Введение к работе
Вирус простого герпеса (ВПГ) и цитомегаловирус (ЦМВ) способны длительно персистировать в организме человека и реактивироваться при снижении иммунной защиты, что может приводить к развитию таких серьезных заболеваний как энцефалит, кератит, кератоконъюнктивит, гепатит, экзема, стоматит и других [Roizman В. et а!., 1993]. Клинические формы герпетической и цитомега-ловирусной инфекций (ВПГИ и ЦМВИ) отличаются разнообразием как по симптоматике, так и по тяжести течения. ВПГ поражает слизистые оболочки, кожные покровы, глаза, печень, центральную нервную систему [Баринскнн И.Ф. и др., 1986]. Способность ВПГ и ЦМВ проникать через плацентарный барьер ведет к внузриутробной передаче инфекции, что часто приводит к невынашиванию беременности, врожденной патологии плода и высокой смертности новорожденных [Carmack М.Л. & Prober C.G., 1993; Raynor B.D., 1993]. ВПГИ и ЦМВИ часто являются причинами летально завершающихся пневмоний у реципиентов костного мозга и других органов и тканей, а также развития вторичной инфекции у лиц, больных СПИД [Ball C.L., 1992; Levin M.J., 1993; Boeckh М. & Bowden R., 1995; Dunn J. P. & Jabs D.A., 1995-6].
Распространенность ВПГИ и ЦМВИ различна в развивающихся и индустриально развитых странах [Roizman В. et al., 1993]. В России инфицированность населения в целом, а также лиц, относящихся к группам риска, изучена недостаточно [Баринский И.Ф. и др., 1986; Сухих Т.Т. и др., 1992; Долгих Т.И. и др., 1994; Исаков В.А., Сафронова М.М., 1997]. Тем не менее, подобные исследования весьма актуальны, так как ослабление иммунной защиты, связанное с ухудшением экологических її социально-экономических условий жизни, приводит к развитию различных инфекций, в том числе герпеевнрусных.
Одним из достоверных свидетельств острой инфекции является наличие в сыворотке вирусспецифических IgM-антител [Диодрица СВ., 1989; Drew L.W., 1988]. Рядом зарубежных фирм выпускаются иммуноферментные тест-системы для определения IgM-, IgG-, IgA-антител к ВПГ и ЦМВ, стоимость которых часто превышает покупательную способность российского здравоохранения. В то же время в связи с возросшей актуальностью герпетических инфекций необходим широкий выбор диагностических средств, количество которых должно быть достаточным для обеспечения вирусологических лабораторий. Указанные обстоятельства определяют актуальность создания тестов для выявления ВПГ- и
ЦМВ-специфических антител в сыворотке человека. К простым, быстрым и надежным методам, на основе которых могут быть разработаны подобные препараты, следует отнести иммунофермеитный анализ.
В настоящее время остается актуальным поиск дополнительных диагностических маркеров герпетической инфекции [Roizman В. et al., 1993; Weber В. et al., 1993]. В этой связи перспективным представляется изучение роли антител, относящихся к разным подклассам IgG, в гуморальном иммунитете против вируса простого герпеса.
Цель настоящего исследования заключалась в разработке иммунофермент-ных тест-систем для выявления антител к вирусам простого герпеса и цитомега-лии и их апробации на клиническом материале.
Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:
-
Получить вирусные антигены и оптимизировать условия проведения им-муноферментного анализа для выявления антител к вирусам простого герпеса и цитомегалии.
-
Апробировать разработанные тест-системы на клиническом материале, оценить их специфичность и чувствительность.
-
Изучить с помощью разработанных тест-систем и других диагностических методов распространенность вируса простого герпеса и определить частоту обострений герпетической и цитомегаловирусной инфекций среди людей, проходивших обследование в вирусологических лабораториях г.Санкт-Петербурга.
-
Изучить содержание антител разных подклассов IgG, специфичных к вирусу простого герпеса, и оценить их диагностическое значение.
-
На основе препаратов очищенных вирусов и моноклоналъных антител против иммуноглобулинов человека разработана технология приготовления тест-систем для выявления в сыворотках крови людей антител классов IgG, IgM и подклассов IgGl, IgG3, IgG4 против вирусов простого герпеса и цитомегалии. Специфичность и чувствительность разработанных тест-систем доказаны сравнением с аттестованными диагностическими наборами и подтверждены результатами их апробации на клиническом материале.
-
При выявлении вирусспсцифических антител определена распространенность вируса простого герпеса и частота обострений герпетической и цитомега-
ловирусноіі инфекций среди людей, проходивших обследование в вирусологических лабораториях г.Санкт-Петербурга.
3. Среди подклассов IgG (IgGl, IgG3, IgG4), специфичных к вирусу простого герпеса, антитела IgG3 имели наибольший удельный вес. При острой герпетической инфекции, свидетельством которой является наличие в сыворотке ви-русспсцифических IgM-антител, отмечено увеличение содержания антител подкласса IgGl, что может служить дополнительным диагностическим маркером инфекции.
Впервые на основе моноклональных антител к иммуноглобулинам человека разработаны отечественные иммуноферментные тест-системы для выявления антител классов IgM, IgG и подклассов IgGl, lgG3, IgG4 к вирусам простого герпеса и цитомегалии.
Впервые определен удельный вес антител подклассов IgG (IgGl, IgG3, IgG4) против вируса простого герпеса у людей разных групп (беременных женщин, новорожденных, детей, взрослых). Выявлено увеличение содержания антител подкласса IgGl в острой стадии герпетической инфекции.
Установлена распространенность вируса простого герпеса и определена частота обострений герпетической и цитомегаловирусной инфекций среди людей разных возрастных групп, проходивших обследование в вирусологических лабораториях г.Санкт-Петербурга в период 1994-1997 гг.
Разработанные иммуноферментные тест-системы для выявления антител класса IgM к вирусам простого герпеса и цитомегалии в сыворотках людей могут быть использованы для диагностики острых герпетической и цитомегаловирусной инфекций при урологической, акушерско-гинекологической, венерологической патологии, а также у больных, страдающих системными заболеваниями крови, СПИД и др.
Разработанные иммуноферментные тест-системы для выявления антител класса IgG к вирусам простого герпеса и цитомегалии можно применять для диагностики острых инфекций по 4-кратному и более нарастанию IgG-антител в парных сыворотках, оценки эффективности вакцинации, проведения сероэпиде-миологических исследований.
Разработаны проекты Научно-технической документации на "Тест-систему иммуноферментную для выявления антител класса М к вирусам простого герпеса 1 и 2 серотипов" и "Тест-систему иммуноферментную для выявления антител класса М к цитомегаловирусу человека". В отделе биологического контроля НИИ вакцин и сывороток проведен контроль 6 экспериментально-производственных серий каждой тест-системы.
Результаты работы были представлены на национальных и международных конгрессах, конференциях и симпозиумах: Международной конференции "BIOTECHNOLOGY St.Petersburg'94" (С.-Петербург, 1994); Всероссийском симпозиуме "Биология клетки в культуре" (С.-Петербург, 1995); III Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996); III Всероссийском конгрессе гематологов и трансфузиологов (С.-Петербург, 1996); International meeting of the Czech branch of the European Tissue Culture Society (Brno, Czech Republic, 1996); VII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997); V международной конференции "СПИД, рак и родственные проблемы" (С.-Петербург, 1997); Юбилейной международной конференции "Грипп - XXI век" (С.-Петербург, 1997); 42nd International Congress of the European Tissue Cultirre Society (Mainz, Germany, 1997).
По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