Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Низкомолекулярные тимусные пептиды 14
1.1.1. Биологическое действие тимусных пептидов 14
1.1.2. Получение триптофансодержащих дипептидов и их аналогов 17
1.1.3. Применение препаратов тимусных пептидов как лекарственных 18
1.2. Значение железа в деятельности организма и иммунной системы аминокислот 23
1.3. Биокоординационные соединения низкомолекулярных пептидов 34
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Химическая часть 44
2.1.1. Методики синтеза пептидов 45
2.1.2. Валидация методики количественного определения 50
2.2. Фармакологическая часть 53
2.2.1. Исследование фармакологической (иммунотропной) активности тимофера 53
2.2.2. Изучение токсических свойств тимофера 57
2.2.3. Статистическая обработка данных 65
Глава 3. Получение и изучение активности потенциально иммуноактивных пептидов 66
3.1. Синтез триптофансо держащих дипептидов 66
3.2. Оценка полученных продуктов синтеза: физико-химические свойства, фармакологическая характеристика 72
3.3. Синтез тирозинсодержащих тетрапептидов 82
3.4. Синтез лизинсодержащих тетрапептидов 87
3.5. Иммуностимулирующая пептидов активность синтезированных 100
3.6. Оценка токсичности синтезированных пептидов 103
3.7. Обсуждение результатов по синтезу пептидов 104
Глава 4 Комплексообразование дипептида изолеицил-триптофана с ионом железа (II) 108
4.1. Изучение процессов формирования координационных соединений дипептида изолейцил-триптофана с ионом железа (II) 108
4.2. Обсуждение результатов по изучению комплексообразования дипептида изолейцил-триптофан с ионом железа (II) 115
Глава 5. Стандартизация препарата тимофер 117
5.1. Стандартизация субстанции препарата тимофер 117
5.2. Разработка стандартного образца препарата тимофер 121
5.3. Валидация спектрофотометрического метода определения количественного содержания тимофера 132
5.4. Изучение стабильности лекарственной формы тимофер 136
Глава 6. Разработка технологической производства тимофера схемы 142
6.1. Стадии технологического процесса 142
6.2. Контроль качества продукции 142
Глава 7. Результаты доклинических и клинических исследований тимофера 155
7.1.Доклинические исследования фармакологической активности и безопасности тимофера 155
7.1.1. Изучение острой токсичнсти и переносимости 155
7.1.2. Изучение иммунотропной активности 162
7.1.2.1. Иммуностимулирующая активность при одновременном использовании с ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза у стельных коров 162
7.1.2.2. Иммуностимулирующая активность при одновременном использовании с ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят 164
7.1.2.3. Влияние на активность и интенсивность фагоцитоза 164
7.1.2.4. Влияние на число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей после иммунизации мышеи 167
7.1.2.5. Влияние на титры антител эритроцитами барана 168
7.1.2.6. Влияние на клеточное звено иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей активности 171
7.1.3. Изучение иммуномодулирующей активности в условиях патологии у животных активности 174
7.1.3.1. Изучение иммуномодулирующей бронхопневмонии у животных 174
7.1.3.2. Изучение иммуномодулирующей пневмоэнтеритах у животных 178
7.1.3.3. Изучение иммуномодулирующей активности при тейлериозе у животных 180
7.1.4. Изучение безопасности лекарственного средства 182
7.1.4.1. Изучение «хронической» токсичности 182
7.1.4.2. Изучение аллергизирующих свойств 196
7.1.4.3. Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств 201
7.2. Анализ результатов клинических исследований 206
7.2.1. Влияние тимофера на клинико-иммунологические показатели у больных в послеоперационное время 206
7.2.2. Результаты применения тимофера при лечении железодефицитной анемии у беременных 212
7.2.3. Клиническая эффективность тимофера при лечении пульмонологических заболеваний 219
7.2.4. Эффективность иммунотерапии тимофером при лечении различных хронических заболеваний бронхолёгочной системы 221
7.2.5. Влияние тимофера на иммунологические показатели крови при лечении гинекологических заболеваний 226
7.2.6. Эффективность применения тимофера при лечении простатита 228
7.2.7. Эффективность тимофера при терапии некоторых суставных заболеваний 231
Заключение 233
Выводы 244
Список литературы 246
Список сокращении 278
Приложение 1 281
Приложение 2 287
Приложение 3 293
Приложение 4 294
Приложение 5 297
Приложение 6 311
- Применение препаратов тимусных пептидов как лекарственных
- Оценка полученных продуктов синтеза: физико-химические свойства, фармакологическая характеристика
- Изучение острой токсичнсти и переносимости
- Эффективность применения тимофера при лечении простатита
Применение препаратов тимусных пептидов как лекарственных
Известно, что иммунная, нервная, эндокринная и вегетативная нервная системы функционируют в тесном взаимодействии друг с другом и с окружающими органами и тканями [104, 287]. Нарушения в деятельности любой из этих систем ведут к нарушению работы остальных органов и систем.
