Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Аллергия: определение, причина развития, классификация 11
1.2.Фармакотерапия аллергических заболеваний кожи. Антигистаминные лекарственные препараты 14
1.3. Мягкие лекарственные формы для лечения аллергических заболеваний кожи 18
1.4. Заключение по обзору литературы 28
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследований 29
2.1. Объекты исследования 29
2.2. Методы исследования 33
2.3. Дизайн исследования 37
ГЛАВА 3. Разработка состава, фармако-технологические исследования мягкой лекарственной формы фексофенадина 39
3.1. Изучение физико-химических свойств фексофенадина 39
3.2. Выбор оптимального состава мягкой лекарственной формы фексофенадина
3.2.1. Выбор вспомогательных веществ мягкой лекарственной формы фексофенадина 43
3.2.2. Изучение высвобождения фексофенадина из образцов геля методом равновесного диализа 49
3.2.3. Изучение реологических свойств образцов геля фексофенадина 51
3.2.4. Изучение намазывающей способности образцов геля фексофенадина 54
3.3. Обоснование состава и технологии геля фексофенадина 56
3.3.1. Определение вероятного взаимодействия действующего и вспомогательных веществ в геле фексофенадина 56
3.3.2. Технологическая схема производства геля фексофенадина 58
3.3.3. Описание технологического процесса 59
3.4. Нормирование качества геля фексофенадина 63
3.4.3 Установление водородного показателя 64
3.4.4 Изучение термостабильности и коллоидной стабильности
3.4.5. Микробиологическая чистота 64
3.4.6. Разработка методик качественного и количественного анализа геля фексофенадина 65
3.4.7. Изучение стабильности геля фексофенадина в процессе хранения 85
3.4.8. Масса содержимого упаковки 91
3.4.9. Спецификация «Фексофенадин, гель для наружного применения 1%» 92
3.5. Выводы по главе 93
ГЛАВА 4. Фармакологическое изучение свойств геля фексофенадина 95
4.1.Изучение общетоксического действия разработанной лекарственной формы 95
4.2. Определение раздражающего действия геля фексофенадина 96
4.3. Изучение специфической активности геля фексофенадина 99
4.4. Выводы по главе 105
Заключение 106
Список используемой литературы 108
- Мягкие лекарственные формы для лечения аллергических заболеваний кожи
- Методы исследования
- Выбор вспомогательных веществ мягкой лекарственной формы фексофенадина
- Определение раздражающего действия геля фексофенадина
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Создание высокоэффективных лекарственных средств антигистаминного действия относится к числу важнейших задач медицинской и фармацевтической науки. Современные подходы к терапии аллергодерматозов подразумевают использование мягких лекарственных форм, преимущественно, глюкокортикостероидов, которые сами по себе оказывают довольно серьёзные побочные эффекты и требуют постоянного врачебного контроля (И.С. Гущин, 2001,2002; Simons F.E.R., 2011).
Естественно, что возникла потребность получения таких
противогистаминных препаратов, которые, во-первых, имели бы высокое
сродство к H1- рецепторам, обеспечивающее прочное с ними связывание и
длительное лечебное действие; во-вторых, обладали бы высокой
избирательной блокадой H1- рецепторов, не затрагивая других
физиологических медиаторов, что позволило бы освободиться от
побочных эффектов H1- антагонистов 1-го и 2-го поколения, а именно
действия на сердечно - сосудистую систему, зрение, желудочно-кишечный
тракт и центральную нервную систему. Эти тяжелые осложнения побудили
начать исследования по радикальному улучшению профиля
противогистаминных препаратов. Препаратом 3-го поколения
антигистаминного действия является фексофенадин, зарегистрированный в Российской Федерации под торговым названием телфаст (Handley D.A. et al., 1998, И.С. Гущин, 1999). Использование в медицинской практике фексофенадина подтвердило его профиль безопасности, высокую терапевтическую эффективность, возможность существенно повысить качество жизни пациентов.
Наружные лекарственные формы с антиаллергическими препаратами антигистаминного действия в настоящее время ограничены двумя субстанциями, относящимися к антигистаминным средствам первого и
второго поколений.
