Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современные представления о патогенетических механизмах стресс-индуцированных патологических состояний и средствах, повышающих неспецифическую резистентность организма 10
1.1. Современные представления об адаптации и механизмах ее формирования 10
1.2. Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью 21
1.3. Сведения о растениях, входящих в состав «Тонофита» 28
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 43
ГЛАВА 3. Исследование спектра фармакологической активности «тонофита» 51
3.1. Определение острой токсичности «Тонофита» 51
3.2. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интенсивным физическим нагрузкам 52
3.2.1. Влияние на общую физическую выносливость 52
3.2.2. Влияние на силовую выносливость 53
3.3. Влияние «Тонофита» на устойчивость к кислороддефицитным состояниям 54
3.3.1. Влияние на устойчивость к гемической гипоксии 54
3.3.2. Влияние на устойчивость к гипобарической гипоксии 56
3.3.3. Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии 57
3.3.4. Влияние на устойчивость к тканевой гипоксии 58
3.4. Влияние «Тонофита» на устоичивость к иммобилизвционному стрессу 59
3.5. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интоксикации тетрахлор- 60
метаном
3.6. Влияние «Тонофита» на устойчивость тканей к действию флого-генных агентов 62
3.6.1. Влияние на процессы альтерации и регенерации 62
3.6.2. Влияние на фазу экссудации процесса воспаления 63
ГЛАВА 4. Исследование влияния «тонофита» на центральную нервную систему 65
4.1. Исследование психотропной активности «Тонофита» 65
4.1.1. Влияние на поведенческую активность в тесте «открытое поле» 65
4.1.2. Влияние на поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» 67
4.1.3. Влияние на поведенческую активность в конфликтной ситуации 68
4.2. Влияние «Тонофита» на выработку «условного рефлекса пассивного избегания» 70
4.3. Влияние «Тонофита» на снотворное действие барбитуратов 71
ГЛАВА 5. Исследование фармакотерапевтической эффективности «тонофита» 73
5.1. Профилактическая эффективность «Тонофита» при иммобилизационном стрессе 73
5.2. Профилактическая эффективность «Тонофита» при интенсивных физических нагрузках 78
5.3. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при токсиче ском повреждении печени 81
5.4. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при иммуно-супрессивном состоянии 86
ГЛАВА 6. Изучение особенностей механизмов адаптогенного действия «тонофита»
6.1. Изучение мембраностабилизирующей активности «Тонофита» 89
6.1.1. Влияние на устойчивость мембран эритроцитов 89
6.1.2. Влияние на дегрануляцию тканевых базофилов 90
6.2. Изучение антиоксидантной активности «Тонофита» 92
6.2.1. Антирадикальная активность по отношению к супероксидным радикалам 92
6.2.2. Антирадикальная активность по отношению к NO радикалам 93
6.2.3.. Влияние «Тонофита» на скорость накопления ТБК-активных продуктов 94
6.2.4. Влияние «Тонофита» на инактивацию Н2О2 95
6.2.5. Определение хелатирующей активности «Тонофита» 95
ГЛАВА 7. Обсуждение 97
Заключение 103
Выводы 105
Практические рекомендации 106
Список литературы 107
- Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью
- Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии
- Влияние на поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»
- Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при иммуно-супрессивном состоянии
Введение к работе
Актуальность. В настоящее время одной из актуальных проблем медицинской науки является проблема повышения неспецифической резистентности организма, что связано с депрессией генетически-детерминированных механизмов адаптации человека на современном этапе развития общества. В этой связи отмечается существенное увеличение числа лиц, находящихся в стресс-индуцированных пограничных состояниях. Так, по данным Всемирной организации здравоохранения в индустриально развитых странах количество таких лиц достигает 80% от всего трудоспособного населения (Ромасенко, 2012; Российский..., 2013). Указанная тенденция связана с увеличением стрессогенных факторов, к числу которых можно отнести: ухудшение экологической обстановки, психоэмоциональное перенапряжение, гиподинамия и гипокинезия, ксенобиотическая нагрузка на организм, разного рода злоупотребления (табакокурение, алкоголизм, наркомания) и т.д. (Воробьева, 2008; Порядин, 2009; Panossian, Wikman, 2010). Вследствие этого отмечается депрессия защитно-компенсаторных механизмов человека и увеличение «болезней цивилизации», к которым относят патологии сердечно-сосудистой, нервной, иммунной, эндокринной, пищеварительной систем. Из них сердечнососудистые, онкологические, легочные болезни и сахарный диабет прочно заняли ведущие места среди причин смертности, инвалидности и временной нетрудоспособности (Агаджанян и соавт., 2003; Яременко, 2008).
