Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор «Экологическая иммунология основа мониторинга иммунологического и репродуктивного здоровья населения промышленного мегаполиса» 13
1.1. Антропогенные экотоксиканты (ЭТ), характеристика, источники, кинетика, биотрансформация, кумулятивные эффекты 16
1.2. Влияние ксенобиотиков-диоксинов на иммунную систему 22
1.3. Гормоноподобное действие экотоксикантов 28
1.4. Онкомаркеры, как основа экологического мониторинга репродуктивной функции 29
Глава 2. Материалы и методы исследования 36
2.1. Общая характеристика обследованных женщин 40
2.2. Эпидемиологические особенности доброкачественной и злокачественной патологии молочной железы г. Магнитогорска 41
2.3. Методы исследования 49
2.3.1. Подсчет общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов методом проточной цитометрии 49
2.3.2. Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови с помощью НСТ-тест 49
2.3.3. Метод исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови 51
2.3.4. Количественное определение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии 52
2.3.5. Турбидиметрический метод определения уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови 53
2.3.6. Метод иммуно ферментного анализа для определения уровней онкологических маркеров в сыворотке крови 54
2.4. Применение статистических методов обработки результатов
Глава 3. Сравнительная характеристика показателей иммунной системы женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез 60
3.1 Изучение иммунного статуса и показателей крови женщин 15-25 лет с мастопатией 60
3.2. Изучение иммунного статуса у женщин 35-60 лет с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез 71
Глава 4. Изучение уровня и спектра онкомаркеров у женщин репродуктивного возраста, проживающих в городе Магнитогорске 91
Глава 5. Многомерные исследующие методы в оценке иммунологических маркеров экозависимой патологии женщин раннего и позднего репродуктивного возраста 107
5.1. Дискриминантный анализ иммунологических параметров женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с гиперпластическими процессами молочной железы 121
Заключение 131
Выводы 148
Практические рекомендации 148
Список сокращений 150
Список литературы
- Влияние ксенобиотиков-диоксинов на иммунную систему
- Подсчет общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов методом проточной цитометрии
- Изучение иммунного статуса у женщин 35-60 лет с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез
- Дискриминантный анализ иммунологических параметров женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с гиперпластическими процессами молочной железы
Влияние ксенобиотиков-диоксинов на иммунную систему
Превышение порогов надежности экологических систем под действием эко-токсикантов антропогенного происхождения является причиной существенных изменений условий существования и функционирования биогеоценозов [5,42,46,78,79]. Экотоксиканты - экологически опасные химические агенты, способные длительное время сохраняться, мигрировать и накапливаться в биотических и абиотических компонентах. В экологическом аспекте любые химические загрязнения являются чужеродным комплексом в экосистеме, и их принято подразделять на четыре класса опасности: I - чрезвычайно опасные (суперэкотокси-канты), II - высокоопасные ЭТ, III - умеренно опасные (экотоксиканты) и IV - малоопасные (ксенобиотики). Приоритетное значение по степени опасности для окружающей среды и здоровья человека имеют неорганические ЭТ - тяжелые металлы и органические - нефтепродукты, полициклические ароматические углеводороды, диоксины. Последние представляют особую опасность для человека и приводят к развитию диоксиновой патологии [14,32,57,106].
Тяжелые металлы - основные неорганические экотоксиканты, имеющие плотность более 8 тыс. кг/м (ртуть, свинец, медь, цинк, никель, кадмий, кобальт, сурьма, висмут, олово, ванадий, мышьяк и др.). Основной поставщик тяжелых металлов - предприятия цветной металлургии, выбросы автотранспорта [126,127,182]. Многие металлы при определенных концентрациях ингибируют действие ферментов (медь, ртуть). Железо образует хелатоподобные комплексы с обычными метаболитами, нарушая обмен веществ. Некоторые металлы конкури 17 руют с необходимыми организму элементами, например, стронций-90 замещает в организме кальций, цезий 137 может замещать калий [90].