Учитывая небольшую долю существующих в настоящее время наружных лекарственных форм соответствующей направленности действия на фармацевтическом рынке России, а также отсутствие конкретной мягкой лекарственной формы фексофенадина, создание лекарственного препарата с фексофенадином для дерматологии расширит как его фармакологический спектр, так и номенклатуру антигистаминных мазей, что, несомненно, является актуальной задачей развития современного фармацевтического рынка.
Степень разработанности темы исследования. Многочисленные исследования противоаллергических лекарственных форм доказали преимущество антигистаминных препаратов третьего поколения в лечении аллергических заболеваний как у взрослых, так и у детей (Ю.Б. Белоусова, Е.Ф. Васильчук, Л.А. Горячкина, А.В. Караулов, Е.Г. Кондюрина, М.В. Леонова, О.И. Пикуза, О.В. Скороходкина). В связи с тем, что на фармацевтическом рынке России фексофенадин представлен только твердыми лекарственными формами, уровень разработки темы диссертации потребовал дополнительной е конкретизации, а именно, создания мягкой лекарственной формы фексофенадина антигистаминного действия для обеспечения комплексного лечения больных аллергическими заболеваниями кожи, что и было осуществлено в настоящей диссертационной работе.
Цель и задачи исследования. Целью данного исследования является разработка состава, фармако-технологические испытания мягкой лекарственной формы фексофенадина антигистаминного действия.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
Разработать состав мягкой лекарственной формы фексофенадина.
Биофармацевтически обосновать состав геля фексофенадина.
Осуществить реологические исследования образцов геля
фексофенадина.
Разработать технологическую схему производства мягкой лекарственной формы.
Установить нормы качества лекарственного препарата.
Разработать методы качественного и количественного определения фексофенадина в геле.
Исследовать стабильность и срок годности предлагаемой лекарственной формы.
Провести фармакологические исследования мягкой лекарственной формы фексофенадина.
Разработать лабораторный регламент и фармакопейную статью на предлагаемую лекарственную форму.
Научная новизна исследования. В результате проведённого комплекса исследований впервые обоснована целесообразность создания противоаллергического геля с фексофенадином. Подобраны вспомогательные вещества, обеспечивающие весь комплекс требуемых реологических и медико-биологических свойств. Разработан состав и оптимальная технология производства геля фексофенадина, позволяющий получить лекарственный препарат с высокой биологической доступностью и оптимальными технологическими характеристиками. Разработаны новые и модернизированы существующие аналитические методики количественного определения фексофенадина в геле. Проведена микробиологическая и фармакологическая оценка геля, позволяющая определить возможность применения лекарственного препарата в терапии аллергических заболеваний кожи.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается в комплексном обосновании оригинального состава и технологической схемы производства мягкой лекарственной формы фексофенадина антигистаминного действия в
условиях предприятия. Данные проведенных исследований включены в
фармакопейную статью и лабораторный регламент на производство
лекарственного препарата «Фексофенадин, гель для наружного применения
1%» для ООО «Озон», г. Жигулевск. Фрагменты диссертационной работы
внедрены в учебный процесс кафедры технологии лекарств Пятигорского
медико-фармацевтический институт – филиала ФГБОУ ВО
«Волгоградский государственный медицинский университет» МЗ РФ.
Методология и методы исследования. В диссертационной работе
использованы технологические, биофармацевтические, физико-
химические, фармакологические, микробиологические, статистические
методы. Дизайн исследования базируется на основных технологических и
биофармацевтических условиях разработки мягких лекарственных форм
антигистаминного действия. Методологией исследований являются
комплексные теоретические положения, которые используют при разработке общих методических подходов в создании технологии производства и проекта лабораторного регламента.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Результаты биофармацевтических, реологических и физико-химических исследований по обоснованию состава геля фексофенадина.
-
Разработка технологической схемы производства геля фексофенадина в условиях крупного фармацевтического предприятия.
-
Результаты разработки норм качества, определение стабильности и срока годности геля фексофенадина антигистаминного действия.
-
Результаты фармакологического и микробиологического исследования предлагаемой лекарственной формы.
-
Результаты разработки нормативной документации и внедрения в фармацевтическое производство геля фексофенадина.
Степень достоверности и апробация результатов работы.
