Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Регенеративная медицина - будущее здравоохранения 11
1.2. Федеральное законодательство в сфере обращения биомедицинских клеточных продуктов 15
1.3. Международные подходы к регулированию препаратов клеточной терапии 18
1.4 Специфика разработки биомедицинских клеточных продуктов 29
1.5. Состояние разработки препаратов клеточной терапии в мире 30
ГЛАВА 2. Технология получения бмкп и особенности производства 37
2.1. Клетки человека, как исходный материал для производства БМКП. 39
2.2. Подготовка исходных материалов 40
2.3. Процессинг 41
2.4. Культивирование клеток 43
2.5. Формирование готового продукта 44
2.6. Контроль качества 45
2.7. Криоконсервация 47
2.8. Маркировка 48
2.9. Подготовка и клиническое использование БМКП на месте 2.10. Пример производственного процесса БМКП 49
2.11. Специфические трудности выпуска БМКП 50
2.12. БМКП, предназначенные для доклинических исследований 52
ГЛАВА 3. Разработка правил надлежащей практики производства биомедицинских клеточных продуктов 53
3.1. Общие положения 54
3.2. Лицензирование и инспектирование учреждений и деятельности, связанной с производством БМКП 3.2.1. Лицензирование 56
3.2.2. Инспектирование 56
3.3. Оценка пригодности доноров клеток и тканей 57
3.3.1. Общие требования 57
3.3.2. Сопутствующая документация. 58
3.3.3. Информированное согласие донора 58
3.3.4. Конфиденциальность данных и защита информации 59
3.3.5. Медицинское обследование донора и лабораторные тесты 60
3.4. Забор биоматериала и его транспортировка на производство 62
3.4.1. Общие требования 62
3.5. Система качества производства БМКП 64
3.5.1. Общие требования 65
3.5.2. Контроль в процессе производства 67
3.5.3. Критерии к выпуску готового БМКП 68
3.5.4. Валидация 70
3.5.5. Анализ рисков 72
3.6. Персонал 74
3.6.1. Общие требования 75
3.6.2. Ответственный персонал 75
3.6.3. Гигиена персонала 77
3.6.4. Специальные требования к персоналу, работающему в чистых помещениях. 78
3.7. Помещения 79
3.7.1. Принцип 80
3.7.2. Производственная зона 81
3.7.3. Иные помещения 84
3.8. Оборудование 85
3.8.1. Общие требования 85
3.8.2. Очистка и техническое обслуживание 88
3.9. Охрана окружающей среды 89
3.9.1. Общие требования 89
3.10. Требования к качеству исходных материалов 90
3.10.1. Общие требования 90
3.10.2. Клеточные и тканевые материалы 91
3.10.3. Другие материалы, реагенты и вспомогательные вещества 92
3.11. Процессинг 92
3.11.1. Принцип 93
3.11.2. Общие требования 94
3.12. Документация 97
3.12.1. Общие требования 97
3.12.2. Технологический регламент 99
3.12.3. Процедуры
- Международные подходы к регулированию препаратов клеточной терапии
- Состояние разработки препаратов клеточной терапии в мире
- Подготовка и клиническое использование БМКП на месте 2.10. Пример производственного процесса БМКП
- Медицинское обследование донора и лабораторные тесты
Введение к работе
Актуальность темы исследования
Клеточные технологии представляют новый раздел медицины, основанный на использовании стволовых и иммунокомпетентных клеток в лечении различных заболеваний и повреждений органов и тканей [Howe R.J. et al., 2011]. С биомедицинскими клеточными продуктами (продуктами этих технологий, БМКП) связывают перспективы развития регенеративной медицины, трансплантологии, а также технологий иммуномодуляции [Пятигорская Н.В. и др , 2013].
Биомедицинский клеточный продукт (БМКП) – продукт, состоящий из клеточной(ых) линии и вспомогательных веществ, либо состоящий из клеточной(ых) линии и вспомогательных веществ в сочетании с прошедшими государственную регистрацию лекарственными препаратами для медицинского применения и (или) медицинскими изделиями [Федеральный закон № 180-ФЗ, 2016].
