Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Факторы риска развития ишемической болезни сердца 11
1.2. Маркеры генетической предрасположенности к ишемической болезни сердца 24
1.3. Влияние комплекса факторов металлургического производства на состояние здоровья рабочих 29
Глава 2. Материал и методы 34
2.1. Объект исследования 34
2.2. Методы исследования
2.2.1. Антропометрический метод 34
2.2.2. Клинические методы 36
2.2.3. Методы молекулярно-генетического анализа 37
2.2.4. Методы статистического анализа 42
Глава 3. Результаты и обсуждение 44
3.1. Структура исследуемой выборки. Анализ ассоциаций с вредными производственными факторами 44
3.2. Анализ ассоциаций некоторых ОНП маркёров с сердечно-сосудистыми заболеваниями 3.2.1. Инсерционно-делеционный полиморфизм гена АСЕ 49
3.2.2. Полиморфизмы гена фактора некроза опухоли TNF-a 53
3.2.3. Полиморфизм промоторного региона гена IL-6 (-174 G/С) 59
3.2.4. Полиморфизм промоторного региона гена ММР2 (-1306 С/Т) 62
3.2.5. Полиморфизм промоторного региона гена ММР9 (-1562 С/Т) 64
3.3. Анализ ассоциаций 64 ОНП маркёров с ИБС на подвыборке в 100
больных ИБС 66
3.3.1. Маркеры в районе p21 3-й хромосомы, содержащем ген CCR2 66
3.3.2. Маркеры в генах других хемокиновых рецепторов и их лигандов 76
3.3.3. Маркеры в других генах-кандидатах ишемической болезни сердца 77
Заключение 86
Выводы 87
Практические рекомендации 88
Список сокращений и условных обозначений 89
Список литературы 90
- Маркеры генетической предрасположенности к ишемической болезни сердца
- Антропометрический метод
- Полиморфизмы гена фактора некроза опухоли TNF-a
- Маркеры в генах других хемокиновых рецепторов и их лигандов
Введение к работе
Актуальность темы
ССЗ являются основной причиной смертности во многих странах (А.Н. Климов, 1989; Б.М.Липовецкий, 2004; Р.Г. Оганов, 2007, 2011).
Одновременно сохраняется высокий уровень профессиональной и производственно обусловленной патологии (Н.Г. Артамонова и др.2004; В.И. Стародубов, 2005; Э.И. Денисов и др. 2006; Е.И. Акимова, 2011; Н.Ф. Измеров, 2011; В.В. Косарев и др. 2011). Однако среди работающих наиболее распространенными заболеваниями являются ИБС и АГ (Г.И. Тихонова и др.2010; Е.Э. Лайковецкая и др. 2010), которые длительно протекают бессимптомно (С.А. Бойцов, 2007; Р.И. Стрюк и др. 2014) и диагностируются только при углубленном обследовании пациентов (Е.Д. Докина и др. 2009). Уровень ССЗ металлургов сохраняется высоким в течение многих лет (С.Н. Филимонов, 2007).Изучение механизмов заболеваемости и смертности населения РФ, по мнению С.М. Белозеровой (2011) – мультидисциплинарная задача.
В настоящее время сравнительно хорошо изучены ФР ИБС. Однако в 50% случаев ИМ и МИ развиваются у лиц без нарушений липидного обмена (P.M.Rеdikeretal. 2013). Нередко АС обнаруживается при отсутствии ФР (В.С. Жданов, 2007), а их наличие не означает его обязательное развитие (Л.А. Лещинский и др.2006). Так, в исследовании GISSI-2 только у 33,2% пациентов, перенесших ИМ в возрасте до 50 лет, ранее была диагностирована стенокардия (Moccetti и соавт. 1997). Недостаточно данных и о механизмах развития ИМ у пациентов без коронарного анамнеза.
