Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
Эндотелий общая характеристика, морфология, развитие, функции 11
1.2 Эндотелиальная дисфункция 12
1.3 Антифосфолипидный синдром в акушерско-гинекологической практике 14
1.4 Патофизиологические механизмы клинических проявлений АФС 17
1.5 Эндотелиальная дисфункция при антифосфолипидном синдроме 19
1.6 Антифосфолипидные антитела. Трудности лабораторной диагностики. 21
1.7 Подходы к терапии АФС 26
1.8 Применение иммуноглобулинов для внутривенного введения при
антифосфолипидном синдроме, механизмы протективного действия 29
1.8.1 ВВИГ: характеристика препаратов 29
1.8.2 Показания к применению ВВИГ 30
1.8.3 Механизмы иммуномодулирующего и цитопротективного действия ВВИГ 32
Глава 2. Материалы и методы 37
2.2 Культура клеток 38
2.3 Исследование содержания аутоантител и маркеров эндотелиальной
дисфункции в сыворотке периферической крови 39
2.4 Определение агрегационной активности тромбоцитов. 40
2.5 Оценка цитопатического эффекта сывороток периферической крови женщин в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 41
2.6 Влияние ВВИГ на изменение чувствительности эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 к цитопатическому эффекту сыворотки крови 42
2.6.1 Определение минимальной токсической дозы препарата иммуноглобулинов для внутривенного введения 43
2.6.2 Оценка цитопротективного эффекта препарата ВВИГ в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 43
2.7 Оценка связывания иммуноглобулинов класса G, входящих в препарат ВВИГ, с эндотелиальными клетками линии EA.Hy926 44
2.8 Статистический анализ 45
ГЛАВА 3. Результаты исследования 47
3.1 Содержание аутоантител к кардиолипину, фосфатидилсерину, фос
5, протромбину у женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности 47
3.2 Результаты сравнительного анализа метода ИФА и иммуноблота для выявления аутоантител, ассоциированных с АФС 49
3.3 Оценка показателей тромбоцитарного гемостаза 50
3.4 Содержание маркеров эндотелиальной дисфункции sICAM-I, эндотелина-1, тромбомодулина, сывороточного аннексина 5 и фактора Виллебранда в сыворотке периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности 51
3.5 Цитопатический эффект нативной сыворотки периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 54
3.6 Цитопатический эффект инактивированной сыворотки периферической крови женщин с привычным невынашиванием беременности в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 56
3.7 Разработка метода оценки эндотелиопротективного эффекта препарата иммуноглобулинов для внутривенного ведения 59
ГЛАВА 4. Заключение. Обсуждение результатов исследования 68
Выводы 80
Практические рекомендации 82
Перспективы дальнейшей разработки темы 82
Список сокращений 83
Список литературы 84
- Патофизиологические механизмы клинических проявлений АФС
- Влияние ВВИГ на изменение чувствительности эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 к цитопатическому эффекту сыворотки крови
- Содержание маркеров эндотелиальной дисфункции sICAM-I, эндотелина-1, тромбомодулина, сывороточного аннексина 5 и фактора Виллебранда в сыворотке периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности
- Разработка метода оценки эндотелиопротективного эффекта препарата иммуноглобулинов для внутривенного ведения
Патофизиологические механизмы клинических проявлений АФС