Поэтому восстановление деятельности иммунной системы способствует нормализации деятельности и других систем. Весьма эффективными в этом плане оказались тимусные гормоны.
Серьезными нарушениями иммунологической реактивности сопровождаются гиперплазия тимуса, хронические гнойно-воспалительные заболевания, острые и хронические инфекционно-воспалительные заболевания костей и мягких тканей, хронический гематогенный и посттравматический остеомиелит, перитониты, деструктивные формы туберкулеза легких и почек [1,97,195], X ВГ, острые отравления ФОС средней и тяжелой степени, химио- и иммунотерапия рака. Применение тимусных гормонов при этих заболеваниях способствовало восстановлению иммунологической реактивности организма [67, 243,104, 206, 287].
Прием цинка и витамина Е замедляет возрастной процесс снижения содержания тимусных гормонов в организме [243].
Тимопентин («Тимунокс») был первым препаратом, разработанным на основе индивидуальных тимусных пептидов, и применялся при лечении первичных и вторичных иммунодефицитов [45], больных атопическими дерматитами [164], для увеличения уровня гуморального иммунитета при вакцинации [227]. При этом тимопентин образует комплекс с молекулами И класса МНС через остаток валина [250].
На базе аналога тимопентина Arg-Asp-Lys-Valyr-Arg создан иммуномодулирующий препарат иммунофан [247], который применялся при терапии бруцеллеза, гепатита В, ВИЧ, острого лимфолейкоза у детей, врожденных иммунодефицитов, вторичного бесплодия, ассоциированного с условно-патогенными и оппортунистическими возбудителями [287], для профилактики сепсиса после хирургического вмешательства [136]. Иммунофан стимулирует созревание Т- лимфоцитов, взаимодействие Т-хелперов и клеток костного мозга, усиливает активность ЕКК и кислородзависимую систему бактерицидности нейтрофилов, активирует ранние этапы антителогенеза, способствует росту синтеза IgM, IgG, IgA, уменьшает гиперпродукцию IgE, стимулирует нарушенную продукцию сывороточного химического фактора, повышает содержание антителообразующих клеток [163], регулирует формирование медиаторов иммунной системы [118]. Кроме иммунологической активности, иммунофан имеет антиоксидантные свойства.
В различие от многих других иммуномодуляторов, иммунофан действует на другие системы гомеостаза организма [63]. Он защищает ДНК лимфоцитов и нейтрофилов от различных разрушающих факторов.
Применение иммунофана способствует нормализаци продукции свободных форм кислорода фагоцитами, сохраняя их способность к бактериальному киллингу и устойчивость к разрушающему влиянию их на близко облегающих фагоцитов [118].
Изучение эффективности иммунофана и активина при комплексном лечении аденокарциномы эндометрия показало, что они оказывают иммуномодулирующий эффект и снижают частоту лучевых осложнений. При этом иммунофан оказался эффективнее тактивина [22]. Был разработан препарат тимоген, представляющий собой раствор дипептида глутамил-триптофан [64,118], имеющего значительную схожесть с рецепторами тимоцитов, вследствие чего инкубация тимоцитов и лимфоцитов селезенки с тимогеном выполняется резким повышением содержания внутриклеточного цГМФ с параллельным уменьшением содержания цАМФ. В клетках костного мозга происходят противоположные процессы. Подобные же особенности обнаружены и для тимопентина [64].