Трудно оценивать влияние ФР внешней среды в металлургии (С.Н. Филимонов, 2007). Особенности технологического процесса в металлургии не позволяют исключить влияние неблагоприятных производственных факторов на человека, которые могут оказывать модифицирующее влияние на стандартные ФР ИБС, в результате чего роль одних может возрастать, а других – нивелироваться (И.О. Маринкин и др. 2010; Б.М. Липовецкий, 2009; Р.Л. Ньюсбаум и др. 2010).
Несомненно значение генетического статуса человека и влияние генетико-биохимических маркеров, как на профессиональные, так и общие заболевания, при которых факторы труда могут быть патологическими механизмами их развития и прогрессирования. В связи с этим возрастает значение изучения генетической предрасположенности к ССЗ.
В настоящее время, недостаточно исследований по поиску генетических маркеров, определяющих у работающих ответ на неблагоприятные производственные факторы.
В связи с этим возникла необходимость в изучении генов – кандидатов, продукты
экспрессии которых прямо или косвенно могут участвовать в развитии патологических процессов (E.G. Nabel, 2010).
Выбор генов кандидатов определялся известными данными о связи их полиморфизма с ССЗ с учетом возможных механизмов реализации в патогенезе ИБС.
Цель исследования: Изучение ассоциаций полиморфизма ряда генов-кандидатов с ССЗ и их ФР у лиц, контактирующих с вредными производственными факторами, на примере работников МПЗС.
Задачи исследования:
-
Изучить воздействие вредных производственных факторов на развитие ССЗ у работников МПЗС;
-
Определить частоты аллелей и генотипов генов-кандидатов у лиц, контактирующих с вредными производственными факторами, на примере работников МПЗС и в контрольных выборках;
-
Оценить ассоциации полиморфизма генов-кандидатов с ССЗ и их ФР у лиц, контактирующих с вредными производственными факторами, на примере работников МПЗС.
Научная новизна. Впервые показана ассоциация количества вредных
производственных факторов и отдельного влияния вибрации и неблагоприятного микроклимата с развитием ИБС у мужчин, работников МПЗС.
Впервые изучены частоты 64 SNP в популяции Западной Сибири.
Впервые отмечена ассоциация полиморфизма генов LTF, FYCO1, CCR5 TNF, XCR1, SELE, PON2, HPSE2, ACE, IL-6, MMP с развитием ИБС у мужчин, работников МПЗС.
Впервые определена ассоциация полиморфизма генов rs5888(SCARB1),
rs1805017(PLA2G7), rs2638118 (11p 14.1), и rs13900(CCL2) с развитием ИБС у женщин, работниц МПЗС.
Впервые показано различие среднего уровня глюкозы крови у мужчин исследуемой группы с ИБС у носителей разных генотипов ОНП: rs1520483 (хр. 3), rs17078944 (LRRC2, хр. 3), rs5888 (SCARB1, хр. 12), rs5369 (EDN1, хр. 6), rs2638118 (хр. 11), индекса массы тела у носителей ОНП: rs17078944 (LRRC2, хр. 3); rs2734648(CCR5; хр. 3); rs1034384 (LTF, хр. 3).
Практическая значимость. По результатам исследования выявлены ОНП маркёры, ассоциированные с ИБС у мужчин, работников МПЗС, которые могут служить основой для формирования групп повышенного риска этого заболевания (после воспроизведения
результатов на большой выборке).
Внедрение в практику. Данные настоящего исследования используются при медико-генетическом консультировании в медико-генетическом отделе ГНОКДЦ и в преподавании на кафедре медицинской генетики НГМУ.
Положения выносимые на защиту
-
ССЗ у мужчин, работников МПЗС, чаще выявляются при воздействии вибрации и неблагоприятного микроклимата, а также при увеличении общего количества вредных производственных факторов.
-
У мужчин, контактирующих с вредными производственными факторами, с ИБС ассоциированы однонуклеотидные полиморфизмы генов: LTF, TNF, FYCO1, CCR5, XCR1, SELE, PON2, HPSE2, IL-6, MMP.