При физиологическом состоянии существует оптимальное соотношение выработки эндотелиальных субстанций. При действии на сосудистый эндотелий различных повреждающих факторов, таких как антифосфолипидные антитела, компоненты комплемента, гипоксия, повышенное артериальное давление, чрезмерная концентрация катехоламинов, ангиотензина II, происходит активация клеток эндотелия и развивается его дисфункция [54]. Под эндотелиальной дисфункцией подразумевается дисбаланс между различными эндотелиальными медиаторами (вазодилататоры- вазоконстрикторы, анти- и прокоагуянты, факторы роста и ингибиторы), разрываются нормальные регуляторные связи, происходит нарушение функции эндотелия [61]. Такая ситуация наблюдается в клинической практике при антифосфолипидном синдроме (как в акушерской клинике, так и при сердечно-сосудистой патологии), гестозе, атеросклерозе, где к перечисленным факторам присоединяется повреждающее действие окисленных липопротеидов низкой и очень низкой плотности. В своем развитии эндотелиальная дисфункция проходит несколько фаз [61, 158]. Первоначально происходит активация эндотелиальных клеток, в которой можно выделить две стадии. На первой - стадии стимуляции, которая начинается сразу же после воздействия агрессивного фактора и сопровождается выбросом медиаторов, имеющихся в клетке, таких как Р-селектин, фактор Виллебранда [54]. Если активирующий сигнал продолжает действовать на клетку, то наступает следующая стадия – собственно активации. В эту стадию резко увеличивается высвобождение вазоконстрикторных субстанций, повышающих сосудистый тонус, агрегацию тромбоцитов и свертывание крови, к ним относятся эндотелин 1, ангиотензин II, тромбоксан и другие. Эндотелин-I является главным вазоконстрикторным пептидом [112]. Вазоконстрикторный потенциал эндотелина-I в 10 раз выше, чем у ангиотензина II. В физиологических концентрациях эндотелин-I действует на эндотелиальные рецепторы, вызывая высвобождение факторов релаксации, а в более высоких – активирует рецепторы на гладкомышечных клетках, стимулируя стойкую вазоконстрикцию. На этой стадии также происходит запуск транскрипции генов, начинается синтез белка de novo, увеличивается экспрессия адгезивных молекул ICAM-1, VCAM-1, E-селектина эндтотелиальными клетками [105], высвобождение хемокинов (ИЛ-8) и фактора активации тромбоцитов (PAF) [60]. Происходит протрузия эндотелиальных клеток в просвет сосуда, они гипертрофируются, увеличивается биосинтез органелл (комплекса Гольджи, шероховатой эндоплазматической сети, рибосом), увеличивается проницаемость эндотелия. Активация эндотелиальных клеток представляет собой обратимый процесс [75]. Если происходит нейтрализация активирующего фактора, то клетка способна вернуться в первоначальное состояние. Если же процесс активации длительный и неконтролируемый, то эндотелиальные клетки могут исчерпать эндогенный защитный эффект [158]. При этом происходит подавление выработки вазодилатирующих субстанций, таких как простациклин, который, помимо мощного сосудорасширяющего действия, обладает антитромботическим эффектом, оксида азота (NO), который обеспечивает выраженную релаксацию гладких мышц артерий, артериол и вен, а также препятствует адгезии и агрегации тромбоцитов [66] и, как следствие, развивается дисфункция эндотелия. При дальнейшем воздействии агрессивного фактора в клетках эндотелия запускаются механизмы апоптоза, клетки теряют целостность и могут появляться в циркулирующей крови [61]. Нарушение функции эндотелия ведет к комплексу микроциркуляторных нарушений с дальнейшим развитием тромботического состояния, что является основной составляющей многих заболеваний. Подобная ситуация развивается и при аутоиммунной патологии, когда появление антифосфолипидных аутоантител ведет к активации клеток эндотелия и их повреждению. К одним из таких заболеваний относится антифосфолипидный синдром.
