Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние исследований в области сахарного диабета (обзор литературы) 9
1.1 Таблетки, как современная и актуальная форма доставки лекарственных веществ 9
1.2 Технологический процесс изготовления таблеток 10
1.3 Классификация готовых лекарственных форм с модифицированным высвобождением 13
1.4 Матричные таблетки с пролонгированным высвобождением. Технологические характеристики таблетирования 14
1.5 Вспомогательные вещества, применяемые для пролонгирования действия 18
1.6 Сахарный диабет: идентификация и современные подходы к лечению 19
1.7 Классификация и принцип действия препаратов, применяемых для терапии сахарного диабета II типа 21
1.8 Обзор фармацевтического рынка препаратов глибенкламида 29
1.9 Научно-исследовательские работы по разработке пролонгированных форм глибенкламида 33 Заключение по главе 34
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1 Материалы исследования 36
2.2 Методы исследования 44
2.3 Дизайн исследования 55
ГЛАВА 3. Обоснование выбора состава вспомогательных веществ и технологии получения таблеток глибенкламида 5 мг, пролонгированного действия 57
3.1 Моделирование и дизайн в пролонгированном высвобождении 57
3.2 Компьютерное моделирование объекта исследования 62
3.2.1 Оценка влияния типа наполнителя и полимера на высвобождение глибенкламида из матричных таблеток 62
3.2.2 Влияние измельчения активной субстанции глибенкламида на профиль высвобождения 74
3.2.3 Подбор оптимального типа наполнителя, оценка свойств таблеточной массы и параметров таблетирования, оценка технологических параметров таблеток (внешний вид, прочность, истираемость, предел прочности)
Заключение по главе 92
Глава 4 Разработка состава и технологии получения таблеток глибенкламида 5 мг, пролонгированного действия стандартизация лекарственной формы
4.1 Состав и технология получения таблеток глибенкламида пролонгированного действия 94
4.2 Стандартизация лекарственной формы 98
4.3 Технологическая схема производства таблеток глибенкламида 5 мг, пролонгированного действия 111
4.4 Валидация аналитических методик УФ спектрофотометрического определения глибенкламида 113
4.5 Фармакокинетические исследования 115
Заключение по главе 118
- Матричные таблетки с пролонгированным высвобождением. Технологические характеристики таблетирования
- Методы исследования
- Оценка влияния типа наполнителя и полимера на высвобождение глибенкламида из матричных таблеток
- Технологическая схема производства таблеток глибенкламида 5 мг, пролонгированного действия
Введение к работе
Актуальность темы: Сахарный диабет (СД) является острейшей медико-социальной проблемой и стоит в ряду первых приоритетов национальных систем здравоохранения практически всех стран мира.
Число страдающих этим заболеванием постоянно увеличивается, причем возраст больных сахарным диабетом снизился. Если раньше этим заболеванием страдали, в основном, люди пожилого возраста, то в настоящее время сахарный диабет часто встречается и у молодых людей.
С 1991 года по инициативе Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) и международной диабетической федерации отмечается всемирный день борьбы с диабетом, а с 2007 года- всемирный день борьбы против диабета проводится под эгидой Организации Объединенных Наций (ООН).
В России по данным Министерства здравоохранения, на январь 2014 года зарегистрировано почти 4 миллиона больных сахарным диабетом. В качестве причин часто называются: стареющее население, снижение физической активности, неправильное питание.
Учитывая успешную борьбу с инфекционными заболеваниями и общее увеличение продолжительности жизни, такие прогнозы представляются вполне реальными.
К сожалению, лечение СД, ограниченное поздней диагностикой, далеко от совершенства Таким образом, создание современных, эффективных и безопасных противодиабетических препаратов по-прежнему остается актуальным.
Однако, сегодня, учитывая большое количество пероральных
противодиабетических средств на фармацевтическом рынке, не всегда легко выбрать оптимальный лекарственный препарат. Хорошим ориентиром в этом случае является список незаменимых лекарственных средств ВОЗ, где представлен глибенкламид – единственный представитель из группы препаратов сульфонилмочевины.
Глибенкламид во всем мире рассматривается как неотъемлемый лекарственный препарат для лечения сахарного диабета. Его востребованность и эффективность вполне современны и подтверждены на протяжении всего времени существования
данного препарата.
