Активность эноксифола в сочетании с рексодом в условиях редуцированного кровообращения в коже на фоне гипергликемии, осложненной экзогенной гиперхолестеринемией Селецкая Валерия Викторовна

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы. фармакологически активные средства, повышающие жизнеспособность тканей 17

1.1. Общая характеристика препаратов метаболического ипа действия 17

1.2. Антигипоксические и антиоксидантные лекарственные препараты и соединения 21

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 69

Глава 3. Сравнительное исследование гистопротекторного действия Эноксифола, рексода, алпростадила и их сочетаний в условиях редуцированного кровообращения в хвостах и коже спины и передней брюшной стенки крыс 78

3.1. Исследование гистопротекторного действия эноксифола в опытах на хвостах 78

3.2. Сравнительное исследование гистопротекторного действия эноксифола, рексода и их сочетания 80

3.3. Сравнительное исследование дерматопротекторного действия эноксифола, рексода и их сочетания в условиях ишемизированной кожной складки в области спины 82

3.4. Сравнительное исследование дерматопротекторного действия эноксифола, рексода, алпростадила и их сочетаний на КЛ передней брюшной стенки в условиях редуцированного кровообращения (недостаточности артериального кровообращения и венозного стаза) 85

3.5. Исследование дерматопротекторного действия сочетания эноксифола с рексодом в условияхэкспериментального сахарного диабета, осложненного экзогенной гиперхолестеринемией,в опытах на КЛ передней брюшной стенки при частичной артериовенозной недостаточности 92

ГЛАВА 4. Исследование некоторых сторон механизма дерматопротекторного действия эноксифола, рексода и их сочетанного применения 99

4.1. Влияние эноксифола, рексода и их сочетаний на жизнеспособность культивируемых фибробластов и остеобластов крыс в условиях нормоксии, гипоксии и разобщения окислительного фосфорилирования 99

4.1.1. Влияние на пролиферативную активность фиб-робластов 99

4.1.2. Влияние на пролиферативную активность остеобластов 103

4.2. Влияние эноксифола на острое воспаление 107

4.3. Исследование противоязвенной активности эноксифола, рексода и их сочетания в условиях стероидно-этанолового повреждения слизистой оболочки желудка крыс 109

4.4. Исследование влияния эноксифола, рексода и их сочетания на показатели интенсивности некротического процесса, антиоксидантной защиты и энергетического обеспечения в условиях моделированной кожной складки в области спины крыс 112

4.4.1. Влияние на показатели интенсивности некротического процесса при ишемии кожи 112

4.4.2. Влияние на метаболические процессы в ишемизированном кожном лоскуте 117

Заключение 132

Выводы 136

Литература

• Антигипоксические и антиоксидантные лекарственные препараты и соединения
• Сравнительное исследование дерматопротекторного действия эноксифола, рексода и их сочетания в условиях ишемизированной кожной складки в области спины
• Исследование дерматопротекторного действия сочетания эноксифола с рексодом в условияхэкспериментального сахарного диабета, осложненного экзогенной гиперхолестеринемией,в опытах на КЛ передней брюшной стенки при частичной артериовенозной недостаточности
• Исследование противоязвенной активности эноксифола, рексода и их сочетания в условиях стероидно-этанолового повреждения слизистой оболочки желудка крыс

Введение к работе

Актуальность избранной темы. Сахарный диабет (СД), как одно из весьма тяжелых социально значимых заболеваний, нередко влечет за собой нарушения кровообращения в различных органах и тканях, включая кожу, индуцируя в них ишемические проявления, а иногда и некротические изменения (И.И. Дедов и соавт., 2002; М.И. Балаболкин и соавт., 2005; Дж.А. Колуэлл, 2010; И.И. Дедов, М.В. Шестакова, 2011, 2016, 2016а; А.Ю. Майоров, Е.В. Суркова, 2011; А.С. Аметов, 2015; В.М. Бенсман, 2015; D.M. Nathan et al., 2006, 2008, 2009; A.J. Boulton et al., 2013; C. Li et al., 2013).

Нарушения углеводного, белкового и липидного обменов, возникающие при СД, влекут за собой накопление в организме недоокисленных продуктов, подавление энергопродукции в клетках и, как следствие, нередко приводят к органным и системным поражениям (А.Ю. Майоров и соавт., 2007; М.В. Ше-стакова и соавт., 2007; И.Н. Тюренков и др., 2015; И.И. Дедов, М.В. Шестакова, 2016; H.W. Rodbard et al., 2009; P.S. Sun et al., 2013; A.I. Vinik et al., 2013; R. Seides, 2014).

Имеющийся к настоящему времени арсенал противодиабетических лекарственных средств (ЛС) не всегда удовлетворяет запросам практического здравоохранения (Кроненберг Генри М. и соавт., 2010; А.С. Аметов, 2015; И.И. Дедов, М.В. Шестакова, 2016а; World Health Organization, 2011; H. Goldenstein et al., 2013). Это связано с тем, что многие препараты соответствующей направленности действия могут вызывать различные побочные явления: аллергические реакции, индивидуальную непереносимость, гипогликемию, а иногда являются и малоэффективными. Продолжает оставаться актуальным создание новых ЛС и их сочетаний, которые обладали бы выраженными сахаро- и холесте-ринснижающими свойствами и не проявляли существенных побочных явлений, включающих поражения кожи, в частности, диабетической стопы (П.А. Гален-ко-Ярошевский, В.В. Гацура, 2009, 2011; П.Д. Шабанов и соавт., 2010; В.К. Леонтьев и соавт., 2012, В.М. Бенсман, 2015).