-
У женщин, контактирующих с вредными производственными факторами, с ИБС ассоциированы ОНП генов: SCARB1, PLA2G7, CCL2, и rs2638118 (11р14.1),
-
У мужчин исследуемой группы с ИБС показано различие: уровня глюкозы крови у носителей разных генотипов ОНП: rs1520483 (3р21.31), rs17078944 (LRRC2), rs5888 (SCARB1), rs5369 (EDN1), rs2638118 (11р14.1), и ИМТ у носителей ОНП: rs17078944 (LRRC2), rs2734648 (CCR5), rs1034384(LTF).
Апробация диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены 28 октября 2014 г. на заседании проблемной комиссии по внутренним болезням ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения Российской Федерациии.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 3 – в журналах из
перечня, рекомендованного ВАК. Основные положения диссертации были представлены на
международных и российских конференциях: Всероссийская конференция «Профилактика
сердечно-сосудистых заболеваний», Новосибирск, 2008; Всероссийской научно-
практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых
патологических процессов», Новосибирск 2009; Всероссийской научно-практической
конференции «Перспективы кардиологии России в XXI веке», Москва 2009;
Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетические основы
функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии», Новосибирск, 2010.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения; 3 глав,
включающих: обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты
собственных исследований и обсуждения; заключение, выводы, практические
рекомендаций и список литературы, содержащий 168 отечественных и 63 зарубежных
источников. Работа изложена на 109 страницах компьютерной верстки. Работа иллюстрирована 80 таблицами и 1 рисунком.
Маркеры генетической предрасположенности к ишемической болезни сердца
В последние годы проведены многочисленные исследования по изучению роли генов в предрасположенности к ИБС [113; 128; 166], в том числе анализ генов-кандидатов.
Ген ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) относят к таковым. Он локализован на 17-хромосоме, экспрессируется во многих тканях, включая эндотелиальные клетки кровеносных сосудов [176], с мембран которых попадает в кровь [22], гидролизуя ангиотензин I в ангиотензин II и инактивируя брадикинин, этот фермент способствует развитию АГ [80], атеросклероза, фиброза [61] и тромбоза, супрессируя фибринолиз [185]. Было доказано, что уровень концентрации АПФ в сыворотке на 50% связан с инсерционно-делеционным полиморфизмом. (I/D) 16 интрона гена АПФ
Инсерционно-делеционный полиморфизм гена АПФ характеризуется присутствием (I) либо отсутствием (D) внутри 16 интрона этого гена alu-повтора размером 287 п. н. У людей с делеционным генотипом DD уровень фермента крови в 2 раза выше, чем у пациентов с генотипом I при промежуточном уровне у лиц с генотипом (ID) [212]. Было выявлено увеличение частоты делеционного аллеля D у больных ИМ по сравнению с контролем [198]. Yoike et al. ангиографическим исследованием выявил, что наличие аллеля D обуславливет более высокий риск ИМ [203]. Схожие результаты были отмечены Arbugtim et al [173]. Р. М. Сагитов [135] доказал, что генотип DD АПФ ассоциирован с развитием ИМ главным образом при нелеченой АГ. Однако Winkelman et al. [229] показали, что риск ИМ у гомозигот DD составляет 1,0–1,1. Отмеченная противоречивость приводит к необходимости дальнейшего исследования.
Ген фактора некроза опухоли альфа (TNF) Доказано, что воспаление является важным фактором инициации и развития атеросклероза, в котором принимают участие провоспалительные цитокины. Одним из провоспалительных цитокинов, участвующим в воспалении при атеросклерозе и в дестабилизации образующихся бляшек является TNF [171– 173].
