Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 11
1.1. Факторы риска развития хронических воспалительных заболеваний органов дыхания 11
1.2 Гены, вовлеченные в патогенез бронхиальной астмы .. 12
1.2.1 Полиморфизмы генов Toll-подобных рецепторов (TLR) 17
1.2.2 Протективные и ассоциированные с БА НЬАОКВ1специфичности.21
1.2.3 Роль провоспалительных цитокинов в патогенезе БА 25
1.2.4. Влияние полиморфизмов генов на продукцию цитокинов 37
Глава II. Материалы и методы 39
2.1. Реактивы, тест-системы и материалы 39
2.2 Экспериментальные методы 40
2.3. Статистическая обработка данных 46
2.4. Общая характеристика обследованных доноров и больных 46
Глава III. Результаты исследований 49
3.1 SNPTLR, вовлеченные впатогенезБА ужителеЙРА 49
3.2. Типирование протективных и ассоциированных с БА специфичностей HLADRB1 у жителей РА 57
3.3 Полиморфизмы генов провоспалительных цитокинов, ассоциированные с БА в этнических группах населения РА 64
3.3.1 G197A аллельные варианты гена IL-17A 64
33.2. Роль G308A SNP гена TNF-a в патогенезе БА у жителей РА 77
3.3.3 C174G полиморфизмы гена IL-6 при ХВЗЛ 89
Глава IV. Обсуждение 100
Выводы 108
Практические рекоменации 109
Список литературы НО
- Гены, вовлеченные в патогенез бронхиальной астмы
- Роль провоспалительных цитокинов в патогенезе БА
- Общая характеристика обследованных доноров и больных
- Полиморфизмы генов провоспалительных цитокинов, ассоциированные с БА в этнических группах населения РА
Гены, вовлеченные в патогенез бронхиальной астмы
Согласно современным представлениям, развитие БА обусловлено сложным взаимодействием факторов среды и выраженной наследственной предрасположенностью, выявленой у 46,3% больных БА. В 33,3% случаев тип наследования БА аутосомно-рецессивный, в 11,1% — аутосомно-доминантный, в 43,1% — аутосомно-доминантный с неполной пенетрантностью, в 18,5% — мультифакториальный (Булатова П.К., 1975; Федосеев Г.Б. с соавт., 2006; Асанов А.А. с соавт., 2008). Значение наследственных факторов в происхождении БА было продемонстрировано в серии работ по оценке повторного риска заболевания в отягощенных семьях. Если один их родителей страдает БА, вероятность развития заболевания у ребенка составляет 20-30%, а если больны оба родителя — 75% (Чучалин Л.Г., 2001).
Семейно-популяционные и близнецовые исследования подтверждают вклад генетических и средовых компонентов в этиологию и патогенез БА. В исследованиях, проведенных на больших выборках в ряде стран, конкордантность БА у монозиготных близнецов в 1,5-2 раза превышала таковую у дизиготных, а показатель наследуемости составлял от 36 до 75% (Булатова П.К., 1975; Федосеев Г.Б. с соавт., 2006).
Высокая фенотилическая вариабельность клинической картины БА указывает на существование эффекта взаимодействия многих генов, что предполагает наличие определенных комбинаций генетических вариантов у заболевших, а также влияние внешних факторов на формирование особенностей клинической картины. Генетический компонент предрасположенности к БА формируется несколькими основными, возможно, кодоминантными генами, эффекты которых в свою очередь ассоциированы с большим количеством генов-модификаторов (Асанов А.А. с соавт., 2008), Это подтверждает большую значимость генетически детерминированных задатков, определяющих в конечном итоге вероятность неблагоприятного воздействия контролируемых факторов: образа жизни, состояния окружающей среды обитания и т.д. (Диел Ф., 2001; GINA, 2006).