Степень разработанности темы. Большого внимания в отмеченном плане заслуживают соединение с лабораторным шифром РУ-185¹ [(дигидробро-мид 9-(2-диэтиламиноэтил)-2(3,4-диоксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола)], получившее название эноксифол, и отечественный препарат рексод, представляющий собой рекомбинантную супероксиддисмутазу (СОД) человека.

Показано, что эноксифол обладает противоишемическими и антиокси-дантными свойствами (А.А. Спасов и соавт., 2003, 2003а, 2006, 2007), увеличивает объемную скорость мозгового кровотока и повышает функциональную устойчивость системы мозгового кровообращения к острой гипотензии (А.А. Спасов и соавт., 2006).

Эноксифол проявляет нормализующее влияние на нарушения гемореоло-

¹ Синтезировано в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета ведущим научным сотрудником канд. хим. наук В.А. Анисимовой под руководством академика РАН В.И. Минкина.

гических показателей вязкости крови и агрегации форменных элементов (по последнему показателю более значим, чем пентоксифиллин), снижает концентрацию глюкозы, молочной и пировиноградной кислот, уменьшает накопление малонового диальдегида в крови (В.А. Косолапов и соавт., 2007).

Т.Н. Хроповой (2004) установлено, что эноксифол в опытах на различных видах животных (мышах, крысах) способен вызывать дозозависимое повышение выживаемости кожного лоскута (КЛ), а также кератиноцитов кожи, находящихся как в интактных условиях, так и при воспалении, вызванном формалином. При моделировании парциальной ишемии кожной складки (КС) у крыс эноксифол обладает (согласно данным электронномикроскопических исследований) выраженным защитным действием в отношении микроциркуляторных расстройств и проницаемости стенок капилляров. Выявлено, что механизм дерматопротекторного действия (ДПД) эноксифола может быть обусловлен способностью его активно вмешиваться в процессы активации гликолиза и дыхательной цепи, метаболизм арахидоновой кислоты, синтез и распад белков и нуклеиновых кислот и связанную с этим активность лизосомальных ферментов.

Препараты СОД, в частности рексод (рекомбинантная СОД человека), уменьшают воспалительные и некротические изменения в коже; защищают её от действия ультрафиолетовых лучей, химических раздражителей, высокоэффективны при ожогах; купируют аллергические реакции (В.В. Абрамченко, 2001; А.В. Стефанов и соавт., 2004; Б.А. Парамонов и соавт., 2005, 2007; С.П. Лысенков и соавт., 2006; В.В. Педдер и соавт., 2012, 2012а; F. Campana, 2004).

Исходя из вышеизложенного, представлялось целесообразным исследовать протекторные свойства эноксифола в сочетании с рексодом при редуцированном кровообращении в коже на фоне гипергликемии, осложненной экзогенной гиперхолестеринемией (ЭГХ).

Цель работы. Повысить выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормо- и гипергликемии и экзогенной гиперхоле-стеринемии путем применения сочетания эноксифола с рексодом; провести углубленное доклиническое изучение и разработать научно-практические рекомендации по его использованию.

Основные задачи исследования.

1. Изучить гистопротекторное действие сочетания эноксифола с рексодом в условиях ишемии тканей хвоста и кожи в области спины крыс при одно- и многократном внутривенном введениях.

2. Исследовать дерматопротекторное действие сочетаний эноксифола с рексодом и эноксифола с алпростадилом в условиях недостаточности артериального кровообращения и венозного стаза кожного лоскута передней брюшной стенки крыс при одно- и многократном внутривенном введениях.

3. Изучить дерматопротекторное действие сочетания эноксифола с рексо-дом в опытах на кожном лоскуте передней брюшной стенки крыс в условиях его артериовенозной недостаточности на фоне экспериментального (аллоксано-вого) сахарного диабета, осложненного экзогенной гиперхолестеринемией.

4. Исследовать влияние эноксифола, рексода и их сочетаний на жизне
способность культивируемых фибро- и остеобластов крыс в условиях нор-

моксии, гипоксии и разобщения окислительного фосфорилирования.

5. Исследовать противовоспалительное действие эноксифола, а также ин-
дометацина и пироксикама, взятых в качестве референтных препаратов.

6. Провести сравнительные исследования противоязвенной активности
сочетания эноксифола с рексодом, эноксифола, рексода и облепихового масла в
условиях стероидно-этаноловых язв желудка крыс.

7. Изучить молекулярные механизмы дерматопротекторного действия со
четания эноксифола с рексодом, а также эноксифола и рексода, взятых в каче
стве референтных препаратов: влияние на показатели энергетического обеспе
чения, антиоксидантной системы, углеводного и липидного обменов у крыс.