Его концентрация повышается в сыворотке у больных, как с нестабильной, так и стабильной стенокардией III-IV функционального класса [183]. Уровень циркулирующего в крови TNF генетически регулируется. Ген TNF расположен на 6-й хромосоме, позиции 6р 21,1–21,3 внутри кластера генов МНС между HLA-B и HLA-DR генами. Известно более 30 полиморфных вариантов генов (ОНП – однонуклеотидные полиморфизмы). Наибольший интерес исследователей вызвал ОНП промоторной области гена в позициях – 238–308 с заменой гуанина на аденин и -863 с заменой цитозина на аденин [180]. Бразильские ученые выявили увеличение частоты мутантного генотипа в позиции -308 гена TNF [171].
В исследованиях R. Autonicelli et al отмечена ассоциация -308 А с развитием ИМ и высоким уровнем в плазме маркеров ишемии и приверженности лиц, несущих -308 AG + АА генотипы к развитию ИМ с зубцами Q, чем без зубца Q [171]. В то время появились сообщения, что смертность от кардиогенного шока ниже у носителей -308 А аллельного варианта [172]. Австралийские и английские исследователи не выявили предрасположенности к атеросклерозу при анализе полиморфизма в позиции – 308 TNF [193], эта противоречивость требует проведения новых исследований. Гены хемокинов и их рецепторов Хемокины и их рецепторы – молекулярные регуляторы направленной миграции и активации лейкоцитов, участвуют в процессах, имеющих воспалительный и аутоиммунный компоненты.
В развитии атеросклероза и его осложнений привлекла роль хемокинового рецептора ССR 2, входящего в СС субсемейство. Ген картирован на хромосоме 3р 21,3 в составе кластера – геном хемокинового рецептора ССR5, занимает примерно 7000 нп и имеет 3 экзона. В результате альтернативного сплайтинга в клетках синтезируются 2 изоформы рецептора – CCR2A и CCR2B. CCR2B – представлен на клеточной поверхности и в цитоплазме, а CCR2A – только в цитоплазме. Обе изоформы рецептора связываются с монохематактическими белками 1, 2, 3 и 4, экспрессируемыми в моноцитах, базофилах и Т-лимфоцитах.
Известно несколько генетических вариантов рецептора. Наибольшее распространение имеет полиморфизм, находящий в 1-й трансмембранной позиции домен 64-й аминокислотной позиции, в которой при частом аллельном варианте находится валин, а в более редком – изолейцин. Полиморфизм обусловлен также нуклеотидной заменой в позиции -190.
Аллельный вариант 64I в различных группах выявляется с частотой 10–254. Обнаружено его 2-кратное увеличение у больных СД 1-го типа. В качестве молекулярного механизма, который может обуславливать наблюдаемые ассоциации с патологическими состояниями, обсуждается способность рецептора 64I к образованию гетеродимерных комплексов с хемокиновыми рецептором CXCR4 семейства СХС, также экспрессирующимся в макрофагах [40].
Антропометрический метод
Обследование проводилось бригадой врачей по стандартным методикам. В программу обследования пациентов сердечнососудистых отделений входило анкетирование по разработанной карте комплексного клинико-генетического обследования, где учитывались ФИО, возраст, пол, профессия, наличие профессиональных вредностей, стаж работы во вредных условиях, курение с определением индекса курильщика, употребление алкоголя, наличие сахарного диабета, наличие артериальной гипертонии и стратификация ее по факторам риска. Для классификации форм ИБС использованы принятые формулировки - острый коронарный синдром (нестабильная стенокардия, ИМ без Q), и ИМ с зубцом Q. Фиксировались осложнения острого ИМ (отек легких, шок, нарушение ритма и проводимости, сердечная недостаточность). Биохимические исследования (АСТ, АЛТ, КФК, ЛДГ, общий холестерин, липопротеиды, сахар крови) проводились в лабораториях стационаров по стандартным методикам. Также указывались медикаментозные средства, применяемые в лечении пациентов. Наличие профессиональных вредностей брали из карты профилактических осмотров работника, где они фиксированы согласно приказу № 90 МЗ России.
