Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Состояние и проблемы медикаментозной терапии рака яичников (аналитический обзор) 13
1.1. Особенности течения рака яичников 13
1.2. Распространенность РЯ и проблемы его терапии 14
1.3. Принципы терапии РЯ 16
1.3.1. Вопросы химиотерапии РЯ 16
1.3.2. Современные концепции канцерогенеза 17
1.3.3. Редокс-зависимые процессы в современной концепции канцерогенеза 21
1.4. Методы терапии РЯ и побочные эффекты лекарственных препаратов 27
Глава 2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Дизайн исслeдoвaния 39
2.2. Объект исследования 39
2.3. Схема эксперимента 44
2.4. Забор и подготовка материала для биохимических и цитохимических исследований 45
2.5. Исследование показателей крови 46
2.5.1. Метод определение глутатион-S-трансферазы (метод В.С. Асатиани, 1969). 46
2.5.2. Метод определение активности каталазы (метод А.И. Карпищенко, 2001) 47
2.5.3. Метод определение перекисного окисления липидов (ПОЛ) (метод И.А. Волчегорского и др., 1989) 48
2.5.4. Метод опредение малонового диальдегида (МДА) (метод Л.И. Андреева, 1988) 48
2.5.5. Метод определение окислительной модификации белков (ОМБ) (метод Е.В. Дубининой, 1999) 49
2.5.6. Метод определение супероксиддисмутазы (СОД) (метод M. Nishikimi, 1975) 50
2.6. Определение цитохимических показателей 51
2.6.1. Кислородзависимая цитотоксичность нейтрофилов 51
2.6.2. Оценка активности миелопероксидазы (МПО) (метод И.И. Долгушина, О.В. Бухарина, 2001) 51
2.6.3. Оценка активированных нейтрофилов (НФ) в тесте восстановления нитросинего тетразолия (метод А.И. Карпищенко, 1999) 52
2.6.4. Статистическая обработка 53
Глава 3. Состояние распространения РЯ в Ульяновской области и проблемы лечения больных 55
Глава 4. Особенности влияния циклофосфамида, доксорубицина и цисплатина при внутривенном введении и аутогемохимиотерапии на показатели редокс-статуса крови интактных животных и крыс с асцитной опухолью яичников 63
4.1. Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови интактных животных 63
4.2. Показатели редокс-статуса плазмы крови, эритроцитов и нейтрофилов у крыс с АОЯ 89
4.3. Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови животных с АОЯ 91
Заключение 117
Выводы 124
Практические рекомендации 126
Список сокращений 127
Библиографический список 129
- Методы терапии РЯ и побочные эффекты лекарственных препаратов
- Состояние распространения РЯ в Ульяновской области и проблемы лечения больных
- Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови интактных животных
- Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови животных с АОЯ
Методы терапии РЯ и побочные эффекты лекарственных препаратов
Методы терапии РЯ напрямую зависят от вида опухоли, так и стадии заболевания, терапия подбирается индивидуально и является комплексной. Оперативное вмешательство при раке яичников – один из первостепенных этапов в лечении данной патологии, и от него зависит последующее течение заболевания [67]. Но большую часть, хирургическое лечение сопровождает химиотерапия [93]. Цитотоксическая терапия – главный метод лечения у основного количества больных, так как он задерживает развитие опухоли. Около 30 % больных получают терапию только цитостатиками [170]. Комбинированный вариант при РЯ составляет 72,9 % [37; 119]. Иногда самостоятельное значение имеет применение цитостатиков, например, при рецидивах опухоли или при нерезектабельных ситуациях [46], в большинстве случаев с последующей полихимиотерапией по общепринятым схемам, не менее 6 курсов [84]:
- Схема САР – цисплатин + циклофосфамид + адиапластин;
- Схема СР – циклофосфамид + цисплатин;
- Схема РТ – цисплатин + паклитаксел (или доцетаксел). Наиболее распространенной является схема САР. Побочные проявления комбинированной химиотерапии являются ограничением при лечении РЯ [2; 137]. В своем докладе, А.Ф. Урманчеева указала выявление в 75 % случаев РЯ только на поздних стадиях, что подразумевает обязательное использование химиотерапии. Назначение стандартных противоопухолевых препаратов в режиме адъювантной химиотерапии (АХТ) и/или лечебной полихимиотерапии (ПХТ) является основным этапом лечения больных РЯ, который, согласно общепринятым стандартам, должен следовать за хирургической операцией, за исключением случаев высокодифференцированных опухолей (кроме серозных) на стадии Ia у молодых больных низкого риска, при которых возможны только органосберегающие операции. В течение последних 15 лет схемой выбора при химиотерапевтическом лечении РЯ является комбинация препаратов платины и таксанов [83; 92].