Научная новизна исследования. В представленной работе впервые:

обосновано гистопротекторное действие сочетания эноксифола с рексо-дом – способность повышать выживаемость тканей (кожи) в условиях редуцированного кровообращения;

показано, что композиция эноксифол + рексод при парциальной ишемии кожи, моделированной в области хвоста, спины и передней брюшной стенки крыс на фоне нормо- и гипергликемии, индуцированной экспериментальным (аллоксановым) СД, осложненным ЭГХ, оказывает ДПД, которое может быть обусловлено активизацией энергетических процессов и повышением резервных возможностей системы АОЗ;

установлено, что сочетание эноксифола с алпростадилом по способности повышать выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения превосходит алпростадил, используемый отдельно;

выявлено, что эноксифол обладает противовоспалительным действием при отеках, индуцированных каррагенином, гистамином, серотонином и полным адъювантом Фрейнда (ПАФ), однако по антифлогогенной активности уступает индометацину и пироксикаму;

показано, что в условиях стероидно-этанолового повреждения слизистой оболочки желудка сочетание эноксифола с рексодом по противоязвенному действию значительно превосходит эноксифол, рексод и облепиховое масло, взятые для сравнения.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты обосновывают целесообразность клинического изучения:

- сочетаний эноксифол + рексод и эноксифол + алпростадил в качестве
дерматопротекторных средств при редуцированном кровообращении в коже,
вызванном травматическими повреждениями и СД;

сочетания эноксифола с рексодом при язвенных поражениях желудка;

эноксифола в качестве противовоспалительного средства.

Результаты изучения дерматопротекторной активности (ДПА) и противоязвенной активности сочетаний эноксифола с рексодом и алпростадилом, противовоспалительного действия эноксифола включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии КубГМУ, Ростовского и Волгоградского государственных медицинских университетов.

Сочетания эноксифол + рексод и эноксифол + алпростадил могут быть использованы (после получения разрешения Федеральной службы по надзору в

сфере здравоохранения и социального развития) для лечения пациентов с ише-мическими поражениями кожи при нормогликемии и СД, осложненном атеросклерозом.

Методология и методы исследования. Работа представляет собой экспериментальное исследование дерматопротекторной активности эноксифола в сочетании с рексодом при гипергликемии с ЭГХ. Экспериментальная часть работы, обработка и анализ результатов исследования выполнены в соответствии с разработанным автором дизайном. При этом были использованы фармакологические, цитологические, биохимические и статистические методы исследования.

Положения, выносимые на защиту:

4. Сочетание эноксифола с рексодом в условиях избирательной окклюзии хвостовых сосудов крыс усиливает гистопротекторное действие эноксифола.

5. При ишемии кожи, индуцированной прошиванием КС в области спины крыс, сочетание эноксифола с рексодом при однократном и, в большей мере, многократном (в течение 7 дней) внутривенном (в/в) введениях обладает более выраженным ДПД, чем эноксифол и рексод, взятые отдельно.

6. В условиях недостаточности артериального кровообращения и венозного стаза КЛ передней брюшной стенки крыс, вызванных окклюзией чревных артерии и вены, эноксифол, рексод, алпростадил и их сочетания по ДПА как при однократном, так и многократном (в течение 7 дней) в/в введениях могут быть расположены в следующий убывающий ряд: эноксифол + алпростадил > алпростадил > эноксифол + рексод > эноксифол > рексод.

7. При многократном (в течение 14 дней) в/в введении сочетания эноксифола с рексодом крысам с экспериментальным СД, осложненным ЭГХ, ДПД (на КЛ передней брюшной стенки) более выражен, чем при использовании этого сочетания в условиях нормогликемии. При этом сочетание эноксифола с рексодом снижает уровень глюкозы в крови как в условиях нормогликемии, так и на фоне экспериментального СД и ЭГХ; вызывает снижение содержания общего холестерина (ОХ), триглицеридов, -липопротеидов (Р-ЛП) и повышение уровня липопротеидов высокой плотности (ЛПВП); не оказывает значимого влияния на показатели липидов при нормогликемии.

8. В условиях нормо- и гипоксии, вызванной натрия цианидом (NaCN), сочетания эноксифола с рексодом (0,01 + 0,0001 и 0,001 + 0,0005 мг/мл соответственно) повышают жизнеспособность культивируемых ОБ.

9. При разобщении окислительного фосфорилирования, индуцированного 2,4-динитрофенолом (ДНФ), эноксифол, рексод и их сочетания (0,01 + 0,0001 0,001 + 0,0005 и 0,01 + 0,001 мг/мл соответственно) повышают жизнеспособность культивируемых ФБ и ОБ.

10. Эноксифол оказывает противовоспалительное действие при отеках, вызванных каррагенином, гистамином, серотонином и ПАФ. Механизм антифло-гогенного действия эноксифола может быть обусловлен ингибирующим влиянием на простагландиновую фазу экссудации и стадию метаболизма арахидо-новой кислоты, реализующуюся через 5-липооксигеназный путь.

11. При стероидных язвах желудка у крыс эноксифол, рексод и особенно

их сочетание обладают выраженным противоязвенным действием, при этом по активности эноксифол несколько уступает облепиховому маслу; сочетание эноксифола с рексодом значительно превосходит как эноксифол и рексод, взятые отдельно, так и облепиховое масло.