В настоящий момент данное инновационное направление проходит стадию бурного развития [Скворцова В.И., 2015]. Поэтому деятельность в области клеточных технологий, а также обращение инновационных клеточных препаратов должны соответствовать определенным требованиям, которые обеспечили бы эффективность и безопасность их применения в клинических исследованиях и в медицинской практике.
Отсутствие четкого правового регулирования, с одной стороны, не позволяет обеспечить безопасность пациентов при применении клеточных продуктов, с другой стороны - тормозит развитие самих биомедицинских технологий, поскольку для исследователей не понятен механизм перехода от лабораторного эксперимента к применению клеточных продуктов у человека.
Способность государства развивать собственную научную базу в области регенеративной медицины и возможность обеспечить граждан инновационными, эффективными БМКП, являются первостепенными задачами здравоохранения Российской Федерации (РФ) на ближайшие годы.
БМКП являются сложными продуктами, процесс создания которых состоит в последовательном включении в них различных компонентов и с неизбежным привлечением дополнительных фундаментальных исследований [Брюховецкий А.С. и др., 2010]. Производство БМКП является многоэтапным технологическим циклом с осуществлением контроля качества и безопасности на разных стадиях их создания и с обеспечением условий хранения и транспортировки. Исходя из этого, каждый этап
жизненного цикла БМКП в отечественной фармацевтической промышленности требует четких методологических основ и нормативов системы обеспечения качества.
За последние годы в России наблюдается увеличение числа разработок в области регенеративной медицины. Возрастает количество клинических исследований, при попытке получения разрешения на проведение которых, разработчики сталкивались с проблемой отсутствия в Российской Федерации законодательной и нормативной базы, регламентирующей надлежащее производство и контроль качества БМКП.
Федеральный закон от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ "О биомедицинских клеточных продуктах" подготовлен с учетом анализа международного опыта, зарубежной правоприменительной практики и направлен на регулирование отношений, возникающих в связи с обращением БМКП, предназначенных для профилактики, диагностики и лечения заболеваний или состояний пациента, сохранения беременности и медицинской реабилитации пациента.
Законом предусмотрено лицензирование производства БМКП, в связи с чем необходимо создание сложных GMP и GTP ориентированных производств, которые позволят получать максимально эффективные и безопасные клеточные продукты. Вступать в силу Закон будет поэтапно, в 2017 и 2018 годах.
Основной проблемой является то, что пока не существует подзаконных актов, стандартов и регламента производства БМКП, проведения доклинических исследований и процедур регистрации БМКП, которые обеспечат надлежащее качество конечного продукта.
Соответственно, является актуальной задача разработки Правил надлежащей практики производства БМКП.
Степень разработанности темы исследования
В Евросоюзе и США имеется многоступенчатая система контроля, гарантирующая качество и безопасность применения клеточного продукта, получаемого в условиях соблюдения надлежащих практик (Good Practices). Государственные регуляторные органы предъявляют жесткие требования не только к безопасности самой продукции, но и к стандартам осуществления надлежащей лабораторной, производственной, клинической, тканевой практики.
Разработка проекта национальных Правил надлежащей практики производства БМКП должна основываться на использовании международных стандартов и директив и учитывать российское законодательство. Данные Правила внесут свой вклад и будут
являться основным документом, регулирующим их качество с момента забора биоматериала и до получения конечного продукта, предназначенного для клинического применения, либо до получения сырья для масштабированного производства. Серийное же производство также должно контролироваться соответствующими разделами Правил Надлежащей производственной практики.
Цель исследования
Разработать методологические основы обеспечения качества БМКП.
Задачи исследования:
-
Провести анализ нормативных документов РФ, официальных документов ВОЗ, ICH, EMA, FDA, ЕС и международных публикаций, касающихся вопросов обеспечения качества клеточных продуктов;
-
Обосновать специфические особенности получения БМКП с учётом особенностей производства, связанных с клеточной природой продуктов;
-
Разработать гармонизированный с международными требованиями проект Правил надлежащей практики (Правил GMP/GTP) производства БМКП;
-
Предложить требования к отбору донора и основные критерии оценки его пригодности для получения биоматериала. Научная новизна Основываясь на проведенном анализе международных стандартов и руководств,
федерального законодательства и нормативных актов РФ в сфере обращения БМКП, обоснованы специфические особенности получения БМКП, разработан гармонизированный с международными требованиями проект Правил надлежащей практики (Правил GMP/GTP) производства БМКП. Предложены требования к отбору донора и основные критерии его пригодности для получения биоматериала. Предложены требования к процедуре получения биоматериала и его транспортировки на производство. Впервые охарактеризовано понятие минимально манипулированных БМКП, проанализировано понятие «процессинга» применительно к БМКП и изложена его суть в производственном цикле. Указаны основные требования к содержанию документации и отчетности на различных этапах получения БМКП. Впервые описана система качества при производстве с учетом специфических особенностей БМКП.