В связи с этим, поиск и разработка новых эффективных адаптогенных
средств является одной из приоритетных задач современной медицинской
науки и практического здравоохранения. Наиболее перспективным
направлением является использование адаптогенов растительного
происхождения, имеющих несомненные преимущества перед
синтетическими, прежде всего, ввиду их высокой эффективности, отсутствия
токсичности и риска развития негативных побочных реакций при
длительном применении (Яременко, 2005; Арушанян, 2008; Olsson et al.,
2009). Растительные препараты находят все более широкое применение в
качестве вспомогательных средств, повышающих эффективность базисной
терапии; их назначают для профилактики заболеваний и на начальных
стадиях заболеваний, а также на этапе противорецидивной терапии (Соколов,
2000). Особенно важным направлением является разработка
многокомпонентных растительных средств на основе тибетских рецептурных прописей, высокая фармакотерапевтическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, осуществляющих коррекцию функционального состояния организма в целом. На основании данных литературных источников (Сумати Праждня, 2008; Вайдурья онбо, 2014) и в соответствии с принципами составления многокомпонентных препаратов (Николаев и соавт., 1988) нами разработано комплексное растительное средство в форме экстракта жидкого, условно
названное «Тонофит», полученный из следующих видов растений: Leuizea carthamoides Willd., Rhodiola rosea L., Inula helenium L., Zingiber officinale Roscoe., Rheum tanguticum L., Crataegus Sanguinea Pall., Rosa cinnamomea L., Elettaria cardamomum (L.) Maton., Urtica dioica L.
Целью настоящего исследования явилось определение спектра адаптогенной активности, профилактической и фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства «Тонофит», а также оценка механизмов его защитного действия.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие
задачи:
- изучить влияние «Тонофита» на устойчивость организма животных к
действию экстремальных факторов;
- определить влияние данного средства на функциональное состояние ЦНС;
- определить лечебно-профилактическую эффективность «Тонофита» при
стресс-индуцированных патологических состояниях (иммобилизационном и
эмоциональном стрессе, интенсивных физических нагрузках, интоксикации
тетрахлорметаном, иммуносупрессивном состоянии);
- определить особенности механизмов адаптогенного действия «Тонофита».
Научная новизна. Работа представляет собой фармакологическое исследование адаптогенного действия нового комплексного растительного средства «Тонофит». Установлено, что испытуемое фитосредство в экспериментально-терапевтических дозах (5,0 – 10,0 мл/кг) повышает неспецифическую сопротивляемость организма к экстремальным воздействиям различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипобарической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, иммобилизационному стрессу, интоксикации ксенобиотиками. Показано, что «Тонофит» повышает ориентировочно-исследовательскую активность, оказывает анксиолитическое действие, стимулирует когнитивные функции животных. Анксиолитические эффекты указанного фитоэкстракта обусловлены активацией ГАМК-ергической системы.
