Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 9
1.1 Патогенез ишемических и реперфузионных повреждений сердца 9
1.2 Адаптивный феномен дистантного посткондиционирования сердца 18
1.3 Роль опиоидных рецепторов в регуляции толерантности сердца к ишемическим и реперфузионным повреждениям 23
Глава 2 Материал и методы исследования 27
2.1 Объект исследования 27
2.2 Дизайн исследования 27
2.3 Методы исследования 32
2.3.1 Моделирование локальной ишемии-реперфузии 32
2.3.2 Моделирование дистантного посткондиционирования 32
2.3.3 Определение размера инфаркта миокарда 32
2.3.4 Исследование гемодинамики 33
2.4 Фармакологические агенты 34
2.4.1 Агонисты опиоидных рецепторов 34
2.4.2 Антагонисты опиоидных рецепторов 38
2.4.3 Блокаторы каналов, ингибиторы киназ и сигнальных молекул 41
2.5 Статистическая обработка данных 46
Глава 3 Результаты и их обсуждение 47
3.1 Кардиопротекторный эффект дистантного посткондиционирования 47
3.1.1 Роль опиоидных рецепторов в формировании кардиопротекторного эффекта дистантного посткондиционирования 48
3.2 Способность агонистов опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца 50
3.2.1 Способность агонистов – опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца 51
3.2.2 Способность агонистов – опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца 58
3.2.3 Способность агонистов -опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца 62
3.3 Сигнальный механизм кардиопротекторного эффекта дельторфина II 69
3.3.1 Роль протеинкиназы С, PI3-киназы, MEK-киназы и JAK-киназ в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта дельторфина II 69
3.3.2 Роль КАТФ-каналов и ВКСа-каналов в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта дельторфина II 73
3.3.3 Роль активных форм кислорода и МРТ-поры в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта дельторфина II 75
Заключение 78
Выводы 83
Список использованных сокращений 84
Список литературы 86
- Адаптивный феномен дистантного посткондиционирования сердца
- Блокаторы каналов, ингибиторы киназ и сигнальных молекул
- Способность агонистов – опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца
- Роль активных форм кислорода и МРТ-поры в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта дельторфина II
Адаптивный феномен дистантного посткондиционирования сердца
Дистантное посткондиционирование сердца (ДПост) - повышение устойчивости сердца к реперфузионным повреждения за счет воздействия нескольких циклов кратковременной ишемии-реперфузии удаленного от сердца органа после того, как реперфузионный период уже начался, или же непосредственно перед возобновлением коронарного кровотока. В 2005 г. под руководством профессора J. Vinten-Johansen был открыт феномен ДПост [78]. В экспериментах на крысах они производили 30–минутную коронароокклюзию и 2– часовую реперфузию. Во второй группе использовали ДПост, которое осуществляли путем 5-минутной перевязки почечной артерии, за 5 мин до реперфузии. Третья группа включала животных, у которых почечную артерию необратимо перевязывали после 24 мин коронароокклюзии. И наконец, в последней группе находились крысы, которым после 26 мин ишемии сердца осуществляли 5-минутную ишемию – реперфузию почечной артерии. Площадь инфаркта определяли как отношение зоны инфаркта к зоне риска (ЗИ/ЗР). Оказалось, что ДПост в 2 раза способствует уменьшению соотношения ЗИ/ЗР. Стоит отметить, что у данной группы также достоверно уменьшалась концентрация креатинфосфокиназы (КФК) в сыворотке крови. Необратимая окклюзия почечной артерии не оказывала достоверных изменений соотношения ЗИ/ЗР. В группе с 5 мин ишемией и реперфузией (после 26 мин ишемии) также не удалось выявить кардиопротекторного эффекта. Таким образом, было сделано предположение, что эндогенные вещества, вызывающие уменьшение индекса ЗИ/ЗР, должны освобождаться в кровеносную систему перед наступлением реперфузионного периода.
