, эффект симвастатина, холестерина и препарата 3 НЖК оказывал однонаправленное отрицательное действие на НЖК семейства 7 (Таблица 133), тогда как влияние препаратов БАБ + АСК оказалось противоположным. Минимальное абсолютное значение суммы 7 НЖК получено при применении симвастатина, а максимальное - при использовании БАБ + АСК. При их сочетанном действии суммарный эффект оставался положительным.