Теоретическая и практическая значимость исследования
Разработанный с учетом мирового опыта проект Правил надлежащей практики производства БМКП содержит основные требования обеспечения качества и безопасности данных продуктов при их клиническом применении. Утверждение данных Правил в качестве нормативного правового акта или национального стандарта позволит систематизировать процедуру регистрации БМКП.
Правила разрабатываются в рамках Стратегии развития медицинской науки в РФ на период до 2025 года для реализации Федерального закона от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах». Данный свод Правил рекомендуется к рассмотрению федеральными органами государственной власти (законодательной и исполнительной) для усовершенствования системы нормативного и правового регулирования данной области. Отдельные положения предложенных в диссертации Правил могут быть использованы как основа для разработки технологических регламентов производства БМКП.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Гармонизированный с международными требованиями проект Правил надлежащей практики (Правил GMP/GTP) производства БМКП;
-
Оценка пригодности доноров для получения биоматериала;
-
Требования к процедуре получения биоматериала и его транспортировки на производство;
-
Специфические особенности производства БМКП и системы качества при производстве, учитывающие клеточную природу продуктов;
-
Обоснование понятия «процессинг» применительно к БМКП и его суть в производственном цикле; характеристика минимально манипулированных БМКП. Методология и методы исследования Методологической основой диссертационного исследования послужили
международные законодательные и нормативные документы по обеспечению качества продуктов на основе человеческих клеток и тканей, отечественные подходы к формированию нормативных актов в сфере фармацевтической промышленности. Большое значение в теоретическом и практическом аспекте имели научные исследования и концепции, обобщающие принципы и механизмы организации производственного процесса клеточных продуктов.
Основными методами исследования, которые использованы в работе, являются: литературный поиск, контент-анализ, методы менеджмента качества; статистические методы, методы анализа рисков, метод «Бережливое производство», метод «PDPC» (Блок-схема процесса принятия решений), методы планирования и проведения валидации.
Достоверность научных положений и выводов
Диссертационная работа выполнена на современном научно-методическом уровне. В ней использованы методики исследования, адекватные целям и задачам. Должный уровень достоверности полученных результатов подтверждается всесторонним анализом стандартов и руководств по работе с человеческими клетками, тканями и продуктами на их основе ряда ведущих стран мира, достаточного количества международных публикаций и выполненных ранее научно-исследовательских работ по предмету исследования. Научные положения, выводы и рекомендации, сформулированные в диссертационной работе, обоснованы, достоверны и логично вытекают из полученных автором данных. Первичная документация проверена и полностью соответствует материалам, содержащимся в работе.
Апробация результатов исследования
Основные положения работы и результаты исследования доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Аспирантские и докторантские чтения: Моделирование научного исследования – форсайт – технологии» (Москва, 2013), IX Международной заочной научно-практической конференции «Научная дискуссия: вопросы медицины» (Москва, 2013), научной конференции «Достижения и перспективы молодых ученых НИИ фармации» (Москва, 2015), международной конференции “StemCellBio 2016: фундаментальная наука как основа клеточных технологий” (Санкт-Петербург, 2016). Апробация работы проведена на конференции ученых Института фармации и трансляционной медицины ФГБОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (13 декабря 2016 г.).
Личный вклад автора
Автором лично проведен поиск и анализ международных законодательных и нормативных актов, публикаций по системам обеспечения качества клеточных продуктов, проблемам организации производства и валидации. Автору принадлежит ведущая роль в разработке положений проекта Правил надлежащей практики производства БМКП, обосновании специфических особенностей получения БМКП и особенностей производства, учитывающих клеточную природу данных продуктов. Вклад автора является определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач, их
экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику.