Глибенкламид в настоящее время вполне перспективен, особенно если будет
совершенствоваться в отношении его лекарственных форм, это возможно и
целесообразно по двум направлениям: повышении его биодоступности и
пролонгирования действия. Что реально при обоснованном выборе вспомогательных
веществ и применении современных технологий. Так что поиск технологических
решений для дальнейшего расширения диапазона лекарственных форм
глибенкламида по-прежнему актуален.
Степень разработанности темы: Более чем за 40 лет применения глибенкламида отмечены неоднократные попытки создания новых лекарственных форм на его основе.
Для улучшения биодоступности и скорости растворения описаны способы комплексообразования с гидроксипропил -циклодекстрином, получения твердой дисперсии глибенкламида с полигликолизированными глицеридами и коллоидным диоксидом кремния в качестве носителя.
Можно отметить некоторые экспериментальные работы по получению пролонгированных лекарственных форм глибенкламида: микрокапсулы, пеллеты.
Цель исследования: Разработка состава и технологии таблеток глибенкламида пролонгированного действия, выбор оптимальной композиции вспомогательных веществ и стандартизация разработанной лекарственной формы.
Задачи исследования:
-
Осуществить выбор наиболее рациональной композиции вспомогательных веществ (биофармацевтические исследования in vitro).
-
Разработать таблетированную пролонгированную лекарственную форму глибенкламида в соответствии с требованиями GMP.
-
Разработать альтернативную методику определения растворения, количественного содержания и однородности дозирования с помощью УФ спектрофотометрии.
-
Провести стандартизацию и валидацию полученной композиции. Определить сроки годности готовой лекарственной формы.
-
Выполнить фармакокинетические исследования для подтверждения пролонгированного действия
-
Разработать проект нормативной документации (НД) и опытно промышленный регламент (ОПР).
Научная новизна исследования: таблетированная лекарственная форма
глибенкламида с пролонгированным высвобождением (без микронизации активной субстанции) будет предложена впервые и является оригинальной, т.к. подобные лекарственные формы для глибенкламида в настоящее время на фармацевтическом рынке отсутствуют.
Впервые разработана технологическая схема производства.
Составлена нормативная документация (проект НД, опытно-промышленный регламент, акт апробации) на разработанную лекарственную форму.
Предложена альтернативная методика теста растворения, количественного определения и однородности дозирования с использованием УФ спектрофотометрии.
Проведены фармакокинетические исследования таблеток глибенкламида, пролонгированного действия.
Теоретическая и практическая значимость работы: Глибенкламид – востребованный лекарственный препарат, разработка для него пролонгированной лекарственной формы в виде таблеток способна расширить выбор лекарственных форм, что важно для больных СД и обеспечить регулируемое высвобождение глибенкламида и комфортность применения, что является одной из важных задач создания лекарственных форм с регулируемым высвобождением, что особенно значимо для лечения таких серьезных заболеваний как СД.
Результаты исследований являются экспериментальным обоснованием для разработки готовой лекарственной формы глибенкламида пролонгированного действия.
На основании проведенных исследований разработана оптимальная лекарственная форма с пролонгированным высвобождением, определены нормы качества, подготовлены НД и опытно-промышленный регламент производства. Проведена технологическая апробация (акт апробации от 25 февраля 2016 г.) на фармацевтическом предприятии ООО «ПИК-ФАРМА» (г. Москва).
Методология и методы исследований: в диссертационной работе
использовались: физико-химические, технологические, микробиологические методы исследований.
Методология исследования основывалась на современных принципах разработки лекарственных средств (ICH Q8).
Проведено изучение возможности использования эфиров целлюлозы
(гидроксиэтилцеллюлозы) как вещества обладающего не только пролонгирующим действием, но и способного ускорять растворение активной субстанции.
Положения, выносимые на защиту:
1. Выбор и обоснование состава таблеток глибенкламида, пролонгированного
действия
-
Технологическая схема производства
-
Результаты аналитических исследований таблеток
-
Результаты разработки норм качества на предложенный состав таблеток глибенкламида
-
Результаты фармакокинетических исследований.