9. В условиях ишемии кожи, вызванной прошиванием КС в области спи
ны крыс, эноксифол активизирует процессы энергетического обмена посред
ством стимуляции как компонентов дыхательной цепи (по литературным дан
ным), так и гликолиза. Рексод способствует стимуляции аэробных и снижению
анаэробных процессов. Сочетание эноксифола с рексодом вызывает снижение в
крови активности АлАТ и АсАТ, ЛДГ, способствует нормализации гидролити
ческой функции лизосом в клеточных элементах кожи; оказывает коррегирую-
щее влияние на нарушение метаболических процессов, что позитивно сказыва
ется на энергетических процессах; проявляет синергический эффект.

10. При прооксидантной нагрузке, вызванной ишемией кожи (вследствие
прошивания КС), эноксифол оказывает активизирующее действие на АОС. Рек-
сод повышает потенциал АОС и блокирует реакции свободнорадикального
окисления (СРО). Сочетание эноксифола с рексодом, в отличие от индивиду
ального действия последнего, в большей степени влияет на процессы активных
форм кислорода, что проявляется снижением уровня О₂^- в коже; понижает по
вышенную лизосомальную активность.

Степень достоверности и апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на расширенных заседаниях (18.04.2011 г., 16.03.2012 г., 17.05.2013 г. и 10.04.2015г.) Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов с приглашением представителей кафедр фармакологии, клинической фармакологии и функциональной диагностики ФПК и ППС, общей и клинической патофизиологии, фундаментальной и клинической биохимии, хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, общей хирургии, факультетской хирургии с курсом анестезиологии и реаниматологии, кафедры хирургии педиатрического и стоматологического факультетов, мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф, оперативной хирургии и топографической анатомии, ортопедии, травматологии и военно-полевой хирургии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России, органической химии Кубанского государственного технологического университета и Краснодарского филиала ФГБУ "МНТК "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова" Минздрава России, а также на конгрессе "Человек и лекарство. Краснодар – 2008" (16 – 18 октября 2008 г., г. Краснодар) и на первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых "Проблемы разработки новых лекарственных средств" (3 – 5 июня 2013 г., ФГБУ "НИИ фармакологии им. В.В. Закусова" РАМН, г. Москва).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ, из них в журналах, рекомендуемых ВАК, – 2. В материалах диссертации содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, проведении анализа отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, оценке и обобщении полученных

результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведены эксперименты на крысах, аналитическая и статистическая обработка материала, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задачи, их экспериментально-теоретической и лабораторной реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и тезисах. Доля автора в совместных публикациях составила 70 – 90%.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 184 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2 глав с описанием результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографии, включающей 345 источников на русском и 58 – на иностранных языках.

Работа содержит 23 рисунка и 20 таблиц.

Антигипоксические и антиоксидантные лекарственные препараты и соединения

На сегодняшний день одной из актуальных задач современной фармакологии является поиск и создание высокоактивных ЛС, повышающих жизнеспособность тканей (П.А. Галенко-Ярошевский, В.В. Гацура, 2000; П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2001, 2014; А.В. Тегай, 2004; А.В. Зеленская, П.А. Галенко-Ярошевский, 2013; В.М. Бенсман, 2015; C.B. Сuono et al., 1998; E.F. Ritter et al., 1998; P.J. Taub et al., 1998; S.C. Um et al., 1998; G. Willemart et al., 1998; M.L. Genova et al., 1999; Y. Kiyoshige, 1999; E. Komorowskaimek et al., 1999; D.D. Lozano et al., 1999; M.A. Rashid et al., 1999; U.P. Neumann et al., 2000). К средствам метаболической терапии относят витаминные, гормональные, ферментные препараты. Вместе с тем существует целый ряд других соединений, подобных биологически активным веществам, которые влияют на обмен веществ в организме. Особое место данные препараты занимают в кардиологии, неврологии, гепатологии (И.Ф. Беленичев и соавт., 2004; П.М. Васильев и соавт., 2005; П.Р. Камчатнов, А.В. Чугунов, 2005; Е.А. Ушакова, 2005; С.Ф. Багненко и соавт., 2011; В.П. Галенко-Ярошевский и соавт., 2011; П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2014; В.Г. Кукес и соавт., 2013; А.А. Спасов и соавт., 2013, 2015).

Известно, что продукты метаболизма при ишемии, а именно наиболее активные их формы – СР и перекиси вызывают необратимые нарушения структуры клеток (П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2001, 2014; Л.А. Фаустов, 2009; С.А. Шахмарданова, П.А. Галенко-Ярошевский, 2015; И.И. Дедов, М.В. Шестакова, 2016).

К настоящему времени накопилось немало сведений о веществах и препаратах метаболического типа действия (ПМТД), активизирующих адаптацию к действию повреждающих факторов и обладающих способностью восстанавливать и поддерживать основные параметры гомеостаза (П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2001, 2014; Л.Д. Лукьянова, 2002; М.М. Танашян и соавт., 2005, 2013; И.А. Мазур и соавт., 2007; Л.А. Фаустов, 2009; П.Д. Шабанов и соавт., 2010; А.А. Спасов и соавт., 2013, 2015; Д.В. Сосин и соавт., 2015). Следует отметить, что большинство из препаратов типа метаболитов обладают большой широтой терапевтического действия (ШТД) и низкой токсичностью, повышают адаптационные возможности организма, включая компенсаторные пути поддержания гомеостаза.