Контрольная группа состояла из практически здоровых работников металлургических комбинатов. Все они имеют стаж работы во вредных условиях, каждый год проходят периодический профилактический медицинский осмотр и не имеют никаких заболеваний сердечно-сосудистой системы. Они также анкетированы и обследованы, как и первая группа.
«Измерение артериального давления проводилось непрямым аускультативным методом» [102] с использованием тонометра фирмы OMRON и стетофонендоскопа дважды с интервалом 5 минут и «фиксировалось среднее значение. За артериальную гипертензию принимались систолическое АД 140 мм рт. ст., диастолическое АД 90 мм рт. ст. или любые цифры АД на фоне приема гипотензивных препаратов» [102]. Представителям обеих групп «записывалась ЭКГ покоя в 12 стандартных отведениях в положении лежа на спине на 6-канальном электрокардиографе 6-NEK с последующей оценкой специалистом» [102].
Забор биологического материала (кровь) осуществлялся в лабораторных подразделениях стационаров и поликлиник. «Кровь для исследований брали из локтевой вены утром, натощак, замораживали и хранили при отрицательной температуре. В лабораторию материал доставляли в контейнерах, не допуская размораживания» [164].
«Выбор генов-кандидатов определялся известными данными о связи их полиморфизма с сердечно-сосудистыми заболеваниями, которые могли являться факторами риска инфаркта миокарда. Так же при выборе генов-кандидатов учитывались возможные механизмы их реализации в патогенезе ИМ» [92].
Методы молекулярно-генетического анализа Подготовка препаратов ДНК «Экстракция ДНК из крови проводилась методом фенол-хлороформной экстракции» [141]. «К образцу крови ( 10 мл) добавляли 5-6 объемов буфера А (10 мМ трис-HCl, pH = 7,5; 10 мМ NaCl; 3 мМ MgCl2) и растирали сгустки в гомогенизаторе. После центрифугирования при 2500 g 15 мин осадки трехкратно промывали буфером А и ресуспендировали в 1 мл буфера В (10мМ ЭДТА; 100 мМ NaCl; 50 мМ трис-HCl, pH = 8,5) [164]. «После добавления SDS до 0,5% и протеиназы Е до 200 мкг/мл смесь инкубировали в течение 12 часов при 56 С. Депротеинизацию проводили последовательно смесью фенол-хлороформ (1 : 1), водонасыщенным фенолом, смесью фенол-хлороформ (1 : 1) и хлороформом. ДНК осаждали добавлением раствора NaCl до 1 М и 1 V изопропилового спирта. После этого раствор охлаждали 1 час при -20 С. Осадок, полученный центрифугированием на микроцентрифуге «Eppendorf» при 12000 g в течение 15 минут, промывали трехкратно 75% этанолом с последующим центрифугированием 5 мин 12000 g и после высушивания при 56 С, растворяли в деинонизованной воде до концентрации ДНК 0,5 мкг/мкл» [102]. Генотипирование инсерционно-делеционного полиморфизма (rs 4340) гена АСЕ Исследование I/D полиморфизма в гене АСЕ проводилось в лаборатории молекулярно-генетических исследований ГУ НИИ терапии СО РАМН. Структура использованных праймеров: 1) прямой - 5 -GCCCT-GCAGGGTCT-GCAGC-ATGT-3 , 2) обратный - 5 -GGATG-GCTCT-CCCCG-CCTTGCTC-3 . Смесь для ПЦР объёмом 12,5 мкл включала: трис-HCI (pH 9,0) 75 мM, (NH4)2 SO4 20 мM, Тween-20 0,01%, каждого праймера по 0,4 мкM, по 0,24 мМ раствора каждого из четырех dNTP, MgCI2 2,5 мM, 0,6 единиц Тag полимеразы; 0,5 мкг ДНК.
«Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 95 С / 1 мин, 58 С / 1 мин, 72 С / 1 мин - 10 циклов, 95С / 25 сек, 58 С / 25 сек, 72 С / 25 сек - 23 цикла. Продукт полимеразной цепной реакции в виде фрагментов амплифицированной ДНК: 597 пар нуклеотидов (I аллель) и 319 пар нуклеотидов (D аллель) был визуализирован методом гель-электрофореза.