Курсовое введение «Тонофита» животным при иммобилизационном стрессе уменьшает выраженность признаков «триады Селье», что обусловлено способностью испытуемого фитосредства предотвращать гиперактивацию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой систем организма животных. Испытуемое средство повышает физическую выносливость животных благодаря активации ресинтеза АТФ, увеличению энергетических запасов клетки и нормализации обменных процессов. Наряду с этим, «Тонофит» обладает гепатопротективными и иммуномодулирующими свойствами, повышая устойчивость животных к повреждающему действию тетрахлорметана и азатиоприна. Показано, что центральные механизмы адаптогенного действия «Тонофита» связаны с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма. Периферические молекулярно-клеточные механизмы этого эффекта обусловлены стабилизацией мембранных структур в результате
ингибирования процессов свободнорадикального окисления
биомакромолекул, а также повышением энергетического потенциала организма при экстремальных воздействиях.
Практическая значимость. Полученные экспериментальные данные явились основой для разработки и внедрения новой биологически активной добавки к пище под коммерческим названием «Арура-тан № 16», обладающей адаптогенными свойствами. Указанное оздоровительное средство используется в лечебно-профилактических учреждениях Министерства здравоохранения Республики Бурятия. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии Медицинского института ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 24.09.2015 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Комплексное растительное средство «Тонофит» в экспериментально-
терапевтических дозах оказывает выраженное адаптогенное действие,
повышая неспецифическую резистентность организма к действию
стрессорных факторов различной природы;
2. «Тонофит» повышает ориентировочно-исследовательскую активность,
снижает уровень тревожности и эмоциональности, повышает когнитивные
функции ЦНС;
-
испытуемое средство обладает профилактической и фармакотерапевтической эффективностью при интенсивных физических нагрузках, экспериментальном токсическом повреждении печени, иммобилизационном стрессе и иммунодефицитном состоянии;
-
механизмы адаптогенного действия «Тонофита» обусловлены оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма, повышением энергетического обеспечения клеток, а также ингибированием процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул при экстремальных воздействиях.
Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета БГУ (Улан-Удэ, 2009); I научно-практической конференции с международным участием «Экология, здоровье, спорт» (Чита, 2009); 5th International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011); научно-практической конференции, посвященной 50-летию нейрохирургического отделения РКБ им. Н.А. Семашко (Улан-Удэ, 2011); международной конференции «Current situation and future trends of drug research and development from natural sources» (Ulaanbaatar, 2015).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 4 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.
Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 219 источников: 172 отечественных и 49 зарубежных авторов. Работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 35 таблицами.
Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью
В настоящее время, несмотря на значительные успехи медицинской и фармацевтической науки, отмечается существенный рост заболеваемости населения т.н. «болезнями цивилизации», к которым относят ишемическую болезнь сердца, гипертоническую болезнь, онкологические заболевания, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, сахарный диабет, иммунные заболевания и др. Частота стресс–индуцированных сердечнососудистых заболеваний в России составляет до 20% в общей медицинской практике (Российский..., 2010; Ромасенко Л.В., 2012). Как свидетельствуют эпидемиологические и экспериментальные исследования, в возникновении всех этих заболеваний важную, а иногда и решающую роль играет чрезмерно интенсивная и длительная стресс-реакция, вызванная воздействием факторов окружающей среды (Пшенникова, 2001; Меньщикова, 2006; Fazel et al., 2005).
Анализ природы факторов указывает на несомненное негативное влияние резкого изменения среды обитания современного человека, связанного с ухудшением экологической обстановки, изменением режима и рациона питания, условий труда и проживания, неизмеримо возросшим, особенно в городах, темпом жизни. Наряду с этим, резкое повышение потока информации и широкое внедрение новых информационных технологий вызывают нервно-психическое перенапряжение с развитием синдрома хронического эмоционального стресса (Пшенникова, 2001). Эти исторически обусловленные процессы протекают на фоне ослабления организма вследствие ограничения физической подвижности (гиподинамия, гипокинезия), недостаточного использования закаливающих мероприятий, злоупотребления медикаментозными средствами, а также табаком и алкоголем. В результате, подвергаясь разного рода антропогенным стрессорным воздействиям, современный человек зачастую не в состоянии справиться с перегрузками и адаптироваться к новым условиям существования, вследствие чего наблюдается повсеместное распространение «болезней цивилизации» (Резников, 2007; Weisberg, 2009).
