Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Основные физиологические функции глутаматергической системы 12
1.2. Классификация глутаматных рецепторов. Распределение в центральной нервной системе различных подтипов глутаматных рецепторов. 15
1.2.1. NMDA рецепторный комплекс. 16
1.2.2. АМРА рецепторный комплекс 17
1.2.3. Каинатный рецепторный комплекс 18
1.2.4. Метаботропные рецепторы 19
1.3. Исследование противосудорожной активности антагонистов глутаматных рецепторов 22
1.4. Исследование глутаматных рецепторов в механизмах аддикции. 25
1.5. Психомиметический и аддитивный потенциал антагонистов глутаматных рецепторов 30
Глава 2. Методы и материалы исследования 34
2.1. Выбор животных 34
2.2. Методы изучения противосудорожной активности препаратов. 35
2.3. Метод электрической самостимуляции мозга. 38
2.3.1. Операция 38
2.3.2. Электрическая самостимуляция латерального гипоталамуса 40
2.4. Условная реакция предпочтения места 42
2.5. Фармакологические вещества, используемые для анализа 43
2.6. Статистика и рассчт. 48
Результаты собственных исследований 49
Глава 3. Исследование противосудорожной активности препаратов на модели NMDA индуцированных судорог . 49
Глава 4. Исследование противосудорожной активности препаратов на модели никотин индуцированных судорог 58
Глава 5. Исследование подкрепляющих свойств в реакции электрической самостимуляции . 66
Глава 6. Исследование подкрепляющих свойств условной реакции предпочтения места 74
Глава 7. Обсуждение результатов. 78
7.1. Результаты исследования подкрепляющих свойств исследуемых веществ. 78
7.2. Результаты исследования противосудорожных свойств исследуемых веществ . 83
Выводы 86
Практические рекомендации 87
Список терминов 88
Список литературы 89
- Метаботропные рецепторы
- Исследование противосудорожной активности препаратов на модели NMDA индуцированных судорог
- Исследование подкрепляющих свойств в реакции электрической самостимуляции
- Результаты исследования противосудорожных свойств исследуемых веществ
Метаботропные рецепторы
Метаботропные рецепторы глутаматергической системы относятся к С-семейству GPC-рецепторов и реализуют свое действие с помощью систем вторичных мессенджеров (Julio-Pieper М. et all, 2011). Подразделяются на 3 группы - 1-я группа - рецепторы mGluRl, mGluR5; 2-я группа - рецепторы mGluR2, mGluR3, 3-я группа - рецепторы mGluR4, mGluR6, mGluR7, mGluR8. G-белки, ассоциированные с mGluR, представляют собой гетеротримерный комплекс, включающий -, -, и у-субъединицы. При связывании глутамата с mGluR первой группы, G-белок передает сигнал на фермент фосфолипазу С (PLC), которая расщепляет фосфатидилинозитол-4,5-фосфат (PIP2) на диацилглицерол (DAG) и инозитол-1,4,5-трифосфат (IP3). DAG, в свою очередь, активирует протеинкиназу С (PKC), которая осуществляет фосфорилирование других белков; а IP3 служит агонистом IP3-рецепторов, стимулирующих высвобождение кальция/Са2+ из эндоплазматического ретикулума, активируя затем Са2+/кальмодулин-зависимые протеинкиназы, участвующие в фосфорилировании белков. Кроме фосфоинозитольного пути mGlu-рецепторы могут взаимодействовать с Gi/o, Gs, и другие, несвязанные с G-белками сигнальные пути, активируя фосфолипазу D, казеин-киназу 1 , циклин-зависимую протеинкиназу 5, JUN-киназы, МАРК (митоген активируемые протеинкиназы), ERK (внеклеточный рецептор киназы), mTOR (рецептор рапамицина у млекопитающих) (Hermans E. et all., 2001). В целом, активация метаботропных рецепторов 1-го типа асоциируется с усилением активности NMDA и АМРА рецепторов, увеличением их плотности и повышением чувствительности к токсическому действию глутамата (Erichsen J. et all., 2015). Рецепторы 1 группы расположены преимущественно постсинаптически. Распространенность рецепторов mGluR1 повсеместная, однако наибольшая плотность рецепторов mGluR1 наблюдается на адренергических нейронах. Нарушение в деятельности данного типа рецепторов сопровождается нарушением памяти и координации движения (Gieros K. et all., 2012). Рецепторы mGluR5 распространены повсеместно (обонятельная луковица, передние обонятельные ядра, обонятельный бугорок, кора головного мозга, гиппокамп, латеральный септум, стриатум, прилежащие ядра, базальные ганглии, черная субстанция, нейроны полосатого тела, внутриутробно – в клетках Кахаля-Ретциуса) (Shostak Y. et all., 2014) и участвуют в модуляции активности ионотропных рецепторов путем фосфорилирования и поверхностной экспрессии (Chanda S. et all., 2011; Jin D., et all., 2015).