Классифицируя ЛС этого типа действия, следует подразделять их на средства регуляции метаболизма и препараты, идентичные или близкие по структуре к биосубстратам – постоянным участникам обмена веществ. Регуляторы метаболизма реализуют свой эффект через посредников. Вторая группа средств, влияющих на энергетический и пластический обмен в мембранных структурах, цитоплазме и органоидах клетки на молекулярном уровне, может быть обозначена как метаболиты и их аналоги. К ним относятся продукты метаболизма, являющиеся субстратами энергетического обмена и синтеза структурных элементов клетки или регуляторами этих процессов. Под метаболитами понимают промежуточные продукты обмена веществ и кофакторы ферментов. Конечные продукты обмена веществ и энзимы, катализирующие реакции, в строгом смысле не относятся к этой категории ЛС. По практическому назначению можно выделить три основных направления применения метаболитов: - средства заместительной терапии (введение биосубстрата при его дефиците); - средства регуляции (стимуляции или торможения) метаболизма, в том числе при наследственных нарушениях обмена веществ (галактоземия, фенилкетонурия и др.); - применение метаболитов для избирательной доставки активного компонента препарата (кондукторная функция), модифицирования его фармококинетики или снижения токсичности. Заместительная терапия восполняет метаболиты, необходимые для энергетического и пластического обмена клетки. Так, при нарушениях биоэнергетики миокарда выявлен положительный эффект субстратов гликолиза (фруктозо-1,6-дифосфат, фосфоенолпируват, гексозофосфат и др.), цикла Кребса (сукцинат, малат, а-кетоглутарат) (Л.А. Фаустов, 2009; П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2014), креатинфосфата (КФ) (В.А. Сакс и соавт., 1989), глутаминовой и аспаргиновой аминокислот и других препаратов типа метаболитов (Н.А. Горчакова, 1990; П.А. Галенко-Ярошевский, В.В. Гацура, 2000; П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2014).

В метаболической терапии широко используют глутаминовую и аспарагиновую аминокислоты, метионин, триптофан и гистидин.

Известен опыт применения в качестве пластического субстрата пуриновых и пиримидиновых оснований, стимуляторов и предшественников синтеза нуклеиновых кислот (фолиевая кислота, цианокобаламин) и средств энергообеспечения синтеза (АТФ, ГТФ, УТФ, КФ) (Ф.З. Меерсон и соавт., 1994) для обеспечения синтеза нуклеиновых кислот и сократительных белков миокарда.

К средствам заместительной терапии относят коферменты. Кофакторы ферментов имеют две функциональные группы - собственно каталитическую и ответственную за связывание с белком фермента. По химической принадлежности коферменты подразделяются на три основные группы (М.Я. Карпейский, А.Е. Браунштейн, 1973): - производные гетероциклического ряда (тетрагидрофолиевая кислота, нуклеозидфосфаты и их производные - НАД, НАДФ, ФАД, ФМН, Ко А и др.); - производные ароматической структуры - убихиноны; - производные алифатического ряда - липоевая кислота (Р.М. Фардиева и соавт., 2013; D. Ziegler et al, 2011), глуатион и др.

Сравнительное исследование дерматопротекторного действия эноксифола, рексода и их сочетания в условиях ишемизированной кожной складки в области спины

Этоксидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридина малат) в условиях ишемии миокарда оказывает стабилизирующее действие на мембраны кардиомиоцитов, уменьшает выраженность тканевой гипоксии, увеличивает содержание АТФ, снижает содержание продуктов ПОЛ (В.Г. Кукес и соавт., 2014). Препарат рекомендован к применению при ИБС (в составе комплексной терапии), а также при комплексной терапии ишемического инсульта, дисциркуляторной энцефалопатии, лгких и умеренных когнитивных расстройствах (М.Д. Машковский, 2010; В.В. Архипов, А.С. Кузьменко, 2013; Л.Н. Сернов, 2013). Кроме того, показано, что этоксидол проявляет лечебное действие при эндогенных интоксикациях, остром перитоните, спаечной болезни, а также при хронической сердечной недостаточности II и III ФК (В.Г. Кукес и соавт., 2013; И.С. Темная, Е.Ю. Демченкова, 2013) и ишемических поражениях, связанных с сахарным диабетом (Е.В. Блинова, 2012; Л.Н. Сернов, 2013). Препарат относится к группе малотоксичных лекарственных средств, не оказывает мутагенного, тератогенного и эмбриотоксического действия, не обладает иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами (И.В. Березовская и соавт., 2010).