В 2006 г кардиологи сравнивали эффективность применения ишемического прекондиционирования, ишемического посткондиционирования и ДПост на модели ишемии-реперфузии сердца у кроликов [95]. В результате все виды адаптационного воздействия обладали практически одинаковым кардиопротекторным эффектом. Также характерным признаками было уменьшение концентрации КФК и малонового диальдигида (МДА) в плазме крови [95]. При этом исследователи считают, что снижение уровня МДА связано с уменьшением активности ПОЛ в ишимизированном миокарде и как следствие способствует меньшему повреждению клеток. В другом эксперименте, проведенном на свиньях, воспроизводили 90-минутную коронароокклюзию и 72-часовую реперфузию [24]. Было установлено, что применение ДПост перед реперфузией вызывает снижение концентрации КФК в крови, а также уменьшает индекс ЗИ/ЗР почти в 2 раза [24]. Экспериментальные данные указывают на то, что моделирование ДПост может осуществляться не только за счет ишемии-реперфузии удаленного от сердца органа. Так J. Fang и соавт. воспроизводили ДПост с помощью трех циклов (10 с) ишемии и реперфузии огибающей ветви коронарной артерии [46]. Оказалось, что при использовании этой модели происходит достоверное уменьшение соотношения ЗИ/ЗР, а также снижение уровня КФК-МВ и МДА в плазме крови [46]. Таким образом, кратковременная ишемии-реперфузия одного участка сердца, способна увеличить устойчивость другого участка к действию длительной коронароокклюзии и реперфузии.
В 2011 году M. Wei и соавт. показали, что ДПост способно предотвращать постинфарктное ремоделирование миокарда [168]. У крыс с 45 мин ишемией и реперфузией оценивали степень развития инфаркта миокарда спустя 4 дня и 4 недели. ДПост моделировали после 25 мин ишемии путем 5-минутного пережатия бедренной артерии с последующей 5 мин реперфузией. Затем в одной группе крысам повторяли ДПост каждый день, а другой один раз в 3 дня. В результате и спустя 4 дня, и 4 недели у всех групп с ДПост было обнаружено снижение индекса ЗИ/ЗР. В контрольной группе через 28 дней после коронароокклюзии наблюдалось развитие гипертрофии левого желудочка [168]. Многократное применение ДПост оказывало наиболее благоприятный эффект на степень развития гипертрофии. Использование ДПост несколько раз в день в течение 4 недель уменьшало дилатацию левого желудочка, а также параметры сократимости и насосную функцию сердца [168]. Следовательно, ДПост способно уменьшать негативные эффекты после инфаркта миокарда спустя длительное время.
Известно, что в патогенезе реперфузионных повреждений сердца важную роль играют нейтрофилы [26]. После возобновления коронарной перфузии они вместе с током крови поступают в зону ишемии, где выделяют факторы, запускающие воспалительные процессы. В экспериментах на крысах было показано, что ДПост уменьшает количество нейтрофилов в зоне, подвергшейся действию ишемии. Степень выраженности нейтрофильной инвазии оценивался с помощью определения концентрации миелопероксидазы, которая является маркерным ферментом активности нейтрофилов. Оказалось, что в группе с ДПост концентрация этого фермента была в 2 раза меньше чем в контрольной группе (30 мин ишемия и 2 ч реперфузия без ДПост) [46; 95; 168]. Однако в ряде исследований было показано, что уровень провоспалительных цитокинов в крови после воздействия ДПост не отличается от контрольной группы [158; 168]. Стоит отметить, что в этих экспериментах также измеряли концентрацию хемокина МСР-1, который способствует аккумуляции лейкоцитов в очаге воспаления [137]. Было установлено, что ДПост уменьшает уровень данного хемокина в несколько раз и, следовательно, снижает количество нейтрофилов. Таким образом, инфаркт-лимитирующий эффект ДПост связан со снижением поступления лейкоцитов в очаг воспаления.
Доказано, что вегетативная нервная система участвует в механизме кардиопротекторного эффекта дистантного прекондиционирования (ДПре) [11; 13]. Опыты на мышах показали, что при рассечении брюшной стенки за 15 мин до перевязки коронарной артерии наблюдается снижение соотношения ЗИ/ЗР в 6 раз по отношению к контролю [77]. Введение гексаметония (блокатор вегетативных ганглиев) на фоне рассечения спинного мозга полностью устраняло данный эффект хирургической травмы [77]. При инъекции ингибитора рецепторов кальцитонин-ген родственного пептида, который находится в сенсорных нервных волокнах чувствительных к капсаицину, также происходило устранение инфаркт-лимитирующего эффекта [96]. Для доказательства участия кальцитонин-ген родственного пептида в полученном эффекте использовали капсаицин, который инициирует выход этого пептида из афферентных волокон. Действительно, введение капсаицина вызывало снижение соотношения зона инфаркта/зона риска в несколько раз. Следовательно, нервная система участвует в реализации инфаркт-лимитирующего эффекта после хирургического вмешательства [77].