Рецепторы 2-й и 3-й группы преимущественно расположены пресинаптически. Вторая и третья группа метаботропных рецепторов реализует свое действие через ингибирующий Gi-белок. Таким образом, блокируется каскад реакций фосфорилирорования через инактивацию протеинкиназы А (Caudler E. et all., 2014). При этом активность NMDA и АМРА уменьшается, как и снижается их плотность на мембране (Beret-Spillson A. et all., 2007; Crawford J. et all. 2013). Рецепторы mGluR3 имеют высокую гомологию и являются тормозными в глутаматергической системе. Рецепторы mGluR 2 обнаружены в каудальной и ростральной областях коры головного мозга, лимбической системе, ретикулярном ядре таламуса, миндалине, маммилярных телах, лактотропных клетках передней доли гипофиза, пинеалоцитах эпифиза, в ганлиях тройничного нерва (Boye L. et all., 2014). При дефиците данных рецепторов развиваются нарушения, связанные с гибелью нейронов – как при боковом амиотрофическом склерозе, так и от излишней активации – как при шизофрении. 3-я группа метаботропных рецепторов является тормозной по отношению к ионотропным рецепторам и участвует в процессах запоминания, координации движения, длительной потенциации. Рецепторы mGluR4 расположены в центральной нервной системе, а также на языке, Т-хелперах, снижая продукцию иммунными клетками интерлейкина 17 (Davis M. et all., 2012). mGluR6 расположен в сетчатке глаза в биполярных клетках, участвуя в регуляции силы восприятия светового раздражителя (Dhingra A., et all., 2012; Govindaiah G., et all., 2012). Наибольшая плотность mGluR7 наблюдается в нейронах слухового органа и вестибулярного аппарата, нейронах ядра ложа терминальной полоски, буграх четверохолмия, обонятельной луковице, в коре, в миндалевидном теле, в гиппокампе. Эти рецепторы участвуют в выработке условнорефлекторной реакции (Gu Z. et all., 2012). mGluR8 обнаружен в гиппокампе, гипоталамусе, обонятельной луковице, его дефицит влияет на неврологический статус и развитие умственной отсталости.
В настоящее время исследуется множество химических соединений, оказывающих влияние на метаботропные глутаматные рецепторы (Архипов В. и др., 2013; Hovels N. et all., 2012). Известно модулирующее влияние метаботропных рецепторов на долговременную потенциацию (O Riordan K. et all., 2014; Wang Z. et all., 2015). Лиганды метаботропных глутаматных рецепторов оказывают отрицательное влияние на реакцию самовведения метамфетамина (Crawford J. et all., 2013; Schwendt M. et all, 2012), улучшают когнитивные, двигательные и нейродегенеративные нарушения при болезни Паркинсона (Hsieh M. et all, 2012; LePoul E. et all., 2012; Picconi B. et all., 2014; Vallano A., et all., 2013), влияет на хронический стресс (Wagner K. et all., 2015), хронический болевой синдром (Palazzo E. et all., 2014), протекция клеток от ишемических повреждений (Vanzulli L. et all., 2015), другие неврологические заболевания (Jaeske G. et all., 2015; Jazayerri A. et all., 2015).
В функционировании глутаматергической системы важна роль всех составляющих компонентов, в которых основополагающую роль принадлежит NMDA рецепторному комплексу.