Изучение тромботических нарушений, которые в настоящее время определяют как антифосфолипидный синдром, началось с 1907 года, когда впервые был введен тест Вассермана для диагностики сифилиса. В 1941—44 годах M.C. Пэнгборн установила, что основным антигенным компонентом в реакции Вассермана является фосфолипид, который она назвала кардиолипином [17]. С 1950 годов появляются первые сообщения о пациентах с ложноположительной реакцией на сифилис, перенесших тромботические состояния [116]. Было установлено, что ложноположительная реакция чаще выявляется при аутоиммунных заболеваниях, особенно при системной красной волчанке (СКВ). У таких пациентов был обнаружен фактор, ингибирующий in vitro фосфолипид-зависимую реакцию свертывания крови, а его присутствие в плазме крови ассоциировалось с тромбозами, он получил название «волчаночный антикоагулянт». В 1983 году Найджел Харрис разработал радиоиммунный метод выявления антикардиолипиновых антител [82]. В том же Грэм Хьюз, сопоставив клинические проявления и лабораторные данные, дал описание антифосфолипидного синдрома [84]. На сегодняшний день под антифосфолипидным синдромом понимают аутоиммунное заболевание, характеризующееся рецидивирующими тромбозами, акушерской патологией, тромбоцитопенией и стойким наличием антифосфолипидных антител [1, 13, 17, 22]. Предварительные критерии постановки диагноза «антифосфолипидный синдром» были разработаны в 1998 году в Саппоро [122], а в 2006 году в Сиднее они были пересмотрены и дополнены [106]. Это клинические критерии, включающие в себя сосудистые тромбозы: один или более эпизодов артериального, венозного тромбоза, или тромбоза сосудов малого диаметра, в любой ткани или органе, подтвержденный картиной ультразвукового доплеровского сканирования или данными гистологического исследования. Отдельное место занимает патология беременности: одна или более гибель плода от 10 и более недель беременности, подтвержденная нормальной морфологией плода при ультразвуковом исследовании и морфологически; один или более случаев преждевременных родов морфологически нормального плода на сроке до 34-х недель беременности в результате тяжелой преэклампсии, эклампсии, или плацентарной недостаточности; три или более необъяснимых спонтанных аборта на сроке до 10 недель беременности, при исключении анатомических, гормональных и генетических причин невынашивания. Лабораторные критерии: умеренный или высокий уровень антител к кардиолипину класса IgG и/или IgМ в крови, в 2-х или более исследованиях, полученных с интервалом не менее 12 недель, измеренные методом иммуноферментного анализа; антитела к 2-гликопротеину-1 класса IgG и/или IgМ в крови, в 2-х или более исследованиях, полученных с интервалом не менее 12 недель, измеренные методом иммуноферментного анализа. Позитивный тест на наличие «волчаночного антикоагулянта» в плазме в 2-х или более исследованиях, полученных с интервалом не менее 12 недель. Пациенты с антифосфолипидным синдромом должны иметь не менее одного клинического и одного лабораторного критерия.
Основу клинических проявлений антифосфолипидного синдрома составляют венозные тромбозы, локализуемые наиболее часто в глубоких венах голеней, что может осложняться тромбоэмболией легочной артерии [13], артериальные тромбозы, проявляющиеся инсультами, инфарктом миокарда, почек и других внутренних органов [48], а также широкий спектр неврологических, кожных, сердечно-сосудистых нарушений, характер и выраженность которых зависят от локализации тромбозов и окклюзий в соответствующих сосудистых бассейнах, степени гемодинамических расстройств и расстройств микроциркуляции [17, 43, 48, 49].
Влияние ВВИГ на изменение чувствительности эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 к цитопатическому эффекту сыворотки крови
В работе использовали эндотелиальные клетки линии EA.Hy926, полученные путем гибридизации первичной человеческой эндотелиальной линии HUVEC с клетками карциномы легкого A-549 [64]. Клетки линии EA.Нy926 были предоставлены Dr. C.-J. Edgell (Университет Северной Калифорнии, США). Клетки линии EA.Нy926 воспроизводят все основные морфологические, фенотипические и функциональные характеристики, присущие эндотелию. Клетки культивировали в инкубаторе при 37С с 5% содержанием СО2 в среде DMEM/F12 (Sigma, США) с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (Sigma, США), 10 мг/мл стрептомицина (Sigma, США), 1х105 ЕД/мл пенициллина (Sigma, США), 2 мМ L-глютамина (Sigma, США) и раствор гипоксантина–аминоптерин–тимидина (HAT) (Sigma, США). Клетки линии EA.Нy926 являются монослойной культурой, требующей пересева 1 раз в 3-4 дня. Дезинтеграцию монослоя для пересева вызывали 5-минутной экспозицией в растворе Версена («Биолот», Россия). Для оценки жизнеспособности клеток использовали раствор трипанового синего, при этом жизнеспособность клеток составляла не менее 96%.