Укрепление уровня дифференцировки лимфоидных клеток и экспрессии их рецепторов отмечается при использовании тимогена в дозах в 10-1000 раз меньше, чем тимусных гормонов [118].
Тимоген, наряду с остальными короткими пептидами, выполняет роль стартового сигнала в пептидном регуляторном каскаде, вследствие чего является не только тимомиметическим иммуномодулятором, но и полифункциональным биорегулятором, способным параллельно индуцировать эффекты, чьи воздействия которых устанавливаются состоянием клеток- мишеней и чертами появившихся разрушений и, главным образом, формировать иммунную реакцию на тимусзависимый АГ [64,198]. Тимоген способен модулирующе влиять на продукты IL- la, IL-8 и ФИО-1а в крови [117]. В реакциях трансплантационного иммунитета тимоген проявляет позитивное действие на дифференцирование Т-лимфоцитов участвующих в реакциях гиперчувствительности неторопливого вида и на эффекторную активностьТ-лимфоцитов[117].
Присущим для тимогена является то, что он активен лишь при присутствии сбоев в системе иммунитета, что позволяет причислить его к тимомиметическим иммуномодуляторам [64].
Воздействие тимогена на механизмы внутритимической дифференцировании Т-лимфоцитов [117] путем увеличения биосинтеза ДНК и РНК [45] и уменьшения уровня аберраций хромосом в лимфоцитах периферической крови человека способствует возрастанию устойчивости организма к радиационному воздействию, замедлению вызванного радионуклидами канцерогенеза. Вследствие этого тимоген обладает геропротекторным эффектом, позитивно действует на интегративные процессы в мозгу и проявляет антидепрессивное и психостимулирующее влияния [117,137].
С высоким положительным эффектом тимоген применяли при лечении хронических неспецифических заболеваний легких с сопутствующими деструктивными изменениями [38], врожденных и приобретенных пороков сердца и ИБС, неспецифического язвенного колита [117], хронического персистирующего гепатита В, гнойно-воспалительных процессов, острой лучевой болезни легкой и средней степени тяжести, сахарного диабета F, острого лимфобластозного лейкоза, лимфогранулематоза, саркомы Капоши у больных СПИДом, вторичного бесплодия, ассоциированого с условно-патогенными и оппортунистическими возбудителями [64,287,276], для профилактики гриппа и ОРВИ. Тимоген обладает гепатопротекторным действием [127]. Есть сведения о том, что синтетического прототипа тимогена-дипептида H-y-Glurp-OH. [137] обладает иммунномодулирующей активностью.
Показано, что нейротропный эффект не только присущ тимогену, но и ряду иммуномодуляторов [2,6,14,18,25,26,75,131,195,238,290].
На основе дипептида лизил - глутаминовая кислота разработан препарат вилон, успешно примененный при лечении генерализованного парадонтита, одонтогенного гайморита, острого и хронического сиалоденита, разнообразных видов туберкулеза легких, обструктивного бронхита, хронических болезней легких [95,91, 92,118,135].
По своему воздействию на МФ и нейтрофилы вилон более активен, чем тимоген. Длительное введение вилона в дозе 50 мкг активирует половое поведение старых самцов крыс, влияет на ЛГ, пролактин, АКТГ и на медиаторный статус на уровне гипоталамуса [117]. Вследствие того, что вилон снижает содержание пролактина в крови, способствующего нарушению половой функции при старении, перспективно применение его как геропротекторного средства. Вилон, в различие от других тимомиметиков, оказывает стимулирующее действие на МФ, фибробласты, тучные клетки, эндотелиальные и ретикулярные клетки только у старых животных [165]. На органотипических культурах тимуса вилон способствовал росту ткани старых и молодых животных [165].
Другой дипептид, лизил - аргинин, при введении престарелым и больным раком повышал выработку тимулина, в результате чего вошло в норму количество оконечных Т-клеток [254] и синтез TNF и IL-6 [270].