На сегодняшний день важны изменения в существующих схемах терапии для улучшения результатов лечения, минимализация возникновения побочных эффектов за счет интенсификации методов лечения для повышения выживаемости больных с РЯ. Во многих странах мира ушли от комбинированной терапии цисплатин + циклофосфан [93]. При дальнейшем изучении (исследования GOG 132, GOG111) было выявлено преимущество цисплатина и его комбинаций: комбинация цисплатина и паклитаксела дала 67 % результативности, а химиотерапия паклитакселом – только 42 %. Отрезок времени действия лекарственного препарата насчитывал меньше года – 11 месяцев, а при применении цисплатина – 14-16 месяцев.
С девяностых годов XX века при лечении РЯ применяется комбинация препаратов платины и таксанов, что является стандартом лечения (первой линией), при этом реальный положительный эффект наблюдался у 67-84 % пациенток, однако даже без учета хирургического и медикаментозного лечения рецидив выявлялся у 62 % больных [140; 172; 143; 171; 106; 155]. Изучение эффективности комбинации карбоплатина + паклитаксела в сравнении со стандартным цисплатин + паклитаксел продемонстрировало хорошую эффективность при меньшей нефротоксичности и нейротоксичности по сравнению со стандартной схемой терапии. Замена паклитаксела на доцетаксел или пегилированный липосомальный доксорубицин (ПЛД) дала схожие результаты, как и включение третьего цитостатика, увеличив частоту и выраженность токсических проявлений [124; 176; 153; 175; 126].
В настоящее время стандартом первой линии признана терапия РЯ препаратами платины + паклитаксел, при необходимости замена паклитаксела на доцетаксел, ПЛД, доксорубицин или проведение лечения монотерапиейкарбоплатином в дозе AUC 7 [93]. Причем роль доксорубицина – основного компонента «доплатинового» режима в терапии РЯ – не детерминирована: 1) По данныи рандомизированного исследования GOG 52, в группе пациенток получающих химиотерапию по схеме САР ранние рецидивы отмечались у 19 человек из 173, а морфологические признаки – у 45 (26 %); CP применяли 176 пациентам, из них ранние рецидивы отмечались у 30 человек (чаще чем в 1,5 раза в сравнении с первой группой), а морфологические признаки – у 42 (24 %). 2) Обобщение четырех рандомизированных исследований (при участии 1194 больных в метаанализе) доказало, что прибавление доксорубицина к комбинации платинового производного и алкилирующего агента значительно повышает выживаемость [105; 88; 185].
Платиносодержащие режимы включают комбинацию платины с доксорубицином и циклофосфамидом (схема CAP). Комбинированные режимы CP (циcплaтин / циклoфoсфaмид – внутривенно) и CAP (циcплaтин / дoксoрубицин / циклофосфамид – внутривенно) в исследовании GIGOG (с участием 529 больных) показали лучшие результаты выживаемости, однако эти результаты не достигли статистической достоверности, что не позволяет ставить точку в исследовании монорежимов. При сравнении лечения цисплатином, СР и CAP констатировались следующие результаты: цисплатин получали 173 пациента, полная регрессия была достигнута у 17 % (или у 30 женщин); схему CP получала 181 пациентка, регрессия составила 28 % (50 больных); по системе CAP лечились 175 пациенток, полная регрессия наблюдалась у 30 % (или у 52 человек).
Общая эффективность комбинированного режима CAP составила 87 %, тогда как при лечении цисплатином – 67 %, промежуточный результат был получен при комбинированном режимe CP – 76 %. Самая высокая 5-летняя выживаемость – 29 % (50 женщин из 175) наблюдалась при комбинированном режиме CAP, самая низкая – при лечении цисплатином – 16 % (27 женщин из 173), а при режиме CP – 21 % (38 женщин из 181) (GICOG, 1987). Однако обольщаться полученными результатами не стоит, так как препараты вводились в разной дозовой интенсивности. Наибольшая частота объективных эффектов получена при лечении больных с использованием комбинаций на основе препаратов платины (36 %), значит в режимах индукционной полихимиотерапии применение платиновых производных при РЯ обязательно [74; 159; 172; 143; 171; 124; 105].
Цисплатин достаточно эффективный противоопухолевый препарат. Его достоинством является не только снижение общей иммунологической реактивности, но и увеличение иммуногенности самой опухолевой клетки, т.е. она становится «антигеном» и, соответственно, более распознаваемой, а как следствие – усиление реакций организма на ее уничтожение [62].