В сыворотках периферической крови содержание антител (IgG/IgM) к кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте, 2-гликопротеину-I, аннексину 5, протромбину определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем фирмы Orgentec Diagnostika GmbH (Германия) и методом иммуноблота с использованием коммерческих тест-систем фирмы Medipan (Германия). Содержание растворимой формы молекулы межклеточной адгезии (sICAM-1) определяли при помощи стандартного набора для иммуноферментного анализа (BD, США). Содержание эндотелина-1 в сыворотке периферической крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем «ENDOTELIN (1-21)» фирмы Biomedika (Австрия). Содержание тромбомодулина в сыворотке периферической крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем «Thrombomodulin» фирмы USCN Life Science (США). Содержание фактора Виллебранда в плазме периферической крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем «TECHNOZYM vWF:Ag ELISA» фирмы Technoclone GmbH (Австрия). Содержание сывороточного аннексина 5 определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем Human annexin 5 (eBioscience; Австрия). При постановке исследований использовали стандартные образцы для построения калибровочной кривой и контрольные образцы. Оптическую плотность исследуемых образцов проводили на автоматическом спектрофотометре для микропланшет серии ELx808 производства BioTek Instruments Inc. (США) при длине волны 450 нм. Результаты исследования оценивали в соответствии с рекомендациями производителя. «Волчаночный антикоагулянт» определяли на коагулометре ACL-200 (Instrumentation Laboratory, Испания) с использованием реактивов фирмы Siemens (Германия).
Агрегационную активность тромбоцитов определяли на анализаторе агрегации тромбоцитов «Solar AP 2110». Кровь для исследования собирали в пробирку с антикоагулянтом - цитрат натрия. Затем кровь центрифугировали при 100g в течение 5 минут, полученную плазму, богатую тромбоцитами, отбирали для исследования. Далее оставшуюся кровь снова центрифугировали при 2000g в течение 15 минут для получения бестромбоцитарной плазмы, которая использовалась для калировки оптической шкалы прибора, и, при необходимости, для разведения богатой тромбоцитами плазмы до стандартного содержания клеток 150-250 109/л.
Мерой агрегационного процесса служило графически регистирируемое падение оптической плотности плазмы крови в результате потребления тромбоцитов в агрегатах, образующихся под воздействием индуктора агрегации (АДФ, концентрация 2мкМ). Степень агрегации оценивали как максимальное изменение оптической плотности образца после добавлении индуктора агрегации (значение выражали в %). Скорость агрегации определяли как тангенс угла наклона касательной к кинетической кривой изменения оптической плотности образца (значение выражали в %/мин).
Содержание маркеров эндотелиальной дисфункции sICAM-I, эндотелина-1, тромбомодулина, сывороточного аннексина 5 и фактора Виллебранда в сыворотке периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности
Таким образом, показано, что концентрация маркеров повреждения эндотелия, таких как тромбомодулин, sICAM-I, сывороточный аннексин 5, фактор Виллебранда повышается в периферической крови у женщин с ПНБ, что косвенно говорит о развитии дисфункции эндотелиальных клеток, повышении их прокоагулянтной активности и, следовательно, повышении риска тромбообразования у этой категории пациенток. Вместе с тем, отсутствие выраженных отличий в уровнях содержания этих косвенных маркеров требуют более достоверных способов оценки эндотелиальной дисфункции, позволяющей объективно охарактеризовать степень повреждения эндотелия. 3.5 Цитопатический эффект нативной сыворотки периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и женщин с привычным невынашиванием беременности в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 Определение маркеров, циркулирующих в периферической крови при повреждении эндотелиальных клеток явилось предпосылкой для оценки дисфункции эндотелия прямым способом. С этой целью мы провели исследование цитопатического влияния сывороток периферической крови в отношении эндотелиальных клеток на модельной линии EA.Hy926.
Гибель эндотелиальных клеток после обработки их сыворотками периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью составляла 13,5% {3,9;22,6}, женщин с привычным невынашиванием беременности без АФС 40,2% {34,5;52,3}, с привычным невынашиванием беременности с АФС 54,2% {44,5;66,3}.
