Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 13
1.1 Проблемы и достижения в терапии мочекаменной болезни 13
1.1.1 Почечный камень как объект терапевтических воздействий при мочекаменной болезни 13
1.1.2 Литотрипсия 18
1.1.3 Лекарственные средства в лечении мочекаменной болезни 20
1.2 Средства природного происхождения в лечении мочекаменной болезни 23
1.2.1 Фитопрепараты 23
1.2.2 Минеральные воды 28
1.2.3 Антилитогенные средства разного природного происхождения 30
Глава2 Материал и методы исследования 30
2.1 Схема разработки нового фармакологического средства для лечения мочекаменной болезни 30
2.2 Экспериментальные животные и условия эксперимента 31
2.3 Характеристики объектов исследования 35
2.3.1 Лиофилизат тканей свиных почек 35
2.3.2 Пептидный комплекс из тканей свиных почек 35
2.3.3 Пептиды Leu-Ile-Lys (Лейцин-изолейцин-лизин), Leu-Ile-Lys-Ala (Лейцин-изолейцин-лизин-аланин) и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro (Лейцин-изолейцин-лизин-аланин-пролин) 36
2.3.4 Дозы объектов исследования 37
2.3.4.1 Доза лиофилизата тканей свиных почек 37
2.3.4.2 Доза пептидного комплекса из тканей свиных почек 37
2.3.4.3 Дозы индивидуальных пептидов 38
2.4 Определение биохимических показателей функции почек 38
2.4.1 Определение концентрации креатинина 38
2.4.2 Определение активности лактатдегидрогеназы 39
2.4.3 Определение активности -глутамилтрансферазы 40
2.4.4 Определение активности N-ацетил--D-глюкозаминидазы 41
2.5 Забор биологического материла 42
2.6 Определение параметров оксидативного стресса в почечной ткани 43
2.6.1 Определение концентрации тиобарбитуратреактивных продуктов 43
2.6.2 Определение общей прооксидантной активности 44
2.6.3 Определение активности глутатионпероксидазы 45
2.6.4 Определение активности супероксиддисмутазы 46
2.6.5 Определение активности каталазы 47
2.7 Морфологические исследования 47
2.8 Анализ пептидного и аминокислотного состава 49
2.9 Статистическая обработка результатов 51
Глава 3 Результаты и обсуждение собственных исследований 52
3.1 Влияние лиофилизата тканей свиных почек на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза 52
3.1.1 Влияние лиофилизата тканей свиных почек на биохимические показатели функции почек крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 52
3.1.2 Влияние лиофилизата тканей свиных почек на показатели активности процесса свободнорадикального окисления в почках крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 55
3.1.3 Влияние лиофилизата тканей свиных почек на морфологическую картину экспериментального оксалатного нефролитиаза 57
3.2 Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза 59
3.2.1 Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на биохимические показатели функции почек крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 59
3.2.2 Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на показатели активности процесса свободнорадикального окисления в почках крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 62
3.2.3 Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на морфологическую картину экспериментального оксалатного нефролитиаза 64
3.2.4 Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на активность ядрышковых организаторов нефроцитов крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 69
3.3 Изучение пептидного и аминокислотного состава пептидного комплекса из тканей свиных почек. Моделирование химической структуры индивидуальных пептидов с потенциальной антилитогенной активностью 72
3.4 Влияние пептидов Leu-Ile-Lys (лейцин-изолейцин-лизин), Leu-Ile-Lys-Ala (лейцин-изолейцин-лизин-аланин) и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro (лейцин-изолейцин-лизин-аланин-пролин) на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза 76
3.4.1 Влияние пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на биохимические показатели функции почек крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 76
3.4.2 Влияние пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на активность процесса свободнорадикального окисления в почках крыс при экспериментальном оксалатном нефролитиазе 80
3.4.3 Морфологическое исследование результатов влияние пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза 84
Заключение 93
Выводы 102
Список использованных сокращений 103
Список литературы 104
- Почечный камень как объект терапевтических воздействий при мочекаменной болезни
- Экспериментальные животные и условия эксперимента
- Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на морфологическую картину экспериментального оксалатного нефролитиаза
- Морфологическое исследование результатов влияние пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза
Почечный камень как объект терапевтических воздействий при мочекаменной болезни
Большую сложность в ранней диагностике и лечении МКБ представляет тот факт, что заболевание в большинстве случаев протекает бессимптомно, пока конкремент не становится достаточно крупным, нарушая уродинамику. В этой ситуации возникает необходимость литолиза – разрушения конкремента до мелких фрагментов, способных с мочой выйти из организма.