Феномены стресса и адаптации, интуитивно предсказанные и в той или иной мере описанные многими поколениями естествоиспытателей и врачей, в настоящее время благодаря успехам биологических и медицинских наук получают научную базу. В результате накоплено большое количество фактов, отражающих различные аспекты проблемы стресса.
Физиологические механизмы стресса впервые были освещены Кен-ноном – основоположником гомеостаза и учения о роли симпатоадреналовой системы в мобилизации функций организма для борьбы за существование. Кеннон еще в 1914 г. предвосхитил взгляды Селье на проблему психофизиологической стрессовой реакции, описав один из специфических аспектов стресса – нейроэндокринный процесс (Cannon,1932; Cannon, 1935).
В отдельных работах отечественных ученых, относящихся к тому же периоду, четко прослеживаются верные направления в раскрытии механизмов неспецифической адаптации. В 1934г. Д. Н. Насонов в своих исследованиях показал, что содержимое протоплазмы однотипно реагирует на любые изменения окружающей среды. Этот стереотип ответов клетки был назван Насоновым «паранекрозом» (Насонов, 1959). Так, фактически был открыт стресс, на клеточном уровне.
Классической концепцией развития адаптационного процесса к любым воздействиям внешней и внутренней среды по праву считается концепция общего адаптационного синдрома Г. Селье, который включает последовательно сменяющие друг друга стадии тревоги, резистентности и истощения. Селье рассматривал адаптационный синдром как неспецифическую реакцию организма на действие разнообразных стрессоров. Общий адаптационный синдром, согласно Селье, формируется однотипно – путем активации веду 12 щего гормонального звена: системы гипоталамус – передняя доля гипофиза – кора надпочечников. (Селье, 1960; 1982; Selye, 1959).
Согласно современным представлениям, в развитии адаптационных реакций прослеживается два этапа: начальный – «срочная», но несовершенная с точки зрения энергетической целесообразности адаптация и последующий этап – более совершенная или «долговременная» адаптация (Меерсон, 1993; Меерсон, Пшенникова, 1988; Пшенникова, 2001). Срочная адаптационная реакция включается непосредственно после начала действия стрессорного фактора и реализуется лишь на основе уже готовых генетически детерминированных физиологических механизмов. К таким стресс-реализущим системам относят: гипоталамо-гипофизарно-адреналовую и симпато-адреналовую системы, в результате активации которых в крови отмечается повышение уровня глюкокортикоидов и катехоламинов, обеспечивающих реализацию «срочного» этапа адаптации (Stratakis, Chrousos, 1995; Vellucci, Parrott, 1997). Гормоном «запускающим» активацию гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси является кортикотропин-рилизинг гормон (КРГ), активирующий секрецию адренокортикотропного гормона АКТГ), за что он был назван Г. Селье «ри-лизинг-фактором стресса» (Selye, 1959). В последние годы установлено, что наряду с КРГ, секрецию АКТГ стимулирует вазопрессин (Whitnall, 1993). Кроме этого, вазопрессин повышает активность симпатоадреналовой системы, участвует на центральном уровне в реализации защитного агрессивного поведения и подавляет иммунные реакции при стрессе (Shibasaku et al., 1998). Важнейшая черта этого этапа адаптации состоит в том, что деятельность организма протекает на пределе его физиологических возможностей при полной мобилизации функциональных резервов и далеко не в полной мере обеспечивает необходимый адаптационный эффект.
Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии
Исследованию подвергался экстракт жидкий «Тонофит», полученный из сырья 9 наименований лекарственных растений: корни и корневища лев-зеи сафлоровидной (Leuizea carthamoides Willd.) – 10%, родиолы розовой (Rhodiola rosea L.) – 10%, девясила высокого (Inula helenium L.) – 15%, имбиря лекарственного (Zingiber officinale Roscoe.) – 5%, корни ревеня тангутско-го (Rheum tanguticum L.) – 5%, плоды боярышника кровавокрасного (Cratae-gus Sanguinea Pall.) – 20%, шиповника (Rosa cinnamomea L.) – 20%, кардамона (Elettaria cardamomum (L.) Maton. – 5%, листья крапивы двудомной (Urtica dioica L.) – 10%. Полученный экстракт представляет сумму экстрактивных веществ, представленных флавоноидами, полисахаридами, дубильными веществами, органическими кислотами, аминокислотами, эфирными маслами, витаминами и другими биологически активными веществами. Стандартизация экстракта жидкого осуществляется по сумме флавоноидов в пересчете на рутин и по сумме полисахаридов в пересчете на глюкозу (Сиде-нова, 2012).
Перед экспериментами, с целью исключения влияния этанола, экстракт деалкоголизировали на роторном испарителе при 370С до 1/10 от исходного объема и полученный объем доводили дистиллированной водой до первоначального объема. Полученный водно-спиртовый раствор повторно упаривали на роторном испарителе, а остаток доводили дистиллированной водой до заданного объема. Водный раствор «Тонофита» вводили внутрижелудочно в объеме 1,0 мл/100 г массы животного. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный экстракт элеутерококка жидкий в дозе, составляющем 5,0 мл/кг, обладающий выраженным адапто-генным эффектом (Дардымов, 1976).
Исследования выполнены на лабораторных животных: 388 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160–220 г. и 90 мышах линии СВА, F1 (СВАхС57Вl/6) обоего пола массой 20–22 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Лабораторных животных умерщвляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом.
Кроме того, в качестве объектов исследования были использованы: суспензия эритроцитов, суспензия липосом и биохимические тест-системы. Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1:10 и центрифугирования при 1,5 тыс. об/мин в течение 10 мин. Суспензию липосом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспендирования с фосфатным буфером (рН 7,4) в соотношении 1 : 10 на магнитной мешалке в течение 15 мин (Лопухин и соавт., 1983).
Острую токсичность определяли по методу Кербера (Руководство…, 2000) при однократном внутрибрюшинном введении вещества в диапазоне доз: от 500 до 6000 мг/кг и внутрижелудочном введении в диапазоне доз: от 1000 до 8000 мг/кг. Все испытанные дозы доводили дистиллированной водой до конечного объема, составляющего 1,0 мл/100 г массы животного. Наблюдение за общим состоянием белых крыс и их поведением осуществляли в течение 14 дней.
Для оценки спектра адаптогенной активности, фармакотерапевтиче-ской эффективности и механизма действия «Тонофита» были использованы наиболее адекватные модели и информативные методы исследования, позволяющие объективно оценить особенности адаптационной перестройки организма животных, происходящие под влиянием испытуемого средства. Исследование спектра адаптогенной активности включало определение влияния «Тонофита» на физическую выносливость лабораторных животных; оценку влияния на устойчивость организма к действию экстремальных факторов различной природы: влияние на устойчивость к гипобарической, гемической, гиперкапнической и тканевой гипоксии, иммобилизационному стрессу.
Общую физическую нагрузку моделировали общепринятым методом путем плавания с грузом, составляющим 7% от массы тела в бассейне с температурой воды 24,0±0,5С до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное погружение под воду. Силовые физические нагрузки воспроизводили по методу С.Я. Арбузова (1960) путем виса животных на шесте.
Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом в специальной барокамере, в которой с помощью масляного насоса создавали разряжение воздуха, соответствующее «подъему» животных на высоту 10000 м. «Подъем» осуществляли со скоростью 20 м/мин до высоты 6000 м. На данной высоте «подъем» прекращался на 2 мин (площадка). Затем с такой же скоростью совершали «подъем» далее до высоты 10000 м. Модель гемиче-ской гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костю-ченков, Фаращук, 1982). Модель гиперкапнической гипоксии создавали путем помещения животного в стеклянную емкость с герметичными крышками, которые опускали под воду для избежания подсоса воздуха. Устойчивость животных к действию гиперкапнической гипоксии определяли по времени жизни животных от момента закрытия емкости до прекращения дыхания (Руководство…, 2000). Модель тканевой гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора нит-ропруссида натрия в дозе 42 мг/кг (Воронина, Неробкова, 2000).