Исследование противосудорожной активности препаратов на модели NMDA индуцированных судорог
Первым препаратом для исследования был выбран антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-2181. Использовали 3 дозы — 17,5 мг/кг; 52,5 мг/кг и 170 мг/кг. Был получен выраженный дозозависимый эффект. Признаки отравления мышей в результате введения NMDA прогрессивно снижались с увеличением дозы препарата. При использовании наименьшей дозы 17,5 мг/кг латентный период возникновения судорог увеличился в 4,7 раза, в дозе 52,5 мг/кг — увеличился в 1,5 раза, а в дозе 170 мг/кг судорог не наблюдалось. При использовании минимальной дозы антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-2181 в дозе 17,5 мг/кг судороги возникали в 50 % случаев; в дозе 52,5 мг/кг — 25 % (р 0,05); в дозе 170 мг/кг — 0 % (р 0,05), а в контроле (введение NMDA) — 68,7 % (рис. 14.). Продолжительность судорог составляла 270,0 ± 87,9 сек и 210,0 ± 30,0 сек соответственно (в контроле — 283 ± 33,2 сек) (рис. 15.). В дозах 17,5 и 52,5 мг/кг зафиксированы по одному случаю позы Штрауба (рис. 19.) и последующего летального исхода (рис. 20.). Тремор головы составил 0,75, 0,6 и 0,0 соответственно, а в контроле наблюдали 1,46 балла (рис. 16.); во всех дозах изменения достоверно отличаются от контроля (р 0,05). Двигательная активность составила 2,75; 2,6 и 2,0 балла соответственно, а в контроле — 3,0 балла (рис. 17.). «Дикий бег» был зафиксирован лишь у единичных особей и составил 0,5; 0,4 и 0,0 балла соответственно, а в контроле — 1,56 (рис. 18.); во всех дозах изменения достоверно отличаются от контроля (р 0,05).
По оси ординат – процент судорог, в долях единицы. Введение NMDA в контроле вызывает разнообразные по силе и выраженности признаки отравления, судороги возникают только в 68%. Из графика следуют важные выводы. Процент возникновения судорог по сравнению с контролем не изменился при профилактическом введении препаратов ИЭМ 1791 (100 мг/кг), ИЭМ 1921 (10 мг/кг) и антагониста АМРА рецепторов ИЭМ 1460 (5 мг/кг). Зато имеется четкий дозозависимый эффект для ИЭМ 2181, с заметным снижением в минимальной дозе в 17 мг/кг, статистически значимым снижением в дозе 52,5 мг/кг (р 0,05) и отсутствием каких либо судорог в максимальной дозировке (170 мг/кг) (р 0,05).
Параметр оценивался по продолжительности судорог, если таковые возникали в данной группе. Продолжительность судорожной активности не абсолютный параметр, так как данный параметр оценивался от момента возникновения судорог до момента их прекращения. А прекращение судорог могло происходить как в связи с их прекращением, так и со смертью животного. Так, сокращение продолжительности судорожной активности при применении препарата ИЭМ 1791 (100 мг/кг) связано с тем, что животные умирали после непродолжительных судорог. Применение антагониста NMDAR ИЭМ-1921 сопровождалось увеличением продолжительности судорожной активности (р 0,05) , однако как будет показано ниже летальность в этой группе была значительно ниже.
Тремор головы - характерный признак, возникающий первым после введения NMDA. У интактных животных тремор головы не регистрируется. Характерно для антагониста ИЭМ 2181 дозозависимое статистически значимое снижение (р 0,05), как и при возникновении судорог, в максимальной дозе признак не был выражен вообще. Антагонист NMDAR ИЭМ-2181 достоверно (р 0,05) снижает тремор головы. Другие препараты не влияли на NMDA-индуцированные судороги.
Антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-1921 использовали в дозе 10 мг/кг. Латентный период начала судорог после его введения увеличился в 2 раза — до 759 ± 55,5 сек, а в контроле — до 374,2 ± 30,3 сек. Процент возникновения судорожной активности составил 66,7 %, а в контроле — 68,7 % (рис. 14.). Продолжительность судорог при этом увеличилась в 2 раза и составила 581,8 ± 35,3 сек, в контроле — 283,1 ± 33,2 сек (рис. 15.). Летальность снизилась в 2 раза, составив 26,7 %, в контроле — 43,7 % (рис. 20.). Поза Штрауба наблюдалась в большем проценте случаев — 40 % (в контроле 43,7 %) (рис. 19.), хотя гибель животных наступала не всегда. При изучении других признаков отравления существенных различий не выявлено. Тремор головы составил 1,2 балла, в контроле 1,46 (рис. 16.). Двигательная активность составил 2,7 балла, по сравнению с 3,0 в контроле 3,0 (рис. 17.). «Дикий бег» составил 1,1 балла, в контроле 1,6 (рис. 18.) (р 0,05). В работе мы также использовали другую модель — введение препарата ИЭМ-1921 в большой дозе — 50 мг/кг в/бр, а через 5 мин — NMDA 170 мг/кг в/бр. После введения ИЭМ-1921 развивался тремор головы, высокая двигательная активность, возрастало количество эпизодов «дикого бега» и попытки выпрыгнуть из клетки. Введение NMDA купировало данные проявления, двигательная активность характеризовалась как средняя, судорог не наблюдали.
Для поиска возможного иного механизма действия (Ефремов О. и др., 2007) тестировали на противосудорожную активность антагонист АМРА рецепторов ИЭМ-1460 в дозе 5 мг/кг в/бр. Результаты оказались сходными с контрольной группой. Процент возникновения судорог составил 63,3 % случаев, в контроле 68,7 % (рис. 14.). Латентный период перед возникновением судорожной активности составил 380,1 ± 48,7 сек, в контроле — 374,2 ± 30,3 сек. Продолжительность судорог составила 176,4 ± 35,0 сек, в контроле — 283,1 ± 33,2 сек (рис. 15.). Поза Штрауба и последующий летальный исход фиксировали в 36,0 % случаев, в контроле 68,7 % (рис. 19. и рис. 20.). Тремор головы составил 1,4 балла, в контроле — 1,5 (рис. 16.). Двигательная активность составил 2,9 балла, в контроле — 3,0 балла (рис. 17.). «Дикий бег» составил 1,4 балла, в контроле 1,6 балла (рис. 18.).
Данный признак выражается в том, что животное мечется в исследуемой камере. Является признаком отравления. Наиболее часто появляется непосредственно перед судорогами животного. Сходными с контрольной группой оказались результаты применения антагониста АМРА рецептора ИЭМ-1460 и антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-1791. ИЭМ-1921 несколько достоверно снижал степень выраженности данного признака (р 0,05). ИЭМ-2181 в максимальной дозировке предотвращал отравление, в более низких дозировках также значительно снизили степень проявления признака (р 0,05).
Антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-1791 использовался в одной максимальной дозе — 100 мг/кг. Латентный период начала судорог незначительно снизился до 329,3 ± 48,3 сек, в контроле — 374,2 ± 30,3 сек. Процент возникновения судорожной активности составил 68,8 %, в контроле 68,7 % (рис. 14.). Продолжительность судорог составила 178,1 ± 32,4 сек, в контроле — 283,1 ± 33,2 сек (рис. 15.) (р 0,05). Позу Штрауба наблюдали в 66,7 %, в контроле 43,7 % (рис. 19.). При использовании данного препарата частота летальных исходов составила 66,7 %, что больше, чем в контрольной группе — 43,7 % (рис. 20). Тремора головы составил 1,2 балла, в контроле 1,5 (рис. 16.). Двигательная активность составила 2,6 балла, в контроле 3,0 балла (рис. 17.). «Дикий бег» составил 1,4 балла, в контроле — 1,6 балла (рис. 18.).
Летальный исход наступал после судорог и мышечной экстензии – позы «Штраубе». В контрольной группе летальность составляет 42%, близкие по значению при введении антагониста АМРА ИЭМ 1460. Антагонист NMDA ИЭМ 1921 снизил летальность в 2 раза до 23%. При этом использование антагониста ИЭМ 1791 многократно увеличило количество летальных исходов, коих стало 66,7 %. При этом при введении водорастворимой соли ИЭМ 1791 антагониста NMDA рецепторов ИЭМ 2181 в меньших дозах значимо снижало летальность, отсутствует при введении такой же дозы.