В основе противоопухолевой активности препарата лежит прямое цитотоксическое действие на опухолевые клетки. Отмечено, что опухолевая ткань более чувствительна к разрушающему действию препарата, чем нормальная. Основной мишенью действия препарата, как и алкилирующих соединений, является ДНК (преимущественное ингибирование синтеза ДНК по сравнению с синтезом РНК и белка). Особенностью цисплатина является связывание с белками крови. В условиях организма этот комплекс не распадается и не оказывает ни цитотоксического, ни токсического действия [62; 111]. Препарат образует сшивки в ДНК, которые наиболее часто представляют собой перекрестные связи между цепями или внутри цепей ДНК. Сшивки платины с ДНК ингибируют ДНК- и РНК-полимеразы, нарушают деление клеток и индуцируют апоптоз. Образование ДНК-аддуктов является главным механизмом действия платиновых препаратов [58]. Цисплатин образует ДНК-аддукты путем координационных связей между атомом платины и двумя основаниями ДНК (преимущественно гуанином), результатом этих реакций является образование плохо репарируемых и длительно существующих внутри- и межнитевых сшивок, что блокирует синтез и последующую репликацию [168; 122].
Отличительной чертой цисплатина является то, что в терапевтических дозировках у здоровых животных данный лекарственный препарат не вызывает существенных изменений кроветворения, а вызываемая им миелосупрессия в большинстве случаев выражена умеренно. Нефро- и нейротоксичность, эметогенные свойства являются главным недостатком первого платинового производного – цисплатина [144]. Нефротоксичность носит накопительное значение, являясь основным токсическим фактором, ограничивающим дозу цисплатина. Она сопровождается повреждением почечных канальцев, но гломерулы не разрушаются, и нефротоксичность имеет обратимый характер при обычных дозах данного лекарственного препарата. Среди побочных эффектов уже с первого часа терапии отмечается тошнота и рвота почти у всех больных.
Рассмотрим побочные действия доксорубицина.
Доксорубицин антибиотик группы антрациклинов, достаточно широко используемый в онкологической практике. Действует данный препарат на раковые клетки по двум различным механизмам: образование свободных радикалов и подавление синтеза нуклеиновых кислот, что способствует гибели клеток. Доксорубицин является интеркалирующим агентом, который встраивается в цепь ДНК между нуклеотидами, блокируя синтез и транскрипцию ДНК. В основе данного механизма действия антибиотика лежит его связывание с нуклеиновыми кислотами посредством специфической интеркаляции плоского антрациклинового ядра с двойной спиралью ДНК.
Антрациклиновое ядро является липофильным, однако насыщенный конец кольцевой системы содержит избыточные гидроксильные группы, образуя гидрофильный центр. Причиной гибели клеток в опухоли являются хромосомные и хроматидные аберрации, которые может индуцировать доксорубицин, проявляющиеся в виде однонитевых разрывов в ДНК, что вызывает хромосомные повреждения в клетках опухоли. При действии доксорубицина происходит изменение структуры и матричных функций молекулы ДНК, результатом чего являются мутации, а в митотическом цикле клеток – появление блоков. По данным мировой литературы, препарат доксорубицин относится к ингибиторам топоизомеразы II типа, соответственно, препарат ингибирует активность фермента топоизомеразы II типа. Это приводит к повреждению геномной ДНК [62; 94]. Когда антрациклиновый антибиотик попадает в клетку, его большая часть концентрируется в ядре [181]. Потеря лигирующей активности топоизомеразы, появление разрывов в цепи ДНК происходит из-за появления тройного комплекса ДНК-антрациклин-топоизомеразы [129].
Состояние распространения РЯ в Ульяновской области и проблемы лечения больных
В структуре онкологической заболеваемости населения Ульяновской области рак яичников (РЯ) занимает сравнительно невысокий удельный вес (рис. 3.1), но, как показал анализ инцидентности за последние годы, в области регистрация первичной заболеваемости не только не снижается, но и имеет тенденцию к нарастанию показателя (рис. 3.2). Об этом свидетельствует и динамика числа ежегодно выписываемых после лечения больных раком яичников (табл. 3.1): нарастание числа пациентов при высоком уровне лиц трудоспособного возраста. В то же время сопоставление показателей стадии рака яичников в 2012 и 2016 гг. в динамике не выявило существенных различий в показателях продвинутого патологического процесса и преобладающего числа больных в стадиях III и IV (рис. 3.3).