Степень достоверности и апробация результатов: Достоверность полученных результатов определяется воспроизводимостью полученных данных, использованием современных методов исследования, значительным объемом используемой информации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК. Материалы диссертационной работы прошли апробацию на научных конференциях: технология получения лекарственных форм по правилам и нормам GMP (Москва, 2013), GMP твердых лекарственных форм, таблетки, таблетки, покрытые оболочкой, пеллеты, капсулы (Москва, 2014), 73 открытая научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Пятигорск, 2015). GMP твердых лекарственных форм, таблетки, таблетки покрытые оболочкой, пеллеты, капсулы (Москва, 2016).
Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 139 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц, 41 рисунок, состоит из оглавления, введения, 4 глав, заключения, списка терминов, условных обозначений и сокращений, приложений и списка литературы, включающего 182 источника, в т. ч. 127 на иностранном языке.
Матричные таблетки с пролонгированным высвобождением. Технологические характеристики таблетирования
При изготовлении таблеток как правило применяются 2 основных метода обработки исходных веществ: - прямое прессование – собственно, прессование порошков без предварительной обработки; - гранулирование – целенаправленное укрупнение частиц исходных веществ для придания им необходимых технологических свойств. Гранулирование может быть сухим и влажным. Сухое гранулирование (компактирование, брикетирование), процесс, в результате которого, гранулируемые вещества подвергаются прессованию, путем пропускания порошков через специальное оборудование, получаемые в результате полупродукты (брикеты, пластинки) измельчаются до гранул необходимого размера. Преимуществом такого метода является отсутствие растворителя, что исключает стадию сушки. [42], [45]
С усовершенствованием технологического оборудования, позволяющего более качественно контролировать процесс и появлению ряда новых вспомогательных веществ [111], [112], [149], отмечается значительное увеличение применения этого метода для получения готовых лекарственных форм, так как он может быть применим к многочисленным задачам – прессование неорганических материалов и растительных экстрактов, для получения «обычных» таблеток и таблеток с модифицированным высвобождением, а также, что актуально в настоящее время, может быть применен для улучшения растворения активных фармацевтических субстанций.[121], [165]
Влажное гранулирование заключается в увлажнении исходных порошков с помощью увлажнителя (увлажнитель как правило, состоит из разрешенного к применению в фармацевтической промышленности растворителя, который часто включает в себя специальные связующие вещества), что приводит к укрупнению исходных частиц, которые затем подвергают сушке и измельчению до необходимого размера гранул. Сам процесс влажной грануляции в свою очередь можно разделить по аппаратурному оформлению процесса как влажная грануляция в высокоскоростном миксере или в псевдоожиженном (кипящем слое). [11] [42] Наиболее оптимальным считается прямое прессование, поскольку такой процесс позволяет сократить число стадий по сравнению с другими методами, что приводит к экономии времени, ресурсов, площадей, занимаемых оборудованием. Также такие таблетки характеризуются, как правило, более высокой терапевтической активностью, поскольку при распадаемости образуются частицы, по своим размерам близкие к исходным веществам. Однако применение прямого прессования ограничено ввиду того что большая часть исходных порошков, применяемых в таблетировании, не приспособлена для прямого прессования, это может быть исправлено с появлением современных вспомогательных веществ, которые улучшают технологические характеристики таблетируемой смеси. [22], [41]
Также в последние годы все чаще находит применение метод экструзии расплава, который позволяет добиться как улучшения технологических параметров обрабатываемых материалов, [106], так и нередко позволяет добиться улучшения биодоступности активных фармацевтических субстанций (АФС), в том числе и в отношении АФС II класса по биофармацевтической классификации, к которым также относится и глибенкламид. [98], [148]
Очень широкое применение этот метод нашел в технологии модифицированного высвобождения, так как во многих случаях позволяет достичь результатов, которые не удается получить с помощью других методов. [94], [145], [181], [182].