На основе проведенных экспериментов, индуцированной введением NMDA в дозе 170 мг/кг в/бр, можно сделать следующие выводы. Профилактическое применение препарата ИЭМ-2181 в дозе 170 мг/кг полностью купировало все признаки отравления мышей NMDA, в том числе любые судорожные проявления. При профилактическом применении антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-1921 в дозе 10 мг/кг в/бр частота возникновения судорог осталась прежней, в 1,9 раза увеличилось время до наступления судорог, хотя длительность судорог оказалась в 2 раза дольше, чем в контрольной группе. Летальность снизилась в 1,6 раза. Так образом, антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-1921 не показал должного эффекта в купировании судорожной активности. Профилактическое применение антагониста АМРА рецепторов ИЭМ-1460 не влияло на уровень судорожной активности и других признаков отравления. Профилактическое применение антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-1791 в дозе 100 мг/кг в/б показало отсутствие видимых эффектов, частота летальных исходом при этом даже увеличилась.
Исследование подкрепляющих свойств в реакции электрической самостимуляции
Исследования показали, что ИЭМ-1921 и вещество сравнения РСР в дозах 1, 3 и 10 мг/кг статистически значимо повышают частоту нажатия на педаль и снижают порог самостимуляции. Число нажатий педали в камере Скиннера после введения ИЭМ-1921 в дозах 1, 3 и 10 мг/кг повышалось по сравнению с фоновыми значениями на 53,1 ± 5,7 (р 0,05), 166,2 ± 31 (р 0,05) и 113,2 ± 22,7 % (р 0,01) соответственно (табл. 2). РСР в тех же дозах повышал число нажатий на педаль в камере Скиннера на 37,5 ± 3,6, 83,7 ± 10,8 (р 0,05) и 37,9 ± 6,5 % соответственно, то есть в значительно меньшей степени, чем ИЭМ-1921. При исследовании порогов возникновения реакции самостимуляции было показано, что этот показатель снижается после введения ИЭМ-1921 в дозах 1, 3 и 10 мг/кг по сравнению с фоновыми значениями на 15, 46 и 33 % соответственно. После введения РСР в тех же дозах пороги реакции самостимуляции снижались на 22, 19 и 10 % соответственно. Вещество сравнения – высокоаффинный канальный блокатор NMDA МК-801 исследовался в дозе 0,05 мг/кг и показал достоверное увеличение числа нажатий в камере Скиннера на 91,2% (р 0,05), также достоверно снизив пороги возникновения реакции самостимуляции на 48,9% (р 0,05). В опыте также исследовали вещество фенамин. Электрическая самостимуляция латерального гипоталамуса показала незначительное влияние н фенамина. После введения фенамина число нажатий увеличилась на 32,0±7,3%, пороги реакции внутримозгового подкрепления увеличились на 27,2±11,0 %.
Представлены данные по антагонисту NMDA рецепторов ИЭМ-1921 по сравнению с селективным блокатором NMDA рецепторного комплекса РСР в тех же дозах, и веществами сравнения МК-801 и фенамин. Из таблицы видно, что исследуемое вещество ИЭМ-1921 выражено повышает частоту оперантной реакции животного на электрическую самостимуляцию латерального гипоталамуса. Имеет место статистически значимое увеличение числа нажатий на педаль после введения ИЭМ-1921. Результаты исследования показывают значительное увеличение числа нажатий животного на педаль при сравнении с РСР и МК-801. При этом пороги возникновения самостимуляции также значительно снижались.