Ртуть. Основными источниками загрязнения окружающей среды этим элементом являются: пирометаллургические процессы получения металла, сжигание органических видов топлива, сточные воды, производство цветных металлов, красок, фунгицидов. Наиболее опасным соединением ртути является метилртуть. Общая (природная и антропогенная) эмиссия ртути в атмосферу составляет свыше 6000 тонн ежегодно, причем менее половины - 2500 т. - составляют поступления от естественных источников. Ртуть обладает широким спектром токсических эффектов: нарушение биосинтеза белка, разобщение окислительного фосфорили-рования субстратов в митохондриях почек и печени; возникновение биохимических сдвигов в организме; оказывает нейротоксическое, гонадотоксическое, гено-токсическое, эмбриотоксическое и тератогенное воздействие [39,120].
Свинец. Основными источниками загрязнения биосферы свинцом являются выхлопные газы двигателей внутреннего сгорания, высокотемпературные технологические процессы, добыча и переработка металла. Перенос свинца в окружающей среде и его распространение в объектах окружающей среды происходит преимущественно через атмосферу. Некоторые виды планктона обладают способностью концентрировать свинец в 12000 раз. Интенсивно аккумулируют свинец хвойные деревья и мох. Концентрация свинца в костях современного человека в 700—1200 раз превышает его содержание в скелетах людей живших 1600 лет назад. Механизм токсического воздействия свинца обусловлен ингибировани-ем ферментов детоксикации ксенобиотиков и угнетением образования цитохома Р-450 и цитохромоксидазы. Эксперименты на крысах и мышах дали убедительные доказательства канцерогенности свинца и его неорганических соединений, токсичность которых неоднородна и убывает в зависимости от вида соединения: нитрат хлорид оксиджарбонат ортофосфат.
Кадмий. Относится к рассеянным элементам и содержится в виде примеси во многих минералах. Основными источниками загрязнения окружающей среды кадмием являются производство цветных металлов, сжигание твердых отходов, угля, сточные воды горнометаллургических комбинатов, производство минеральных удобрений, красителей. Кадмий способен замещать ионы кальция в кальмодулине, ингибировать ионный транспорт и индуцировать синтез металло-тионеина [220]. Металлотионеины способны связывать как физиологические (цинк, медь, селен), так и ксенобиотические (кадмий, ртуть, серебро, мышьяк и др.) тяжёлые металлы. Кадмий чрезвычайно медленно выводится из человеческого организма. Хроническое отравление кадмием характеризуется поражением почек, нервной системы, легких, нарушением функций половых органов, оссалгия-ми.
Хром. Экотоксический эффект имеет шестивалентный хром, который появляется в результате антропогенной активности (использование хрома, сжигание угля, добыча руды и производство металла). Токсичность шестивалентного хрома проявляется в подавлении роста, в торможении метаболических процессов, в виде генотоксического, эмбриотоксического и тератогенного эффектов. Отмечаются различные дерматиты, аллергические реакции, раздражение верхних дыхательных путей. Многочисленными эпидемиологическими исследованиями установлено, что хроматы могут вызывать бронхогенный рак, поэтому хром и его соединения относят к группе высокого канцерогенного риска для человека.
Мышьяк. Один из самых опасных химических экотоксикантов. Ежегодно в мире промышленно производится более 60 000 тонн соединений As. Антропогенные источники поступления мышьяка в окружающую среду - добыча и переработка мышьяксодержащих руд, пиррометаллургия, сжигание природных видов топлива - каменного угля, сланцев, нефти, торфа, а также производство и использование суперфосфатов, содержащих мышьяк ядохимикатов, препаратов и антисептиков. Абсорбция, трансплацентарный транспорт, распределение в организме, элиминация и биотрансформация мышьяка видоспецифичны, зависят от путей поступления и химической структуры As-соединений. Токсические эффекты приводят к нарушениям тканевого дыхания, ацидозу, гемолизу, гипо - и апла-стической анемии, эмбрио - и гонадотоксическим и тератогенным эффектам; химическому канцерогенезу [230].