В связи с тем, что аллель D нарабатывается преимущественно, образцы, гомозиготные по короткому аллелю (DD) были подвергнуты независимой ПЦР с использованием пары праймеров, узнающей специфическую инсерционную последовательность нуклеотидов. Структура праймеров: прямой - 5 GGGA-CCACA-GCGCC-CGCCA-CTAC-3 , обратный - 5 -ТCGCC-AGCCCCCCAGCCC-ATAA-3 . Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 95 С / 30 сек, 67 С / 30 сек, 72 С / 30 сек - 33 цикла. Присутствие продукта ПЦР длиной 335 пн свидетельствовало о наличии I аллеля» [175].
Полиморфизмы гена фактора некроза опухоли TNF-a
В своё время «картирование и клонирование гена представлялось тем узким местом, пройдя через которое, можно выйти на широкое поле биомедицинских приложений, включая понимание физиологических механизмов болезни, диагностику, терапию и превентивную медицину» [128]. В настоящее время сформировалось понимание, что «до надёжно обоснованного практического применения этих знаний предстоит достаточно длительный процесс накопления информации и опыта. С одной стороны, ID полиморфизм гена АСЕ является одним из самых изученных, с другой – до сколько-нибудь полного понимания подавляющего большинства последствий носительства того или генотипа ещё очень далеко. Тем более, если иметь ввиду последствия для каждого конкретного человека с учётом действующих внешних факторов и остального генома индивидуума» [102]. Немецкие исследователи пришли к выводу: «чтобы рекомендовать общее генетическое тестирование перед началом терапии, воздействующей на состояние ренин-ангитензин-альдостероновой системы необходимо преодолеть имеющиеся противоречия путём проведения большого мультицентрового исследования» [182].
Были исследованы три ОНП в промоторе гена TNF в контроле, у пациентов с артериальной гипертензией, с нестабильной стенокардией, с инфарктом миокарда без зубца Q, с инфарктом миокарда с зубцом Q. Частоты генотипов G-238A, -G308A, С-863A гена фактора некроза опухоли TNF находятся в равновесии Харди - Вайнберга. «В контрольной группе частоты аллелей и генотипов исследуемых полиморфных позиций гена TNF соответствуют показанным для европеоидных популяций» [83].
Влияние полиморфизма в позиции G-238-A промоторного региона TNF на развитие ССЗ изучено недостаточно. Выявлено достоверное увеличение -238А носительства аллельного варианта у пациентов с нестабильной стенокардией относительно здоровых более чем в два раза. Ещё выше частота носительства этого аллельного варианта у лиц с ИМ без зубца Q. Учитывая, что полиморфизм промотора в данной позиции оказывает влияние на уровень продукции, можно допустить включение тонких молекулярно-генетических механизмов в общую картину воспаления при развитии патологии, и как следствие, склонность к развитию нестабильной стенокардии у носителей -238А аллельного варианта, и соответственно, устойчивость к развитию патологий у носителей -238G аллельного варианта, несмотря на выраженный атеросклероз коронарных артерий (Таблица 20).
При сравнении группы с одним вредным фактором с группой с двумя и более факторами (без разделения на больных ССЗ и контроль) по частоте генотипов полиморфизма -238, получили достоверное повышение доли гетерозигот в группе с одним вредным фактором, р = 0,037 (Таблица 21).
При разделении на больных ССЗ и контроль тенденция к уменьшению доли гетерозигот с нарастанием количества вредных факторов сохраняется в обеих группах (Таблицы 22, 23).
При разделении на больных ССЗ и контроль оказалось, что в контроле нет различий по частотам генотипов, тогда как в группах больных имеется тенденция к повышению доли гетерозигот в группе с нормальным микроклиматом. В группе с инфарктом миокарда с зубцом Q различие статистически достоверно, р = 0,003 (Таблица 25).