Одним из альтернативных методов является технология микрокапсулирования полимером, способным набухать, и замедлять высвобождение активной субстанции из микрокапсулы – один из способов создания пролонгированных форм. В качестве материала оболочки могут использоваться любые разрешенные к применению в фармацевтике. [18], [133]
Набирают популярность методы, как одни из современных и перспективных, с применением нанотехнологий, это позволяет добиться уменьшения побочных эффектов и токсичности, но на данный момент, не до конца понятно влияние самих наночастиц на органы и клетки, что является ограничением подобных методов и требует более тщательного изучения для обеспечения безопасности такого лекарственного средства. [81]
Методы исследования
Глибенкламид представляет собой мелкокристаллический порошок белого цвета (или белого с кремоватым оттенком), практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте этиловом (96%). Растворимость глибенкламида, который является слабой кислотой, зависит от многих факторов, одними из важнейших являются рН и наличие в составе лекарственного средства, веществ, улучшающих растворимость [87]. при этом, увеличение температуры оказывает негативный эффект на растворимость глибенкламида, которая понижается с увеличением температуры. [63], [71], [88] Таким образом справочная растворимость глибенкламида, приводимая в различных источниках, не соответствует реальной растворимости глибенкламида при проведении теста растворение, который согласно ГФ XII проводится при температуре 37 ±1 С. [14] Растворимость глибенкламида возрастает с разбавлением щелочных растворов, как показано в таблице 2.2, где приведены некоторые примерные экспериментальные значения растворимости глибенкламида в различных растворителях при температуре 25 С, полученные при проведении диссертационных исследований. Данные результаты были получены и использовались при подборе растворителя при разработке аналитических методик определения глибенкламида в готовой лекарственной форме. Таблица 2.2 примерная экспериментальная растворимость глибенкламида в различных растворителях при 25С. Растворитель Растворимость глибенкламида N- метилпирролидон 2 мг/мл Ацетон 1,2 мг/мл Фосфатный буфер (рН 6,8) 0,20 мг/мл 0,5М раствор натрия гидроксида 0,20 мг/мл 0,2М раствор натрия гидроксида 0,25 мг/мл 0,1М раствор натрия гидроксида 0,40 мг/мл 0,05М раствор натрия гидроксида 0,50 мг/мл Этиловый спирт (96%) 0,30 мг/мл Метиловый спирт 0,50 мг/мл Метиленхлорид 0,70 мг/мл
По биофармацевтической классификации (BCS) глибенкламид относится ко II классу, обладает малой растворимостью и высокой проницаемостью [43], [70]. При этом, как уже отмечалось выше имеет тенденцию к ухудшению растворимости с увеличением температуры, и согласно экспериментальным исследованиям, при 37С растворимость глибенкламида примерно в 4,7 раз ниже его растворимости при 25С. Что создает дополнительные сложности при разработке его лекарственных форм. [161], [178]. На рисунке 2.2 показана разница в растворимости глибенкламида в воде относительно его положения по биофармацевтической классификации при различной температуре.
Как видно из рисунка 2.2 при растворимости глибенкламида при температуре 25 С, для растворения 5 мг дозировки требуется около 160 мл растворителя (вода), однако, с увеличением температуры до 37С, объем растворителя увеличивается до 750 мл на растворение 5 мг глибенкламида. Биодоступность немикронизированного глибенкламида зависит от приема пищи. Так, биодоступность глибенкламида понижается при приеме жирной пищи и наоборот, повышается при приеме пищи, богатой карбогидратами. Микронизированный глибенкламид менее чувствителен к эффектам приема пищи. Действие развивается через 2ч после приема, достигает максимума через 7–8ч и продолжается 8–12ч (для микронизированных форм до 24 ч).
Быстро и практически полностью абсорбируется из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Максимальная концентрация в плазме крови после однократного приема достигается через 1–2ч. Практически не проникает через плацентарный барьер. Канцерогенные свойства – не обнаружены (18 месячное изучение на крысах с дозировкой до 300 мг/кг тела в день. Двухлетнее изучение канцерогенных свойств на мышах).
Оценка влияния типа наполнителя и полимера на высвобождение глибенкламида из матричных таблеток
Планировалась оценка полученных таблеток также по показателям: внешний вид, прочность, истираемость, пористость и предел прочности, но поскольку все экспериментальные серии обладали приемлемыми показателями при любой использованной комбинации выбранных наполнителей и полимеров для пролонгации, они были исключены из исследования Серии глибенкламида 1-12 (GL1-GL12) наработаны в рамках экспериментального дизайна по определению наиболее рационального состава (во всех случаях использовалась субстанция глибенкламида, измельченная совместно с гидроксиэтилцеллюлозой).
Серии 13 и 14 (GL13, GL14) являются воспроизведением центральной точки эксперимента для подтверждения воспроизводимости.
