Введение к работе
Актуальность проблемы. Регуляция иммуногенеза остается сложной проблемой биологии. Известен ряд пептидов тимусного происхождения, которые стимулируют или угнетают иммунный ответ [Арион В.Я. с соавт., 1982; Hadden J.H., 1993; Петрова Т.А., 1993.].
Новым иммуноактивным препаратом является иммуномодулин, применяемый в медицинской практике в качестве иммунокорректора и биостимулятора [Регистрационное удостоверение № 96/671/22, выдано Главным управлением по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники МЗ РУ]. Иммуномодулин имеет молекулярную массу до 6 кДа и состоит из комплекса биологически активных пептидов, выделенных из тимусов овечьих плодов [Гариб Ф.Ю., 1997].
Для изучения механизмов иммунобиологических эффектов иммуно-модулина необходимо разделение его на фракции с изучением его функциональных свойств и состава. Однако такой подход остался не реализованным. Нужно подчеркнуть, что исследование высокоочищенных природных соединений выделенных из тимуса является актуальной задачей биологии и медицины, поскольку создает реальные возможности для исследования иммунорегуляторных пептидов.
Цель работы
Выделить фракции иммуномодулина, изучить их иммунобиологическую активность и физико-химическую характеристику.
Задачи исследования:
- методами ионообменной и высокоэффективной жидкостной хрома
тографии выделить фракции иммуномодулина, изучить их электрофорети-
ческую подвижность и аминокислотный состав;
-определить пептидные фракции иммуномодулина, обладающие иммунобиологическими свойствами в системе IN VIVO у интактных животных и на моделях вторичного иммунодефицита с сублеталъным облучением и острым токсическим гепатитом;
разработать метод оценки активности пептидов тимуса на иммуно-регуляторные субпопуляции Т-лимфоцитов-хелперов (СД 4+) и Т- супрес-соров (СД 8+) с использованием микродоз исследуемого вещества;
изучить в системе IN VITRO влияние выделенных пептидов на им-мунокомпетентные клетки: Т-хелперы, Т-супрессоры, В-лимфоциты и фагоциты;
выявить фракции пептидов иммуномодулина, обладающие избирательным влиянием на отдельные звенья иммуногенеза и кроветворения;
-выявить сходство между механизмом действия иммуномодулина и его пептидным спектром.
Научная новизна.
Впервые произведено разделение иммуномодулина на 13 пептидных фракций и определен их аминокислотный состав. Выявлены конкретные пептиды в составе иммуномодулина, обладающие иммунобиологической активностью в системах IN VIVO - стимуляция антителогенеза, пролиферация спленоцитов и стволовых клеток, эритро- и лейкопоэза; IN VITRO -стимуляция экспрессии рецепторов на лимфоцитах человека (Е-, Т-лимфоциты); СД 4 (Т-хелперы); СД 8 ( Т-супрессоры); ЕМ (В-лимфоциты) и фагоцитарной активности нейтрофилов. Совокупность исследований пептидных фракций иммуномодулина раскрывает новые механизмы его иммунобиологической активности.
Практическая ценность работы.
Разработан экспресс-микрометод для тестирования тимусных пептидов на экспрессию рецепторов СД 4 и СД 8 иммунорегуляторных Т-лимфоцитов - Т хелперов и Т-супрессоров.
Полученные данные о способности пептидов иммуномодулина избирательно стимулировать конкретные звенья иммуногенеза являются основой для создания нового поколения иммунокорегирующих препаратов для медицины и ветеринарии.