В результате проведенных исследований установлено, что нативные сыворотки периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью оказывают меньшее влияние на эндотелиальные клетки по сравнению с сыворотками периферической крови беременных женщин с привычным невынашиванием беременности с АФС и с сыворотками периферической крови беременных женщин с привычным невынашиванием беременности без АФС. Показано также, что цитопатический эффект сывороток крови наиболее выражен у женщин с АФС по сравнению с цитопатическим эффектом сывороток крови женщин с привычным невынашиванием беременности без АФС (p 0,001) (рисунок 5). Рисунок 5. Цитопатический эффект сыворотки периферической крови в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926.
Клетки линии EA.Hy926, инкубированные в присутствии сывороток периферической крови женщин: группа 1 - с ПНБ без АФС; группа 2 - с ПНБ и АФС; группа 3 - с физиологически протекающей беременностью; группа 4 – интактные клетки линии EA.Hy926. Достоверность различий: # - p 0,05 по сравнению с группой 3; - p 0,001 по сравнению с группами 1 и 2; ### - p 0,001 по сравнению с группами 2,3 и 4; - p 0,001 по сравнению с группой 1,3 и 4.
Для оценки влияния аутоантител в различных концентрациях на степень эндотелиопатического действия нами было проанализировано цитопатическое влияние сывороток периферической крови женщин с АФС в зависимости от уровня обнаруженных аутоантител. Достоверных различий нам выявить не удалось, но прослеживалась тенденция, характеризовавшаяся увеличением цитопатического эффекта сывороток при нарастании в них титра антител (Рисунок 6). Корреляционной зависимости между уровнем антител и степенью цитопатического влияния сывороток в отношении клеток эндотелия также выявлено не было. Рисунок 6. Цитопатический эффект сывороток периферической крови женщин с АФС в зависимости от титра выявленных аутоантител.
Группа 1 – женщины с выявленными аутоантителами в низком титре (10-20 U/ml); группа 2 - в среднем титре (20-40 U/ml); Группа 3 - в высоком титре (более 40 U/ml).
Таким образом, можно сделать вывод о том, что сыворотки крови женщин с привычным невынашиванием беременности оказывают прямое цитопатическое влияние на эндотелиальные клетки. Прослеживалась тенденция, характеризовавшаяся увеличением цитопатического эффекта сывороток при нарастании в них титра антител.
Для оценки вклада системы комплемента в повреждение эндотелия и развитие эндотелиальной дисфункции нами было проведено исследование эндотелиопатического влияния сывороток крови, инактивированных при 56С в течение 40 минут .
Установлено, что гибель эндотелиальных клеток после их обработки инактивированными сыворотками периферической крови женщин с привычным невынашиванием беременности без АФС составляла 29,9% {20,4;38,7}; гибель эндотелиальных клеток после обработки их сыворотками крови тех же женщин с неинактивированным комплементом составляла 40,2% {34,5;52,3}, p 0,05 (рисунок 7). После обработки эндотелиальных клеток инактивированными сыворотками периферической крови женщин с привычным невынашиванием беременности с АФС гибель клеток составляла 22,5% {12,5;39,6}, в то время как гибель эндотелиальных клеток после обработки их нативными сыворотками крови тех же женщин с составляла 54,2% {44,5;66,3}, p 0,05 (рисунок 8). После обработки эндотелиальных клеток инактивированными сыворотками периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью гибель клеток составляла 6,9% {3,4;18,4}, а гибель эндотелиальных клеток после их обработки нативными сыворотками крови тех же женщин составляла 10,4% {3,5;29,6}, достоверных различий в данной группе выявлено не было.
Разработка метода оценки эндотелиопротективного эффекта препарата иммуноглобулинов для внутривенного ведения
Данные эффекты обусловлены тем, что иммуноглобулины, входящие в состав ВВИГ, способны адсорбироваться [87] на клеточной мембране за счет ковалентных взаимодействий [79], интернализоваться в клетку и вызывать модификацию фенотипа эндотелиальных клеток с ингибированием их прокоагулянтной активности [39]. За счт своих достаточно крупных размеров и конфигурации, иммуноглобулины также способны «прикрывать» отрицательно заряженные фосфолипиды мембран клеток («зонтичное» прикрытие), препятствуя связыванию фосфолипидов с антифосфолипидными антителами и последующей активацией системы комплемента [132]. ВВИГ способны предупреждать комплемент-зависимое повреждение эндотелия за счет связывания С3 и С4 компонентов комплемента [39].