Наблюдаемые нами больные при поступлении в стационар подвергались комплексному обследованию, включающему физикальные методы (оценка статуса ECOG); клинический анализ крови; лабораторные методы с оценкой уровня СА-125; эзофагогастродуоденоскопию; колоноскопию; рентгенологическое обследование органов грудной клетки; ультразвуковое исследование, а по показаниям – КТ, МРТ органов малого таза, брюшной полости; сцинтиграфию скелета. Морфологически уточняли характеристику опухоли [41; 67; 68; 133; 183; 162; 146]. После проведенного лечения осуществлялось динамическое обследование по общепринятой схеме.
Большинство пациентов находились на комбинированной терапии (табл. 3.2), т.е. хирургическое лечение сочеталось с химиотерапией.
Характер хирургического лечения определялся стадией болезни, включал полную или оптимальную циторедукцию. Группа обследованных нами больных с РЯ (либо в послеоперационном периоде, либо с первично-генерализованным раком яичников) получала 6 курсов химиотерапии в 1-й день 21-дневного курса.
Химиотерапия проводилась по общепринятым схемам:
- САР цисплатин (50 мг/м) внутривенно + доксорубицин (50 мг/м) внутривенно + циклофосфамид (500-750 мг/м) внутривенно в первый день 21-дневного курса, схема включает 6 курсов;
- паклитаксел (175 мг/м) внутривенно + цисплатин (75 мг/м) внутривенно в первый день 21-дневного курса, схема включает 6 курсов;
- карбоплатин AUC 6-7 внутривенно в первый день 21-дневного курса, схема включает 6 курсов;
- паклитаксел (175 мг/м) внутривенно + карбоплатин AUC 6 внутривенно в первый день 21-дневного курса, схема включает 6 курсов [90; 91].
Лекарственный препарат паклитаксел требовал обязательной премедикации – назначения кортикостероидов (дексаметазон в дозе 20 мг либо внутривенно, либо внутрь за 12 часов и 6 часов до введения данного препарата), антигистаминных препаратов (1 мл 1 % димедрола) и блокаторов Н2-гистаминных рецепторов (ранитидина в дозе 0,05 г внутривенно капельно перед введением цитостатика).
Для оценки эффективности лечения были использованы стандартные критерии [100], а именно:
1. Выживаемость пациенток в течение 5 лет от того времени, как было выявлено заболевание, до летального исхода, независимо от причины – 5-летняя выживаемость.
2. Процент пациенток, у которых не наблюдалось прогрессирование рака яичников от того времени, как было выявлено заболевание, в течение 5 лет, т.е. 5-летняя выживаемость без прогрессии опухоли.
3. Послеоперационные осложнения и послеоперационная летальность. Проведенный анализ показал (рис. 3.4), что из общего числа госпитализированных в онкогинекологическое отделение больных по поводу рака гениталий и находившихся на химиотерапии 2/3 приходится на пациенток, страдающих раком яичников: 631 из 945 курсов (66,7 %). При этом в динамике соответственно увеличению числа поступающих больных растет в последние годы и число проведенных курсов химиотерапии (рис. 3.5).
Несмотря на проводимое интенсивное комбинированное лечение среди больных раком яичников сохраняется высокий уровень летальности (табл. 3.4) и фиксируются невысокие показатели 5-летней выживаемости после проведенного лечения (рис. 3.6).
Следует отметить, что в России в целом наблюдается отставание от показателей стран Европейского союза в эффективности оказания медицинской помощи онкологическим больным. Так, проведенный нами анализ показал, что при более низком показателе общей онкологической заболеваемости в 2014 году имел место более высокий показатель смертности (рис. 3.7).
Как показал проведенный нами анализ (117 пациенток, получавших комбинированное лечение), наиболее частым вариантом побочных реакций при проведении 1-го курса химиотерапии рака яичников была гематологическая токсичность, которая (хотя и в умеренной степени) встречалась у 49,5 % больных в виде лейкопении, у 35,0 % – нейтропении и 33,3 % анемии. При этом лейкопения III степени имела место у 9 из 117 больных (7,69 %), анемия III степени у 6 пациенток (5,12 %), тромбоцитопения у 2 человек (1,70 %).
Со стороны желудочно-кишечного тракта токсичность химиотерапии проявлялась в виде жалоб на тошноту, отсутствие аппетита, наличие рвоты у 26 больных (22,2 %).
Проявления нефротоксичности 1-й степени имели место у 19 больных (16,2 %), 2-й степени – у 4 (3,41%).
Алопеция после завершения всех курсов химиотерапии развилась у 88 из 117 больных (75,2 %), при этом алопеция III степени – у 18 пациенток (15,4 %).
Таким образом, побочные эффекты химиотерапии часто отмечаются при лечении больных раком яичников.
Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови интактных животных
На первом этапе этого раздела эксперимента, мы изучили влияние различных способов введения циклофосфамида на редокс-статус крови интактных животных. При этом нами установлено (табл. 4.1, рис. 4.1) значимое возрастание уровня малонового диальдегида (МДА) на 8-й день после введения препарата как при полихиотерапии (ПХТ), так и при аутогемохимиотерапии (АГХТ), и значимое возрастание шиффовых оснований (ШО) на 3-й и 8-й день после введения с использованием АГХТ. Одновременное снижение при этом активности глутатион-S-трансферазы (ГТ) и повышение активности каталазы на обоих сроках введения предполагает возможность развития оксидативного стресса (ОС). На фоне АГХТ циклофосфамидом также значимо возрастает уровень продуктов окисслительной модификации белков (ОМБ).
При этом уровень МДА, ШО и каталазы значимо возрастает, а активность ГТ значимо снижается на фоне АГХТ по сравнению с ПХТ. Усиление ОМБ, тестируемое при =430 нм и =530 нм, также значимо более выражено на фоне АГХТ.
Далее мы изучили влияние различных способов введения доксорубицина на редокс-статус плазмы крови интактных животных. Как видно из представленных таблицы 4.2 и рисунка 4.2, при использовании обоих способов введения препарата в плазме крови значимо возрастает уровень МДА и при АГХТ доксорубицином также значимо возрастает уровень ШО. Снижение активности ГТ и возрастание каталазной активности имеет место при обоих способах введения. Но при АГХТ активность ГТ восстанавливается до уровня интактных животных на 8-е сутки после введения. Уровень продуктов ОМБ увеличивается при обоих способах введения доксорубицина и сохраняется на 8-е сутки после введения. Но при АГХТ уровень продуктов ОМБ при =346 нм сохраняется в пределах нормы.
Одновременно на фоне АГХТ на 3-й день после введения активность каталазы в 4 раза выше, чем на этом же сроке на фоне ПХТ. Но при использовании АГХТ значимо менее выражено усиление ОМБ, определяемое на всех тестируемых длинах волн на 8-е сутки после введения, чем при ПХТ.
При изучении, эффекты от различных способов введения цисплатина на редокс-статус плазмы крови интактных животных было установлено (табл. 4.3, рис. 4.3) значимое повышение уровня МДА на всех сроках после введения при использовании обоих способов введения. На фоне АГХТ также значимо возрастают и остаются повышенными к 8-му дню после введения уровни КД и ШО. Активность ГТ понижается на 3-й день на фоне ПХТ и на всех сроках после введения препарата при АГХТ. Активность каталазы повышена на всех сроках после ПХТ и АГХТ. Возрастание уровня всех исследуемых продуктов ОМБ на фоне АГХТ имеет место на всех сроках после введения. На фоне ПХТ количество ОМБ, регистрируемых при =430 нм и =530 нм, не изменяется в сравнении с контролем. При этом уровень МДА ниже, а количество ШО выше на фоне ПХТ на всех сроках после введения, чем на фоне АГХТ.
Под влиянием АГХТ более значимо снижена активность ГТ и повышена активность каталазы по сравнению с этими показателями при ПХТ. И, наконец, использование АГХТ характеризуется значимо более высокими показателями ОМБ.
При изучении действия различных способов введения химиопрепаратов в варианте CAP на редокс-статус плазмы крови установлено: значимое повышение уровня МДА имело место на 3-й день после введения методом ПХТ и на всех сроках после введения методом АГХТ (табл. 4.4, рис. 4.4). Из остальных параметров ПОЛ возрастали только показатели КД и ШО на 3-й день после введения методом ПХТ. Активность ГТ была значимо снижена на всех сроках и при обоих способах введения. Активность каталазы была повышена на всех сроках после ПХТ и АГХТ. Сравнительный анализ изучаемых показателей позволил установить, что на фоне АГХТ введение химиопрепаратов по схеме CAP вызывает более значимое возрастание уровня МДА, активности каталазы и показателей ОМБ на всех сроках после введения по сравнению с использованием метода ПХТ.
Следовательно, введение химиопрепаратов, используемых в схеме CAP, на редокс-статус плазмы крови у интактных крыс позволил установить, что использование АГХТ по сравнению с традиционным внутривенным введением повышает уровень МДА, снижает активность ГТ и повышает активность каталазы как при моновведении (за исключением доксорубицина), так и при введении по схеме CAP. Уровень ОМБ также возрастает более выражено при использовании АГХТ. Наименьшее влияние на редокс-статус плазмы крови оказывает доксорубицин при обоих изученных способах введения.