Достоверность результатов подтверждена использованием в работе
современного высокотехнологического оборудования. Все результаты
измерений статистически обработаны при помощи специализированных
программ Excel, Statistica. Для получения достоверных результатов были
соблюдены правила повторности эксперимента. Основные результаты
работы были доложены на XIII конференции молодых учёных и
специалистов, посвящённой 75-летию СОГМА «Молодые учёные –
медицине» (г. Владикавказ, 2014 г.); Всероссийском Съезде
Фармацевтических работников (г. Москва, 2014 г.); X международной
заочной конференции «Развитие науки в XXI веке» (г. Харьков, 2016 г.); II
международной научно-практической конференции «Современные
проблемы развития фундаментальных и прикладных наук» (г. Прага, 2016
г.); Всероссийской научно-практической конференции с международным
участием «Актуальные вопросы современной фармацевтической
технологии», посвященной памяти выдающегося ученого, заслуженного деятеля науки РСФСР, доктора фармацевтических наук, профессора И.А. Муравьева (г. Пятигорск, 2016 г.).
Результаты диссертационной работы опубликованы в 13 работах, включая 6 – в журналах, рекомендуемых ВАК.
Личный вклад автора. Осуществлен выбор направления
исследования, выполнен поиск и анализ литературных источников по проблематике диссертационной работы, сформулированы цель, задачи исследования и пути их решения. Проведен анализ полученных экспериментальных данных, проведено их обобщение.
Участвовала в подготовке материалов исследования для их последующей публикации, представления на научных конференциях и оформлении диссертационной работы.
Объём и структура диссертации. Объем диссертации составляет
125 страниц текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора
литературы, главы описания объектов и методов исследований и двух глав, содержащих собственные экспериментальные исследования и их обсуждения, заключения, списка литературы и приложений. Работа содержит 35 таблиц, 33 рисунка. Список цитируемой литературы включает 178 источника, из них 32 - на иностранном языке.
Мягкие лекарственные формы для лечения аллергических заболеваний кожи
Кардиотоксическое действие впервые было обнаружено у терфенадина, относящегося к группе антигистаминных препаратов второго поколения. Побочный эффект зарегистрирован в 1981 году в Европе и в США [62]. Кардио-токсический эффект заключался в удлинении интервала QT – фибрилляции желудочков, вызванной блокадой ионных калиевых каналов, контролирующих реполяризацию мембран миокарда. Препараты терфенадина и астемизо-ла были запрещены в Германии и США в 1998 и 1999 г.г., а так же запрещены к реализации на фармацевтическом рынке большинства стран [150,166].
Данный побочный эффект определил направление поиска новых, более безопасных средств и в 90-х гг. ХХ в. разработали антигистаминные препараты III поколения, которые представляли собой активные метаболиты анти-гистаминных препаратов второго поколения. Так, фексофенадин является активным метаболитом терфенадина, дезлоратадин получен из лоратадина, но-растемизол – активный метаболит астемизола [23].
Биотрансформация метаболитов препаратов второго поколения не связана с изоферментом CYP3F4 окислительной системы цитохромов, они не вызывают негативных эффектов, при этом обладают перечисленными положительными свойствами препаратов II поколения [47, 48].
Антигистаминные препараты третьего поколения не оказывают побочного кардиотоксического и седативного действия. Препараты оказывают дополнительные противоаллергические эффекты: уменьшают экспрессию молекул адгезии, блокируют выделение интерлейкина – 8 из клеток эпителия, уменьшают проявления аллергического бронхоспазма и бронхиальной гипе рактивности. Препараты применяют как для быстрого воздействия на симптомы аллергии, так и для продолжительной терапии [53,174].
Разработка новых антигистаминных препаратов заметно улучшила безопасность и переносимость антигистаминных лекарственных средств [45,154].
Одним из ярких представителей данной группы является фексофена-дин, который в дозах, несколько превышающих терапевтические, не оказывает седативного эффекта. Исследование влияния фексофенадина на величину QT показало полное отсутствие кардиотропного действия как при использовании высоких доз, так и при длительном приеме [156-167].
Стабильность фармакокинетики фексофенадина гидрохлорида подтверждена минимальным пресистемным метаболизмом. Препарат не взаимодействует ни с индукторами, ни с ингибиторами цитохрома Р450, как и непосредственно с цитохромом Р450. Фармакологический эффект фексофенадина раскрывается через 1 ч после приема, пик концентрации наблюдается через 2–3 ч, эффект, в зависимости от дозировки, продолжается 12–24 ч. [5, 72,140,143,153]. Фексофенадин не обладает канцерогенным, тератогенным и мутагенными свойствами [80,144].