Синтезированный на основе мексидола этоксидол, содержащий D,L гидроксиянтарную кислоту, на различных стандартных моделях – ишемическом повреждении миокарда, амнезии, вызванной скополамином, ишемии мозга, вызванной гравитационной перегрузкой, пережатием сонных артерий, билатеральной окклюзией сонной артерии, гиперлипидемией, проявляет антиоксидантное действие. Так, показано, что субстанция этоксидола (15 мг/кг) при острой ишемии миокарда проявляет значимое кардиопротекторное действие на кардиогемодинамику. Применение этого вещества (1 мг/кг) вызывает снижение интенсивности ПОЛ, при этом индекс атерогенности снижается на 82,9%. Изучение ноотропной активности субстанции (200 мг/кг) и таблеток (100 мг/кг) этоксидола показало, что они существенно улучшают обучение условному рефлексу пассивного избегания у крыс-недоучек. Кроме того, этоксидол (100 мг/кг) проявляет отчетливое антиамнестическое действие. Субстанция этоксидола (5 мг/кг) увеличивает выживаемость животных при тотальной ишемии мозга. Клиническое изучение этоксидола, проведенное на основе его доклинического исследования, выявило высокую биодоступность при применении его в твердой (80% - таблетки) и жидкой (95% - инъекции) лекарственной форме и отсутствие кумуляции. Примечательно, что компоненты отмеченных лекарственных форм способны также проявлять церебропротекторные свойства при интоксикациях и психоорганических синдромах. Этоксидол рекомендован к использованию в практической медицине при острых нарушениях мозгового кровообращения, дисциркуляторной энцефалопатии, вегетативной дистонии, когнитивных расстройствах атеросклеротического генеза, при невротических и неврозоподобных состояниях, острой интоксикации антипсихотическими препаратами (С.Я. Скачилова и соавт., 2015). Полезные фармакологические свойства ЯК оказались присущи разработанному на ее основе ЛС «Реамберин-1,5% раствор для инфузий» (А.Л. Коваленко и соавт., 2001). Он представляет собой хорошо сбалансированный полиионный раствор, содержащий соль ЯК и микроэлементы (В.А. Исаков и соавт., 2001; С.В. Оболенский, 2002; В.В. Лазарев и соавт., 2003; И.А. Луговая и соавт., 2005).

Реамберин обладает высокой антигипоксической и антиоксидантной активностью, положительно влияет на аэробные биохимические процессы в клетке при ишемии и гипоксии, уменьшает продукцию СР, восстанавливает энергетический потенциал клетки, способствует утилизации клетками жирных кислот и глюкозы. Реамберин как АО является ингибитором СР, мембранопротектором. В условиях гипоксии он препятствует ПОЛ, активизирует физиологическую АОС, а также энергосинтезирующие функции митохондрий (В.А. Исаков и соавт., 2001; В.В. Афанасьев, 2005; В.П. Галенко-Ярошевский и соавт., 2005; А.В. Зеленская, 2014). Применение реамберина и других АГ у хирургических больных с воспалительными заболеваниями является эффективным и необходимым средством послеоперационной реабилитации (А.Е. Александрова, 2005; А.Л. Костюченко, Н.Ю. Семиголовский, 2002; Л.Д. Лукьянова, 2004; Е.Р. Немцова и соавт., 2006; СВ. Оболенский, 2002; Н.Ю. Семиголовский, 2004). В частности, при воспалительных процессах различной этиологии и локализации отмечена высокая эффективность реамберина, в том числе при перитоните (А.Д. Белявский и соавт., 2006; А.О. Гирш и соавт., 2004; А.Ю. Яковлев, 2007), абдоминальном сепсисе (А.Б. Толкач и соавт., 2006), критических состояниях (СВ. Оболенский, 2002; D.E. Taylor, С.А. Piantodosi, 1995), у больных с острыми деструктивными процессами легких (острый абсцесс, гангренозный абсцесс, распространенная гангрена легкого) (Е.Е. Фуфуев и соавт., 2007).

В тесте принудительного плавания по Porsolt установлено, что трехкратное введение крысам эмоксипина, реамберина и мексидола, а также амитриптилина и а-липоевой кислоты, взятых в качестве препаратов сравнения, в оптимальных дозах, соответствующих терапевтическому диапазону для человека, способно сокращать длительность "поведения отчаяния". Выявленное действие реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты указывает на их антидепрессивное действие, выраженность которого зависит от влияния этих препаратов на поведение животных в "открытом поле". Реамберин и а-липоевая кислота, соответствующие действию анксиолитиков, по антидепрессивной активности не уступают амитриптилину, тогда как эмоксипин и мексидол, оказывающие стимулирующее влияние на активность в "открытом поле", значимо уступают ему (И.А. Волчегорский и соавт., 2015).

Исследование дерматопротекторного действия сочетания эноксифола с рексодом в условияхэкспериментального сахарного диабета, осложненного экзогенной гиперхолестеринемией,в опытах на КЛ передней брюшной стенки при частичной артериовенозной недостаточности

Эффект терапевтического воздействия веществ оценивали по степени угнетения воспалительной реакции по сравнению с контролем и рассчитывали по формуле: 100% - [(О - И)/И(о) - (О - И)/И (к) х 100%], где (о) - леченые животные, (к) - контрольные животные. Противоязвенную активность исследовали на модели стероидно-этаноловой язвы (И.А. Савенко и соавт, 2010) желудка крыс. В экспериментах были задействованы 5 групп крыс линии Вистар по 6 особей в каждой: 1, 2, 3, 4 и 5-я получали соответственно раствор Рингера-Локка (10 мл/кг, в/в), эноксифол (7,5 мг/кг, в/в), рексод (0,02 мг/кг, в/в), облепиховое масло (10 мл/кг, внутрижелудочно) и сочетание эноксифол + рексод (7,5 мг/кг + 0,02 мг/кг, в/в).