D-Аналог тимогена - тимодепрессин, препятствует расширению реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) in vivo и тормозит подъем хронической РТПХ, ингибирует определенные маркеры активации (CD28, CD69) Т-лимфоцитов [166], действует на пролиферацию кроветворных клеток-предместников человека [203]. Действие тимодепрессина на рецепторы цитокинов вслед за их специфической активации зависит от концентрации: в небольших дозах содействуя, а в больших - препятствуя сигналам от надлежащих ростовых факторов.
Под воздействием тимусных пептидов находятся синтез и внутриклеточное наличие ФНО, а- и у-интерферонов, интерлейкина-4 [62].
Тимусные пептиды проявляют иммунологическую активность и в ничтожных дозах (10"18 М). Предполагается, что такое воздействующее качество основано на дистантной трансляции сигнала от молекул лиганда к клетке-мишени посредством солитонов воды [30].
Диапазон биологической активности низкомолекулярных тимусных пептидов (тимоген, вилон, изолейцил - триптофан), в том числе при очень малых эффективных дозах, привели к пересмотру концепции лиганд-рецепторного взаимодействия и к новым выводам о механизм их действия.
Определенным аминокислотам, входящим в состав тимусных пептидов (глутаминовая кислота, глицин, триптофан и их простые смеси) присущи некоторые их свойства [14].
Оценка полученных продуктов синтеза: физико-химические свойства, фармакологическая характеристика
Следующим этапом работы явилось изучение химико-фармацевтических свойств полученных дипептидов. Константы физико-химических свойств, полученных в результате синтеза свободных пептидов, внесены в таблицы 2 и 3. Согласно описанию цвет всех синтезированных пептидов белый или с желтоватым оттенком.
Нередко одним из показателей характеристики подлинности лекарственных препаратов органической природы является температура плавления вещества. Изучение некоторых фармакопейных статей на препараты пептидного происхождения (ФСП 42-4076-08 Тимоген натрий. Субстанция; ФС 42-0001-07. Тимодепрессин. Образец стандартный; ФСП 42-0011007. Тимо депрессии, субстанция) показывает, что эта характеристика в качестве одного из показателей подлинности вещества не применяется. Возможно, это связано с тем, что температура плавления пептидов часто находится выше 200С и имеет достаточно широкий температурный интервал, причем большинство из них плавятся с разложением. Диапазон температуры плавления синтезированных пептидов также являлся очень большим и охватывал ряд градусов, что явствовало об аморфном виде веществ. Наряду с этим, часть пептиды плавилась с расщеплением.
Вследствие этого температура плавления пептида, как показатель его подлинности, нами не использовалась. Полученные дипептиды, приведенные в таблице 2, имеют аморфный вид.
Другим методом, часто используемым для идентификации и численного измерения пептидов, включающих ароматические аминокислоты, является УФ-спектрофотометрия. Известно, что спектр поглощения пептида измеряется спекром поглощения ароматической аминокислоты, имеющейся в строении пептида. В рассматриваемом условии все полученные пептиды содержат ароматические аминокислоты, имеющие максимумы поглощения при следующих длинах волн: триптофан - 219 нм (є = 47000 М см"1), 278 нм (є = 5600 М -см"1); тирозин - 193 нм (є = 28000 М -см"1), 222 нм (є = 8000 М см"1), 274 нм (є = 1400 М"1-см"1); фенилаланин - 188 нм (є = 60000 М см"1), 206 нм (є = 9300 М см"1), 257нм(є = 200М-1см-1).
С аналитической точки зрения наиболее приемлемыми являются максимумы поглощения при 278 нм для триптофана, 274 нм для тирозина и 257 нм для фенилаланина. Однако, при этих длинах волн молярный коэффициент поглощения триптофана в 4 раза превышает такового показателя тирозина и в 28 раз - фенилаланина. Это говорит о том, что максимум поглощения триптофана будет полностью перекрывать поглощение тирозина и фенилаланина, и спектр поглощения дипептида будет соответствовать спектру поглощения триптофана.
В качестве примера, на рисунке 6 приведены УФ-спектры триптофана, тирозина и дипептида триптофил-тирозин в концентрации 1x104 М.