Серии 15-17 (Gl15-GL17) наработаны для выбранного, наиболее эффективного состава для проверки влияния размола субстанции глибенкламида на профиль высвобождения. Серия 15 (GL15) из неизмельченной субстанции. Серия 16 (GL16) из измельченной субстанции. Серия 17 (GL17) из субстанции глибенкламида измельченной совместно с гидроксиэтилцеллюлозой (3 варианта с различными марками микрокристаллической целлюлозы МКЦ 101 (GL17-1), МКЦ 102 (GL17-2), МКЦ 200 (GL17-3).
Серии 18 и 19 (GL18, GL19) являются воспроизведением выбранного серии GL17, (17-2 с МКЦ 102) для получения результатов троекратного воспроизведения окончательно выбранного состава лекарственной формы глибенкламида 5 мг пролонгированного действия. В таблице 3.2 указаны основные варьируемые параметры и результаты растворения в соответствующих контрольных точках.
На первом этапе были спланированы последовательные эксперименты (GL1-GL12) с комбинацией варьируемых параметром и троекратным повторением (GL12-GL14) центральной точки эксперимента, для определения сходимости результатов. Все экспериментальные образцы контролировались в 2 точках, начальное растворение (1 час) и конечный результат (количество высвободившегося глибенкламида в течение 24 часов). Результатом данного этапа являлся отбор наиболее перспективных комбинаций для дальнейших исследований и доработки, в случае необходимости. По результатам данного этапа только одна комбинация -соотношения полимеров (ГЭЦ - ГПМЦ 1:1) и наполнителей – (растворимого-нерастворимого 3:1) дала требуемые значения в обоих точках контроля, данный результат был воспроизведен трижды, в результате была подтверждена сходимость полученных результатов и данный состав был взять за основу для дальнейших исследований.
Результаты серии экспериментов с указанием варьируемых параметров и полученных результатов представлены в таблице 3.2 Р:Н - соотношение растворимого (Р) и нерастворимого (Н) наполнителей, в скобках указано их соотношение друг относительно друга, также и для соотношения пролонгирующих полимеров.
В качестве растворимого наполнителя использовался лактозы моногидрат, в качестве нерастворимого – микрокристаллическая целлюлоза. Порядок проведения экспериментов присваивается системой в произвольном, случайном порядке для большей объективности полученных результатов и построения в целом более адекватной модели, минимизируя влияние экспериментатора на набор экспериментов. Интерпретация полученных результатов
Для достижения линейного профиля высвобождения, требованием к первому часу было не более 10% высвободившейся субстанции, при этом в течение 24 часов субстанция должна была высвобождаться в количестве не менее 80%, что подтверждало бы возможность полного высвобождения субстанции глибенкламида из данной матрицы. На данном этапе для большего удобства использовалась точка контроля в 24 часа, несмотря на то, что для готовой лекарственной формы подразумевалось полное высвобождение (не менее 80%) субстанции глибенкламида из матричных таблеток.
Технологическая схема производства таблеток глибенкламида 5 мг, пролонгированного действия
Тест растворение Анализ литературных данных показал, что USP 36 NF 31 содержит 5 различных методик для определения растворения глибенкламида [167]. В НД на Манинил включена методика, не соответствующая ни одному из вариантов, предложенных в USP 36 NF 31[32]. Для первичной оценки полученного результата, использовалась методика ВЭЖХ, максимально приближенная к методике по НД, адаптированная к имеющемуся оборудованию. В дальнейшем использовался метод определения с помощью УФ-спектрофотометрии, в литературе описаны способы контроля качества лекарственной формы с использованием УФ спектрофотометрии, на основании этих данных была разработана методика определения глибенкламида [67], [89], [117], [160].