Внедрение результатов исследования
Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре промышленной фармации ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (акт внедрения от 10.04.2017) и в практическую деятельность Лаборатории биомедицинских клеточных продуктов ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (акт внедрения от 11.05.2017).
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.04.01 – «Технология получения лекарств». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 4 и 7 паспорта «Технология получения лекарств».
Связь темы диссертационной работы с планом научных работ учреждения
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГАОУ ВО Первого МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) и является фрагментом исследования по теме «Развитие научных и научно-методических основ, базовых и инновационных подходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств» (номер государственной регистрации 01201261653).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России.
Объем и структура работы
Международные подходы к регулированию препаратов клеточной терапии
Клеточная терапия
Вероятно, наиболее обширным сегментом в регенеративной медицине является клеточная терапия. В настоящее время проводится более 2000 клинических испытаний в мире в данной области. Более 250 фармацевтических компаний разрабатывают коммерческие продукты и почти каждый из них подразумевает отдельное заболевание или состояние [118]. В дополнение к коммерчески доступной и развивающейся продукции, клетки использовались в качестве стандарта в течение многих десятилетий в медицинской практике гематологи и онкологии. Трансплантация стволовых клеток была главной в лечении рака с конца 1960-х годов [123].
Стволовые клетки – это первооснова жизни, первые незрелые клетки, способные к самообновлению и развитию в различные ткани организма. Именно стволовые клетки дают начало всему человеческому организму. При их использовании в качестве терапии обеспечивают восстановление поврежденных тканей и заменяют старые и отмирающие клетки. Стволовые клетки перспективны для лечения большинства основных болезней с которыми люди сталкиваются в течении их жизни в том числе рака, сердечно-сосудистых заболеваний, болезни Паркинсона, рассеянного склероза, инсульта, болезни Хантингтона, травмы спинного мозга, и многих других заболеваний [140].
Живые клетки используются для достижения следующих положительных эффектов: 1. для замены поврежденных или больных клеток и/или тканей; 2. чтобы стимулировать эндогенный ответ, который способствует собственному исцелению организма, такой как иммунный ответ или регенерация пораженных тканей; 3. чтобы достичь целей в генетических или молекулярных методах лечения [60]. Более 40 продуктов клеточной терапии коммерчески доступны на мировом рынке, это препараты для лечения заболеваний и поражений кожи, костей, хряща, ран, рака предстательной железы [67, 110].
Разнообразие типов клеток, включая первичные клетки, клетки-предшественники, тканеспецифические стволовые клетки (взрослые стволовые клетки), эмбриональные стволовые клетки, а теперь и перепрограммированные клетки (индуцированные плюрипотентные стволовые клетки) находится на различных стадиях развития [111]. Oни проходят исследования при всевозможных состояниях человека, начиная от крупномасштабных показаний, как хроническая сердечная недостаточность, злокачественные новообразования, диабет, и заканчивая редкими заболеваниями, для которых есть всего лишь несколько доступных методов лечения [115].
По сравнению с первым поколением клеточной терапии, в настоящее время, исследуемая продукция должна быть лучше охарактеризована и понята. Это, в свою очередь, зачастую требует передовых методов культивирования и более целенаправленных и эффективных методов доставки целевых клеток к пораженному участку тела [89]. Кроме того, эти продукты часто требуют значительно более сложных и масштабных производственных технологий, а также являются предметом требования серьезной нормативно-правовой базы, которая значительно эволюционировала с момента утверждения первых продуктов [69, 70]. Используя десятилетия исследований и применяя знания, полученные от трансплантации стволовых клеток о том, как воссоздать иммунную систему, исследователи разрабатывают и тестируют множество способов манипулировать (например, индуцировать, усилить или подавить) клетками иммунной системы для борьбы с заболеванием, то есть имеет место иммунотерапия на основе клеток. Есть целый ряд иммунотерапевтических продуктов. Многие из первого поколения основаны на интерлейкинах, цитокинах, хемокинах и прочих, развивающийся класс – иммунотерапевтические клеточные продукты с использованием лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток, Т-клеток, естественных клеток-киллеров, цитотоксических Т-лимфоцитов и других. Они могут быть аутологичными, аллогенными и генетически модифицированными. Утверждение FDA препараты клеточной иммунотерапии Provenge для лечения рака простаты в 2012 году вызвало значительный всплеск в области иммунотерапии [88].