Еще одним очень важным вопросом при выборе терапии с использованием ВВИГ, кроме их высокой эффективности и уникальности (большинство препаратов, в частности, подавляющих синтез аутоантител, противопоказано беременным), является их высокая стоимость. В связи с этим одной из задач нашего исследования было создание метода лабораторной оценки эффективности действия ВВИГ. Для этого мы брали кровь пациенток, которым планировалось введение препарата ВВИГ и анализировали е на экспериментальной модели, включающей в себя эндотелиальные клетки, обработанные и необработанные иммуноглобулинами для внутривенного введения. В результате эксперимента анализировалась способность иммуноглобулинов оказывать защитный эффект в отношении эндотелиальных клеток от агрессивных факторов, находящихся в сыворотке крови женщин. При анализе данных установлено, что цитопатический эффект сыворотки крови после обработки клеток ВВИГ снижался во всех группах, но было отмечено, что в группе женщин с АФС иммуноглобулины не во всех случаях оказывали протективный эффект.
С целью формализации полученных данных мы рассчитывали цитопротективный коэффициент (ЦК), который показывает, насколько снизилась цитотоксичность сыворотки периферической крови в отношении эндотелиальных клеток после их обработки ВВИГ по сравнению с интактными клетками. Если цитопротективный коэффициент составлял более 55%, то он оценивался как положительный – иммуноглобулины для внутривенного введения способны оказать защитное действие в отношении клеток эндотелия от цитопатических факторов, содержащихся в сыворотке крови. Если цитопротективный коэффициент был менее 55%, то ВВИГ в меньшей степени оказывают защитное действие в отношении клеток эндотелия.
При сопоставлении данных расчета цитопротективного коэффициента и исходах беременности у женщин с АФС и применением ВВИГ установлено, что ЦК позволяет прогнозировать клиническую эффективность применения ВВИГ. Анализируя истории болезни таких пациенток было показано, что у женщин, которым на экспериментальной модели установлено положительное влияние ВВИГ (ЦК 55%), после курса ведения лекарственного препарата клинические проявления угрозы невынашивания беременности проходили. Беременность заканчивалась срочными родами в 88% случаях. Пациенткам, которым на экспериментальной модели установлено отрицательное влияние ВВИГ (сыворотки крови таких пациенток как до обработки клеток эндотелия ВВИГ, так и после оказывали выраженное цитопатическое влияние - ЦК 55%), после курса терапии иммуноглобулинами для внутривенного введения беременность заканчивалось преждевременными родами в 75% случаях. Таким образом, предлагаемый нами метод позволяет принимать решение о целесообразности использования препарата ВВИГ и предоставляет возможность осуществить индивидуальный подход к пациенту как при терапии женщин с привычным невынашиванием беременности и диагностированным антифосфолипидным синдромом, так и при терапии других заболеваний, связанных с повреждением эндотелия и формированием эндотелиальной дисфункции.
В результате проведенного исследования и обзора литературных данных можно заключить, что эндотелиальные клетки при их повреждении, становятся модуляторами многих патологических процессов в организме, а в случае акушерской практики это может привести к репродуктивным неудачам. К одним из факторов, которые приводят к повреждению эндотелия, относятся антифосфолипидные антитела. Так, по нашим данным, у женщин с привычным невынашиванием беременности они выявляются в 37% случаев. Сыворотки периферической крови, содержащие повышенный уровень АФА, оказывают выраженное цитопатическое действие в отношении эндотелиальных клеток. К лекарственным препаратам, способным нивелировать эндотелиопатический эффект аутоантител, относятся иммуноглобулины для внутривенного введения. Нами разработан метод лабораторной оценки эндотелиопротективного эффекта иммуноглобулинов для внутривенного введения, позволяющий прогнозировать клиническую эффективность использования данного препарата у женщин с привычным невынашиванием беременности и АФС, для профилактики преждевременного прерывания беременности.