Уровень ОМБ также возрастает более выражено при использовании АГХТ. Наименьшее влияние на редокс-статус плазмы крови оказывает доксорубицин при обоих изученных способах введения.
В этой части эксперимента мы изучили эффекты способов введения циклофосфамида на редокс-статус эритроцитов интактных животных.
Как показали результаты исследования (табл. 4.5, рис. 4.5), имеет место значимое возрастание уровня МДА на фоне традиционного введения циклофосфамида на 3-й день после введения, снижение активности ГТ, каталазы при АГХТ на обоих сроках введения.
На фоне АГХТ по сравнению с показателями на фоне ПХТ на обоих сроках введения значимо снижался уровень МДА, ГТ, каталазы, супероксиддисмутазы (СОД).
Введение доксорубицина значимо повышает уровень МДА на 8-й день после введения и снижение уровня ШО как на фоне ПХТ, так и на фоне АГХТ (табл. 4.6, рис. 4.6). Активность ГТ значимо снижалась на фоне АГХТ, каталазы и СОД.
На фоне ПХТ активность каталазы возрастала, а активность СОД снижалась на обоих сроках после введения. При этом на фоне АГХТ по сравнению с ПХТ значимо ниже, даже чем у интактных животных был уровень МДА, но выше уровни ДК, КД, ШО.
Далее было изучено влияние цисплатина при ПХТ и АГХТ на редокс-статус эритроцитов интактных животных. Установлено значимое повышение уровня МДА при одновременном снижении КД и ШО на фоне АГХТ по сравнению с контролем (табл. 4.7, рис. 4.7).
Активность ГТ, каталазы и СОД была снижена на 3-и сутки после ПХТ и на всех сроках после введения на фоне АГХТ. ОМБ значимо усиливалась на 3-и сутки при лечении и ПХТ, и АГХТ.
Одновременно на фоне АГХТ по сравнению с показателями при ПХТ значимо ниже (ниже уровня контроля) оказывался уровень МДА, КД и ШО, а также активность ГТ на 8-е сутки после введения, каталазы и СОД на обоих сроках после введения.
При изучении влияния химиопрепаратов, вводимых по схеме САР методом ПХТ и АГХТ, на редокс-статус эритроцитов интактных животных установили, что увеличение по сравнению с нормой уровня МДА имело место только на 3-й день после ПХТ; введении АГХТ уровень МДА значимо снижался.
Снижалось также и количество шиффовых оснований на всех сроках и при введении как ПХТ, так и АГХТ. Значимо снижалась активность ГТ на фоне АГХТ, каталазы и СОД на всех сроках при использовании ПХТ и АГХТ. Повышался уровень продуктов ОМБ, регистрируемых при =530 нм, при обоих способах введения (табл. 4.8, рис. 4.8).
Под влиянием АГХТ на обоих сроках после введения значимо ниже по сравнению с ПХТ были показатели ПОЛ, ДК, КД и МДА, активность ГТ и значимо выше активность СОД.
Введение химиопрепаратов, используемых в схеме САР, на редокс-статус эритроцитов интактных крыс позволило установить, что моновведение циклофосфана, доксорубицина и цисплатина и введение по схеме САР значимо повышает уровень МДА при использовании ПХТ и снижает его на фоне АГХТ на обоих сроках после введения. Однако уровень ДК на фоне доксорубицина и схемы САР был выше при использовании АГХТ по сравнению с его уровнем на фоне ПХТ.
Значимо сниженными по сравнению с нормой определялись показатели активности ГТ, каталазы и СОД на фоне моновведения циклофосфамида, доксорубицина и цисплатина и введения по схеме САР при использовании схемы АГХТ. При традиционном способе введения эти показатели сохранялись на уровне нормы при моновведении циклофосфана. Снижение активности ГТ, каталазы и СОД было значимо более выражено на фоне АГХТ по сравнению с ПХТ при моновведении циклофосфана, доксорубицина и цисплатина, за исключением каталазы и введения по схеме САР. Возрастание уровней продуктов ОМБ имело место при обоих способах введения, без значимых различий между ними.
Влияние ПХТ и АГХТ на редокс-статус крови животных с АОЯ
В результате проведенных исследований нами выявлено (табл. 4.16, рис. 4.13) в плазме крови животных с АОЯ значимое увеличение уровня МДА в сравнении с контролем и уровнем до введения циклофосфана на фоне АГХТ на обоих сроках после введения.