Методология литолиза и его эффективность во многом определяются биоминеральными свойствами конкремента. Хорошо известно, что основным типом мочевых камней являются оксалатные уролиты [14, 90, 156, 176, 180, 182, 185]. Они имеют наиболее прочную структуру, в связи с чем их литолиз наиболее сложен.
Сегодня не вызывает сомнений, что оксалатный уролит – это сложный органоминеральный агрегат, состоящий из биоминералов оксалата кальция и органической матрицы [34]. Изучение механических и прочностных свойств оксалатного камня показали, что шлифт оксалатного уролита имеет отчетливое радиальное строение, проявляющееся в своеобразных «лучах», исходящих из центра камня (Рисунок 1).
При этом характер зависимости микротвердости от радиальной симметрии у оксалатного камня таков, что наибольшее значение данный показатель имеет в приграничной области, т.е. наибольшее количество минерального компонента сосредоточено в поверхностных слоях камня [34]. Похожие данные были получены и в ряде других исследований [38, 39, 75, 166].
С одной стороны, это хорошо согласуется с общепринятыми сегодня теориями литогенеза, согласно которым камни эволюционируют из органического ядра путем преципитации на нем неорганического материала [11]. В прикладном же аспекте данный факт вносит вклад в понимание устойчивости оксалатного камня к литолитическим воздействиям. Ясно, что разрушить камень, у которого твердость максимальна уже на поверхности, довольно сложно. Здесь уместно добавить, что твердость кальций-оксалатных биоминералов (вевеллит и веделлит) по шкале Мооса находится в диапазоне значений 3-4, т.е. они характеризуются как минералы средней твердости. Для сравнения, среди биоминералов, встречающихся в организме человека, большую твердость имеет только гидроксиапатит и его производные (значение твердости гидроксиапатита по шкале Мооса – 5).
Таким образом, минеральный компонент оксалатного уролита следует признать не самой выгодной мишенью для литолитического воздействия, особенно в контексте фармакологического лечения. Поэтому в последние годы все большее внимание уделяется изучению органической матрицы камня. Естественно, это во многом преследует цель продвинуться в понимании патогенеза нефролитиаза. Но в то же время, эти знания могут определить новый вектор поиска эффективных методов фармакологического литолиза.
Протеомный анализ органической матрицы оксалатных камней, осуществленный в ряде последних исследований, позволяет с определенной долей уверенности говорить о том, что массовая доля «органики» в общей структуре камня в основном варьирует в диапазоне 2-5%, иногда достигая уровня порядка 10% [79, 80]. При этом количество матричных протеинов довольно велико, оно может исчисляться несколькими десятками или даже сотнями.
Одним из наиболее современных и информативных исследований в данном контексте является работа японских ученых 2015 года [110]. Ими был проведен анализ 13 образцов оксалатных камней от разных пациентов. Оказалось, что по минеральному составу 4 камня содержат только вевеллит (кальция оксалата моногидрат), 3 – только веделлит (кальция оксалата дигидрат), 5 – смесь вевеллита и веделлита и 1 – смесь веделлита и гидроксиапатита. В результате протеомного анализа было идентифицировано 65 протеинов (Таблица 1). Идентификационным критерием являлось наличие в структуре протеина как минимум 3-х пептидов, состоящих не менее чем из 5 аминокислот.