В новой редакции рабочей группы GINA (2011) упоминается о многочисленных генах, участвующих в развитии БА и отличающихся для разных этнических групп, однако, как и в издании 2006г. поиск генов, связанных с развитием БА, сосредоточен на четырех крупных областях: выработке аллерген-специфических антител класса IgE (атопия); проявление бронхиальной гиперреактивности; образование медиаторов воспаления, например цитокинов, хемокинов и факторов роста; определение соотношения между ТЫ и Th2 опосредованными типами иммунного ответа (согласно гигиенической гипотезе развития БА) (Postma D.S. et al., 1995; In K.H. et al., 1997; Holloway J.W. et al., 1999; Wiesch D.G. et al, 1999; Louis R. et al, 2000; Nanavaty U. et al, 2001; Drazen JJVL et al., 2002; Buckova D. et al., 2002; Tattersfield A.E. et al., 2004; Shin H.D. et al., 2004; Israel E. et al., 2004; Ito K. et al., 2006; Sharma S. et al., 2006; GINA, 2006).
С развитием методов молекулярной биологии и расшифровки генома человека идентифицированы гены, расположенные в разных хромосомах и ассоциированные с наиболее распространенными системными патологическими процессами, обуславливающими высокую заболеваемость, инвалидизацию и смертность населения от БА и др. заболеваний во многих странах мира (Sandford AJ. et al., 2004; Trajkov D. et al., 2012).
В международных базах данных HuGen, Pubmed, Ensembl и др. приведены результаты исследований, направленных на поиск протективных и ассоциированных с риском развития БА генов. Основные гены-кандидаты, вовлеченные в патогенез БА, приведены в таблице 1. Таблица 1. Гены-кандидаты, ассоциированные с риском развития бронхиальной астмы Ген Название Локализация Количествоссылок ADRB2 Бета-2 адренорецептор 5q31-q32 149 IL13 Интерлейкин 13 5q31 103 IL4 Интерлейкин 4 5q31.1 87 TNF Фактор некроза опухолей 6р21.3 84 GSTP1 Глутатион S-трансферазы Р-1 llql3 74 CD14 Молекулы CD 14 5q22-q32 5q31.1 73 GSTMI Глутатион S-трансферазы М-1 1р13.3 69 HLA DRB1 Главный комплекс гистосовместимости II класса DRB1 6p21.3 35 TLR4 Толл-подобный рецептор 4 9q33.1 32 TLR9 Толл-подобный рецептор 9 Зр21.3 16 IL6 Интерлейкин 6 7р21 16 IL17A Интерлейкин 17 А 6р12 6 Примечание: данные HuGen, Pubmed, Ensembl, Наиболее исследованные гены ADRB2 рецепторов, экспрессируемые на гладких мышцах бронхиол, при возбуждении обеспечивают в основном терапевтические эффекты (расслабление гладких мышц дыхательных путей), однако прогностически не информативны. Распространенный в мировых популяциях Argl6Gly (47G A) полиморфизм гена ADRB2 не связан с риском развития БА, но имеет определяющее значение в индивидуальном ответе на применение (32-агонистов (Daniel К. С. et al., 2003; Migita О. et al., 2004; Contopoulos-Ioannidis D.G. et al., 2005; Hall LP. et al., 2006; Finkelstein Y. et al, 2009). Поиск маркеров, ассоциированных с риском развития БА направлен преимущественно на выявление генов, связанных с высоким уровнем IgE (атопией), чаще всего соответствующей аллергической форме БА. Однако, в патогенезе большинства зарегистрированных случаев БА в РА, ведущим компонентом является хроническая воспалительная реакция. Результаты многочисленных мета-анализов, проведенных за период 2000-2013г., подтверждают патогенетическую роль про- и противовоспалительных цитокинов, как возможных генов-кандидатов БА, что отражено в международных базах данных HuGen, Pubmed, Ensembl.
Роль провоспалительных цитокинов в патогенезе БА
МНК выделены из стабилизированной ЭДТА (в конечной концентрации 2 мг/мл) периферической крови доноров и больных на одноступенчатом градиенте фиколла («ПанЭко», Москва, плотность 1,077), центрифугированием при 4С и 400 g в течении 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трижды отмыты в 10-кратном объеме среды 199 с солями Хенкса и глутамином («ПанЭко», г. Москва). После каждой отмывки клетки осаждены центрифугированием при 1000 оборотах/мин, 4 С и ресуспендированы в РКС в концентрации 2 10 6 кл/мл.
Уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови доноров и больных определены при инкубировании МНК (концентрация 2-Ю6 кл/мл) в рабочей культуральной среде RPMI-1640 с добавлением 5% фетальной сыворотки плодов крупного рогатого скота («HyCIone»), 80 мкг/мл гентамицина в С02- инкубаторе при 37С в 24-луночных плоскодонных планшетах («Costar», США) в течении 18 часов. Для оценки стимулированной продукции медиаторов иммунной системы МНК инкубированы с ФГА («ПанЭко», г.Москва) в конечной концентрацией 10 мкг/мл. Через 18 часов после инкубации супернатанты отобраны в пробирки на 0,5 мл (Eppendorf, Germany) и заморожены при -30С.
Для определения уровня цитокинов использован твердофазный сэндвич-ИФА, разработанный для антигенов, имеющих не менее двух неперекрывающихся эпитопов. Антитела к одному из эпитопов сорбированы на твердой фазе. Сэндвич-ИФА не требует препаратов очищенных антигенов, чувствительность сэндвич-ИФА потенционально выше, чем конкурентного и ингибиторного. В тест-системах для определения TNF-a, IL-6, IL-17A, в качестве индикаторного фермента использована пероксидаза хрена, коньюгированная со стрептавидином, имеющим очень высокое сродство к биотину.
Испытуемые пробы (образцы сывороток и супернатантов в триплеплетах), калибровочные и контрольные растворы добавлены к твердой фазе и инкубированы в соответствующих условиях: в СОг-инкубаторе при 37С в течении 2-х часов при постоянном встряхивании на шейкере (Titertek, Germany). Имеющийся в образцах медиатор связывается с иммобилизованными антителами, а несвязавшийся материал удаляется отмывкой. После трехкратной отмывки в лунки добавлены коньюгированные с биотином антитела ко второму эпитопу определяемого антигена - вторые антитела; последующей отмывкой удален несвязавшийся коньюгат. Количество связавшегося коньюгата определено цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена - перекиси водорода и хромогена - тетраметилбензидина. Ферментативная активность, остающаяся на твердой фазе, прямо пропорциональна содержанию антигена в пробе. Для остановки реакции использован IN раствор H2S04. Оптическая плотность калибровочных растворов и исследуемых триплетах образцов измерена в лунках при длине волны 450 нм на 96-плашечном спектрофотометре (BioRad, USA). С помощью компьютерной программы «Земфира», версия 4.0, (BioRad, USA) и калибровочных растворов построен график, рассчитана концентрация медиаторов в каждой лунке. Для каждого образца рассчитаны средние значения по результатам трех измерений с вариацией, не превышающей 10%.
Образцы венозной крови для выделения геномной ДНК отобраны в пластиковые пробирки («VACCUETTE», Австрия) объёмом 2,5 мл с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2 мг/мл. Для выделения геномной ДНК из периферической крови использовали комплект реагентов «ПРОБА-ГС» (ООО «НПО ДНК-Технология», Москва) и «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «ЛИТЕХ»).
Согласно методике предложенной для комплекта «ПРОБА-ГС» в промаркированные пробирки (Eppendorf, Germany) вносили по 50 мкл подготовленного биоматериала исследуемых образцов. В качестве отрицательного контроля (К-) использовали 50 мкл стерильного физиологического раствора. К исследуемому биоматериалу на первом этапе добавляли 170 мкл смеси, состоящей из лизирующего раствора с предварительно ресуспендированным сорбентом 150-(N+1) мкл лизирующего раствора, 20-(N+l) мкл сорбента, где (N + 1) — количество анализируемых образцов с учётом «К-» (N) с запасом на 1 образец)» затем пробирки встряхивали на вортексе (3-5 сек.), термостатировали 20 мин. при 50С, центрифугировали 1 мин при 13000 об/мин, Не задевая осадок, удаляли надосадочную жидкость. Для отмывки адсорбированной ДНК к осадку последовательно добавляли 200 мкл промывочного раствора №1, №2, №3 после каждого добавления пробирки встряхивали на вортексе, центрифугировали и удаляли надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки), при тех же условиях. После отмывки осадок высушивали в пробирках с открытыми крышками 5 мин при 50С. К высушенному осадку прибавляли 100 мкл элюирующего раствора и встряхивали пробирки на вортексе в течение 5-Ю сек, термостатировали (5 мин., при 50С), центрифугировали (1 мин при 13000 об/мин). Надосадочную жидкость содержащая выделенную ДНК, переносили в новую пробирку и хранили при температуре минус 20С.