Подсчет общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов методом проточной цитометрии
Так, в 2005 году в городе проживало 414853 человека, в том числе 160231 мужчин и 164052 женщин, соответственно 38,6% и 39,6% от общей численности населения. Детское население составило 90570 человек, что составляет 21,8%. По состоянию на 2012 год численность Магнитогорского городского округа составляет 409593 человека, из них 151175 мужчин (36,9% от общего числа) и 182210 женщин (44,5%). Детское население составляет 76208 человек (18,6%).
Состояние популяционного здоровья и развития любого общества определяется уровнем здоровья детей и подростков, которые формируют демографический резерв, в городе, как и в целом по России, отчетливо прослеживается тенденция снижения детского и подросткового населения, а так же отмечаются проблемы репродуктивного здоровья [150]. Магнитогорск является вторым по значимости промышленным городом в Челябинской области. Основными источниками загрязнения атмосферного воздуха являются предприятия черной металлургии, производства строительных материалов, в том числе ОАО «Магнитогорский металлургический комбинат», ЗАО «Механоремонтный комплекс», ООО «Огне-упор», ЗАО «Металлургремонт-1»,000 «Электроремонт», ЗАО «Русская металлургическая компания», ОАО «ММК-МЕТИЗ», тепловые электростанции, а также автомобильный и железнодорожный транспорт. Огромный вклад в выбросы стационарных источников, как основных, так и специфических веществ вносит ОАО «Магнитогорский металлургический комбинат» с полным металлургическим циклом [68,89,90,91,182]. По данным формы ГН 1.1.725-98 «Перечень веществ, продуктов, производственных процессов, бытовых и природных факторов канцерогенных для человека» нами выделены основные канцерогенные химические вещества, вызывающие онкологическую патологию органов репродуктивной сферы, перечень которых представлен ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Челябинской области» г. Магнитогорска (2012): диоксид серы, оксид углерода, диоксид азота, оксид азота, сероводород, фенол, аммиак, бенз[а]пирен, формальдегид, бензол, ксилол, толуол, этилбензол, железо, марганец, медь, никель, хром, цинк, свинец, кадмий, магний. Среднегодовые концентрации 4 примесей превышают 1 ПДК: взвешенные вещества - 2,6 доли ПДК, диоксид азота - 1,4 доли ПДК, формальдегид - 4,3 доли ПДК, бенз[а]пирен - 5,7 доли ПДК (рис.4.) Как отмечает Кошкина В. С. (2008) в г. Магнитогорске ряд предприятий черной металлургии, что является региональной особенностью, являются источниками выбросов веществ потенциально опасных с точки зрения канцерогенного воздействия.
По данным мониторинга загрязнения атмосферного воздуха (2005-2012 гг.) уровень загрязнения атмосферного воздуха во все годы оценивался как очень высокий [68]. Индекс загрязнения атмосферы (ИЗА), в 2012 году составил 25,2, при нормативе не более 14, при этом тенденция к росту индекса наблюдается с 2010 г (ИЗА=16,6), в 2011 (ИЗА = 21). Показатели индекса загрязнения атмосферного воздуха представлены на рис.2. ИЗА
Доля загрязнителей 1 класса опасности (пентаоксид ванадия, сульфат никеля, свинец и его неорганические соединения, хром шестивалентный, бенз[а]пирен и пыль асбестсодержащая) составляет менее 0,001%, 2 класса опасности (высокоопасные) - 0,8%, 3 класса опасности (умеренно опасные) - 29,3%, доля веществ, класс опасности для которых не определен (34 вещества), составила 1,6%.Согласно СанПин 1.2.2353-08 «Канцерогенные факторы и основные требования к профилактике канцерогенной опасности» обладают канцерогенным действием при ингаляционном пути поступления в организм: никель оксид, никель сульфат, хром шестивалентный, бензол, бенз[а]пирен, (хлорметил)оксиран, формальдегид, масло минеральное нефтяное, пыль неорганическая с содержанием диоксида кремния менее 20%, пыль неорганическая с содержанием диоксида кремния 20-70%, пыль неорганическая с содержанием диоксида кремния более 70%, пыль асбестсодержащая и пыль древесная. Превышение концентрации в окружающей среде вышеуказанных веществ лежит в основе развития экозависи-мой патологии желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, репродуктивной сферы, эндокринной, нервной, иммунной систем [11,101]. 2.1. Общая характеристика обследованных женщин
Всего обследовано 150 женщин репродуктивного возраста из лечебных учреждений г. Магнитогорска, постоянно проживающих в промышленном городе, находящихся под наблюдением врачей гинекологов, онкологов. Изучена карта амбулаторного больного форма №025-у, составлены карты иммунологического мониторинга больного с иммунопатологией, которые были разработаны в НИИ иммунологии ЧелГМА. Дополнительно был собран более подробный акушерско-гинекологический анамнез с учетом выявления онкологической наследственности среди ближайших родственников.