Генная терапия
Генная терапия подразумевает введение правильно функционирующих генов в клетки или ткани пациента с целью лечения заболеваний, которые связаны с дефектными или мутировавшими генами, нуждающимися в коррекции или улучшении регуляции.
Крупнейшим сегментом применения генной терапии являются злокачественные новообразования, следующей категорией идут болезни, обусловленные дефектом одного гена, такие как кистозный фиброз, гемофилия, мышечная дистрофия, талассемия, серповидно-клеточная анемия, а также множество других моногенных заболеваний. Значительное количество исследований генной терапии и клиническая разработка также направлены на лечение сердечнососудистых, неврологических заболеваний и глазных болезней, многие из которых классифицируются как регенеративная генная терапия. Для сердечно сосудистых заболеваний, в частности, ожидается, что генная терапия обеспечит новые возможности для терапевтического ангиогенеза, защиты миокарда и регенерации и восстановления поврежденных тканей сердца [131].
Есть множество механизмов, чтобы доставить ДНК в клетку пациента и совершать генетические манипуляции. Часть этих векторов вводят в клетки-мишени in vivo, но некоторые предпочитают трансфицировать клетки ex vivo, тем самым имплантируя клетки, как носители новой ДНК.
Широкую известность получила методика модификации основного ко-рецептора (CCR5) на поверхности клеток, которые используются ВИЧ, чтобы поразить клетки иммунной системы. Часть Т-клеток пациента удаляются, генетически модифицируются и вводятся обратно пациентам с ВИЧ [116]. Тканевая инженерия
Тканевая инженерия является многопрофильной наукой, которая объединяет биологию, медицину и материальные науки, чтобы разработать терапию, которая будет восстанавливать, поддерживать и улучшать ткани и, в целом, функционирование органов. Эти сложные продукты разрабатываются для целого спектра заболеваний и среди многочисленных тканей, таких как кости, хрящи, скелетная мускулатура, кожа, кровеносные сосуды, нервные, глазные ткани и целые органы [111]. В дополнение к терапевтическому применению эти технологии, через использование 3D-моделей тканей и микроорганов, имеют инновационные диагностические и исследовательские применения для изучения абсорбции лекарственных препаратов, метаболизма, токсичности и патогенности [145].
В настоящее время большинство коммерчески доступных продуктов — это тканевые материалы для заживления ран, костные трансплантаты и хирургические вспомогательные средства. Многие из этих продуктов сравнительно просты, они состоят из минимально манипулированных компонентов.
Состояние разработки препаратов клеточной терапии в мире
К общим требованиям качества, которые подтверждаются соответствующими данными регистрационного досье, относят: - клетки должны соответствовать происхождению и стадии дифференцировки по иммунофенотипу; - потенциал дифференцировки должен быть подтвержден гистохимическими исследованиями; - жизнеспособность клеток и их количество должны быть подтверждены соответствующими анализами; - стабильность кариотипа клеток должна быть подтверждена; - отсутствие иммуномодулирующего или иммуносупрессивного эффекта после их введения реципиенту (если такой эффект не является целью разработки препарата); - отсутсвие ксеногенных клеточных линий; - отсутствие инфицирования клеток бактериальными эндотоксинами, бактериями, микоплазмами, вирусами и простейшими [85].
Несмотря на то, что аналитические методики контроля качества БМКП находятся на стадии разработки, определенные инструменты уже сейчас описаны в Государственной фармакопее Российской Федерации XIII издания, Европейской Фармакопее и позволяют охарактеризовать и контролировать качество клеточного продукта.
Когда механизм действия БМКП ассоциирован с определенным белком (маркером), могут быть применены аналитические методики, аналогичные используемым в оценке качества всех произведенных биотехнологическим путем протеинов. Одним из примеров является метод проточной цитометрии – инновационная система анализа, позволяющая определять характерные признаки клеток [109]. Кроме того, используются специфические биопробы, иммунохимические анализы, исследования пролиферации, апоптоза и ферментативной активности для идентификации клеток и контроля качества [113].