Широкое использование в терапии аллергических заболеваний фексо-фенадина установило его дополнительные фармакологические свойства, помимо блокады Н1-рецепторов. У больных с аллергодерматозами фексофена-дин, в отличие от других антигистаминных препаратов, дополнительно уменьшает заложенность носа. Фексофенадин угнетает как раннюю, так и позднюю фазу аллергического ответа, на которые классические антигиста-минные препараты не действуют. Фексофенадин оказывает мощное ингиби-рующее действие на разные патогенетические пути развития хронического воспаления, эффективно подавляя выброс многих медиаторов воспаления [52, 53]. Важным преимуществом фексофенадина для лечения системных аллергических и кожных местных реакций является его выраженная органо-тропность и способность проникать в кожу в значительно большей степени, чем другие антигистаминные препараты. Фексофенадин снижает интенсивность кожного зуда, что определяет его лидерство в лечении хронической идиопатической крапивницы (ХИК) [12,46,121,148,175]. Проведенные клинические исследования свидетельствуют о его высокой эффективности и хорошей переносимости, целесообразности применения данного препарата в комплексной терапии аллергических дерматозов [54,73,127,155].
Таким образом, фексофенадин – селективный неседативный антиги-стаминный препарат последнего (третьего) поколения, обладающий выраженным противоаллергическим эффектом, с дополнительным противовоспалительным, противозудным и противоотечным действием. Высокая фарма-кобезопасность (отсутствие кардиотоксичности, изменений психомоторных реакций, клинически значимых взаимодействий с другими лекарственными средствами и алкоголем, тахифилаксии), в сочетании с хорошей переносимостью, позволяет рекомендовать его для лечения широкого спектра аллергических заболеваний и реакций в практике дерматологов, аллергологов и других специалистов, оптимизируя лечение дерматологических больных [17].
Методы исследования
Образцы геля № 1, № 2 содержат гель карбопола-940, нейтрализованного раствором натрия гидроксида. Карбопол является редкосшитым сополимером акриловой кислоты, который образует гидрогели в водном растворе. В дерматологической практике гели карбопола зарекомендовали себя как основы, не раздражающие кожу, включая лиц с гиперчувствительностью. Гели карбопола равномерно распределяются по слизистым и кожной поверхности, образуя тонкую пленку и обеспечивая равномерное пролонгированное высвобождение лекарственных веществ. Данные составы получают путем растворения активного компонента в 5% растворе натрия гидроксида, выступающим в качестве нейтрализующего агента, диспергированием карбопола-940 в воде или глицерине, введением раствора фексофенадина в полупродукт основы с последующим перемешиванием смеси до получения гелевой композиции с рН 5-7 [4, 29].
Состав № 3 выполнен с использованием полиэтиленоксидов. Достоинства полиэтиленоксидов 400 и 1500 (ПЭО-400 и ПЭО-1500) заключаются в устойчивости основ при изменении pH, при воздействии высоких температур, стабильности при хранении и малой токсичности. Полиэтиленоксиды хорошо растворяются в воде, а также растворяют в себе гидрофильные и гидрофобные лекарственные вещества, не препятствуя газообмену и не нарушая деятельность желез. ПЭО – основы хорошо распределяются на кожных покровах, однородны даже после поглощения секреторных выделений кожи [92, 167]. Самостоятельно ПЭО-основы оказывают слабое бактерицидное действие, осмотически активны, могут использоваться в лечении гнойных ран. Данный состав получают путем растворения активного компонента в сплаве полиэтиленоксидов (T=60 0C).
Отличительной особенностью состава № 4 является использование в качестве нейтрализатора карбопола более мягкого модулятора рН - триэтанола-мина, влияющего на реологические показатели геля. Завышенное, по сравнению с другими композициями, содержание пропиленгликоля в данной композиции обеспечивает максимальную концентрацию лекарственных веществ в кожных покровах. Пропиленгликоль создает каналы в кожных покровах, улучшая их проницаемость, тем самым обеспечивая быстрое поступление действующих веществ в кожу. Пропиленгликоль, являясь пластификатором, повышает эластичность образуемой на коже пленке. Этанол совместно с пропиленгликолем в данном составе являются консервантами, обладающими бактерицидной и противогрибковой активностью [132]. Фексофенадин предварительно растворяют в смеси пропиленгликоля и спирта, гомогенизируют с раствором карбопола, нейтрализуя гель триэтаноламином.