Обследование пациентов проводилось во время проведения профилактических медицинских осмотров, после консультативного приема по обращению к врачу гинекологу, во время лечения в онкологическом диспансере (до хирургического вмешательства).
Всем пациентам проведен необходимый перечень инструментальных исследований молочной железы при соответствующих показаниях. Женщинам с раком молочной железы проведены дополнительные исследования после хирургической манипуляции в виде цитологического и гистологического исследования биологического материала из ткани молочной железы.
Нами проанализирована медицинская документация, карты иммунологического мониторинга, результаты лабораторного исследования, в результате чего выделено 5 групп пациентов: из них 2 группы женщин раннего репродуктивного возраста (15-25 лет) и 3 группы женщин позднего репродуктивного возраста (35-60 лет, где с 45 до 60 лет постменопаузальный период): 1 группа - 36 условно-здоровых женщин (контрольная группа), средний возраст которых составил 20,1 ± 0,90 лет. 2 группа - 33 молодые женщины с патологией молочных желез, средний возраст составил 19,9±0,99 лет. 3 группа - 20 условно-здоровых женщин, средний возраст составил 44,5± 1,28 года. 4 группа - 22 женщины с доброкачественной патологией молочных желез, средний возраст составил 46,5 ± 1,37 лет. 5 группа - 27 женщин с раком молочной железы 1-2 стадии, впервые выявленным до хирургического и терапевтического лечения, средний возраст составил 52,9 ± 1,76 года.
Формирование 1 и 3 групп осуществлялось после полного терапевтического осмотра и заключений ряда специалистов: иммунолога, хирурга, стоматолога, эндокринолога, гинеколога, ЛОР. На момент обследования все условно-здоровые лица не предъявляли каких-либо жалоб на наличие хронического или аллергического заболевания и в течение последнего месяца перед обследованием не страдали острыми респираторными заболеваниями.
На основании анкетирования был проанализирован профмаршрут каждого пациента, входящего в исследование, изучены сопутствующие заболевания и подверженность воздействию неблагоприятных экологических факторов.
Изучение иммунного статуса у женщин 35-60 лет с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез
Определение популяционного состава лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии [189], особенность которого заключается в возможности исследовать целевую клеточную популяцию в среде гетерогенного образца. Тест основан на способности специфических моноклональных антител связываться с дискретными антигенными детерминантами, экспрессированными на поверхности лейкоцитов. В процессе инкубации образца с реагентом происходит специфическое окрашивание. После этого эритроциты удаляются путем лизирования, а клетки белой крови анализируются на проточном цитометре с использованием лимфоцитарных гейтов [188,189,190].
