Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ. Уроренальные инфекции - самая распространенная патология органов мочевой системы в детском возрасте (Orellana P. et al„ 2002; Коровина НА. с соавт., 2003). Умение диагностировать и лечить эту патологию - один из критериев подготовленности педиатра к практической деятельности (Малаховский Ю.Е. с соавт., 1998).
В настоящее время уровень заболеваемости инфекциями мочевой системы (ИМС) среди детского населения неуклонно увеличивается (Урывчиков ГА и др., 2002), нередко встречаются случаи их упорного, хронического течения, приводящие к инвалидизации ребенка (Игнатова М.С, 1998).
Несмотря на то, что этиология ИМС к настоящему времени достаточно хорошо изучена, вопрос о структуре уропатогенов является дискутабельным: работы многих авторов свидетельствуют о том, что наряду с традиционным высевом из мочи больных микроорганизмов вида Escherichia coli наблюдается рост грампозитивной кокковой флоры (Кухтевич А.В., 2002; Сафина, 2002; Gupta К., 2003; Ronald А., 2003; Kumamoto Y. et al., 2003). Также требует более детального изучения вопрос о взаимосвязи возбудителя и клинических проявлений ИМС (Гринбаум Н.В., 1987; Гриценко ВА, 1998; Адаменко О.Б., 2002).
В структуре средств, применяемых для этиотропной терапии инфекций мочевой системы, первыми по частоте использования стоят химически синтезированные антибиотики. Разнообразие нежелательных побочных эффектов, а также быстрое формирование резистентности бактерий к лекарственным антибактериальным средствам определяют постоянный интерес исследователей к поиску новых эффективных и безопасных антибактериальных препаратов.
Начало XX века отмечено открытием в нейтрофильных гранулоцитах млекопитающих антимикробных поликатионных субстанциий пептидной природы (Petteison A, 190S), несколько позже названных дефенсинами (Ganz Т. et al., 1985). В дальнейшем дефенсины и подобные им антибактериальные пептиды были обнаружены в различных тканях многоклеточных организмов (Nicolas Р., Мог А, 1995; LehrerR.I., 1996; Stabili L. et al., 1996; Taniai K. et al., 1996; Robert E.W. Hancock, 1997; Date A. et al., 1998; Кокряков B.H., 1999; Weng H.B. et al, 2002; Bowie J.H. et al, 2002; Andeisson E. et al, 2002; Hagiwara. K. et al., 2003). Список их постоянно пополняется, и в настоящее время имеются предпосылки использования этих соединений в ближайшем будущем в качестве антибактериальных средств нового поколения, принципиально отличающихся по
рос национальная! библиотека i
4 механизму действия и биологическим эффектам, от традиционно применяемьж: антибиотиков.
В 80-х годах прошлого столетия пермскими учеными - С А Печеркиной, ЛИ. Малеевой, И.В. Щицьшой, В.П. Коробовым - впервые был обнаружен феномен антибактериального действия препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона. В последующие годы на базе отделения > интерферона филиала ФГУП < МЗ';. РФ" НПО «Микроген» «Пермское НПО Биомед» был. выделен» ассоциированный' с интерфероногенезом пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в его состав пептидов не превышающей 2000 Да. Опираясь на их происхождение и низкий молекулярный вес, можно предполагать, что полученные пептиды- обладают антибактериальной активностью.
ЦЕЛЬ ДИССЕРТАЦИОННОЙ ? РАБОТЫ: изучение клинико-микробиологических аспектов > ИМС у детей и исследование действия низкомолекулярного > пептидного комплекса, ассоциированного с интерфероногенезом, на условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, включая урокулыуры, выделенные из мочи пациентов с микробно-воспалительными заболеваниями мочевой системы.
-
Изучить микробный пейзаж мочи детей с инфекциями мочевой системы.
-
Определить особенности клинического течения инфекций мочевой системы у детей в зависимости от этиологического фактора.
-
Установить уровень антибиотикорезистентности выделенных штаммов уропатогенньж микроорганизмов.
-
Исследовать низкомолекулярный пептидный- комплекс на* наличие антибактериального действия на примере «музейных» штаммов условно-патогенных и патогенньж микроорганизмов.
-
Исследовать действие низкомолекулярного пептидного комплекса на культуры микроорганизмов, выделенные из мочи детей с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочевой системы.
НАУЧНАЯ- НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые, доказано существование у низкомолекулярного пептидного комплекса, ассоциированного * с интерфероногенезом, антибактериального действия на примере «музейных» штаммов грамположительньж и грамотрицательных микроорганизмов: Stqphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Escherichia coli, Proteus mirabilis,. KlebsieUapneumonium,>Pseudomonas aeruginosae: Установлено, что выраженность антибактериальной активности пептидного комплекса зависит; ог количественньж характеристик культур микроорганизмов (антибактериальное
5 действие выражено в большей степени при относительно низких концентрациях микроорганизмов в единице объема) и от ионной силы инкубационной среды (ее увеличение посредством добавления хлорида натрия приводит к снижению антибактериальной активности пептидного комплекса).