Состав № 5 на основе хитинового геля. Хитозан – линейный структурный полисахарид, образованный из остатков производного глюкозы – N-ацетилглюкозамина. Получают хитозан из панцирей камчатских крабов. Являясь натуральным биополимером, хитозан совместим со структурой кожи. Гель хитозана характеризуется высокой эффективностью и безопасностью. Под действием ферментов он разрушается до естественных компонентов, не обладает токсичностью, не вызывает аллергии. Хитозановый гель оказывает регенерирующее действие, стимулирует выработку коллагена, ускоряя восстановление кожи после перенесенных травм. Дополнительно оказывает антибактериальное, детоксикационное и обезболивающее действия, улучшает микроциркулирование и обмен веществ в клетках кожи. При нанесении на поверхность кожи образует защитную пористую пленку, не препятствующую газообмену [164]. Композицию на данной основе получали путем растворения лекарственного вещества в полиэтиленоксиде-400 и пропиленгликоле и последующим смешиванием с хитозановым гелем.
Составы № 6 и № 8 основаны на полиэтиленоксидах высоких молекулярных масс (ПЭО-4000 и ПЭО – 1500), характеризующихся высокой индифферентностью и устойчивостью. Данные составы получают сплавлением полиэти леноксидов (T=600C) и добавлением предварительно растворенного в части основы или в глицерине действующего вещества.
Состав № 7 – желатино-глицериновый гель, образующий нежный легкоплавкий студень, медленно всасывающийся при втирании в кожу. Желатин предварительно заливают водой, оставляют на 30-40 минут набухать. Затем прибавляют глицерин и нагревают на водяной бане до образования гомогенной структуры, постепенно вливая оставшуюся воду. Фексофенадин растворяют в смеси полиэтиленоксидов и постепенно добавляют в желатин - глицериновую основу [16].
Состав № 9 и № 10 содержат эфиры целлюлозы, характеризующийся отсутствием раздражающего, сенсибилизирующего действия и безвредностью. NaKМЦ или МЦ заливают половинным количеством горячей воды. После полного охлаждения добавляют оставшееся количество воды. Оставляют на 12 ч в холодильнике для образования плотного геля. Фексофенадин растворяют в ПЭО-400 и ПГ или глицерине и постепенно добавляют в готовый гель.
Образцы геля фексофенадина предварительно были изучены на предмет стабильности по показателям: внешний вид, реакция среды, намазываемость, термическая и коллоидная стабильность.
Как показали исследования, в процессе хранения в течение 2-х месяцев образец геля фексофенадина состава №7 на желатин-глицериновой основе становился мутным и изменял значения рН, спустя 3 месяца, составы № 9 и 10, содержащие натрий карбоксиметилцеллюлозу и метилцеллюлозу соответственно, так же мутнели и расслаивались.
После отбраковки по внешнему виду (цвету, запаху и однородности в процессе хранения) определяли показатель намазываемости. Массу испытуемых образцов (около 0,5 г) помещали между двумя стеклянными пластинами, размером 1010 см. Сверху помещали груз (1000 г) на 10 минут, после чего, измеряли полученный диаметр пятна раздавленного образца. По результатам определения намазываемости образец № 8 имел наименьший диаметр пятна после нагрузки.
В разработке гелей особое внимание уделяли показателю значения рН, относящегося к объективным показателям качества, при этом дающим результат субъективной характеристики в виде определнных ощущений при нанесении геля. Данный показатель должен иметь значение от 5,5 до 7,0 для дермато логических мягких лекарственных форм. Значение рН водных извлечений из модельных образцов устанавливали по методике, указанной в ГФ XIII издания. Таблица 9 - Результаты определения pH водных извлечений образцов гелей
Выбор вспомогательных веществ мягкой лекарственной формы фексофенадина
ВР 1. Подготовка воды очищенной. Воду очищенную получают методом дистилляции, предварительно очищая от сопутствующих примесей методами фильтрации, умягчения или ионного обмена. Качество воды очищенной ежедневно проверяют на соответствие требованиям ФС.2.2.0020.15.