В 2012 году было установлено, что моделирование ДПост путем стимуляции блуждающего нерва сразу после восстановления кровотока в зоне ишемии, вызывает уменьшение размера инфаркта [165]. При этом также наблюдалось снижение в крови таких маркеров некроза кардиомиоцитов как тропонин I и КФК-МВ. Авторы данной работы предположили, что кардиопротекторный эффект возникающий при стимуляции блуждающего нерва связан с уменьшением количества провоспалительных цитокинов. Оказалось, что данный вид ДПост действительно снижает концентрацию провоспалительных цитокинов в крови и как следствие приводит к ограничению размера инфаркта [165]. Позднее эти сведения были подтверждены и другими исследователями [166].
Стоит отметить, что в некоторых исследованиях показано наличие кардиопротекторного эффекта у ДПост при введении капсаицина только в профилактическом применении. Использование препарата во время или после ишемии не оказывало никакого эффекта [25].
Таким образом, вопрос о значение роли нервной системы в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта ДПост остается спорным и требует дальнейшего изучения.
По данным некоторых авторов кардиопротекторный эффект ДПре и ДПост проявляется за счет неизвестного вещества (или веществ), появляющегося в крови при действии ДПре и ДПост [146]. В опытах на изолированном сердце крысы было установлено, что если собрать перфузат оттекающий от сердца подвергшегося действию 3 циклов глобальной ишемии-реперфузии продолжительностью по 5 мин, и в течение 10 мин (до или после 30 мин ишемии) перфузировать этим раствором другие сердца (у которых моделировали региональную 30 мин ишемию и 2 ч реперфузию), то наблюдается достоверное уменьшение индекса ЗИ/ЗР в несколько раз [29]. При попытке идентифицировать это вещество оказалось, что оно обладает гидрофобными свойствами и молекулярной массой 30 кДа [29]. Во многих исследованиях было доказано нейропротекторное действие ДПост [35; 55; 73; 98; 141]. Известно, что гидрофобные вещества способны проникать через гематоэнцефалический барьер [140]. Следовательно, эти данные косвенно доказывают гидрофобную природу соединения появляющегося в крови при ДПост.
Блокаторы каналов, ингибиторы киназ и сигнальных молекул
1) Ингибитор проткинкиназы С (ПКС) хелеритрина хлорид (Chelerythrine chloride;1,2-dimethoxy-N-methyl(1,3)benzodioxolo(5,6-c) phenanthridinium chloride) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl- cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 0,3 мг/кг [104]. Препарат синтезирован компанией «LCLabs Company» (Woburn, США). Структурная формула:
2) Ингибтор PI3–киназы (рhosphoinositide 3-kinases) вортманнин (Wortmannin) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl--cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 25 мкг/кг [47]. Препарат синтезирован компанией «Sigma-Aldrich» (St. Louis, США). Структурная формула:
3) Ингибитор МЕК-киназы (mitogen-activated protein kinase) PD98059 (2-(2-Amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl--cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 0,3 мг/кг [61]. Препарат синтезирован компанией «Tocris Bioscience» (Bristol, Великобритания). Структурная формула:
4) Ингибитор JAK-киназы Tyrphostin AG 490 ((E)-2-Cyano-3-(3,4-dihydrophenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl--cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 3 мг/кг [61]. Препарат синтезирован компанией «Tocris Bioscience» (Bristol, Великобритания). Структурная формула:
5) Неселективный блокатор всех типов КАТФ-каналов глибенкламид (Glibenclamide ;Glyburide; 5-chloro-N-[4-(cyclohexylureidosulfonyl)phenethyl]-2-methoxybenzamide;) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl--cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг [104]. Препарат синтезирован компанией «Sigma-Aldrich» (St. Louis, США). Структурная формула:
6) Селективный блокатор митохондриальных КАТФ-каналов 5-гидроксидеканоат (5-hydroxydecanoate sodium salt) растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутривенно в дозе 5 мг/кг [104]. Препарат синтезирован компанией «Sigma-Aldrich» (St. Louis, США). Структурная формула:
7) Селективный блокатор сарколеммальных КАТФ-каналов HMR 1098 (Clamikalant sodium) растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутривенно в дозе 6 мг/кг [62]. Препарат синтезирован компанией «Aventis Pharma Deutschland» (Frankfurt, Germany). Структурная формула:
8) Блокатор кальций-чувствительных К-каналов большой проводимости (BКСа канал) паксиллин (Paxilline, (2R,4bS,6aS,12bS,12cR,14aS) 5,6,6a,7,12,12b,12c,13,14,14a-Decahydro-4b-hydroxy-2-(1-hydroxy-1 methylethyl)-12b,12c-dimethyl-2H-pyrano [2 ,3 :5 ,6 ]benz[1 ,2 :6,7]indeno[1,2-b] indol-3(4bH)-one) растворяли в 0,1 мл DMSO и полученный раствор доводили до 1 мл 20%-раствором hydroxypropyl--cyclodextrin (200 мг hydroxypropyl- cyclodextrin растворяли в 1 мл H2O). Вводили внутривенно в дозе 1,5 мг/кг [150]. Препарат синтезирован компанией «Tocris Bioscience» (Bristol, Великобритания). Структурная формула:
9) Антиоксидант 2-меркаптопропионилглицин (2-МПГ; Tiopronin; N-(2 Mercaptopropionyl)glycine) растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутривенно в дозе 20 мг/кг [157]. Препарат синтезирован компанией «Sigma-Aldrich» (St. Louis, США). Структурная формула:
10) Антиоксидант темпол (Tempol; 1-oxyl-2,2,6,6etramethyl-4-hydroxypiperidine) растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутривенно в дозе 30 мг/кг [80].
Препарат синтезирован компанией «Tocris Bioscience» (Bristol, Великобритания). Структурная формула:
11) Активатор МРТ-поры митохондрий атрактилозид (Atractyloside potassium salt, (20,4а, 15а)-15-hydroxy-2- [[2-0-(e-methyl 1 -oxobutyl)-3,4-di-0-sulfo-P-D-glucopyranosyl]oxy] - 19-norkaur-16-en-18-oic acid dipotassium salt) растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутривенно в дозе 5 мг/кг [133]. Препарат синтезирован компанией «Sigma-Aldrich» (St. Louis, США). Структурная формула
Способность агонистов – опиоидных рецепторов уменьшать реперфузионное повреждение сердца
В работе были использованы агонист 1-ОР U-50,488, агонист -ОР ICI-199,441 и агонист 2-ОР GR-89696. Препараты вводились за 5 мин до реперфузии. В контрольной группе соотношение ЗИ/ЗР составляло 46,3 ± 3,1 % (Рисунок 5). При введении агониста U-50,488 (1 мг/кг) было выявлено уменьшение ЗИ/ЗР на 23% по сравнению с контрольной группой (Рисунок 5). Данный результат свидетельствует о том, что препарат U-50,488 обладает кардиопротекторным эффектом. Чтобы выяснить связан ли полученный эффект с активацией ОР предварительно вводились антагонисты ОР. Так использование налтрексона (5 мг/кг) способствовало устранению эффекта U-50,488 (Рисунок 5). Подобное действие наблюдалось и при введении блокатора периферических ОР налоксона метиодида (5 мг/кг). Следовательно, инфаркт-лимитирующий эффект U-50,488 реализуется через периферические ОР.
С целью выявления конкретного типа ОР, через который опосредуется эффект U-50,488, применялись селективные блокаторы каждого из типов ОР. Введение селективного антагониста -ОР СТАР (0,1 мг/кг) не влияло на эффект U-50,488. Никаких изменений не было и при использовании блокатора -ОР TIPP() (0,5 мг/кг) (Рисунок 6). В свою очередь инъекция селективного антагониста -ОР нор-биналторфимина (2 мг/кг) устраняла защитный эффект U-50,488 (Рисунок 6). Следовательно, кардиопротекторный эффект U-50,488 был связан с активацией периферических -ОР.