Также на фоне АГХТ возрастал уровень ДК на 3-й день и снижался уровень ШО на 8-й день по сравнению с показателями до введения. Активность ГТ была значимо снижена на фоне АГХТ на 3-й и 8-й день после введения. При оценке показателей ОМБ установлено достоверное снижение при =430 нм, по сравнению с уровнем до введения, на фоне АГХТ. При сравнении изученных показателей в зависимости от способа введения отмечено значимое повышение уровня МДА и ДК и понижение уровня КД, ШО и ОМБ при =430 нм на фоне АГХТ.
При изучении влияния различных способов введения доксорубицина на редокс-статус плазмы крови крыс с АОЯ нами установлено (табл. 4.17, рис. 4.14) значимое по сравнению с показателями до введения повышение на фоне АГХТ уровня МДА, ДК, КД и ШО, а также активности каталазы и снижение активности ГТ.
Показатели ОМБ при обоих способах введения не отличались от таковых до введения. По сравнению с внутривенным введением на фоне АГХТ на 8-й день после введения были значимо повышены показатели ПОЛ (МДА, ДК, КД, ШО), активность каталазы и снижена активность ГТ.
В результате проведенных исследований по влиянию цисплатина на редокс-статус плазмы крови крыс с АОЯ нами установлено (табл. 4.18, рис. 4.15) значимое возрастание по сравнению с показателями до введения на фоне АГХТ уровня МДА, ДК, ШО, активности каталазы и снижение активности ГТ и параметров ОМБ при =370 нм и =430 нм.
При сравнении изучаемых параметров в зависимости от способа введения цисплатина отмечено увеличение МДА, ДК, активности каталазы, снижение всех показателей ОМБ и активности ГТ на фоне АГХТ по сравнению с внутривенным введением.
При оценке влияния различных способов введения химиопрепаратов по схеме САР на редокс-статус плазмы крови животных с АОЯ мы установили, что независимо от способа введения, повышается уровень продуктов ПОЛ (МДА, ШО и активность каталазы) по сравнению с показателями до введения (табл. 4.19, рис. 4.16). При этом использование схемы АГХТ приводит к достоверно более выраженному их повышению, чем традиционное внутривенное введение.
Динамика ДК и КД была разнонаправленной. Активность ГТ на фоне АГХТ была снижена по сравнению с активностью до введения и по сравнению с активностью на фоне внутривенного введения химиопрепаратов. Показатели ОМБ при обоих способах введения значимо не отличались от таковых до введения.
Таким образом, редокс-статус сыворотки крови крыс с АОЯ на фоне АГХТ как при моновведении химиопрепаратов, так и при введении по схеме САР, характеризуется в целом более выраженным, чем при традиционном внутривенном введении, повышением уровня МДА и ДК, активности каталазы и снижением активности ГТ по сравнению с показателями до введения.
Анализ данных эксперимента по влиянию различных способов введения циклофосфамида на редокс-статус эритроцитов периферической крови крыс с АОЯ показал (табл. 4.20, рис. 4.17) значимое снижение уровня МДА по сравнению с уровнем до введения как на фоне ПХТ, так и на фоне АГХТ, и снижение в сравнении с контролем на фоне АГХТ. При этом на фоне ПХТ был повышен по сравнению с контролем уровень ДК и снижен уровень ШО.
На фоне АГХТ были снижены по сравнению с контролем и с уровнем до введения показатели КД и ШО. Активность ГТ была снижена как в сравнении с нормой, так и с показателями до введения, а активность каталазы и СОД была снижена по сравнению с нормой, но значимо выше по сравнению с уровнем до введения на всех сроках и при обоих способах введения. Все показатели ОМБ были значимо снижены по сравнению с показателями до введения на всех сроках и при обоих способах введения.
Анализ влияния различных способов введения доксорубицина на редокс-статус эритроцитов периферической крови крыс с АОЯ (табл. 4.21 и рис. 4.18) показал, что уровень МДА значимо снижается на фоне АГХТ, как в сравнении с показателями до введения, так и в сравнении с нормой. Сниженным также оказывается уровень ШО на 3-й день после введения как на фоне ПХТ, так и на фоне АГХТ. Представляет интерес значимо сниженный по сравнению с ПХТ уровень ДК на обоих сроках после введения. Активноть ГТ, резко сниженная при РЯ, продолжала снижаться на фоне ПХТ. Активность каталазы и СОД, сниженная при РЯ по сравнению с нормой, несколько возрастает на фоне химиотерапии. При этом показатели СОД на фоне АГХТ значимо ниже таковых на фоне ПХТ. Показатели ОМБ на всех сроках после введения на фоне ПХТ и на 8-й день на фоне АГХТ значимо ниже таковых до введения, и на 8-й день на фоне АГХТ они даже ниже контрольных.