Непосредственно для окрашивания нами были использованы двух- и четы-рехпараметрические реагенты линии IOTest: CD3-FITC/CD19-PE, CD3-FITC/CD4-РЕ, CD3-FITC/CD8-PE, CD3-FITC/CD(16+56)-PE, CD3-FITC/CD25-PE, CD3-FITC/-HLA-DR-PE. Наличие пан-Т-лимфоцитарного маркера CD3+ при отсутствии CD19+ характерно для Т-лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD4+ - для Т-хелперно/индукторных лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD8+ - для Т-цитотоксических лимфоцитов; CD 16+56+ при отсутствии CD3+ для NK-лимфоцитов, CD3+CD25+ - маркер ранней активации Т-клеток, CD3+ HLA DR+ -маркер поздней активации Т-лимфоцитов.
Окрашивание моноклональными антителами проводили в цельной крови. С этой целью после осторожного переворачивания вакуумной пробирки по 100 мкл крови помещали в каждую из 7 пробирок размером 12x75 мм. Добавляли в них по 10 мкл антител CD3-FITC/CD19-PE, CD3-FITC/CD4-PE, CD3-FITC/CD8-PE, CD3 FITC/CD(16+56)-PE, CD3-FITC/CD25-PE, CD3-FITC/-HLA-DR-PE соответственно. Пробирки инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 25 минут. По окончании инкубации проводили лизис эритроцитов и фиксацию лейкоцитов с использованием лизирующего комплекта реагентов Im-muno-Prep (в состав комплекта входит реагент А - лизирующий эритроциты, реагент В - стабилизирующий и реагент С - фиксирующий реагент) на автоматической станции пробоподготовки Q-Prep. Непосредственно перед анализом на проточном цитометре добавляли в пробирки по 100 мкл частиц Flow-Count, которые по показателям флуоресценции сильно отличаются от клеток. Концентрация этих частиц заранее известна. Проводили подсчет клеток и частиц Flow-Count в полученной суспензии. Исходя из известного количества клеток интересующей нас субпопуляции, в том же объеме подсчитывается концентрация клеток этой субпопуляции. Готовый образец анализировали на лазерных проточных цитометрах Epics XL и Cytomicx FC 500 фирмы Beckman Coulter, США с использованием гомогенного гейтирования по показателям светорассеяния.
Турбидиметрия - это метод количественного измерения концентрации специфических белков, основанный на измерении мутности раствора при реакции «антиген-антитело», образованную частицами определяемого вещества в жидкой фазе. Для определения уровня иммуноглобулинов А, М, G использовались реагенты фирмы FIUMAN , производство Германия. Набор включает антисыворотки Ig А, М, G и стандарт Ig А, М, G. Метод определения иммуноглобулинов основан на реакции между иммуноглобулином-антигеном и специфической анти-сывороткой, как соответствующим антителом. В результате реакции образуются нерастворимые иммунопреципитаты, приводящие к появлению мутности раствора. Анти-сыворотка поставляется в готовом к применению виде и содержит этиленгликоль в качестве ускорителя. Мутность реакционной смеси, измеряемая фотометрически, прямо пропорциональна содержанию иммуноглобулинов в об 54
разце. Расчет концентрации иммуноглобулинов производится на основании измерения стандарта, который исследуется в каждой серии проб. Исследуемые биологические пробы перед анализом разбавляли физиологическим раствором 0,9% NaCl в отношении 1:20, одно и то же разведение использовали для исследования трех иммуноглобулинов, длина волны 340 нм.
Для контроля качества исследований применяли контрольные сыворотки на основе крови человека «SERODOS» производства фирмы «HUMAN». Анализ исследований проводился на автоматическом биохимическом анализаторе открытого типа «САПФИР-400» производства Япония согласно инструкции производителя наборов.