Воду очищенную хранят стеклянных баллонах, не изменяющих свойств воды и сохраняющих ее микробиологическую чистоту. ВР 2. Санитарная обработка производства. Осуществляется в соответствии с требованиями действующей нормативной документации и включает в себя комплекс мероприятий подготовки воздуха, с контролем микробной обсемененности не реже 1 раза в неделю, а также приготовление дезинфицирующих растворов для санитарной обработки.
Для достижения и обеспечения соответствующего класса чистоты подготовка помещений производства к работе включала влажную уборку, дезинфекцию, ультрафиолетовое облучение производственных помещений. Подготовка технологического оборудования заключается в мойке и стерилизации всей лабораторной посуды моющими и дезинфицирующими средствами.
Персонал должен пройти предварительное медицинское освидетельствование и бактериологическое исследование, а также контроль личной гигиены. Для работы в производственных помещениях использовали технологическую одежду, которая подвергалась замене не реже одного раза в неделю.
ВР 3. Подготовка сырья. До поступления в производственный отдел действующие и вспомогательные вещества проверяли на соответствие требованиям нормативной документации. В предварительно подготовленные индивидуальные тары на технических весах отвешивают фексофенадин, карбопол и глицерин. Воду очищенную и раствор натрия гидроксида отмеривают мерниками.
ТП 4. Приготовление 1 % геля фексофенадина. ТП. 4.1. Приготовление основы (смачивание полимера). В реактор подают предварительно взвешенный карбопол. Смачивают глицерином и выдерживают от 30 мин до 1 часа. Затем интенсивно перемешивают с помощью роторной мешалки, постепенно добавляя воду до образования гомогенной гидрофильной основы. ТП.4.2. Приготовление раствора фексофенадина. Предварительно
взвешенный в индивидуальную тару фексофенадин растворяют в 5% растворе натрия гидроксида. Фильтруют через мембранный фильтр.
ТП 4.3. Нейтрализация полимера раствором фексофенадина. В реактор с готовой гелевой основой, при медленном перемешивании, добавляют щелочной раствор фексофенадина до образования однородного прозрачного геля белого цвета с рН 5,5-7,0.
ТП 4.4. Гомогенизация геля. Гомогенизацию геля осуществляют в роторном гомогенизаторе в течение 30 мин. Контроль равномерного распределения фексофенадина в основе осуществляют визуально по достижению однородной окраски основы. УМО 5. Фасовка, упаковка и маркировка геля. Гель фексофенадина расфасовывают по 10,0, 15,0 и 30,0 в ламинатную тубу. Тубу вместе с инструкцией помещают в картонную пачку. На первичной упаковке фиксируют международное непатентованное и торговое наименование лекарственного препарата, дату выпуска, срок годности, номер серии, концентрацию; на картонной пачке фиксируют международное непатентованное и торговое наименование лекарственного препарата, наименование производителя лекарственного препарата, дату выпуска серию, срок годности, концентрацию, массу, номер регистрационного удостоверения лекарственную форму, способ применения, условия отпуска, условия хранения, предупредительные надписи. Наиболее значимыми в данной технологической схеме являются стадии ТП 4.1, ТП 4.2 и ТП 4.3. По данным стадиям мы провели валидационную оценку (таблица 13)
№ п.п. Стадия технологического процесса Критический параметр Примечание Приготовление основы (смачивание полимера) Время выдерживания (30 мин - 1ч.) Нарушение показателя может привести к неоднородности структуры геля. Нейтрализация полимера раствором фек-софенадина. Число оборотов мешалки, время перемешивания (до 100 об/мин, 20-30 мин.) Может привести к неоднородности структуры геля. Контроль готового продукта проводили по следующим показателям: описание, значение водородного показателя, подлинность и количественное определение, микробиологическая чистота [137].
Технология геля фексофенадина 1 % апробирована в производственных условиях заказчика ООО «Озон», г. Жигулевск. 3.4. Нормирование качества геля фексофенадина
Полученный гель фексофенадина оценивали по таким показателям качества, как: описание, значение водородного показателя (рН), масса содержимого упаковки, подлинность, количественное содержание фексофенадина, микробиологическая чистота. Дополнительно изучили однородность геля в процессе хранения, термическую и коллоидную стабильность.