Для выделения ДНК с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «ЛИТЕХ») 1000 мкл венозной крови каждого исследуемого образца вносили в пробирки (Eppendorf, Germany)» центрифугировали 5 мин. при 3000 об/мин. После центрифугирования удаляли плазму крови и замораживали пробирки при минус 20С, в течение 1 ч. При комнатной температуре размораживали пробирки, добавляли -550 мкл реактива «ДНК-экспресс-кровь», примешивали на вортексе (10 сек.), термостатировали (99С, 15 мин.), центрифугировали (8000-14000 об/мин., 1 мин). В полученном супернатанте определяли концентрацию и качество ДНК на спектрофотометре NanoDrop 2000с «Thermo Scientific» (USA). Аликвоты по 15 мкл образцов ДНК в концентрации 50-100 мкг/мл отобраны в пластиковые пробирки (Eppendorf, Germany) и заморожены при t=-30C.
Общая характеристика обследованных доноров и больных
Нами проанализированы частоты TLR4 (Asp299/299GIy), TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G) при наследственной форме БА (клинические проявления БА у ближайших родственников в двух предшествующих поколениях) (табл. 13).
У больных с наследственной формой БА по сравнению с донорами не установлено достоверных различий по исследованным SNP.
Типирование полиморфизмов генов TLR не выявило ассоциированности трех исследованных SNP генов TLR у больных с приобретенной или наследственно-отягощенной БА. Вероятным кандидатом в маркерные SNP мог быть гомозиготный «патологический» G/G генотип внутриклеточного TLR9, участвующий в распознавании вирусных и бактериальных паттернов (#2=3,62; OR=3,03; р 0,05) (Табл. 13).
В соответствии с классификацией возрастной периодизации развития человека, учитывающей анатомические, физиологические, социальные факторы, принятой на VII конференции по проблемам возрастной морфологии, физиологии и биохимии (1965) обследованные больные в зависимости от возраста манифестации БА распределены в две группы. В 1 группе (п=5) включены лица с клиническими проявлениями болезни в период раннего и первого детства (0-7 лет). Во 2 группу (п=18) объединены больные I зрелого (21/22 - 35/35 лет) и II зрелого (36/36 - 55/60 лет) возрастов, так как между этими группами нет достоверных различий по исследованным SNP (табл. 14).
Для лиц с манифестацией БА в детском периоде и в зрелом возрасте не выявлено каких - либо различий по распределению частот аллелей и генотипов Т1Л(Табл. 14). Таблица 14 Частоты SNP генов TLR 4, TLR 9 у больных с манифестацией БА в детском периоде (раннем, первом) в зрелом возрасте (1-2-й периоды)
Частоты аллелей и генотипов исследуемых полиморфных вариантов TLR4 в группе доноров и больных не различаются. У больных с манифестацией БА в зрелом возрасте выявлена ассоциация с патологической 2848G аллели гена TLR9 и патологического гомозиготного генотипа G2848/2848G TLR 9. (Табл. 14), 3.1.5 Сочетание аллель ныл вариантов я генотипов TLR4 (Asp299/299Gly), TLR 4 (ТЬг399/399Пе), TLR 9 (A2848/2848G) при БА
Способность TLR к распознаванию разных вирусных и бактериальных паттернов предполагает необходимость исследования совместного участия полиморфных вариантов их генов в процессах переключения врожденного иммунитета на адаптивный (табл. 15). Таблица 15. Риск развития БА при сочетанном носительстве SNP TLR 4 (Asp299/299Gly), TLR 4 (Тгіг399/399І1е), TLR 9 (A2848/2848G) Аллели / генотипы TLR4(Asp299/299Gly), TLR4(Thr399/399Ile), TLR9(A2848/2848G) Частоты аллелеї і и генотипов І OR (95% СІ) больные БА (n=19) доноры (п=19) Asp/Thr/A 0,474 0,656 2,35 0,471 (0,18-1,24) Asp/Thr/G 0,526 0,344 2,121(0,81-5,59) N/N/N 0,263 0,375 3,49 0,60(0,14-2,51) N/N/Gt 0,421 0,563 0,57(0,15-2,17) N/N/P 0,316 0,062 6,92(0,73-65,26) Примечание: n - количество обследованных; Xі- хи - квадрат; OR-отношение шансов При анализе распределения SNP в обследованных группах доноров и больных БА выделено всего три наиболее часто встречающихся генотипа и два аллельных варианта. По сочетанным аллельным вариантам нет значимых различий (х2=3,49).