В результате проведенных исследований по влиянию различных способов введения цисплатина на редокс-статус эритроцитов периферической крови крыс с АОЯ установлено (табл. 4.22, рис. 4.19) снижение уровня МДА на фоне химиотерапии по сравнению с показателями до введения. При этом снижение на фоне АГХТ значимо более выраженное, нежели снижение на фоне ПХТ. Уровень КД, повышенный по сравнению с нормой на фоне ПХТ, был значимо ниже как по сравнению с показателями до введения, так и по сравнению с нормой на фоне АГХТ. Уровень ШО значимо снижался даже по сравнению с нормой на фоне АГХТ.
Активность ГТ, уже сниженная при РЯ, продолжала снижаться на фоне ПХТ и несколько возрастала на фоне АГХТ. Активность каталазы была повышена по сравнению с показателями до введения и на фоне ПХТ достигала контрольных цифр. На фоне АГХТ активность каталазы была значимо ниже контроля, хотя значимо выше, чем до введения. Активность СОД возрастала на фоне химиотерапии. Однако это увеличение было значимо более выражено на фоне ПХТ. Показатели ОМБ на фоне химиотерапии снижались при обоих способах введения.
Мы изучили влияние различных способов введения химиопрепаратов по схеме САР на редокс-статус эритроцитов периферической крови крыс с АОЯ (таблица 4.23 и рисунок 20), на фоне АГХТ значимо снижен уровень МДА как по сравнению с показателями до введения, так и по сравнению с показателями на фоне ПХТ. Активность ГТ, каталазы и СОД снижалась при обоих способах введения как по сравнению с нормой, так и по сравнению с уровнем до введения. Показатели ОМБ были снижены по сравнению с уровнем до введения как на фоне ПХТ, так и на фоне АГХТ. При этом на фоне АГХТ снижение было значимо менее выражено, чем на фоне ПХТ.
Таким образом, анализ показателей редокс-статуса эритроцитов крыс с АОЯ на фоне химиотерапии позволяет констатировать следующее: моновведение циклофосфамида, доксорубицина и цисплатина приводит к снижению показателей ПОЛ – МДА, ДК, КД и ШО по сравнению с уровнем до введения, значимо более выраженным на фоне АГХТ по сравнению с ПХТ. Одновременно при этом возрастает активность каталазы и СОД (увеличение активности СОД значимо более выражено на фоне ПХТ). Активность ГТ снижена по сравнению с уровнем до введения при обоих способах введения. Уровень ОМБ всех исследованных групп также снижен по сравнению с показателями до введения. При этом снижение значимо более выражено на фоне АГХТ.
Использование химиотерапии по схеме САР, по сравнению с показателями до введения, также приводит к снижению уровня МДА и КД, а также параметров ОМБ, наиболее выраженному на фоне АГХТ. Активность ГТ была снижена, а активности каталазы и СОД повышена по сравнению с уровнем до введения.
Далее мы изучили влияние различных способов введения циклофосфана на нейтрофилы крыс с АОЯ. В результате экспериментального исследования было установлено (табл. 4.24, рис. 4.21) значимое по сравнению с нормой, снижение количества нейтрофилов, активных в спонтанном НСТ-тесте на всех сроках при обоих способах введения. При этом снижение на 3-и сутки после введения значимо более выражено на фоне АГХТ.
Активность МПО также была значимо снижена как в сравнении с нормой, так и с уровнем до введения на всех сроках и при обоих способах введения. При этом снижение на 3-и сутки было значимо более выражено на фоне АГХТ по сравнению с показателями на фоне ПХТ.
В результате проведенных исследований влияния различных способов введения доксорубицина на нейтрофилы крыс с АОЯ нами установлено (табл. 4.25, рис. 4.22) значимое увеличение количества Нф, активных в спонтанном НСТ-тесте, по сравнению с уровнем до введения как на фоне ПХТ, так и на фоне АГХТ на обоих сроках после введения. Активность МПО на фоне АГХТ значимо была выше, чем на фоне ПХТ, и не отличалась от показателей в контроле.
Далее проведено изучение влияния различных способов введения цисплатина на нейтрофилы крыс с АОЯ. Анализ полученных данных (табл. 4.26, рис. 4.23) показывает значимое снижение по сравнению с контролем количества нейтрофилов, активных в спонтанном НСТ-тесте на фоне ПХТ и значимое возрастание этого количества, по сравнению с показателями до введения, на фоне АГХТ. При этом количество нейтрофилов на фоне АГХТ было значимо больше, чем на фоне ПХТ. Активность МПО, уже сниженная у животных с АОЯ, продолжала снижаться на фоне введения ЦП при обоих способах введения.