Лабораторная диагностика опухолей проводится в целях диагностики и мониторинга течения заболевания и основывается на использовании чувствительных опухолеспецифических (ассоциированных с опухолью) онкомаркеров. К таким онкомаркерам относится большая группа факторов, обнаруживаемых в злокачественных и ассоциированных со злокачественным ростом клетках. Они представляют собой макромолекулы, в основном белки с углеводным или липидным компонентом. От соединений, продуцируемых нормальными клетками, они отличаются или качественно (опухолеспецифичные) или количественно (ассоциированные с опухолью, но присутствующие также и в нормальных клетках). Они формируются внутри или на поверхности опухолевых клеток, или же в результате индукции образуются в других клетках. Часть онкомаркеров секретируется в кровь, благодаря чему их концентрацию можно определить с помощью иммуноферментного анализа [69].
Иммуноферментный анализ (ИФА) - лабораторное исследование, основанное на высокой избирательности и специфичности иммунологических реакций «антиген-антитело», а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня. В наборах для определения уровня онкологических маркеров преимущественно используется «сэндвич» вариант твердофазного иммуноферментного анализа.
Для определения уровня СА -125 применялся набор «ОнкоИФА -СА 125», «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитоп-ной специфичностью к раковому маркеру. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. При добавлении исследуемого образца и конъюгата анти- СА-125- перок-сидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация СА-125,содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. Степень окраски во время инкубации с ТМБ прямо пропорциональна количеству СА-125 в исследуемом образце. Диапазон значений концентраций СА-125: от 0 до 35 Ед/мл.
Определение антигена MUC1 в наборе реагентов «СА15-3(М12)- ИФА» основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы мышиные моноклональные антитела к СА-15-3(М12).В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца, происходит связывание СА15-3 (М12), содержащегося в исследуемом образце, с антителами на твердой фазе. Образовавшийся комплекс выявляем с помощью коньюгата мышиных моноклональных антител к СА-15-3 человека с пероксидазой хрена. Степень окраски после инкубации с ТМБ (тетра-метиленбензидин) прямо пропорциональна концентрации антигена. Диапазон значений концентраций СА-15-3: от 0 до 30 Ед/мл.
Дискриминантный анализ иммунологических параметров женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с гиперпластическими процессами молочной железы
Как видно из таблицы 27, анализ факторной структуры в группе женщин позднего репродуктивного периода, страдающих мастопатией, также позволил выделить пять главных компонент, состоящих из ряда показателей иммунной системы и онкологического скрининга. Первая подгруппа (Factor 1) содержит набор показателей как врожденного, так и приобретенного иммунитета: НСТ спонтанный (индекс), НСТ индуцированный, CD4, CD8, с высокими факторными нагрузками (0,89; 0,89; 0,82; 0,83; соответственно), а также маркера онкоскрининга СА19-9 (ФН=0,92), при этом вклад в общую дисперсию признаков фактора 1 составляет 24,7%. Вторая подсистема (Factor 2) включает следующие показатели: ИРИ (ФН=0,72), T-NK (ФН=0,82), Т-лимфоциты (ФН=0,71) и онкомаркер СА125 (ФН=0,85), вклад в общую дисперсию признаков составил 17,09%; третья подсистема (Factor 3) содержит показатели, характеризующие наличие исключительно факторов адаптивного иммунитета: CD3-лимфоцитов (ФН=0,73), CD4 (ФН=0,70), IgA (ФН=0,74), показатель нейрон-специфической енолазы (ФН=0,77), при этом вклад в общую дисперсию признаков составил 15,75%. Четвертая подсистема (Factor 4) включает маркеры ранней позитивной активации (СО25,ФН=0,91) и СА 19-9 (ФН=0,92), относительный вклад компоненты в общую дисперсию признаков составил 10,51%; пятая компонента (Factor 5) включает в себя параметры характеризующие активационные признаки лимфоцитов (CD25, ФН=0,79) и лимфоциты с рецепторами HLA-Dr (ФН=0,92), вклад в дисперсию = 8,24%.