Ключ к успешному управлению качеством продуктов на основе человеческих клеток и тканей заключается в том, чтобы четко определить критические параметры, подлежащие контролю на различных этапах производственного процесса и соответствующих методов анализа [131]. Определенные методы анализа требуются для контроля качества продуктов в процессе производства и для получения разрешения на выпуск серии, валидации процессов и для определения соответствия и стабильности клеток.
Затруднительным в контроле качества клеточных продуктов является определение генетической стабильности клеток. Физиологический стресс или культивирование в лабораторных условиях могут привести к значительному повреждению ДНК и способствовать клеточным и хромосомным аберрациям, которые могут быть спонтанными или рецидивирующими. Две группы аналитических методов доступны в настоящее время для оценки цитогенетических аномалий: кариотипирование - является ценным методом для анализа хромосомной стабильности в ходе доклинических исследований, и молекулярные цитогенетические методы, сравнительная геномная гибридизация и нуклеотидный полиморфизм, которые могут быть использованы для поиска рецидивирующих аберраций, вследствие высокой чувствительности и способности определять низкий процент аномальных клеток. В некоторых случаях общие методы контроля качества для всех БМКП определить затруднительно, ввиду разнообразия клеток и сроков их хранения [128].
В случае, когда пациенту вводится смешанные популяции клеток, необходимо гарантировать, что результат анализов имеют отношение к популяции, ответственной за терапевтический эффект.
Биологическая активность является одним из ключевых параметров БМКП и определяющей связью между качеством, безопасностью и эффективностью продукта. Оценка общих функциональных свойств, таких как рост клеток, выживание и миграция полезна, но недостаточно специфична для определения активности продукта. В данном случае не подходят трудоемкие и длительные по времени проведения методы, особенно если продукты предназначены для немедленного использования после производства, с очень коротким сроком жизни. В таком случае, применяется «множественный» подход в исследовании активности продукта, используемом для выпуска серии. Методики анализов должны быть чувствительными, точными, надежными и простыми в проведении [131].
Криоконсервирование основано на принципе, что при пониженных температурах (ниже -140оС) химические, биологические и физические процессы существенно замедляются.
Особого внимание требуют конкретные требования криоконсервации, например, изменение скорости и температуры во время замораживания и размораживания. Тип камеры для хранения, процесс помещения БМКП в камеру и извлечение должен сводить к минимуму перекрёстную контаминацию.
Клетки сначала охлаждают в контролируемых условиях до -100C в морозильной камере, а затем их переносят в резервуар с жидким азотом. Для успешного криоконсервирования клеток, необходимо следовать стандартизированным и воспроизводимым протоколам. Каждый протокол может потребовать оптимизации для данного типа клеток или клеточной линии, для достижения максимальной жизнеспособности после размораживания.
Критическим моментом криоконсервации является использование соответствующей программы замораживания. Скорость охлаждения имеет важное значение и должна тщательно контролироваться. Когда скорость охлаждения является слишком медленной, клетки могут умереть от осмотического стресса. С другой стороны, когда скорость охлаждения слишком высока, клетки могут погибнуть из-за образования внутриклеточных кристаллов льда. Поэтому в некоторых случаях может быть целесообразным использование криопротекторов (диметилсульфоксид или глицерин).
Криоконсервация более высоких объемов (например, в криомешках) имеет решающее значение, так как весь объем должен быть заморожен гомогенно. Температура поднимается в точке кристаллизации, поскольку образование кристаллов вызывает повышение температуры, что приводит к небольшому повышению температуры раствора. Учитывая этом момент, скорость охлаждения должна быть увеличена, чтобы предотвратить нагревание клеток продукта.
В целях тестирования продукта и определения жизнеспособности после размораживания дополнительные флаконы, как правило, должны быть заморожены из конечного продукта. Необходимо доказать, что продукт, замороженный в криомешке, и опытный образец, замороженный во флаконе, показывают аналогичные результаты.