Использовали модель стероидной язвы желудка крыс. При этом живот-ным внутрижелудочно вводили преднизолон в дозе 20 мг/кг на 80% этаноле, объемом 8 мл/кг Через 3 ч после индукции инъецировали эноксифол, рексод и их сочетание. Спустя 24 ч под легким эфирным наркозом крыс декапитировали. Желудки извлекали, вскрывали по малой кривизне, проводили макро- и микроморфологические исследования с использованием компьютерного цифрового микрофотографирования. Площадь язв измеряли с точностью до 0,01 мм. Антиульцерогенное действие оценивали по классическим критериям: общее количество язв и их средняя площадь, количество язв и их площадь по отделам желудка.

Влияние эноксифола, рексода и их сочетания на интенсивность некротического процесса исследовали в условиях моделирования КЛ в области спины у крыс-самцов линии Вистар. Животных в случайном порядке рандомизировали на 3 серии опытов, в каждой из которых были сформированы по 3 группы (в первой серии опытов по 8 особей в каждой, во 2-й – по 7 и в 3-й – по 8): 1-я – интактные животные, 2-я – контрольные и 3-я – подопытные. У крыс 2 и 3-й группы воспроизводили ишемию кожи: шелковой нитью прошивали КС в области спины длиной 4,5 – 5,0 см и высотой 1 см. За 1 ч до воспроизведения ишемии крысам 3-х групп первой и второй серий опытов в/бр вводили соответственно эноксифол (7,5 мг/кг) и рексод (0,02 мг/мл). Сочетание рексода и эноксифола в дозах 0,01 мг/кг и 7,5 мг/кг также вводили в/бр соответственно за 1 час и 40 мин до воспроизведения ишемии в третьей серии опыта. 2-ой группе (контрольной) во всех случаях вводили физиологический раствор в эквивалентном препаратам объеме. Образцы кожи после удаления подкожной жировой клетчатки гомогенизировали при 140 000 об/мин; экстрагирующий раствор содержал 0,45 NaCl, 50мМ трис-буфер pH 7,4 (А.В. Зеленская, П.А. Галенко-Ярошевский, 2013). Для получения митохондрий гомогенат кожи центрифугировали в среде, содержащей 250 мМ сахарозы, 5 мМ ЭДТА, 10мМ трис-HCl буфера, рН 7,4 (среда 1), в течение 10 мин при 650 g, осадок удаляли, а из надосадочной жидкости осаждали митохондрии при 5000 g в течение 15 мин. Полученные митохондрии ресуспензировали в среде 1 и брали 1 мл, содержащий 50 мг белка. Определяли активность креатинфосфокиназы (КФК) и ЛДГ с использованием тест-наборов фирмы "LaRoche" и тест-системы "Диахим" соответственно. Индекс цитолиза рассчитывали путем соотношения КФК к АсАТ. Влияние рексода и сочетания эноксифол (7,5 мг/кг) + рексод (при в/бр введении) на показатели антиоксидантной защиты и энергетическое обеспечение при ишемии кожи изучали в условиях моделирования КС в области спины крыс-самцов линии Вистар1. Подготовка материалов для исследования проводилась согласно вышеописанной. В данной серии опытов об антиоксидантной защите и энергетическом обеспечении рексода (0,02 мг/кг) и сочетания эноксифол (7,5 мг/кг) + рексод (0,01 мг/кг) судили по скорости

Исследование влияния эноксифола, взятого отдельно, на показатели антиоксидантной защиты и энергетического обеспечения при ишемии кожи нами не проводилось, т. к. оно было осуществлено в нашей лаборатории Т.Н. Хроповой (2004). генерации супероксиданиона О2-, СОД, ГП, каталазе, малоновому диальдегиду (МДА), цитохрому С, АТФ, АДФ, АМФ, КФ, НАД+, НАДН, соотношению НАД+/НАДН, коэнзиму Q10, лактату, пирувату, соотношению лактат/пируват, СДГ, ЛДГ, НАДН-цитохром С-редуктазе, НАД+ + НАДН, катепсину Д, РНКазе, щелочной фосфатазе. Определение содержания адениловых нуклеотидов, КФ, НАДН-цитохром С-редуктазы (на основе перехода цитохрома С из окисленной в восстановленную форму), лизосомальных ферментов, РНКазы и содержание катепсина Д, скорость генерации О2-, активность АОС (по величине активности СОД, каталазы и щелочной фосфатазы – по А.В. Зеленской, П.А. Галенко-Ярошевскому (2013).

Статистическую обработку результатов исследований проводили по А.В. Зеленской, П.А. Галенко-Ярошевскому (2013), используя разработанное на кафедре фармакологии Кубанского государственного медицинского университета программное обеспечение для ЭВМ IBM PC XT (США). Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента при достигнутом уровне значимости р 0,05.