Для дальнейшего фармакологического анализа использовали антагонист АМРА-рецепторов ИЭМ-1460, который вводили внутрибрюшинно в дозах 1, 3 и 5 мг/кг, вещество сравнения МК-801 в дозе 0,05 мг/кг, вещество сравнения фенамин за 10 мин до изучения самостимуляции (после определения ее фоновых значений). ИЭМ-1460 в исследуемых дозах уменьшал частоту нажатий на педаль при самостимуляции и повышал пороги возникновения реакции внутримозгового подкрепления. Число нажатий педали в камере Скиннера после введения ИЭМ-1460 в дозах 1, 3 и 5 мг/кг снижалось по сравнению с фоновыми значениями и составило 66,8 ± 5,9, 77,7 ± 3,1 и 79,2 ± 2,0 % соответственно от исходного уровня (табл. 3). МК-801 в дозе 0,05 мг/кг, напротив, на 91,2 ± 26,3 % повышал число нажатий педали в камере Скиннера по сравнению с фоновыми значениями (р 0,05). При исследовании порога возникновения реакции самостимуляции было показано, что ИЭМ-1460 в дозах 1, 3 и 5 мг/кг повышал этот показатель на 24,2 ± 11,0; 55,5 ± 24,0 и 1,8 ± 1,0 % соответственно в сравнению с фоновыми значениями. После введения МК-801 в дозе 0,05 мг/кг порог реакции самостимуляции значительно снизился и составил 51,1 ± 9,3 % от исходного значения.
Антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-1791 в дозах 10,30,100 мг/кг не оказал воздействие на электрическую самостимуляцию, в отличие от вещества сравнения – РСР, которое в дозах 1, 3 и 10 мг/кг достоверно повышал частоту и снижал пороги возникновения реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. Число нажатий педали в камере Скиннера после введения ИЭМ-1791 в дозах 10 и 100 мг/кг достоверно не отличается с фоновыми значениями и повышается на 13,5±9,6 и 30,4±22,2% соответственно; в дозе 30 мг/кг составило 92,3±12,3% от исходного уровня (табл. 4). РСР повышал число нажатий на педаль в камере Скиннера на 37,5 ± 3,6; 83,7 ± 10,8 (р 0,05) и 37,9 ± 6,5 % соответственно. При исследовании порогов возникновения реакции самостимуляции видно, что ИЭМ-1791 этот показатель достоверно не меняет.
Представлены данные по антагонисту NMDA рецепторов ИЭМ-1791 по сравнению с селективным блокатором NMDA рецепторного комплекса РСР, и веществами сравнения МК-801 и фенамин. Исследуемое вещество ИЭМ-1791 не оказывает влияния на частоту оперантной реакции животного на электрическую самостимуляцию латерального гипоталамуса.
Вещество ИЭМ-2181 в дозах 17, 52, 170 мг/кг дозозависимо повышает число нажатий в камере Скиннера и снижает пороги возникновения реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. Число нажатий педали в камере Скиннера после введения ИЭМ-2181 в дозах 17, 52, 170 мг/кг повышалось по сравнению с фоновыми значениями на 14,9±16,6; 36,1±23,9 и 97,5±30,3% соответственно (табл. 5). ИЭМ-2181 в дозе 170 мг/кг статистически значимо повышает число нажатий в камере Скиннера – на 97,5±30,3% (р 0,05). Вещество сравнения РСР повышал число нажатий на педаль в камере Скиннера на 37,5 ± 3,6; 83,7 ± 10,8 (р 0,05) и 37,9 ± 6,5 % соответственно При исследовании порогов возникновения реакции самостимуляции было показано, что этот показатель снижается после введения ИЭМ-2181 в дозах 17, 52, 170 мг/кг по сравнению с фоновыми значениями на 23, 18 и 19 % соответственно. После введения РСРа пороги реакции самостимуляции снижались на 22, 19 и 10 % соответственно.
Представлены данные по антагонисту NMDA рецепторов ИЭМ-2181 по сравнению с селективным блокатором NMDA рецепторного комплекса РСР, и веществами сравнения МК-801 и фенамин. Видно, что исследуемое вещество ИЭМ-2181 дозозависимо повышает частоту оперантной реакции животного на электрическую самостимуляцию латерального гипоталамуса. ИЭМ-2181 в дозе 170 мг/кг изменения являются статистически значимыми. Результаты исследования показывают, число нажатий животного на педаль при применение ИЭМ-2181 в максимальной дозировке сравнимо с РСРом и МК-801. При этом пороги возникновения самостимуляции также снижались.