Подготовка и клиническое использование БМКП на месте 2.10. Пример производственного процесса БМКП
Использованные материалы:
Директива Европейского парламента и Совета 2004/23/ЕС от 31 марта 2004 г. о установлении стандартов качества и безопасности при донации, подготовке, тестировании, процессинге, консервации, хранении и распределении человеческих клеток и тканей [75];
Постановление Правительства РФ от 26 января 2010 г. №29 "Об утверждении технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии";
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 1 февраля 2016г. №19 "Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.3.2.3332-16 "Условия транспортирования и хранения иммунобиологических лекарственных препаратов". 3.4.1. Общие требования 40. Учреждения, где осуществляется забор биоматериала для производства БМКП должны быть организованы и аттестованы в соответствии с требованиями Правил. 41. Учреждение должно обладать лицензией на осуществление деятельности по забору биоматериала для клеточных технологий. 42. Забор биоматериала производится обученным персоналом, с использованием одноразовых материалов, строго в соответствии с установленной процедурой. 43. Признается, что Учреждения, где осуществляется забор биоматериала для производства БМКП, не всегда аттестованы в соответствии с требованиями Правил, например, когда забор осуществляется на базе клиник. В данном случае необходимо заключение технического соглашения/соглашения об уровне предоставления сервиса и проведение аудитов. Это соглашение должно содержать сведения: - о типе клеток и тканей, - о медицинском обследовании донора и результатах лабораторных анализов, - о процедуре забора биоматериала, - об обучении персонала, - о документации, - о хранении (в том числе, контейнер, маркировка, карантин), - о условиях транспортировки, - о передаче производителю, - об аудитах, - об уведомлениях о серьезных нежелательных явлениях и т.д. Иными словами, в таком случае, учреждение, осуществляющее забор биоматериала, берет на себя обязательства перед производителем БМКП и компетентными органами соответствовать определенным стандартам качества. 44. Качество воздуха в помещениях, где осуществляется забор биоматериала должно соответствовать классам чистоты A/B (ИСО 5), что соответствует требованиям к чистоте воздуха асептических операционных помещений лечебных учреждений. 45. В случаях, когда для процедуры забора не могут быть созданы помещения класса A/B (ИСО 5) необходимо обеспечить, чтобы требования по гигиене (тщательная местная дезинфекция и дезинфекция рук) были выполнены. Оценка рисков в данном случае является обязательной. 46. Процедура забора биоматериала должна быть документирована и контроль за изменениями должен охватывать всех контрактных партнеров. 47. Забранный материал маркируется использованием идентификационного номера. Вся информация о доноре, полученных образцах, анализе их качества фиксируется в валидированной компьютеризированной системе и сопровождает биоматериал на производство. 48. В Учреждении, где осуществляется забор биоматериала, должен быть назначен сотрудник, ответственный за качество полученных биообразцов, за соблюдение другими сотрудниками установленной процедуры забора и осуществляющего выпуск биообразцов на производство. Ответственное лицо должно пройти соответствующую подготовку по вопросам соблюдения условий хранения и транспортирования биоматериала и работе с приборами, регистрирующими изменения температурного режима (термоиндикаторы и терморегистраторы).
Транспортировка клеточного материала для производства БМКП осуществляется медицинской организацией, имеющей лицензию на осуществление медицинской деятельности, предусматривающую выполнение работ (оказание услуг) по транспортировке биологического материала для клеточных технологий (требуется внесения изменения в Постановление Правительства РФ от 16.04.2012 №291 "О лицензировании медицинской деятельности…»).
Транспортировка биообразцов должна осуществляться в специальных транспортных термоизоляционных контейнерах или рефрижераторах с соблюдением санитарно-гигиенических требований при условии обеспечения сохранности продукта.
Условия транспортировки/хранения, упаковка, маркировка и сопроводительная документация биообразцов регламентируются спецификацией. Время от момента забора биоматериала до его доставки в лабораторию/на производство обычно составляет не более 2 суток для охлажденных (температура 2,0–8,0 C) и замороженных/криоконсервированных (температура минус 18–196C) проб (при транспортировке в специальных термоконтейнерах с хладогеном, термосах с термопакетами, сухом льду, сосудах Дьюара).
Транспортировка осуществляется по системе «холодовой цепи». Регистрацию отправления биообразцов проводят с указанием наименования биоматериала, его количества, контрольного номера, срока годности, даты забора, показания термоиндикаторов (терморегистраторов), Ф.И.О. ответственного лица, осуществляющего выпуск. При регистрации поступления биоматериала на производство указывают поставщика и условия транспортирования.