В контрольной группе достоверных изменений ЧСС на протяжении всего эксперимента зафиксировано не было. В группе, которой за 5 мин до реперфузии вводился U-50,488 спустя 30 мин после возобновления коронарного кровотока наблюдалось выраженное снижение ЧСС, которое оставалось низким и в конце эксперимента (Таблица 3). Важно отметить, что при измерении АД наблюдалось достоверное снижение данного показателя, как и ЧСС, на аналогичных промежутках времени (данные не представлены). Следовательно, агонист -ОР U-50,488 оказывает негативное действие на гемодинамические показатели, а именно вызывает брадикардию и гипотензию.
Другой неселективный агонист -ОР ICI-199,441 (0,1 мг/кг) при внутривенном введении за 5 мин до реперфузии также вызывал уменьшение ЗИ/ЗР по сравнению с контролем (Рисунок 7). Предварительное введение как налтрексона (5 мг/кг), так и налоксона метиодида (5 мг/кг) устраняло эффект препарата (Рисунок 7). Это говорит о том, что кардиопротекторный эффект ICI-199,441 также связан с активацией периферических ОР. ЗИ/ЗР %
Изучение рецепторной природы ICI-199,441 показало, что и антагонист -ОР СТАР (0,1 мг/кг), и антагонист -ОР TIPP() (0,5 мг/кг) не влияли на проявление инфаркт-лимитирующего эффекта ICI-199,441. А вот при совместном введении с нор-биналторфимином (2 мг/кг) было обнаружено устранение кардиопротекторного эффекта ICI-199,441 (Рисунок 8). Следовательно, кардиопротекторный эффект ICI-199,441 также связан с активацией -ОР.
В контрольной группе достоверных изменений ЧСС на протяжении всего эксперимента зафиксировано не было. После введения ICI-199,441 уже через 5 мин наблюдалось достоверное снижение ЧСС (Таблица 4). Как и в случае с U-50,488 так и с ICI-199,441 брадикардия сохранялась да конца реперфузии. Кроме того, после применения ICI-199,441 наблюдалось снижение систолического АД (данные не представлены). Следовательно, агонист -ОР ICI-199,441 также способствует развитию брадикардии и гипотензии
При введении агониста 2-ОР GR-89696 (О,1 мг/кг) мы не обнаружили достоверных изменений соотношения ЗИ/ЗР по сравнению с контролем (Рисунок 9). Следовательно, данный препарат не обладает инфаркт-лимитирующем эффектом.
В контрольной группе достоверных изменений ЧСС на протяжении всего эксперимента зафиксировано не было. После введения GR-89696 мы не обнаружили изменений ЧСС по сравнению с контролем (Таблица 5). Данный препарат не влиял и на показатель АД (данные не представлены). В отличии от U-50,488 и ICI-199,441 агонист 2-ОР GR-89696 не вызывал брадикардию и гипотензию. Возможно, это связано с тем, что GR-89696 взаимодействует с 2-ОР, активация которых не влияет на ЧСС и АД.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что активация -ОР экзогенными препаратами повышает толерантность сердца к повреждающему действию реперфузии. Ниши данные согласуются с результатами исследований J.N. Peart и соавт. [124]. Однако в своих экспериментах они использовали агонист ОР U-50,488 в дозе 0,1 мг/кг. В нашей лаборатории не удалось обнаружить кардиопротекторный эффект U-50,488 в дозе 0,1 мг/кг. Стоит отметить, что при введении U-50,488 через 10 с после начала реперфузии эффект препарата не проявлялся [124]. Предварительное введение блокатора -ОР нор биналторфимина устраняло эффект названного опиоида [124], что подтверждает наши результаты. Можно сделать вывод, что важна не только дозировка препарата, но и время введения. Следует отметить, что коллатеральный кровоток в ишемической зоне никогда не падает до нулевых значений и может достигать 17% от исходного значения [162], а по другим данным - 12,6% [132], 1% [81]. Возможно, именно поэтому введение U-50,488 после возобновления коронарного кровотока не оказывает никакого эффекта, т.к. препарат не успевает накопится в области риска в достаточном количестве, чтобы активировать рецепторы в миокарде до начала реперфузии. В экспериментах на изолированном сердце также было показано, что 10 мин перфузия сердца раствором содержащий U 50,488 оказывает инфаркт-лимитирующий эффект [124]. Следовательно, действие U-50,488 связано непосредственно с активацией ОР, расположенных в сердце.