Исследование противоязвенной активности эноксифола, рексода и их сочетания в условиях стероидно-этанолового повреждения слизистой оболочки желудка крыс

Влияние эноксифола на показатели антиоксидантной защиты и энергетическое обеспечение при ишемии кожи. Т.Н. Хропова (2004), исследуя влияние эноксифола на показатели системы энергетического обеспечения, АОС и активность лизосом (гистамина, цитохрома С, НАД-Н-цитохрома С-редуктазы, НАД+, НАД-Н, НАД+/НАД-Н, НАД+ + НАД-Н, СОД, Си,гп-СОД, каталазы, оксипролина, катепсина Д, РНК-азы, ЩФ, -галактозидазы и содержание общего азота) КЛ (на питающей ножке), установила, что механизм дерматопротекторного действия эноксифола (РУ-185) может быть обусловлен его способностью коррегировать процессы свобонорадикального окисления (СРО), активизировать гликолиз и реакции дыхательной цепи; активно влиять на метаболизм арахидоновой кислоты, синтез и распад белков и нуклеиновых кислот и связанную с этим активность лизосомальных ферментов. Влияние рексода на показатели антиоксидантной защиты и энергетическое обеспечение при ишемии кожи. Установлено, что в контрольной группе животных (с моделированной ишемией кожи), по сравнению с интактной, отмечалось статистически достоверное повышение скорости генерации О2- (на 93,9%), МДА (на 8,0%), при этом активность СОД снижалась (на 25,9%); активность ГП и каталазы не претерпевала существенных изменений (таблица 18, рисунок 20).

При в/бр введении рексода в дозе 0,02 мг/кг в гомогенатах ишемизированной кожи подопытной группы животных, по сравнению с 120 контрольной, наблюдалось статистически значимое повышение (на 70, и 24,0% соответственно) активности СОД и ГП, при этом содержание МДА снижалось (на 10,6%). Скорость генерации О2- и активность каталазы существенно не изменялись (таблица 18, рисунок 20). При исследовании влияния рексода на энергетическое состояние ишемизированной кожи выявлено, что в контрольной группе животных, по сравнению с интактной, содержание АДФ и лактата в гомогенатах статистически достоверно повышалось (на 13,9 и 47,6% соответственно), при этом активность СДГ снизилась (на 9,6%), а ЛДГ повысилась (на 68,4%). Остальные показатели (цитохром С, АМФ, НАД+, НАДН, пируват и соотношение лактат/пируват) практически не изменились (таблица 19, рисунки 21 – 23).

При в/бр введении рексода (в дозе 0,02 мг/кг) в гомогенатах кожи подопытной группы животных, по сравнению с контрольной, содержание НАД+, соотношения НАД+/НАДН, коэнзима Q10 повысилось (на 15,5, 20,5 и 57,2% соответственно), а лактата – снизилось (на 15,6%). Что же касается содержания цитохрома С, АТФ, АДФ, АМФ, КФ, НАДН, пирувата, соотношения лактат/пируват и активности СДГ и ЛДГ, то они существенно не изменялись (таблица 19, рисунки 21 – 23).

Влияние сочетания эноксифола с рексодом на показатели энергетического обеспечения, антиоксидантной защиты и активность лизосом при ишемии кожи. Установлено, что в контрольной группе животных (с ишемией кожной складки в области спины), по сравнению с интактной, наблюдалось статистически достоверное снижение (на 79,6, 34,1, 34,1, 21,3, 36,3, 13,3 и 16,1% соответственно) содержания в гомогенатах кожи АТФ, соотношения АТФ/АМФ, КФ, цитохрома С, коэнзима Q10, активности СДГ и суммарного показателя НАД+ + НАДН, при этом отмечалось повышение уровня лактата; содержание АДФ, АМФ, пирувата, а также соотношения лактат/пируват, активности НАДН-цитохрома С–редуктазы, НАД+, НАДН, соотношения НАД+/НАДН не претерпевали значимых изменений (таблица 20, рисунки 21 – 23).

В случаях в/бр инъецирования сочетания эноксифола (7,5 мг/кг) и рексода (0,01 мг/кг) в гомогенатах ишемизированной кожи подопытной группы животных, по сравнению с контрольной, имело место статистически значимое повышение (на 24,1, 30,7, и 14,6% соответственно) содержания КФ, коэнзима Q10 и суммарного НАД+ + НАДН, при этом уровень лактата снижался (на 19,9%). Остальные показатели, характеризующие энергетические процессы в ишемизированной коже (АТФ, АДФ, АМФ, соотношение АТФ/АМФ, цитохром С, пируват, соотношение лактат/пируват, а также активность СДГ, НАДН-цитохрома С–редуктазы, НАД+, НАДН и соотношение НАД+/НАДН) практически не изменялись (таблица 20, рисунки 21 – 23).

Показатели антиоксидантной защиты и состояния гидролитической функции лизосом также изменялись: в контрольной группе животных (с ишемией кожи), по сравнению с интактной, возрастали (на 185,7, 48,8, 60,7 и 81,8% соответственно) скорость генерации О2- , активность каталазы, катепсина Д и ЩФ, при этом активность СОД снижалась (на 19,9%); а РНК-азы – существенно не изменялась (таблица 20, рисунки 21 – 23).