При этом интересно, что ни один из идентифицированных протеинов не был обнаружен сразу во всех 13 камнях. Это может означать, что часть из них не участвуют в патогенезе нефролитиаза и, видимо, попали в органическую матрицу случайно. Однако некоторые закономерности были выявлены довольно четко. Так, например, остеопонтин, протромбин и протеин Z были обнаружены вместе во всех вевеллит-содержащих камнях, что хорошо согласуется с известными данными о роли этих веществ в процессе камнеобразования [15]. При этом компонент плазменного амилоида P выявлялся во всех веделлит-содержащих камнях. По всей видимости, существует определенная специфика участия указанных веществ в кристаллизации того и другого типа оксалатных минералов. Наконец, присутствие в матрице таких веществ как кальгранулины A и B и гистон H4 свидетельствует об определенной роли лейкоцитов и моноцитов в развитии нефролитиаза.
Двумя годами ранее группа индийских ученых опубликовала данные, согласно которым в органической матрице оксалатных камней были обнаружены 5 новых протеиновых молекул [58]. Таковыми явились этаноламин-фосфат цитидилтрансфераза, протеин подобный ГТФаза-активируемому Ras, UDP-глюкоза:гикопротеин глюкозилтрансфераза 2, RIMS-связывающий протеин 3A, макрофаг-покрывающий протеин. При этом 2 первых проявляли свойства промоутера кристаллизации, 2 других – ингибитора, а последний мог играть дуалистическую роль в зависимости от условий.
Известны и другие данные, раскрывающие особенности строения органической матрицы оксалатных камней. Так, в одном из исследований было обнаружено 33 уникальных матричных протеина, 90% из которых ранее в составе матрицы никогда не обнаруживались, а 70% из них по своим известным свойствам являются белками воспаления или клеточной защиты [79]. Близкие по своей сути результаты были получены при анализе структуры 25 камней. Оказалось, что органическая матрица содержит сотни протеинов, среди которых превалируют белки, ассоциированные с воспалительным ответом [80].
Как бы то ни было, накапливающийся массив экспериментальных данных позволяет несколько модернизировать и расширить взгляд на роль органической матрицы камней в проблеме нефролитиаза. Учитывая разнообразие ее протеинового состава, потенциальную роль этих белков в развитии и предупреждении нефролитиаза [142], нельзя исключать, что органическая матрица может являться мишенью для литолиза (или предупреждения литогенеза), в том числе и фармакологического характера. В современной литературе даже предложен соответствующий термин: протеомный подход. Логично предположить, что разрушение матрицы (или изменение ее строения и функции) приведет к потере целостности общей структуры микролита, а значит, определит литолитический эффект. Косвенным подтверждением правомочности такой гипотезы могут являться результаты исследований, согласно которым происходит растворение или деградация кристаллов вевеллита в культуре клеток почечных канальцев под влиянием эндолизосом [84]. Поскольку мишенью для действия лизосомальных ферментов может быть только органический субстрат, можно полагать, что полученные результаты были обусловлены ферментированием определенных органических структур, участвующих в формировании биоминералов и их взаимодействию с клетками.
Экспериментальные животные и условия эксперимента
Эксперименты проведены на 194 аутбредных крысах-самцах сток Вистар возрастом 2-3 месяца и массой от 200 до 300 граммов. Животные были выращены в отделении генетики животных и человека Федерального исследовательского центра «Институт цитологии и генетики» Сибирского отделения Российской академии наук (г. Новосибирск). Исследования на крысах проводили согласно Правилам надлежащей лабораторной практики (GLP), утвержденными Приказом Министерства здравоохранения РФ от 01.04.2016 г. №-199н г. и требованиям Директивы 2010/63/EU по охране животных, используемых в научных целях от 22.09.2010 г.
На всем протяжении эксперимента животные находились в индивидуальных метаболических клетках, приспособленных для сбора мочи, в условиях свободного доступа к питью и пище при естественном световом режиме. Все манипуляции с животными, а именно взвешивание, введение объектов исследования, эвтаназия, осуществлялись в интервале времени суток с 9 до 12 часов дня.