Выявлено антибактериальное действие пептидного комплекса, ассоциированного с интерфероногенезом, в отношении уропатогенных штаммов микроорганизмов родов Escherichia, Staphylococcus, Klebsiella uProteus, вьщеленных из мочи детей с инфекциями мочевой системы Установлено, что микрофлора мочи детей с диагнозом «цистит» имеет к пептидному комплексу 100%-ную чувствительность. Полученные результаты обосновывают продолжение исследовательской работы в плане разработки на основе пептидного комплекса нового антибактериального препарата, предназначенного для терапии ИМС.
В ходе исследования определены современные тенденции в этиологии и клинике инфекций мочевой системы у детей. Показано, что помимо бактерий рода Escherichia, традиционно считающихся основным этиологическим фактором уроренальньж инфекций, существенную роль в возникновении ИМС играют микроорганизмы рода Staphylococcus. Установлено, что имеются различия в структуре уропатогенов в разные возрастные периоды жизни ребенка, определены микроорганизмы, высев которьж наиболее характерен для хронического течения микробно-воспалительного процесса в органах мочевой системы Показано, что более тяжелые варианты течения ИМС регистрируются при высеве из мочи пациентов уропатогенов, принадлежащих родам Escherichia и Proteus.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Полученные результаты, свидетельствующие о том, что пептидный комплекс, ассоциированный с интерфероногенезом, обладает антибактериальной активностью, позволяют в целом расширить представление о механизмах врожденного иммунитета человека. Благодаря наличию антибактериального эффекта низкомолекулярного пептидного комплекса в отношении уропатогенных штаммов микроорганизмов, выделенных из мочи больных, дальнейшая исследовательская работа, конечная цель которой - создание нового эффективного и безопасного антибактериального средства для лечения инфекций мочевой системы, обоснована и целесообразна.
Выявленное в процессе бактериологических исследований разнообразие уропатогенных микроорганизмов, инициирующих ИМС, свидетельствует о необходимости назначения пациентам до получения результатов микробиологического исследования мочи современных антибактериальных средств широкого спектра действия, активных в отношении не только грамотрицательной, но и грамположительной флоры.
После выделения и идентификации возбудителя ИМС необходим дифференцированный подход к назначению этиотропной терапии с учетом вьшвленной антибиотикорезистентности уропатогенных микроорганизмов.
-
В структуре уропатогенов наряду с традиционно высеваемой грамнегативной флорой отмечается увеличение доли грамположительных микроорганизмов, главным образом, за счет представителей рода Staphylococcus.
-
Особенности течения ИМС во многом обусловлены характером микрофлоры мочи пациентов, для разных возрастных периодов выявлены наиболее характерные виды возбудителей.
-
Уропатогенные штаммы, выделенные от больньж с инфекциями мочевой системы, обладают множественной антибиотикорезистентностью.
-
Низкомолекулярный пептидный комплекс, продуцируемый лейкоцитами человека в процессе интерфероногенеза, имеет, вероятнее всего, суммарный положительный заряд, то есть пептиды, входящие в его состав, могут считаться катионными, и проявляет антибактериальную активность в отношении не только грамположительных микроорганизмов, что типично для катионньж пептидов, но и в отношении представителей грамнегативной флоры: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiellapneumonium,Pseudomonasaeruginosae.
-
Низкомолекулярный пептидный комплекс из лейкоцитов человека обладает антибактериальным действием в отношении изолированных из мочи больньж уроренальными инфекциями культур микроорганизмов: Escherichia coli, Staphylococcus spp.Proteusspp,Klebsiellaspp,Pseudomonasaeruginosae.
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ. Полученные результаты внедрены в учебный процесс на кафедре пропедевтики детских болезней, факультетской педиатрии и последипломного образования ГОУ ВПО «ПГМА МЗ РФ», включены в программу обучения врачей ФУВ. Данные по антибиотикорезистентности урокультур, выделенньж из мочи больньж нефрологического отделения ДГКБ им. П.И Пичугинаг. Перми, используются в лечебной работе. Результаты исследований используются в научно-исследовательской работе лаборатории интерферона филиала Пермское НПО «Биомед».
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия МЗ РФ. Результаты исследований доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2000» (Минск, 2000), П Межрегиональной научной
7 конференции молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» (Пермь, 2002), диплом I степени; Региональной научно-практической конференции «Здоровье и образование ребенка» (Пермь, 2002); X Юбилейном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003), диплом I степени, Юбилейной конференции, посвященной 105-летию ПНПО «Биомед», ежегодных научных сессиях ПГМА (Пермь, 2002, 2003 гг.), клинических конференциях ДГКБ им. П.И. Пичугина, IX Конгрессе педиатров России (Москва, 2004).
По теме диссертации опубликовано 23 работы.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация включает следующие разделы и главы: содержание, введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации изложены на 159 печатных страницах, содержат 3 клинических примера, 12 таблиц, 36 рисунков, включают 182 литературных источника, из которых 106 - отечественных и 76 -иностранных авторов.