Таким образом, у женщин позднего репродуктивного возраста с мастопатией ведущие компонены (факторы 1,2,3), имеющие весомый суммарный вклад в общую дисперсию признаков (более 58%) содержат в своем составе показатели как врожденного, так и приобретенного иммунитета и онкологические маркеры, относящиеся преимущественно к репродуктивной сфере. Примечательно, что 4 и 5 факторы содержат в своем составе показатели приобретенного иммунитета, несущие на мембране маркеры ранней и поздней активации иммунных клеток, при этом суммарный вклад в общую дисперсию признаков составил 18,75%.
Следовательно, при системном иммунном ответе на гиперпластические процессы в тканях молочной железы у женщин позднего репродуктивного возраста, оказались вовлеченными все звенья иммунной системы, как врожденные, так и приобретенные, в отличие от группы женщин раннего возраста с мастопатией. Кроме того, отмечено наличие в составе ведущих подгрупп (1,2,3) маркерных показателей онкоскрининга, в отличие от группы молодых женщин, где они входили в состав лишь 5 подгруппы.
Следующим этапом явилось изучение корреляционной матрицы главных компонент в группе женщин позднего репродуктивного возраста, страдающих раком молочной железы 1-2 степени. Результаты представлены в таблице 28.
Анализ таблицы 28 показал, что при проведении многофакторного анализа в группе пациенток позднего репродуктивного возраста с раком молочной железы 1-2 стадии максимальное количество вариативных признаков, входящих в состав главных компонент зафиксировано в составе Factor 1, показатели, характеризующие активность врожденных механизмов иммунитета: интенсивность фагоцитоза (ФН=0,73), НСТ спонтанная активность (ФН=0,79), НСТ индуцированная активность (ФН=0,85) и онкомаркеры СА15-3 (ФН=0,95) и СА125 (ФН=0,85), суммарный вклад в общую дисперсию признаков составил 19,7%. Factor 2 содержит в своем составе показатели ранней и поздней позитивной активации клеток Т- звена иммунной системы: CD25 abs (ФН=0,83), HLA Dr abs (ФН=0,92) и РЭА (ФН=0,84), вклад в общую дисперсию признаков составил 17,8%. Factor 3 включает Т лимфоциты (ФН=0,85), вклад составил 11,06%. Factor 4 не содержит ни одного показателя, имеющего высокие факторные нагрузки, общий вклад в дисперсию признаков 9,25%; Factor 5 включает относительное и абсолютное количество Т-МСклетки (ФН=0,82; 0,74 соответственно).
Так, в группе женщин с раком молочной железы, отмечено преобладание факторов врожденного иммунитета, активационных маркеров Т-лимфоцитов и параметров онкологического скрининга, как и в группах раннего и позднего репродуктивного возраста с гиперпластическими процессами в тканях молочной железы.
Таким образом, главными особенностями, установленными нами при проведении многофакторного анализа в группе пациенток раннего репродуктивного возраста с мастопатией являются: (1) параллельное включение как факторов приобретенного, так и врожденного компартментов (Factor 1, 2, 3) иммунной системы с самыми высокими процентами относительного вклада в общую дисперсию признаков, при этом маркеры онкологического скрининга не входят в состав ведущих компонент (Factor 5).
В группе пациенток позднего репродуктивного возраста с мастопатией ведущие главные компоненты содержат информацию о факторах врожденного иммунитета (Factor 1, 2), показатели адаптивного иммунитета переместились на более отдаленные позиции (Factor 3), однако, в данной возрастной группе имеет место включение онкомаркеров на более близкие позиции (Factor 2, 3), в отличие от молодых женщин. Перемещение вариативных показателей врожденного звена иммунной системы, маркеров Т-клеточной активации и маркеров онкоскрининга на ведущие позиции (Factor 1,2) отмечено в группе женщин позднего репродуктивного возраста, страдающих раком молочной железы, что свидетельствует о важной роли врожденных механизмов защиты и Т-звена иммунитета в реализации противоопухолевого иммунитета.
Ниже дана суммарная таблица 4, в которой приведены общие результаты многофакторного анализа показателей иммунной системы и онкологического скрининга среди изучаемых возрастных групп.