Медицинское обследование донора и лабораторные тесты
Данный раздел написан с использованием материалов стандарта ISBT 128, разработанного по инициативе ВОЗ во исполнение программы, утвержденной Всемирной Ассамблеей Здравоохранения в 2010 году, которая настоятельно призывает государства-члены "способствовать реализации согласованных на глобальном уровне систем кодирования для клеток, тканей и органов человека в качестве таковых, в целях содействия национальной и международной прослеживаемости используемых для трансплантации биологических субстанций человека".
Стандарт ISBT 128 – глобальный стандарт для идентификации, маркировки и передачи информации о медицинских продуктах человеческого происхождения (в том числе продуктов крови, клеток, тканей, молока и органов) через международные границы и различные системы здравоохранения. Стандарт разработан с целью обеспечить высокий уровень точности, безопасности и эффективности в интересах доноров, пациентов и ISBT 128 лицензированных предприятий по всему миру. В основе стандарта – комплексный метод кодирования для каждого продукта. Необходим механизм для включения нужной информации в штрихкод или электронные метки, который обеспечит правильное физическое назначение информации продукта и уверенность в чёткой связи между хранящейся в электронном виде информации и читаемой глазами печатной информации. В России уже встречается успешный опыт внедрения подобной системы маркировки для препаратов крови, что подчёркивает эффективность данной методики и возможность распространения ее на БМКП.
Кроме того, использована информация соответствующих разделов Директивы Комиссии 2006/86/ЕС от 24 октября 2006г. по внедрению Директивы 2004/23/ЕС Европейского Парламента и Совета по требованиям к прослеживаемости, уведомлению о серьезных нежелательных реакциях и событиях и определенным техническим требованиям по кодированию, прессингу, защите, хранению и распределению тканей и клеток человека [79] и Действующая надлежащая тканевая практика США и дополнительные требования для производителей продуктов на основе человеческих клеток и тканей [92].
Раздел «Упаковка», в большей мере, заимствован из Приказа Министерства промышленности и торговли РФ от 14 июня 2013 г. № 916 «Об утверждении Правил надлежащей производственной практики» и Федерального закона от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах». - защиту от контаминации; - поддержание установленных условий транспортировки; - безопасность персонала от возможного инфицирования. . Образцы и готовые продукты упаковываются в стерильные материалы (первичная упаковка). Далее помещаются в транспортный контейнер для биологических материалов (вторичная упаковка) с контролем температурного режима в зависимости от типа тканей. Первичная и вторичная упаковка должны гарантировать сохранность клеток и тканей. . Защитная герметичная упаковка готового БМКП должна выдерживать низкие температуры хранения. А) первичная упаковка: - Идентификационный номер; - Дата и время забора; - Тип ткани; - Информация о проведенной трансфузии перед забором; - Информация о наличии биологической опасности – «БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОПАСНОСТЬ»; - Использованные сопутствующие вещества; - При аутологичном использовании «ТОЛЬКО ДЛЯ АУТОЛОГИЧНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ»; - Название, адрес учреждения, где проводился забор; - ФИО и контактные данные сотрудника, проводившего забор. Б) вторичная упаковка: - Идентификационный номер; - «ТКАНИ И КЛЕТКИ» - «ОБРАЩАТЬСЯ С ОСТОРОЖНОСТЬЮ» - «НЕ ОБЛУЧАТЬ» - Информация о наличии биологической опасности – «БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОПАСНОСТЬ» - При аутологичном использовании «ТОЛЬКО ДЛЯ АУТОЛОГИЧНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ»; - Название, адрес учреждения, где проводился забор; - Название, адрес учреждения, куда осуществляется транспортировка. - Дата и время отправки; - Особенности условий хранения. 256. БМКП, должны поступать в обращение, если: а) на их первичной упаковке хорошо читаемым шрифтом на русском языке указаны: - наименование БМКП; - идентификационный номер; - номер регистрационного удостоверения; - название производителя; - номер серии; - дата выпуска; - срок годности; - условия хранения; - тип и характеристика содержащихся клеток, их количество или концентрация; - способ применения; - вид донорства (аутологичное – должен быть определен донор и реципиент, или аллогенное); - объем, размер и количество доз; - показания к применению; - предупредительные надписи (если известно присутствие инфекции, указать «БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОПАСНОСТЬ»).