Были проверены ассоциации изучаемых ОНП в гене TNF с осложнениями ССЗ, такими как рефлекторный шок, отёк лёгких, сердечная недостаточность, фибрилляция предсердий, фибрилляция желудочков, нарушения проводимости по ЭКГ. Обнаружено повышение частоты носительства генотипов AA и AG в группе с сердечной недостаточностью по сравнению с группой без признаков сердечной недостаточности р = 0,028 (Таблица 26). Отношение шансов развития сердечной недостаточности у носителей аллеля А в 3,2 раза выше, чем у носителей аллеля G (95%-й ДИ 1,4–7,5; р = 0,011). Отношение шансов развития сердечной недостаточности у носителей генотипов АА и AG в 3 раза выше, чем у носителей генотипа GG (95%-й ДИ 1,1–8,4; р = 0,05).
Частота генотипов полиморфизма-238 гена TNF в группах с сердечной недостаточностью и без неё
Сравнение уровня таких показателей как рост, масса тела, индекс массы тела, систолическое, диастолическое, пульсовое артериальное давление, АСТ, АЛТ, общий холестерин, сахар крови, в-липопротеиды, триглицериды, ЛДГ, КФК у носителей разных генотипов позволило выявить снижение среднего уровня АСТ у носителей генотипов AG и AA, по сравнению с носителями генотипа GG. Достоверность различий в тесте Крускалла – Уоллиса р = 0,028 (Таблица 27).
Анализ частот генотипов в позиции -308 показал, что частота гетерозиготного носительства у пациентов с ИБС ниже, чем в контроле. При этом наблюдалось достоверное снижение частоты генотипа AG у пациентов c ИМ с зубцом Q (р = 0,005). Отношение шансов обнаружить носителей генотипа AG в группе пациентов с ИМ с зубцом Q в 3,1 раза меньше, чем в контроле (95%-й ДИ 1,4–6,8). Носительство гомозиготного варианта -308АА в группе с ИМ с зубцом Q возросло до 7,3% относительно здоровых, где эта величина не превышала 1,1% (ОШ = 7,4, р = 0,033) (Таблица 28).
Маркеры в генах других хемокиновых рецепторов и их лигандов
Но при этом имеются достоверные различия в частотах генотипов между мужчинами и женщинами с ИБС (р = 0,032). У мужчин с ИБС частота гетерозиготного генотипа АТ меньше чем в контроле 14,1% и 20,5% соответственно, а у женщин наоборот в 2 раза больше, чем в контроле – 40% и 20,6%, соответственно.
Полиморфизм rs3136673 гена CCR1 находится на хромосоме 3. По частотам генотипов различия между контролем и группой с ИБС отсутствуют (Таблица 57). Но при этом имеются достоверные различия в частотах генотипов между мужчинами и женщинами с ИБС (р = 0,05). У мужчин с ИБС частота гетерозиготного генотипа АG меньше, чем в контроле 15,5% и 26,1% соответственно, а у женщин наоборот больше, чем в контроле – 40% и 24,6%, соответственно. Ген LRRC2 (leucine-rich repeat-containing protein 2) находится на хромосоме 3. По частотам генотипов и аллелей полиморфизма rs17078944 различия между контролем и группой с ИБС отсутствуют (Таблица 58).
Но при этом имеются достоверные различия в частотах генотипов между мужчинами и женщинами с ИБС (р = 0,05). У мужчин с ИБС частота гомозиготного генотипа ТТ меньше, чем в контроле 7,1% и 12,5% соответственно, а у женщин наоборот больше, чем в контроле – 20% и 11,2% соответственно.
Средний уровень глюкозы крови у мужчин с ИБС достоверно различается (р = 0,038, в тесте Крускалла – Уоллиса) у носителей разных генотипов rs17078944 гена LRRC2 (Таблица 59). Кроме того, у носителей разных генотипов значимо отличаются масса тела (р = 0,05) и ИМТ.