В отличие от U-50,488 другой агонист -ОР ICI-199,441 в дозе 0,1 мг/кг оказывал выраженный кардиопротекторный эффект. Стоит отметить что данный эффект является вполне закономерным, т.к. доказано, что сродство у ICI-199,441 к -ОР в 14 раз выше чем у U-50,488 [40].
Таким образом, установлено, что агонисты ОР U-50,488 и ICI-199,441 обладают кардиопротекторным эффектом, который обеспечивается за счет активации периферических -ОР. При этом оба препарата вызывают брадикардию и гипотензию.
Роль активных форм кислорода и МРТ-поры в механизме инфаркт-лимитирующего эффекта дельторфина II
При изучении феномена ишемического прекондиционирования было обнаружено, что протеинкиназа С способствует открытию митохондриальных КАТФ-каналов за счет окислительно-восстановительных реакций со свободными радикалами [38]. Установлено, что кардиопротекторное и цитопротекторное действие морфина устраняется предварительным введением «ловушки» свободных радикалов 2-МПГ [37; 125]. В 2005 г. было установлено, что МРТ-пора участвует в механизме кардиопротекторного эффекта опиоидов. В опытах на изолированном сердце было показано, что атрактилозид устраняет инфаркт-лимитирующий эффект агониста k-ОР U-50,488 [31]. Известно, что U-50,488 обладает антиапоптатическим эффектом и снижает уровень каспаз, которые активируются после открытия МРТ-поры, а также данный опиоид усиливает экспрессию антиапоптатического белка Вс1-2 и снижает экспрессию проапоптатического белка Вах [136]. При этом антиапоптатический эффект U-50,488 устранялся введением ингибитора митохондриальных КАТФ-каналов 5-ГД. Поэтому можно предположить, что U-50,488 предотвращал открытие МРТ-поры путем передачи сигнала через КАТФ-канал. Таким образом, имеющиеся данные указывают на то, что КАТФ-каналы и МРТ-пора участвуют в механизме кардиопротекторного эффекта опиоидов.
Для того, чтобы исключить влияние антиоксидантов и атрактилозида на индекс ЗИ/ЗР предварительно проводились эксперименты с каждым препаратом по отдельности. Исследования показали, что ни антиоксидант, ни атрактилозид не оказывал влияния на соотношение ЗИ/ЗР (Рисунок 20).
Размер зоны инфаркта/зона риска при 45-минутной коронароокклюзии и 120-минутной реперфузии у крыс (М ± SD) В контрольной группе отношение ЗИ/ЗР составило 47,6 ± 3,2 %. После введения «ловушки» гидроксильных радикалов 2-меркаптопропионилглицина (2-МПГ) в дозе 20 мг/кг кардиопротекторный эффект дельторфина II сохранялся (Рисунок 21). При использовании другой «ловушки» супероксидных радикалов темпола (30 мг/кг) также не было обнаружено устранения эффекта дельторфина II (Рисунок 21).
Считается, что увеличение концентрации свободных радикалов и ионов Cа2+ в цитозоле митохондрий в первые минуты реперфузии способствует открытию МРТ-поры [84]. Открытие данной поры может привести к гибели кардиомиоцита путем некроза, либо сопровождается выделением проапоптатических веществ, в зависимости от количества погибших митохондрий. Поэтому мы решили выяснить, участвует ли МРТ-пора в кардиопротекторном эффекте дельторфина II. Внутривенное введение атрактилозида (переводит МРТ-пору из закрытого состояния в открытое) в дозе 5 мг/кг устраняло инфаркт-лимитирующий эффект дельторфина II (Рисунок 14). Полученные результаты свидетельствуют о том, что кардиопротекторный эффект дельторфина II связан с МРТ-порой.
Таким образом, представленные данные свидетельствуют, что инфаркт-лимитирующий эффект дельторфина II связан с закрытием МРТ-поры. Активные формы кислорода не участвуют в кардиопротекторном эффекте дельторфина II.