Влияние на устойчивость к стрессовому воздействию оценивали на модели иммобилизационного стресса путем фиксации животных в положении на спине в течение 12 и 24 часа. Для оценки антистрессорной активности определяли выраженность триады Селье: гипертрофию надпочечников, инволюцию иммунокомпетентных органов (тимуса и селезенки) и наличие деструктивных изменений в слизистой оболочке желудка. Желудок разрезали по большой кривизне и, после промывания в физиологическом 0,9% растворе NaCl, подсчитывали количество деструкций, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений подсчитывали «индекс Паулса» (ИП) по формуле (Амосова Е.Н., 1998):
Влияние на поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»
Как следует из данных, приведенных в таблице 3.2.1.1., однократное введение испытуемого средства в дозе 5 мл/кг не оказывает влияния на продолжительность плавания животных; тогда как при введении дозы 10 мл/кг отмечалось увеличение времени плавания на 38% по сравнению с данными животных контрольной группы. Более значимое повышение физической выносливости отмечено при многократном введении «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг: продолжительность плавания крыс опытной группы увеличилась на 80% по сравнению с показателями животных контрольной группы. При этом, актопротекторная активность «Тонофита» в дозе 5 мл/кг была аналогичной таковой у препарата сравнения – экстракта элеутерококка.
Эксперименты проведены на мышах линии F1(CBAxC57B1/6) обоего пола массой 18-20 г. Влияние испытуемого средства на силовую выносливость определяли по времени виса животных на шесте от начала удержания до момента падения (Арбузов и соавт., 1960). «Тонофит» вводили внутриже-лудочно в дозе 5 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в указанной дозе 1 раз в день за 30 мин до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный раствор экстракта элеутерококка в аналогичной дозе. Полученные данные приведены в таблице 3.2.2.1.
Элеутерококк (n=10) 16,1+1,42 Как следует из данных, приведенных в таблице 3.2.2.1., однократное введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг не оказывает влияния на силовую выносливость животных. Многократное введение испытуемого средства сопровождается выраженным повышением силовой выносливости животных, о чем свидетельствует увеличение продолжительности виса мышей опытной группы в 1,5 раза по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом, актопротекторная активность «Тонофита» при однократном введении несколько уступала таковой у препарата сравнения – экстракта элеутерококка.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что многократное введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг оказывает стимулирующее действие на общую и силовую физическую выносливость животных.
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-220 г. Модель гемической гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костюченков, Фаращук, 1982). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили испытуемое средство в дозах 5 и 10 мл/кг в течении 7 дней. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию тканевой гипоксии определяли по времени жизни животных от момента введения натрия нитрита до прекращения дыха ния. Полученные данные приведены в таблице 3.3.1.1.