Т.о. несмотря на комплексный анализ полиморфизмов TLR4 и TLR9 с учетом таких многочисленных параметров как возраст, пол, время манифестации и наследственная отягощенность, достоверные различия не установлены.
Из многочисленных генов, вовлеченных в патогенез мультифакторных заболеваний, определенный научный интерес представляют гены МНС II, специфичности HLA DRB1, экспрессирующиеся на антигенпрезентирующих клетках иммунной системы. С 1999 по 2013 гг в базе данных HuGEn опубликованы результаты 22 исследований по ассоциации HLA DRB1 с риском развития БА, выполненные преимущественно в США, Корее, Китае.
По данным Di Somma С. et al., 2003; Juhn Y.J. et al., 2007; Munthe-Kaas M.C. et al., 2007; Hanchard N.A. et al., 2010; ICnutsen A.P. et al., 2010; Martyn M.B. et al., 2010, с БА ассоциированы разные специфичности HLA DRB1, что связано с этногенетическими и региональными особенностями,
В России аналогичные исследования проведены для географически удаленных регионов Астраханской, Кировской и Московской областях (таблица 2)., однако данные, полученные для этнических групп русских весьма противоречивы (Яковлева К.П. с соавт., 2002; Иллек Я.Ю. с соавт., 2009; Андреева Е.Е. с соавт., 2011).
Актуальным являются исследования, направленные на выявление у жителей каждого региона протективных и ассоциированных с БА HLA DRB1 специфичностей, особенно в сочетании с единичными нуклеотидными заменами в генах провоспалительных цитокинов.
Протективные и ассоциированные с Б A HLA DRB1 специфичности у жителей Республики Адыгея практически не исследованы, однако данные, полученные отечественными и зарубежными исследователями свительствуют об этногенетических различиях и прогностической значимости основных аллельных вариантов HLA DRB1 как предикторов хронических воспалительных заболеваний органов дыхания. Экспериментальные результаты, представленные в таблице 16 отражают распределение основных специфичностей в норме и при БА у этнических русских.
Полиморфизмы генов провоспалительных цитокинов, ассоциированные с БА в этнических группах населения РА
При сравнении доноров и больных с тяжелой формой БА без учета наследственной отягощенности, тендерных различий и др. параметров, у жителей РА не выявлено достоверных различий по частотам исследованных полиморфных вариантов, что согласуется с данными Chen S., 2012. Установленная ассоциация 299Gly «мутантного» аллеля гена мембранного TLR4 с тяжелым течением БА у русских жителей Московской области, не нашла экспериментального подтверждения для этнических русских, проживающих в Республике Адыгея (Воронько O.R с соавт., 2011).
У мужчин и женщин РА с хроническими воспалительными заболеваниями легких не установлены статистически значимые гендерные различия в соотношении частот Asp299 и 299Gly TLR4 (соответственно 0,909:0,091, у?=0,Ъ5; OR=0,57 и 0,971:0,029, х2=Ь20; OR=0,29). Наши данные не согласуются с утверждениями Adjers К. et all. (2005) об ассоциации «мутантной» 299Gly аллели гена TLR4 и определенного генотипа «высокого риска» развития БА для женщин Финляндии, что может быть обусловлено этническими особенностями. Следует отметить, что у мужчин и женщин РА по другим исследуемым SNP генов TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G) экспериментально также не выявлено ассоциации с хроническими воспалительными заболеваниями легких.