Рисунок 6 показывает, что, действительно, максимум поглощения триптофана полностью перекрывает максимум поглощения тирозина и УФ -спектр дипептида определяется поглощением триптофана. Кроме того, состояние максимумов поглощения аминокислот и включающих их пептидов имеют различие на 1-2 им, что соответствует нормам ОФС 42-0042-07 «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях» (ГФ РФ XII издание). Синтезированные дипептиды и аминокислоты имеют отличия лишь по величине удельного показателя поглощения, что для аминокислот имеет более высокое значение, чем для включающих их дипептидов. В таблицу 4 включены найденные величины удельного показателя поглощения для ряда синтезированных дипептидов.
Данные таблицы свидетельствуют о том, что по местоположению максимума поглощения ароматических аминокислот и включающих их пептидов практически невозможно различать друг от друга. Однако, при одинаковой их концентрации вследствие различных значений удельного показателя поглощения, оптическая плотность растворов будет неодинаковой, и по ее значению, возможно, устанавление различия пептид от аминокислот. Но это все действительно, если пептиды не находятся в смеси.
Следовательно, данные УФ-спектрофотометрии дипептидов, содержащих ароматические аминокислоты, можно использовать для их идентификации и количественного определения только в том случае, если эти соединения являются самостоятельными фармацевтическими субстанциями или лекарственными препаратами. Пептиды можно также идентифицировать с использованием тонкослойной хроматографии. При этом необходимо использовать не расчет значения Rf, а сопоставление со стандартным образцом, так как хроматографические пластинки разных изготовителей различаются друг от друга, что приводит к получению разных значений Rf у одного вещества в одних и тех же условий растворителей на пластинках разных изготовителей.
Учитывая то, что все пептиды значатся слабыми кислотами и слабыми основаниями, в растворе находятся в цвиттер-ионной форме и показания рН соответствуют пределам, установленным для дистиллированной воды, а при назначении пептидов, как растворов для вливания, концентрация во многих случаях имеет значения меньше 0,1%, воздействие диссоциации функциональных групп пептидов на рН воды минимальное, и как один из параметров стандартизации допустимо использовать величину рН гидрораствора. В данном случае, при количестве пептидов 0,01% оно имело значения 5,5-6,8.
Следовательно, выполненное химико-фармацевтическое исследование синтезированных пептидов дало возможность отобрать такие показатели как описание, поглощение в УФ-области, величина Rf при применении ТСХ и рН гидрораствора как базовых при выполнении стандартизации пептидов при назначении их как лекарственных препаратов.
Реакции расщепления синтезированных пептидов
В фармацевтических изысканиях исследование реакций расщепления пептидных препаратов имеет важное значение, так как позволяет делать выводы об их стабильности и образующихся в результате хранения посторонних примесей. В основном, отличием пептидных препаратов от обычных, с точки зрения стабильности, является возможность протекания большого количества химических реакций, приводящих как к изменению структуры пептида, так и его частичному или полному разрушению, что приводит к частичной или полной потере пептидным препаратом своей специфической активности. На основании многочисленных исследований [204, 218, 232, 237, 240, 241, 244, 246, 260], проведенные как с белковыми препаратами, так и препаратами на базе коротких пептидов, был сделан вывод, что к числу основных реакций разложения пептидных препаратов относятся: реакции окисления, гидролиза, деамидирования, элиминации, рацемизации и дисульфидного обмена. Тип реакции определяется аминокислотным составом пептидного препарата.
Обнаружено, что самые уязвимые аминокислоты к окислению, катализируемому металлами, это His, Arg, Lys, Pro, Met, и Cys, к фотоокислению -His, Trp, Met, и Cys, нередко сталкиваются с реакциями р-элиминации- Cys, Ser,Thr, Phe и Lys [246].
На этом основании, первоначально сочли необходимым проанализировать последовательность синтезированных пептидов на предмет вероятного проявления реакций расщепления. Далее предположили, что эти пептиды возможно способны принимать участие в реакциях фотоокисления и Р-элиминации (табл. 5).
Как указывалось выше, аминокислотами, наиболее восприимчивыми к реакциям фотоокисления являются His, Trp, Met, и Cys, реакциям Р-элиминация чаще всего подвергаются остатки Cys, Ser, Thr, Phe и Lys.
