Введение к работе
Тромболитическая терапия при эмболиях, инфарктах, окклюзии сосудов и других заболеваниях заключается в лизисе фибриновых сгустков. Чтобы свести к минимуму нарушения системы'гемостаза при введении тром-болитиков (в основном протеолитических ферментов и активаторов плазми-ногена), используются различные способы их направленной доставки. Среди новых препаратов направленного действия, помимо комплексов тромбо-литиков с моноклональныш антителами к фибрину или к коллагену, предложены обратимо ацилированные по активному центру л'-анизоильной группой производные плазмина и активаторного комплекса плазмин(оген).стре-птокиназа, устойчивые к действию антипротеиназ и более длительно циркулирующие в кровотоке. Ацилирование фермента (или активаторного комплекса) не затрагивает лизин-связывающих участков молекулы плазминоге-на, за счет которых происходит специфическое взаимодействие тромболи-тика с фибриновым сгустком. Тромб лизируется под действием сорбированного активного фермента, образующегося в результате реактивации ацил-фермента. Большой интерес представляют ацилированные производные плазмина и активаторного комплекса, содержащие и другие ацильные заместители, которые покидают активный центр с требуемой для успешного тром-болизиса скоростью и тем самым обеспечивают непрерьгоное поддержание оптимальной концентрации активного тромболитика на тромбе.
Цель и задачи исследования. Цель работы - создание ацилировакных производных плазмина и активаторного комплекса ПЛ.ск с заданными скоростями реактивации и изучение их свойств. Для этого необходимо выделить плазминоген из плазмы крови человека, подобрать ацилируюшие агенты, получить обратимо инактивированные производные фермента и- активаторного комплекса, изучить их физико-химические характеристики, а также разработать методы измерения и исследования реакции фибринолиза свободными и ацилированными производными плазмина и активаторного комплекса ІП YltrO И ІП YiYO.
Научная новизна и практическое значение работы. Разработаны методы синтеза ашшфованных производных плазмина и активаторного комплекса с различными скоростями реактивации, которые предназначены для использования в качестве пролонгированных тромболитических средств. Синтезированы п'-анизоил-, п'-гуанидинбензоил- и транс-п'-Пі.Н.Н- триме-тиламинощиннамоил-производные плазмина к активаторного комплекса ПЛ.СК (последний синтезирован впервые).
Для анализа фибринолитических свойств ацилированных и неацилиро-ванных производных плазмина и комплекса ПЛ.СК предложено два метода непрерывного измерения кинетики фибринолиза, обладающих высокой чувствительностью и позволяющие варьировать концентрацию тромболитиков .на несколько порядков. На модельной системе in vitro, содержащей компоненты плазмы крови (плазминоген и ингибиторы плазмы крови человека), показана большая фибринолитическая эффективность активаторного комплекса ПЛ.СК по сравнению с плазмином и ацилированных активаторных комплексов по сравнению с неацилированными. В опытах на животных с экспериментальным тромбозом показано, что ацил-активаторы, в отличие от немодифицированных комплексов, вызьюают меньшую системную активацию фибринолиза, меньший фибриногенолиз и обладают пролонгированным- тром-. болитическим эффектом.
Апробация работы. Основные результаты и отдельные положения диссертационной работы докладывались на международной конференции "Химическая физика ферментативного катализа" (Таллинн, 1937), на VT Всесоюзном симпозиуме по инженерной энзимологии (Вильнюс,1988), на конференции молодых ученых МГУ (1988), IV Всесоюзной научной конференции "Противотромболитическая терапия в клинической практике. Вопросы фибринолиза и тромболиза" (Ялта, 1988), на Всесоюзной научно-практической конференции "Ферменты - народному хозяйству (Черновцы, 1990), на ХТмеждународном конгрессе по тромболизу (Любляна, 1990).
Публикации, по материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на/^страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, изложенных в III главах, заключения, выводов, списка основной использованной литературы ( 166 наименований ). Работа иллюстрирована 4S рисунками и 12 таблицами.