Введение к работе
Актуальность проблемы. В последние десятилетия особое место биохимии липидов занимает исследование метаболизма полиненасы-энных высших жирных кислот, в частности арахидоновой кислоты, родуктами этого метаболизма являются новые низкомолекулярные лорегуляторы, вещества с чрезвычайно высокой биологической стивностью: простагландини, гидроксикислоты, лейкотриены, литорины, объединенные общим названием зйкозаноиды. Особое внимание ривлекли липоксины, недавно открытые полиоксигенированные произ-эдные арахидоновой 'кислоты, биологическое действие которых эвершенно отличается от действия остальных эйкозаноидов. Липок-ины стимулируют генерацию супероксвданиона в нейтрофилах челове-а,- активируют протеинкиназу С, ингибируют клеточную активность атуралышх клеток-киллеров (NK), обладают спазмогенной активнос-ью, стимулируют образование простациклина клетками эндотелия.
Широкий спектр биологического действия эйкозаноидов обуслов-квает актуальность исследований' процессов окисления полиеновых ислот, ферментов, участвующих в этих процессах, а также направ-знного воздействия на образование и биологические- эффекты йкозаноидов. Исследование физико-химических и кинетических войств ферментов синтеза эйкозаноидов - лшюксигеназ (LO) вляется- важным для понимания механизма" регуляции патологических роцессов в организме. Огромное значение для выяснения каталити-еского механизма действия лилоксигеназ, а также для разработки иотехнологического получения эйкозаноидов имеют работы с -фермен- -ами из растительных источников, в частности 5-lo злаков и is-lo ои, которые в силу большей доступности пригодны к широкомасштаб-_ ому практическому использованию.
Ш:Ль_работы_;. Целью работы является изучение кинетических акономерностей биосинтеза липоксигенззных метаболитов арахидо-овой кислоты - моногидроксикислот и липоксинов, а также некото-ых путей активации и ингибирования лшюксигеназ.
На^чная_новизна_работы. К настоящему времени идентифицирован яд лилоксигеназ из растительных и животных источников, получены иохимические характеристики этих фзрментов, исследованы пути иосинтеза различных эйкозаноидов, в т.ч. липоксинов. В данной абоге впервые получена в лиофилизованном виде 5-липоксигеназа из
- і -
ячменя, выяснены некоторые особенности кинетического поведе данного фермента. Предложен препаративный путь биосинтеза ыс гидроксиэйкозатетраеЕовых кислот и липоксвнов с использоваї растительных лкпоксигеназ. Синтезирован и впервые охарактеризс как антиоксидантний липоксигеназный ингибитор один из компонеї прополиса - фенэтиловый эфир кофейной кислоты, впервые ПОЛІ новый лшоксигеназнкй ингибитор - ы.ы'-двдшюгексил-о-рн-гидроксициннамоил) изомочевина, исследован механизм действия < веществ.
Практическая значимость. Разработанные оптимальные услс биосинтеза моногидроксикислот и липоксинов и методика' их детеї могут быть использованы в лабораторных условиях. Предложении работе "механизм ингибнрования - липоксигеназ производным кофеі кислоты, ^активным компонентом прополиса, вносит вклад в даним? действия ряда лекарственных препаратов. Моногидроксикислс полученные в данной работе, переданы в Институт педиатри детской хирургии МЗ России и в НИИ Медицинской радиологии Армении для медико-биологических исследований.
Апробация_р.аботы. Результаты работы были дологены на Всесоюзном симпозиуме "Ишсенерная энзимология", Москва, 1991г; на Международном симпозиуме "Modem enzymoiogy, ProK and Trends", Санкт-Петербург, июнь 1992г;. на .22й Междунароі конференции febs, Стокгольм, июль 1993; на курсах і
"Biomembrans and Signal Transduction", Утрехт, февраль 1994; I Международной Конференции "Prostaglandins-and Related Corapounc
Флоренция, июнь 1994; на Международном симпозиуме по биохі липидов, Санкт-Петербург, октябрь 1994.
П^б^икации. По материалам диссертации опубликованы з ста: 5 тезисов, і статья принята в печать.
Объем_Еа_<5отн. .Диссертация состоит из введения, об; литературы (8 разделов), описания материалов и мето, результатов и их обсуждения (5 разделов), выводов и cm цитируемой литературы (158 наименований). Работа иэлокена не страницах машинописного текста, включает 2і рисуЕок и э таблш