Моделирование экспериментального оксалатного нефролитиаза
Оксалатный нефролитиаз моделировался в соответствии с общепринятой «этиленгликолевой моделью» (Рисунок 3). Ее суть заключается в том, что крысы получают в виде питья в свободном доступе 1%-й раствор этиленгликоля (ЭГ). Этиленгликоль в гепатоцитах под влиянием микросомальных ферментов метаболизируется до оксалат-иона, который затем выделяется с мочой, где вступает в реакцию с ионами кальция, образуя нерастворимые кристаллы кальция оксалата, выпадающего в осадок. Считается, что в указанных условиях нефролитиаз развивается к исходу 3-й недели моделирования, приобретая стабильно выраженную форму в период 3-6 недель [10, 12]. Поэтому длительность моделирования патологии составила 6 недель, а объекты исследования вводились с 3 по 6 неделю эксперимента.
Крысы распределялись в соответствии с тремя разделами исследования. Наименование разделов и распределение по группам представлены в таблице 2. Кроме того, на 2-х группах интактных крыс (по 10 особей) определялись показатели оксидативного статуса почек в норме (в таблице не представлено).
В ходе экспериментов в соответствии с дизайном производился сбор суточной мочи и в ней определялись концентрация креатинина и активность маркерных ферментов повреждения почечных тканей [6, 17-19, 35-36]. По завершении шестой недели опыта крысы каждой группы подвергалась эвтаназии под эфирным наркозом, после чего у них хирургическим путем извлекались обе почки для определения уровня оксидативного стресса в почечной ткани и для морфологического исследования структурного состояния почечной ткани, измерения количества и размеров кальциевых депозитов, а также для определения уровня биосинтетической активности нефроцитов.
Результаты измерений подвергались статистической обработке. Проводилось внутригрупповое сравнение зависимых выборок, на основании которого делался вывод о наличии/отсутствии статистически значимых изменений изучаемого показателя относительного его исходного уровня. Также проводилось межгрупповое сравнение независимых выборок, на основе которого делался вывод о наличии/отсутствии статистически значимых изменений изучаемого показателя в сравнении с контрольной группой в каждой серии экспериментов. По совокупности статистических данных делалось заключение о наличии/отсутствии антилитогенного эффекта у изучаемого объекта исследований.
Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на морфологическую картину экспериментального оксалатного нефролитиаза
Морфологическое исследование почек крыс контрольной группы показало наличие признаков, характерных для развития оксалатного нефролитиаза.
Установлено, что при окраске гематоксилином и эозином эпителий канальцев находился в состоянии гиалиново-капельной дистрофии и некробиоза.
Апикальный край клеток разрушен, щеточная кайма не видна. Канальцы при этом выглядели кистозно растянутыми. Клетки нефротелия, выстилающего канальцы, уплощены, атрофичны. Вокруг канальцев определялась выраженная воспалительная лимфо-плазмацитарная инфильтрация. Сосуды полнокровны (Рисунок 9а).
На этом фоне морфологическое исследование почек крыс группы пептидного комплекса из тканей свиных почек показало, что на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, почечная ткань пролеченных животных находилась в состоянии гистологической нормы. Депозитов камней в просветах канальцев не определялось. Апикальный край клеток и щеточная кайма нефроцитов проксимальных канальцев были видны хорошо. Явлений воспаления не определялось (Рисунок 9б). Сосуды были слабо или умеренно полнокровны.
При окрашивании метенамин-серебром в почках крыс контрольной группы была зафиксирована следующая гистологическая картина. Базальные мембраны канальцев утолщены. В цитоплазмах клеток эпителия канальцев в различном количестве по одиночке или группами определялись кристаллы депозитов камней коричневато-черного цвета различной формы и размера. Также были видны крупные образования в просветах канальцев (Рисунок 10а).
Определялось формирование крупных камней из более мелких непосредственно в цитоплазме клеток и выход конкрементов в просвет канальца (Рисунок 10б). Число крупных депозитов в просветах канальцев варьировалось от 1 до 4 и в среднем составило 2,6±0,5 в поле зрения при увеличении 1000. При проведении компьютерной морфометрии площадь депозитов камней составила от 0,95 мкм2 до 41,8 мкм2, в среднем – 11,5±1,7 мкм2.