При SNP-типировании аллельных вариантов генов TLR4 (Asp299/299Gly), TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G) у больных с БА наследственная отягощенность, как правило, не учитывается. Поэтому нами исследовано частотное распределение и возможная ассоциация TLR4 (Asp299/299Gly), TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G) с риском развития БА в зависимости от наличия или отсутствия у близких родственников обследуемых больных хронических воспалительных заболеваний легких в двух предшествующих поколениях. Согласно полученным экспериментальным данным, с наследственно-отягощенной БА у обследованных жителей РА не ассоциирован ни один из трех SNP TLR4 и TLR9 (rs4986790, rs4986790, rs352140). Различия по частотам патологического гомозиготного G2848/2848G генотипа для A2848/2848G полиморфизмов гена внутриклеточного TLR9, участвующего в распознавании как вирусных, так и бактериальных паттернов у больных с приобретенной формой БА и доноров статистически не значимы ( =3,62, OR =3,03, р 0,05)
Для определения возможной ассоциации полиморфных вариантов TLR4 (Asp299/299Gly), TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G) с возрастом манифестации БА, проанализировано их распределение в группах больных с первыми клиническими проявлениями болезни в детском или зрелом возрасте (1 гр.), однако статистически значимые различия установлены только по гену внутриклеточного TLR9. У больных с манифестацией БА в зрелом возрасте, по сравнению с 1 группой, достоверно повышена частота «мутантной» 2848G аллели (Х2=5,52; OR=6,67) и G2848/2848G генотипа ( =4,46; OR=8,68) гена TLR9, что позволяет рассматривать их как маркеры более поздних клинических проявлений бронхиальной астмы.
Способность TLR к распознаванию вирусных и бактериальных паттернов предполагает необходимость анализа сочетания их аллельных вариантов и генотипов, обуславливающих предрасположенность или устойчивость к БА, что может иметь значение в процессах взаимодействия неспецифического и специфического иммунитета. Из возможных сочетаний исследованных SNP TLR4 и TLR9, в обследованных группах населения РА наиболее часто обнаруживаются две комбинации аллельных вариантов (Asp/Thr/G; Asp/Thr/A) и три генотипа (AspAsp/ThrThr/AA; AspAsp/ThrThr/AG; AspAsp/ThrThr/GG). У носителей AspAsp/ThrThr/GG генотипа риск развития БА повышается почти в семь раз {% =3,49; OR=6,92).
Развитие воспалительной реакции, опосредованной TLR, связано не только со стимуляцией экспрессии генов цитокинов, но и с HLA II класса. Исследования системы тканевых антигенов HLA свидетельствуют о тесной связи продуктов HLA с рядом заболеваний и возможностью их использования в качестве генетических маркеров предрасположенности или резистентности к БА (Михайленко А.А. с соавт., 2005; Андреева Е.Е. с соавт., 2011). Экспериментальные данные по частотному распределение специфичностей HLA DRB1 в этнических группах русских, проживающих на территории РА и в других областях РФ, а так же у славянских народов (белорусов и украинцев), подтверждает многочисленные литературные данные об этногеографических различиях в распределении аллельных вариантов HLA II класса. Одни и те же специфичности HLA II класса могут выступать в роли протективных или ассоциированных с мультифакторными заболеваниями (БА и др.), в зависимости от этнической принадлежности или территориальной удаленности обследованных этногрупп.
Повышение частоты DRB1 08 специфичности HLA (р=0,063) при БА у русских, проживающих в РА, сопоставимо с данными для этнических русских Астраханской области, где статистически значимо установлена ассоциированность DRB1 08 специфичности с БА (Андреева Е.Е., и др., 2011). Наиболее распространенная среди русских доноров PA HLA DRB 1 15 специфичность не является строго протективной к БА (р=0,082), что подтверждается данными мировых исследований (Cho S.H. et al., 2000; Kim Y.K. etal., 2002; Zhao J. etal., 2009; Шамгунова Б.А. с соавт., 2011; УбайдуллаевС. А. и др., 2010; Андреева Е.Е. с соавт., 2011).
Тендерные различия в заболеваемости БА, по данным HuGen, Pubmed, Ensembl проявляются преимущественно в детском возрасте, однако особенности распределения, возможные различия у мужчин и женщин по протективным/ ассоциированным с БА специфичностям HLADRB1 в проводимых ранее исследованиях и международных базах практически не отражены. Для мужчин и женщин Астраханской области выявлены разные протективные аллельные варианты гена HLA DRB1: у мужчин DRB1 13, у женщин DRB1 01, однако в качестве ассоциированного с ХВЗЛ установленна DRBP08 специфичность (Андреева Е.Е с соавт., 2011).