В качестве среды растворения использовался фосфатный буфер с рН=8, объем среды растворения 500 мл. В USP 36 NF 31 рекомендуется использовать объем среды растворения 900 мл для не микронизированной субстанции и 500 мл для микронизируемой. Поскольку в качестве препарата сравнения использовался Манинил 3,5, в котором используется микронизированная субстанция, было решено использовать для данного теста такой же объем среды растворения, несмотря на то что субстанция глибенкламида не микронизировалась. Порядок проведения процедуры описан в соответствующем разделе, результаты представлены в таблице 4.5. Построение калибровочных графиков. Для теста «Растворение» Для использования в качестве метода анализа УФ Спектрофотометрию была построена зависимость поглощения УФ излучения раствором субстанции глибенкламида от концентрации. В качестве растворителя была использована система 0,05 М раствор Натрия гидроксида и фосфатный буфер (рН =8,0). При подборе растворителя основной задачей было подобрать такой растворитель, чтобы растворить субстанцию глибенкламида в достаточной концентрации и при этом растворитель должен быть, максимально близкий к среде растворения. Разбавленные растворы щелочи, (наилучшие результаты в растворении глибенкламида демонстрирует 0,05М раствор NaOH) использовали в сочетании с буферным раствором для теста растворения, как наиболее близкий по составу растворитель к среде растворения, чтобы минимизировать погрешность измерения. Ввиду ограниченной растворимости глибенкламида в данной системе калибровочную кривую строили в диапазоне 1-25 мкг/мл, что является достаточным, поскольку при проведении теста растворение максимальная концентрация глибенкламида в растворе не должна превышать 10 мкг/мл.
Для теста «количественное определение» и «однородность дозирования» Растворители, использованные при тесте «растворение» в данном случае не использовали, поскольку водные системы также растворяют и высокомолекулярные полимеры, входящие в состав таблетки и тем самым увеличивают погрешность измерений и создают дополнительные сложности с фильтрацией, поскольку значительно возрастает вязкость таких растворов, также как уже было отмечено, растворимость глибенкламида в водных системах ограничена и не позволяет получить растворы с концентрацией, достаточной для получения необходимой величины абсорбции, при этом по возможности не растворять вспомогательные вещества и при этом быть оптически прозрачным в исследуемом диапазоне длин волн.
Были проведены практические исследования по растворимости глибенкламида (таблица 2.2, стр 38), наилучшими растворителями с точки зрения растворимости глибенкламида являются N-метилпирролидон и ацетон, но в виду оптической непрозрачности в требуемом диапазоне УФ излучения их использование не представляется возможным.
Таким образом, наилучшими растворителями, удовлетворяющими всем предъявленным требованиям для проведения теста «количественное определение» и «однородность дозирования» были выбраны метиленхлорид и метанол, но в виду высокой летучести метиленхлорида, окончательный выбор был сделан в пользу метанола.
На рисунках 4.1 и 4.2 представлены графики зависимости оптической плотности субстанции глибенкламида в системе 0,05М NaOH/Фосфатный буфер с концентрацией 1-25 мкг/мг и в метаноле в диапазоне концентраций 2-100 мкг/мл соответственно.
Субстанция глибенкламізда в системе NaOH/фосфатный буфер 2,0 - 1,8 - 1,6 - 1,4 - 1 мкг/мл 2мкг/мл " "Ч. 5 мкг/мл\ 10 мкг/мл 1,0 - . \ 15 мкг/мл Ч \ 20 мкг/мл 0,8 - \ \ 25 мкг/мл 0,6 - 0,4 - 0,2 -0,0 -2 zr- 0 230 250 270 290 310 330 350 Длина волны А, нм Рис4.1 спектр поглощения глибенкламида в системе NaOH/ Фосфатный буфер Рис. 4.2. Спектр поглощения глибенкламида в метаноле На графике (рис 4.2) присутствуют 3 максимума поглощения -229 нм, 300 нм и слабовыраженный максимум при 275 нм. При этом при длине волны 229 нм линейность соблюдается до концентрации 50 мкг/мл. При больших концентрациях оптическая плотность не подчиняется закону Ламберта-Бугера 101
Бера и не может быть использована. При этом на кривых поглощения раствора таблеток глибенкламида, а также на спектре в растворе NaOH/Фосфатный буфер пик на 229 нм отсутствует. На рисунке 4.3 представлен график оптической плотности раствора таблеток глибенкламида в соответствующих точках растворения:1,2,4,8,12, и 24 часа.
Для идентификации неявно выраженных пиков применяется в том числе производная спектрофотометрия, позволяющая идентифицировать скрытые и неявно выраженные пики. Максимальный порядок производной, который можно получить для спектра определяется возможностями прибора, современные спектрофотометры комплектуются программным обеспечением, способным проводить вычисления до производной 9 порядка. Однако на практике такое используется редко, поскольку одним из негативных эффектов дифференцирования является возникновение побочных пиков, так называемых сателлитов, количество которых растет пропорционально степени дифференцирования и затрудняет идентификацию целевого пика.