Полиморфизм rs35568430 находится на хромосоме 3, вблизи этой позиции нет идентифицированных генов. По частотам генотипов различия между контролем и группой с ИБС отсутствуют (Таблица 60). Таблица 59 – Средние уровни некоторых показателей у носителей разных генотипов полиморфизма rs17078944 гена LRRC Генотипы N Среднее Станд.отклон. Ст. ошибка среднего 95%-й ДИ
Выявлены достоверные различия в частотах генотипов между мужчинами и женщинами с ИБС (р = 0,028). У мужчин с ИБС частота гетерозиготного генотипа СТ меньше, чем в контроле 14,3% и 23,8% соответственно, а у женщин наоборот больше, чем в контроле – 40% и 21,4%, соответственно.
Полиморфизм rs1520483 находится на хромосоме 3, вблизи этой позиции нет идентифицированных генов. По частотам генотипов различия между контролем и группой с ИБС отсутствуют. Средний уровень глюкозы крови у мужчин с ИБС, работников металлургического производства в Западной Сибири достоверно различается (р = 0.034, в тесте Крускалла –Уоллиса) у носителей разных генотипов этого ОНП (Таблица 61).
Полиморфизм rs17141079 находится на хромосоме 3, вблизи этой позиции нет идентифицированных генов. По частотам генотипов различия между контролем и группой с ИБС отсутствуют. Средний рост у мужчин с ИБС, достоверно различается (р = 0,032, One-Way ANOVA) у носителей разных генотипов этого ОНП (Таблица 62).
Средний рост у носителей разных генотипов полиморфизма rs171410 Генотипы N Средний АСТ Станд. отклон. Ст. ошибка среднего 95%-й ДИ А/A 44 1,7132 0,06650 0,01003 1,6930 1,7334 А/Т 38 1,7208 0,04756 0,00771 1,7052 1,7364 Т/Т 3 1,8067 0,06028 0,03480 1,6569 1,9564 Ранее ассоциации этого ОНП с ИБС, её факторами риска и эндогенными показателями - не исследовались.
Ген селектина Е (SELE) находится на хромосоме 1, экспрессируется клетками эндотелия в ответ на стимуляцию цитокинами. Белок ответственен за аккумуляцию лейкоцитов крови в месте воспаления посредством их адгезии. Носители генотипов с аллелем Т полиморфизма rs5368 гена SELE у мужчин реже встречаются в группе с ИБС, по сравнению с контролем (Таблица 63), отношение шансов 3,3, р = 0,004. Ген CCL2 Полиморфизм rs13900 гена CCL2 (хр. 17) достоверно ассоциирован с ИБС у женщин (Таблица 64). Отношение шансов обнаружить носителя генотипа СС в группе с ИБС меньше, чем в контроле 0,24 (95%-й ДИ 0,07-0,87; р = 0.031). Таблица 63 – Частоты генотипов rs5368 гена SELE у мужчин
Полиморфизм rs7493 гена параоксаназы 2 (PON2 находится на хромосоме 7) достоверно ассоциирован с ИБС (Таблица 65). Отношение шансов обнаружить носителя генотипа GG в группе с ИБС в 2,8 раза выше, чем в контроле (р = 0.014).
Средний уровень холестерина крови у мужчин с ИБС достоверно различается (р = 0,019, в тесте Крускалла – Уоллиса) у носителей разных генотипов rs7493 гена параоксаназы 2 (Таблица 66). Таблица 65 – Частоты генотипов rs7493 гена PON2 у мужчин
Полиморфизм rs1471352 гена гепараназы 2 (HPSE2 находится на хромосоме 10) достоверно ассоциирован с ИБС (Таблица 67). Отношение шансов обнаружить носителя генотипа СТ в группе с ИБС значительно выше, чем в контроле (р = 0,013). У женщин достоверных различий между группами по частотам генотипов вышеперечисленных ОНП – нет.