Определение раздражающего действия геля фексофенадина
Изучение общетоксического действия проводили на белых беспородных мышах массой 150-200г.
Определение острой токсичности. Острую токсичность геля фексофенадина исследовали при однократном накожном нанесении геля на 70% площади тела мышей массой 20±1,0 г. Первой группе наносили гелевую основу, второй группе – 1% гель фексофенадина. Исследуемые образцы наносили тонким слоем в дозе 10г/кг, что превышает дозу гелей для медицинского применения в десятки раз [108].
Критериями острой токсичности служила картина интоксикации животных: изменение поведенческих реакций, двигательной активности, частоты дыхания, рефлекторной деятельности, а также гибель животных.
Результаты эксперимента показали, что после нанесения как геля, так и гелевой основы поведение животных в течение 3 часов отличалось вялостью и малоподвижностью. Данная картина связана с нарушением кожного дыхания и терморегуляции на достаточно большой площади тела. Через три часа активность животных возобновлялась. Во время эксперимента ни одно животное не погибло.
Определение хронической токсичности. Хроническую токсичность геля исследовали при ежедневном накожном нанесении в течение 28 суток. Гель и гелевую основу наносили на кожу мышей один раз в день. Ежедневно регистрировали поведенческие реакции животных и изменение массы тела. По результатам эксперимента не погибло ни одного животного. Гель фексофенадина при нанесении на кожу относится к классу – безопасное средство.
Для предварительной оценки раздражающего действия на слизистые оболочки млекопитающих эксперимент проводили на модели хорион-аллантоисной оболочки куриного эмбриона [107].
Методика работы состояла в том, что яйцо фиксировали на подставке; освобождали центр и воздушную камеру от скорлупы, смачивали 0,9% раствором натрия хлорида и помещали в термостат на полчаса, после чего раствор удаляли микропипеткой вместе с увлажненной жесткой оболочкой, без повреждения хорион-аллантоисной оболочки. Далее наносили 0,2 г подогретого до 31 С геля и наблюдали в течение 5 минут.
Результаты предварительного определения степени раздражающего действия геля фексофенадина и гелевой основы № опыта Степень раздражения Как видно из таблицы 30, при нанесении на хорион-аллантоисную оболочку куриного эмбриона геля с фексофенадином в двух случаях сужались сосуды и временно останавливалось кровообращение. Коэффициент раздражающего воздействия составил 1,3+0,487. Гель фексофенадина обладает слабым раздражающим действием на хорион-аллантоисной оболочку куриного эмбриона, а следовательно, дальнейший эксперимент мы проводили на животных.
Оценка раздражающего действия in vivo. В опытах in vivo исследуемые образцы наносили на слизистую оболочку переднего сегмента глаза морских свинок. Критериями оценки служили степень раздражающего действия в виде покраснения и отека глаза морской свинки. Результаты оценки приведены в таблице 31.
Полученные данные о степени выраженности отека и раздражения глаз морских свинок как через 30 секунд, так и через 1 минуту свидетельствуют о слабом раздражающем действии геля фексофенадина в опытах iv vivo. Данные эффекты представлены на рисунке 27.
Оценка раздражающего действия геля фексофенадина и гелевой основы (слева – гель, справа – гелевая основа) 4.3. Изучение специфической активности геля фексофенадина Оценка противовоспалительного действия геля фексофенадина Противовоспалительную активность образцов геля фексофенадина оценивали в экспериментах на модели «формалинового» отека лапы мыши. Острый воспалительный отек вызывали субплантарным введением (под подошвенный апоневроз) в заднюю правую лапу крысы – 0,1 мл 2 % водного раствора формалина [139]. Выраженность отека оценивали объемом жидкости, вытесненной при погружении в нее пораженной конечности. Образцы наносили за 1 час до введения формалина и после каждого измерения объема лапки. Величину отека оценивали в соотношении с исходными данными и контролем. Препаратом сравнения являлся «Фенистил» – гель. Степень воспалительной реакции представлена в таблице 32, наглядное обозначение представлено на рисунке 28.