Тонофит (n=8) 5,0 92,3+5,48 Тонофит (n=8) 10,0 46,7+3,68 Элеутерококк (n=8) 5,0 Как следует из приведенной таблицы, профилактическое введение испытуемого средства в указанных дозах сопровождается выраженным повышением устойчивости животных к гемической гипоксии. При этом, более выраженное антигипоксическое действие отмечено при введении «Тонофи-та» в дозе 5 мл/кг: продолжительность жизни животных у животных этой группы увеличивалась почти в 3 раза по сравнению с данными крыс контрольной группы. На фоне введения средства в дозе 10 мл/кг продолжительность жизни повышалась на 43% по сравнению с контролем. Антигипоксиче-ское действие испытуемого средства в дозе 10 мл/кг было сопоставимым с таковым у препарата сравнения, а в дозе 5 мл/кг существенно превосходило действие экстракта элеутерококка в аналогичной дозе. 3.3.2. Влияние на устойчивость к гипобарической гипоксии
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-200г. Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом путем «подъема» животных на «высоту» 10000 м (атм. давление – 196,8 мм рт.ст., парциальное напряжение кислорода – 50 мм рт.ст.). «Тоно-фит» животным вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в указанном объеме в течение 7 дней 1 раз в день за 1 ч до приема пищи. Животным контрольной группы внутриже-лудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию гипобарической гипоксии определяли по продолжительности жизни животных на высоте 10000 м. Полученные данные приведены в таблице 3.3.2.1
Тонофит (n=8) 21,2+2,34 38,5+2,45 Элеутерококк (n=8) 18,4+1,63 36,0+2,95 Как следует из данных, приведенных в таблице 3.3.2.1., однократное введение «Тонофита» в дозе 5мл/кг на фоне гипобарической гипоксии сопровождается повышением продолжительности жизни крыс в среднем на 46% по сравнению с данными животных контрольной группы. Более выраженное ан-тигипоксическое действие установлено при многократном введении испытуемого средства: продолжительность жизни животных опытной группы возрастала практически в 2 раза по сравнению с контролем. При этом антиги 49 поксическая активность испытуемого средства превосходила таковую у препарата сравнения экстракта элеутерококка.
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель гиперкапнической гипоксии создавали путем помещения животного в стеклянную емкость, которую герметично закрывали и опускали под воду (Руководство…, 2000). Испытуемое средство вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней 1 раз в день за 1 ч до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг.
Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при иммуно-супрессивном состоянии
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг на фоне интенсивных физических нагрузок оказывает выраженное актопротекторное действие, повышая общую физическую выносливость животных. Установлено, что в стимуляция физической работоспособности связана с активацией энергетического обмена, усилением ресинтеза АТФ, очевидно, обусловленных ингибированием процессов свободнорадикального окисления мембран митохондрий, индукция которых сопровождает истощающую физическую нагрузку. Наряду с этим, под влиянием испытуемого фитосредства отмечается существенное увеличение энергетических запасов организма и, тем самым, концентрации основных субстратов окисления, необходимых для выполнения физической работы.
Опыты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180 – 200 г. Острое токсическое повреждение печени воспроизводили путем внут-рибрюшинного введения 50% масляного раствора тетрахлорметана (СС14) в объеме 0,4 мл/100 г массы животных 1 раз в день в течение 3 дней (Венгеровский и соавт., 2000). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили раствор «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг 1 раз в сутки в течение 21 дня после интоксикации тетрахлорметаном. Крысы контрольной группы получали эквиобъ-емное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. На 7, 14 и 21 сутки с начала введения тетрахлометана проводили исследование функцио 74 нального состояния печени животных. Для этого определяли активность ала-нинаминотрансферазы (АлТ), аспартатаминотрансферазы (АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), уровни общего и прямого билирубина в сыворотке крови. Исследование проведено на анализаторе «SAPPHIRE 400» (Япония). Содержание гликогена в печени определяли по методу S. Seifter (1950). Также оценивали интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности каталазы (Королюк и соавт., 1988). Полученные данные приведены в таблицах 5.3.1 - 5.3.4.