С учетом этого, допустимо предположить, что возможно участие синтезированных пептидов в реакциях фотоокисления и Р-элиминации (табл. 5).
Изучение острой токсичнсти и переносимости
В экспериментах по определению «острой» токсичности препарата тимофербыли выбраны белые нелинейные мыши обоего пола весом 20-22 г. Им вводили внутримышечно однократно в общем объеме, не превышающем 0,5 мл, допустимом для данного вида животных. Вводимы е дозы составляли 1000, 1500, 2000 и 2500 мкг/кг. В контрольных сериях экспериментов подопытным мышам внутримышечно вводили 0,9% раствор натрия хлорида.
Были сформированы группы по 6 животных. Всего в эксперименте было использовано 36 животных (12 животных составляли группы контроля). За мышами наблюдали на протяжении 2-х недель после введения, (о токсичности препарата судили по гибели мышей и общей картине интоксикации (внешнее поведение мышей, восприятия питания, подвижность, вид шерстного покрова и слизистых оболочек). Результаты изучения свидетельствовали о том, что внутримышечный ввод тимофера подопытным животным в указанных дозах не оказывает воздействия на самочувствие мышей. После введения препарата во всем изученном диапазоне доз смертности мышей и симптомов интоксикации не наблюдали (табл.22, 23).
На протяжении всего периода контроля общее состояние и поведение этих животных не имели отличия от таких же показателей в контрольных группах.
При динамическом осмотре за мышами на протяжении 14 сут смертности среди них не отмечали. Анализ динамики принятия корма и воды у мышей не показал заметного различия по сопоставлению с контрольными группами (табл. 24, 25). Динамика веса мышей, получавших тимофер, тоже не имела заметного различия от показателей у других животных в контрольных группах (табл. 26).
Подопытные мыши обычного телосложения, средний уровень упитанности. Вид шерсти блестящий, опрятен. Местов выпадения шерсти не замечено. Выделения из естественных отверстий отсутствовали. Не было видно перемен в передних и задних конечностях. Сохранность зубов хорошая. Зримые слизистые оболочки бледные, блестящие, гладкие. Половые органы имели нормальное состояние. Листки плевры и органы грудной клетки не претерпели изменений. Легкие бледно-розовые, воздушные, без уплотнений на ощупь. Сосуды легких умеренно полнокровны. Эпителий альвеол и внутрилегочных бронхов без отклонений. Альвеолы наполнены воздухом. Отека или воспаления легочной ткани не обнаружено. Размеры сердца не имели отклонений от нормы. В полостях сердца замечено немного жидкой крови. Мышца сердца плотная, по цвету коричневая. На миофибриллах левого желудочка сердца и межжелудочковой перегородки отчетливо видна поперечная исчерченность. Сосуды миокарда размеренно полнокровные.
Желудок заполнен незначительным объемом плотной пищи. Слизистая оболочка блестящая, складчатая, имеет слегка розоватую окраску. Структура слизистой оболочки фундальной части желудка безпатологии. В базальных частях желез видна зернистость в цитоплазме.
Выполненные изучения явствуют о том, что препарат тимофер в исследованных дозах не оказывает токсического воздействия на подопытных мышах.
Эксперименты по определению переносимости тимофера были проведены на собаках [189].
Были отобраны 4 беспородных собак обоего пола весом 8-12 кг. Осуществлялся внутримышечный ввод тимофера в дозе 1500 мкг/кг (оба пола). Эта доза в 650 раз выше лечебной дозы для человека с учетом межвидового переноса доз.
Собакам контрольной группы (оба пола) вводили равноценный объем 0,9% раствора хлорида натрия. Наблюдение вели на протяжении 2 недель с начала опыта. Летальные исходы не наблюдались. Спустя 2 недели пережившие интоксикацию и контрольные собаки были умерщвлены с помощью гексенала, выполнены вскрытие и патоморфологическим изучения Лечение опытного отравления при применении препарата тимофер в дозе 1500 мкг/кг к животным летальных эффектов не выявлено. Спустя 1-2 часа после введения у всех собак, принявших препарат, появилась настороженность, незначительная атаксия, тремор ушей и головы. Максимум проявлений признаков интоксикации отмечался спустя 3-4 ч после начала эксперимента. Последующие сутки общее состояние экспериментальных собак и поведение не имели отличия от таких показателей у контрольных.