При гистохимическом окрашивании метенамин-серебром срезов почечных тканей крыс группы пептидного комплекса из тканей свиных почек установлено, что базальные мембраны канальцев содержали единичные очаговые утолщения. В цитоплазмах клеток эпителия канальцев различных отделов нефрона в разном количестве содержалась «пылевидная» зернистость, состоящая из мелких округлых кристаллов депозитов камней коричневато-черного цвета. Крупных депозитов в просветах канальцев не определялось (Рисунок 10в). Площадь депозитов камней в различных типах канальцев почки составила от 0,45 мкм2 до 1,6 мкм2, в среднем – 0,96±0,05 мкм2, что было в 12,1 раза меньше, чем в контрольной группе-2 (p=0,000001).
При более детальном анализе распределения камней в зависимости от их площади выявлено, что в контрольной группе число мелких депозитов площадью от 0,2 мкм2 до 1,45 мкм2 составило 20%, количество депозитов среднего размера площадью от 1,46 мкм2 до 3,0 мкм2 составило 14%, количество крупных депозитов площадью более 3,0 мкм2 и более составило 66%. Гистограмма распределения депозитов камней сдвинута вправо и имеет пик распределения в области площади камней 3,1 мкм2 и более (до 66%), что свидетельствовало об активном камнеобразовании (Рисунок 11).
При более детальном анализе распределения камней в зависимости от их площади в группе пептидного комплекса из тканей свиных почек выявлено, что 100% депозитов камней в канальцах почки в целом имеют площадь от 0,2 мкм2 до 1,45 мкм2, а депозиты с площадью 1,6 мкм2 до более 3 мкм2 отсутствуют, что могло свидетельствовать об отсутствии процесса камнеобразования, либо о крайне низкой активности камнеобразования в данной группе исследования (Рисунок 11).
Морфологическое исследование результатов влияние пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза
Морфологическое исследование почек крыс контрольной группы показало, что при окраске гематоксилином и эозином на участках нефролитиаза эпителий канальцев находился в состоянии гиалиново-капельной дистрофии. Апикальный край клеток местами был разрушен, щеточная кайма местами не видна. Канальцы при этом выглядели кистозно-растянутыми. Клетки нефротелия, выстилающего канальцы, были разрушены, либо уплощены или атрофичны. Вокруг канальцев определялась слабо или умеренно выраженная воспалительная лимфо-плазмацитарная инфильтрация. Отмечались явления нефросклероза. Сосуды находились в состоянии выраженного полнокровия. Фиксировались явления белковой и вакуольной гидропической дистрофии в эпителии канальцев ткани почки (Рисунок 18).
При гистохимическом окрашивании на кальций по методу Косса в канальцах почек крыс контрольной группы отмечали распложенные по одиночке или группами кристаллы депозитов камней коричневато-черного цвета различной формы и размера (Рисунок 19). Число депозитов в просветах канальцев варьировало от 6 до 19 и в среднем составляло 7,9±1,6 в поле зрения при увеличении 1000, при модальном значении 6.
При проведении компьютерной морфометрии площадь депозитов камней составила от 48,8 мкм2 до 789,9 мкм2, в среднем – 298,8±34,2 мкм2. При более детальном анализе распределения камней в зависимости от их площади выявлено, что число депозитов камней площадью от 20 мкм2 до 100 мкм2 составило 16,7%, количество депозитов площадью от 100 мкм2 до 300 мкм2 составило 47,2% и содержание депозитов площадью более 300 мкм2 и более составило 36,1%. Гистограмма распределения депозитов камней имела сдвиг вправо и пик распределения находился в области площади камней от 100 мкм2 до 300 мкм2 (Рисунок 20).
На этом фоне морфологическое исследование почек крыс подопытной группы, в которой вводился пептид Leu-Ile-Lys, показало, что почечная ткань животных в целом находилась в состоянии гистологической нормы. При окраске гематоксилином и эозином и при окраске по Коссу отложений депозитов камней в просветах канальцев не определялось. Апикальный край клеток и щеточная кайма были видны отчетливо. Явлений воспаления и нефросклероза не определялись. Сосуды были слабо или умеренно полнокровны (Рисунок 21 и Рисунок 22).