АлТ, ед/л 33,7±1,87 73,1±7,30 41,40±1,27 АсТ, ед/л 17,0±1,07 58,2±5,82 28,4±2,31 ЩФ, ед/л 75,8±3,41 128,0±9,80 83,2±9,25 Билирубин общ., мкмоль/л 4,3±0,02 5,9±0,18 4,7±0,10 Билирубин прямой, мкмоль/л 1,4±0,04 2,9±0,16 1,8±0,23 Гликоген, мг% 1350,0±98,65 855,3±65,32 1280,5±103,5 Как следует из данных, приведенных в таблице 5.3.1, на фоне интоксикации тетрахлорметаном развивается симпотоматика, характерная для острого токсического повреждения печени: повышение активности трансаминаз (АлТ и АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), а также повышение концентрации билирубина в сыворотке крови. Установлено, что курсовое введение «Тоно-фита» на фоне токсического повреждения печени оказывает выраженное ге-патопротекторное действие, нормализуя функциональное состояние печени белых крыс на более ранних сроках патологического процесса. Как видно из приведенной таблицы, фармакотерапевтическое влияние «Тонофита» начинает проявляться на 14 сутки заболевания, тогда как на 7 сутки изменения не носят статистически значимого характера. Так, на 14 сутки исследования под влиянием «Тонофита» отмечается снижение активности мембраносвязанных ферментов АлТ и АсТ в среднем на 25%, а щелочной фосфатазы на 32% по сравнению с данными у крыс контрольной группы. При исследовании на 21 сутки эксперимента активность аминотрансфераз у крыс опытной группы, получавших испытуемое средство, была почти в 1,5 раз ниже, чем у животных контрольной группы и практически приблизилась к значениям физиологической нормы. Такая же тенденция отмечалась и по отношению к ЩФ, активность которой была на 35% меньше, чем в контроле. На фоне нормализации основных маркеров цитолитического и холестатического синдрома у крыс опытной группы отмечалась снижение концентрации билирубина в сыворотке крови до показателей интактных крыс. Наряду этим, курсовое введение «Тонофита» при интоксикации тетрахлометаном сопровождалось повышением синтетической функции печени. Так, концентрация гликогена в печени крыс опытной группы во все сроки исследования была достоверно выше таковой у крыс контрольной группы, а на 21 сутки достигала значений физиологической нормы. дикального окисления (СРО) и снижением активности эндогенной антиокси-дантной системы организма. Установлено, что курсовое введение «Тонофи-та» оказывало выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение концентрации МДА и повышение активности одного из ферментов антиоксидантной системы – каталазы крови во все сроки исследования. Так, на 7, 14 и 21 сутки опыта концентрация МДА в крови крыс опытной группы была соответственно на 10, 30 и 44% меньше по сравнению с аналогичными данными крыс контрольной группы. Наряду с этим у крыс опытной группы отмечалось повышение активности каталазы на 7, 14 и 21 сутки соответственно на 19,87 и 63% по сравнению с аналогичными данными крыс контрольной группы.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «Тонофит» в экспериментально-терапевтической дозе при курсовом введении на фоне токсического повреждения печени оказывает выраженное гепатопротектор-ное действие, нормализуя функциональное состояние печени белых крыс на более ранних сроках патологического процесса. В частности, на фоне введения испытуемого средства отмечалось уменьшение признаков развития ци-толитического и холестатического синдромов, а также нормализация синтетических и обменных процессов в печени животных. Установлено, что гепа-топротекторное действие испытуемого средства на фоне острого токсического повреждения печени обусловлено его способностью ингибировать процессы СРО и повышать мощность эндогенной антиокислительной системы организма, благодаря чему обеспечивается стабилизация мембранных структур гепатоцитов и нормализуется функционирование мембраносвязанных ферментных систем печени. иммуносупрессивном состоянии Эксперименты проведены на мышах обоего пола линий СВА и F1 (CВА х С57В1/6) массой 18–20 г. Иммуносупрессивное состояние у животных воспроизводили путем пероральным введением цитостатика азатиоприна в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней (Лазарева,1985). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг в объеме 0,1 мл/100 г в течение 14 дней 1 раз в сутки. Мыши контрольной группы получали дистиллированную воду по аналогичной схеме. Через 1 сутки после последнего введения фитосредства животных дека-питировали под легким эфирным наркозом и определяли относительную массу иммунных органов (по отношению к массе тела). Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и др. 1987), гуморального звена – по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза (Cunningham, 1965), макрофагаль-ного звена – в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство…, 2005). Полученные данные приведены в таблице 5.4.1 – 5.4.3.