Сведения об изменениях массы тела, принятии корма и воды всех экспериментальных животных приведены в таблицах 27-29. Таблицы показывают, что принятие корма и воды подопытными собаками, которым вводили тимофер, в начале периода наблюдения несколько снизилось, в более поздний период оно не имело различий от обыкновенного. Каких- либо заметных отклонений в массе тела и принятии воды не обнаружилось.
Результаты вскрытия (некропсии)
Внешний осмотр подопытных собак во всех испытательных группах показал, что они нормального телосложения и питания. Выделений из естественных отверстий не выявлено. Шерсть блестящая, опрятного вида , очагов облысения не видно. Зубы сохранены. Слизистые оболочки бледной окраски, блестящие. Молочные железы самок без уплотнений на ощупь, выделения из сосков не были. Половые органы самцов имеют правильное развитие. Деформации или отека конечностей отсутствовало. Грудная и брюшная полости выпота не имели. Состояние внутренних органов грудной и брюшной полости без отклонений. Париетальный и висцеральный листки плевры и брюшины были тонкие, блестящие, гладкие. Лимфатические узлы сероватого цвета, округлой формы, с гладкой поверхностью и плотной беловатой капсулой. Межсобой и с подлежащими тканями узлы не спаяны. Слюнные железы овальной формы, желтоватого цвета, умеренно плотные, на разрезе — зернистой формы. Щитовидная железа розовато-красного цвета, обычной величины и формы, умеренно плотной консистенции. Тимус выглядел плоским образованием, бледного, чуть розоватого цвета, находящимся посреди жировой ткани переднего средостения у рукоятки грудины. Размеры и плотность без отклонений. Интима аорты гладкая, блестящая, беловатого цвета. Диаметр аорты не имел отклонений. Листки перикарда тонкие, блестящие, гладкие. Размеры и форма сердца также были без отклонений. Левый желудочек сокращен, в правом имелись темно-красные сгустки и жидкая кровь. Клапаны сердца тонкие, блестящие, гладкие. Мышца сердца на разрезе однородной коричневой окраски, умеренно плотная.
Просвет трахеи и крупных бронхов не претерпел изменений, слизистая оболочка блестящая, гладкая, бледного цвета. Легкие воздушные, без уплотнений на ощупь, бледно-розовой окраски. Слизистая пищевода блестящая, гладкая, бледного цвета. Желудок обычных размеров и формы. Заполнен пищевым веществом. Слизистая оболочка желудка складчатая, блестящая, бледного цвета. Слизистая оболочка 12-перстной кишки бледно-розового цвета, гладкая, блестящая. Слизистая оболочка тонкого кишечника бледно-розового цвета, блестящая, гладкая. Слизистая оболочка толстой кишки сероватого цвета, блестящая, гладкая. Форма и размеры печени без отклонений. Поверхность печени гладкая, однородной темно- красной окраски, капсула тонкая, прозрачная. Ткань печени на разрезе полнокровная, умеренно плотная. Поджелудочная железа обычной формы и размеров, размеренной плотности, беловатой, чуть розовой окраски, дольчатая. Селезенка обычной формы, темно-вишневого цвета, умеренно плотной консистенции, с морщинистой капсулой. На разрезе на темно красном фоне селезенки просматриваются мелкие сероватого цвета фолликулы. Размеры и форма почек не имели отклонений. Поверхность почек коричневатого цвета, гладкая, капсула плотная, беловатого цвета, легко снимаемая. На разрезе органа хорошо отличимы корковое и мозговое вещество. Надпочечники овальной формы, беловатого цвета, обычных размеров и плотности. Мочевой пузырь наполнен незначительным объемом прозрачной мочи. Слизистая оболочка пузыря складчатая, блестящая, бледной окраски. Тело матки самок умеренно плотной консистенции, форма и размеры не изменены, слизистая оболочка труб бледная, блестящая, гладкая. Яичники обычных размеров и плотности, с неровной поверхностью сероватого цвета. Яички самцов беловатого цвета, обычных форм и плотности, поверхность разреза зернистая, однородной бледной окраски. Капсула плотная, непрозрачная.