Морфологическое исследование почек крыс группы тетрапептида Leu-Ile-Lys Ala показало, что сформированных крупных камней в канальцах экспериментальных животных обнаружено не было, но при этом были выявлены явления инкрустации эпителия канальцев солями кальция (Рисунок 23б).
В этих условиях результаты морфологических исследований почек крыс группы пентапептида Leu-Ile-Lys-Ala-Pro позволили вывить совершенно иную гистологическую картину.
При окраске гематоксилином и эозином эпителий канальцев находился в состоянии выраженной гиалиново-капельной дистрофии и некробиоза. Большинство канальцев почки были кистозно растянуты. Клетки нефротелия выглядели уплощенными и атрофичными. Вокруг канальцев определялась выраженная воспалительная лимфо-плазмацитарная инфильтрация. Выявлялись признаки выраженного нефросклероза. Сосуды были в состоянии выраженного полнокровия.
При гистохимическом окрашивании на кальций по методике Косса в почках крыс группы пентапептида Leu-Ile-Lys-Ala-Pro в канальцах выявлялись камни различной формы и размера (Рисунок 24). Число депозитов в просветах канальцев варьировало от 9 до 20 и в среднем составляло 13,1±1,1 в поле зрения при увеличении 1000, при модальном значении 10. При проведении компьютерной морфометрии площадь депозитов камней составила от 291,2 мкм2 до 3122,5 мкм2, в среднем – 968,9±143,1 мкм2 (p=0,00003 – относительно контрольной группы).
При более детальном анализе распределения камней в зависимости от их площади было выявлено, что в данной группе животных число депозитов камней площадью от 30 мкм2 до 100 мкм2 составило 0%, количество депозитов площадью от 100 мкм2 до 300 мкм2 составило 7,4%, а содержание депозитов площадью более 300 мкм2 и более составило 92,6%. Гистограмма распределения депозитов камней была сдвинута вправо и имела пик распределения в области площади камней от 300 мкм2 и более, что свидетельствовало об очень выраженных процессах камнеобразовании, превосходящих по интенсивности контрольную группу (Рисунок 24).
Таким образом, в результате исследования влияния пептидов Leu-Ile-Lys, Leu-Ile-Lys-Ala и Leu-Ile-Lys-Ala-Pro на течение экспериментального оксалатного нефролитиаза установлено, что трипептид Leu-Ile-Lys проявил выраженное антилитогенное лечебное действие.
После его трехнедельного применения происходила нормализация активности ГГТ в моче – одного из основных маркерных ферментов повреждения клеточных мембран нефроцитов. Кроме того, до уровня интактных крыс снижалась концентрация ТБРП в почечной ткани – основного маркера перекисного окисления мембранных фосфолипидов нефроцитов. Кроме того, происходило усиление активности ГПО – главного фермента антиоксидантной защиты почек, нормализация активности СОД и ослабление активности КАТ. В совокупности это свидетельствует о нормализации структуры и функции нефроцитов, а также о подавлении оксидативного стресса в почках крыс с экспериментальной мочекаменной болезнью. Наконец, морфологическое исследование показало полное отсутствие признаков процессов камнеобразования в почках животных, получавших лечение трипептидом Leu-Ile-Lys.
На этом фоне тетрапептид Leu-Ile-Lys-Ala практически не проявил признаков существенной антилитогенной активности. Динамика активности маркерных ферментов в целом не отличалась от таковой в контроле заболевания. Концентрация ТБРП была даже выше, чем в контрольной группе. Отмечалось лишь некоторое усиление ферментной антиоксидантной защиты. Фиксировалась инкрустация эпителия канальцев кальциевыми депозитами. И хотя формирования крупных камней выявлено не было, формирование литогенных процессов установлено.
В отношение пентапетида Leu-Ile-Lys-Ala-Pro оказалось, что он не только не оказывает лечебного эффекта при экспериментальном нефролитиазе, но и значительно усугубляет его течение, что подтверждалось как биохимическими, так и морфологическими признаками.