Результаты исследования противосудорожных свойств исследуемых веществ
Выявлено, что признаки отравления мышей в результате введения NMDA в дозе 170 мг/кг характеризуются наличием длительным латентным периодом, продолжительной судорожной активностью, повышенной двигательной активностью, тремором конечностей, наличием летальных исходов. Это согласуется с данными литературы (Руководство по проведению доклинических исследований, 2012). При исследовании фармакологических свойств антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-2181 также был получен выраженный дозозависимый эффект, который заключался в значительном снижении числа возникновения судорог с увеличением дозы препарата, до полного их купирования в дозе 170 мг/кг. Также с увеличением дозы постепенно приходили в норму проявления двигательной активности мышей. Это соответствовало веществу сравнения полиаминовому блокатору NMDA мемантину (Wang C. et all., 2018; Kumamoto T. et all., 2018).
При исследовании фармакологической активности антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-1921 латентный период начала судорог и продолжительность судорог увеличились в 2 раза в отличие от контроля. Летальность снизилась в 2 раза. Уровень «дикого бега» снизился в 1,5 раза в отличие от контроля. При использовании последовательности введения ИЭМ-1921 в большой дозе (50 мг/кг в/бр), а через 5 мин — NMDA (170 мг/кг в/б) показало, что NMDA купировал судорожную активность. Таким образом, ИЭМ-1921 является конкурентным антагонистом NMDA рецепторов, проявляя сходные свойства подобно N-метил-D-аспартату. Это не соответствует веществу сравнения мемантину.
При исследовании фармакологической активности антагониста АМРА рецепторов ИЭМ-1460 результаты оказались сходными с контрольной группой. Таким образом, несмотря на разнонаправленность действия антагонистов глутаматных рецепторов, в данном случае препарат ИЭМ-1460 не проявляет никакой активности в отношении NMDA рецепторов. При исследовании фармакологической активности антагониста NMDA рецепторов ИЭМ-1791 выявлено, что частота судорог не изменилась, но значительно усилилась тяжесть протекания судорог и выросло количество летальных исходов. Это не соответствовало веществу сравнения мемантину.
При исследовании противосудорожной активности, вызванной введением NMDA, нами было показано, что большинство исследованных веществ не обладает противосудорожными свойствами. Исключение составляет антагонист NMDA рецепторов ИЭМ-2181. В результате исследований был получен выраженный противосудорожный эффект, который заключается в полном купировании судорог, вызванных введением NMDA, а также отсутствием каких-либо других проявлений отравления животных.
При введении никотина в дозе 14 мг/кг судороги развивались в 100 % случаев. Это согласуется с данными литературы (Гмиро В. И др., 2008; Rezvani A. et all, 2018). Латентный период возникновения судорог был короткий. Судороги характеризовались продолжительностью в 77,0 ± 12,5 сек, частым возникновением позы Штрауба и отсутствием летальных исходов. Был характерен невысокий уровень тремора головы. Уровень «дикого бега» составил 1 балл. На основе проведенных экспериментов противосудорожной активности, вызванной введение никотина, можно заключить, что применение антагониста АМРА рецепторов ИЭМ-1460 полностью устраняет проявления судорожной активности и в большей степени устраняет признаки отравления никотином. Таким образом, действие антагониста АМРА рецепторов направлено не только на ионотропные глутаматные рецепторы, но и на 34 Н-холинорецепторов (Гмиро В.Е. и др., 2008). ИЭМ-1921 снизил в 2 раза процент возникновения судорог и в 7 раз уменьшил продолжительность судорог. Однако имелись многочисленные побочные эффекты практически у всех животных, которые выражались в полной обездвиженности животных, мыши испытывали затруднение при дыхании, на расстоянии выслушивались шумные влажные хрипы. Антагонист NMDA-рецепторов ИЭМ-1791 увеличил продолжительность судорог, и были зафиксированы многочисленные летальные исходы, частота которых составила 55,6 % животных. ИЭМ-2181 не влиял на проявления судорожной активности, вызванной никотином. Таким образом, установлена противосудорожная активность новых антагонистов NMDA рецепторов в модели судорог у мышей линии СВА, вызванных введением N-метил-D-аспратата (NMDA) и никотина.