Эффективность применения тимофера при лечении простатита
В последние десятилетия большое внимание врачей привлечено к проблеме лечения хронического простатита (ХП), которая значительно (на 35-40%) распространена среди мужчин возраста от 20 до 40 лет [44, 98]. Негативные влияния на качество жизни, оказываемые этой болезнью, сравнивают с инфарктом миокарда или болезнью Крона, отчего ХП имеет большую медико-социальную значимость [102]. В последние 15-20 лет наблюдается возрастание частоты выявления ХП имеющегося в большей степени стертых и скрыто протекающих форм [102]. При простатитах происходят расстройства в гуморальном и местном звеньях иммунитета [236, 263], выявлено снижение общего количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров в периферической крови, функциональной активности клеточного звена иммунитета [43]. Поэтому в комплексном лечении простатитов важнейшую роль играет использование иммуномодуляторов [237, 265].
В связи с этим нами было исследовано действие тимофера на показатели крови больных урологическими заболеваниями (хронический простатит) [184] при включении его в содержание комплексного лечения.
Клинические испытания тимофера были выполнены в центре здоровья №3 города Душанбе на 5 пациентов с хроническими простатитом. Этой группе больных (основная группа) проводили комплексное лечение традиционными препаратами и тимофером, который вводили по 1 мл (148 мкг/мл) внутримышечно один раз в день в течение 10 дней. Контрольную группу составили 5 аналогичных больных, которым проводили только традиционное лечение. Возраст пациентов в обеих группах составлял 30-58 лет.
Результаты лабораторных исследований приведены в таблице 78.
До лечения показатели крови больных обеих групп свидетельствовали о наличии воспалительного процесса. Содержание эритроцитов у больных основной группы было занижено в 1,4 раза от среднего значения физиологических норм колебания, у больных контрольной группы - в 1,05 раза. Количество лейкоцитов у больных основной группы было увеличено в 2,16 раза, у больных контрольной группы - в 1,28 раза. У больных основной группы содержание гемоглобина было понижено в 1,18 раза, у больных контрольной группы оно почти не отличалось от нормального. Цветной показатель у больных основной группы был понижен в 1,32 раза, контрольной - в 1,11 раза. Повышенной у больных обеих групп была скорость оседания эритроцитов: у больных основной группы - в 4,11 раза, контрольной - в 2,65 раза. Такая разница в показателях свидетельствует о том, что воспалительный процесс у больных основной группы был более сильно выраженным.
После лечения у больных обеих групп отмечалась положительная динамика клинических симптомов заболевания и субъективных ощущений: исчезли дезурические симптомы, снизилась утомляемость, повысилось либидо, заметно улучшилось общее состояние больных.
После лечения практически все показатели крови у больных обеих групп нормализовались. Наибольшее влияние тимофер оказал на показатели крови больных основной группы, где отклонения от нормы были более высокими. Этот факт еще раз подтвердил сведения о том, что иммуномодулирующие препараты оказывают позитивное действие на организм больных и почти не оказывают влияния на организм здоровых людей.
Одним из важных иммунологических показателей при простатите является содержание иммуноглобулинов в крови. Результаты определения содержания иммуноглобулинов до и после лечения приведены в таблице 79.
Как видно из таблицы 79, до лечения уровни иммуноглобулинов у всех больных были значительно повышены. В крови больных основной группы содержание IgA было повышено в 1,93 раза, IgM - в 2,02 раза, IgG - в 1,85 раза, у больных контрольной группы повышение содержания иммуноглобулинов А, М и G составляло соответственно 1,78, 1,98 и 1,76 раза.
После осуществления терапии их содержание уменьшилось, и в значительной степени - в опытной группе. Причем содержание IgA и IgG нормализовалось, содержание IgM - имело тенденцию к нормализации.
Учитывая вышеизложенное, можно отметить, что тимофер позитивно действует на показатели гуморального иммунитета, способствует снижению интенсивности воспалительного процесса.
Таким образом, включение тимофера в комплексную терапию оказало нормализующее влияние на клинические и иммунологические показатели крови больных хроническим простатитом.