Введение к работе
і -.<- -. Актуальность проблемы. Активное изучение цитокинов в
х-;о-,т,Ц:"и і
~"ТТОЯледние годы позволило определить их важнейшую роль в обеспечении межклеточного взаимодейотвия при иммунологических и воспалительных реакциях. Цитокины вырабатываются широкий' спектром клеток в организме и способны регулировать пролиферацию, дифференцировку и функциональную активность не только иммуно-яоыпетентных клеток, но и клеток нелиыфоидной природы.
Нарушения выработки или проявления активности медиаторов иммунитета имеют важное значение в патогенезе ряда заболеваний: при воспалительных процессах различной этиологии, инфекционных и вирусных поражениях иммунной системы, регенеративных процессах, болезнях ооединптепьной ткани /ревматоидный артрит, склеродермия, псориаз/ и др.
Действие цитокинов проявляется в усилении активности клеток фагоцитарной системы, вовлечении в процесс других клеток -фибробластов, эндотелиальных клеток, а также непосредственном воздействии на чужеродные агенты.
Эффекты комбинаций качественно и количественно отличны от >.?ех, которые вызываются индивидуальными цитокинамл Цитокины в комбинации действуют либо оинергично, усиливая свой эффект, либо, наоборот, антагонистично, подавляя активность других. Понимание эффекта комбинаций цитокинов позволит открыть но-вые подходы в лечении ряда заболеваний.
К настоящему времени показано существование сложной сети цитокиповых взаимодействий, в которой одни цитокины индуцируют продукцию других, трансмодулируют цитокиновые клеточно-поверх-ностные рецепторы и действуют в комбинации друг с другом на клеточные функции, обеспечивая каскадность вызываемых эйектов,
И, фОрШруЯ ШИРОКУЮ CSTb ЦИТОКИНОБЦХ СИПІЛЛОВ / trCW.L .. L Г.,іЬН9/.
- г -
Информационное содержание, передаваемое клетке, находится не в индивидуальных пептидах, а в группе регупяторньк пептидных молекул, к который эта клетка чувствительна. Ключевая роль в оё-ги цитокиновых взаимодействий отводится ИЛ-І, ФНО-tf, ИЛ-6, ^-интерферону, благодаря их широкому опектру действия на мно-гие клетки-мишени и способности индуцировать высокий уровень экспрессии многих других цитокинов. Вое ато позволяет говорить о перспективности использования имыуворегупяторных пептидов и, оообенно, их сочетание в качестве иниунофармакодогических препаратов.
На кафедре иммунологии 2-го ШЛГШ им .Н.И.Пирогова /зав. кафедрой - академик Р.В.Петров/ проводится работа по разработке способов получения и поиску путей практического использования препаратов естественного происхождения, полученных на оонове комбинаций цитокинов, в качестве юшунофариакологичео-ких средств.
Вышеизложенные данные, а также эффективность применения цитокинов в клинической практике свидэтельствуют об актуальности проблемы получения и изучения препаратов иммунорегуляторных пептидов. Особое значение имеет разработка подходов к получении и изучению свойств медиаторов различного животного происхождения .
Цель и задачи исследования. Цельв данного исследования явилась разработка споооба получения, изучение физико-химических свойств и биологической активности комплексов имнунолепти-дов, секретируемых мононукпеарными клетками периферической крови свиньи. В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:
I. Выделение комплексов естественных иммуноцитокинов из культур стимулированных мононуклеарных клеток периферической
крови СВИНЬИ.
-
Изучение физико-химических свойств и чаотичная характеристика биологической активности комплексов еотеотвенных иммуноцитокинов в тестах in vitro и in ^'.vo .
-
Исследование действия комплексов естественных гашуно-цитокинов на пролиферативную активность фиброблаотов и синтез ими коллагена.
-
Разработка возыожных подходов к коррекции нарушений Функций фибробпастов комплексаии естественных шиуноцитокинов
Б КуЛЬТуре ІП Vitro . , .
Научная новизна. Впервые разработаны основные этапы получения комплексов иииунопептидов, обозначенных как М- и Л-коып-,пенсы,из культур стимулированных мононукдеарных клеток периферической крови свиньи.
Обнаружено, что комплексы естественных иимуноцитокинов М- /н.м. 15-30 кД/ и Л- /м.м. 60-80 кД/ представляют собой гетерогенные фракции, содержащие ,как минимум, восемь компонентов /для М-/ и три коипонента /для Л-/, определены изоэлектри-ческие точки этих компонентов методом изоэлектрофокуоированйя в агарозноы геле.
В биологичеоких тестах in vitro М комплекс иммунопептидов обладает активностью ЙЛ-І, ФН0-
Впервые выявлено, что II и Л комплексы естественных цитоки-ноа наряду о клетками фагоцитарного звена активно регулируют> клетки соединительной ткани --фибробласты. И-комплеко стимулирует пролиферативную активнооть фиброблаотов и оказывает модулирующий эффект на синтез коллагена в культуре in vitro , проявляя стимулирующий или ингибирующий эффект в зависимости от исходного уровня продукции коллагена фибробластами.
Для Л-коиплекса выявлено стимулирующее влияниегч относе-
" 4 "
ний роота фибробпаотов и оинтеза иии крллarena.
. Обнаруженные эффекты коиплекоов иммунопептидов на функциональную активность фибробпаотов позволили раэработать воз-ыожные подходы к коррекции нарушений функциональной активности клеток in vitro при использовании фибробпаотов, полученных из кепоидного рубца больного. U-кошілбко ингибирует продукцию коллагена фибрОблаотами.
Практическая ценнооть работы. Разработаны условия получения биологичеоки активных комплексов иммуноцитонвнов /М и Л-комппексы/ из культур стимулированных Ш1К периферической крови свиньи.
Использование периферической Крови овивьи при получении комплексов иммунорегудяторных Пептидов является перспективный и безопасным в овете распространения СПИД, а также позволяет подучить исходный материал и комплексные препараты с меньшими экономическими затратами по оравнекию о аналогами из периферической крови человека.
Выявленные различия U- и Л-воыплекоов,иммувопептидов на миграционную активность макрофагов и леікоцитов поавопяет ис» пользовать их в дальнейшем в качестве дзагноотйкумов для оценки функций этих клеток-мишеней.
Данные о способности М- и Л-комплекоов естественных иныу-ноцитокйнов регулировать функции фагоцитов и фибробпаотов создают предпосылки для активного использования их в качеотве имму-нокорригируюцих препаратов при хронических воспалительных заболеваниях, процессах регенерации и др. нарушениях.
Модулирующее действие Ы-комппекоа на оинтез коллагена фиб-роблаотами в зависимости от исходного уровня продукции коллагена моиет быть учтено при разработке новых охем индивидуального применения йимуноцитокинов.
Апробация, диооертацин. Ооновные положения диссертации доложены и обсуждены иа заседаниях кафедры иммунологии ЫБФ 3-го Ы0ЛГ1М им. Н,И.Пярогова /Иооква, 1988-1991гг./. «в Международном симпозиума "Структура инмунорегУляторных пептидов" /Мооква, 1988г./, на Воеооюзной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической иммунологии" /Мооква, 1989г./, на Международном симпозиуме "Проблемы имму-нофарнакологиа" /Тбилиои, 1990г./,
Апробация работы состоялась на научной конференции кафедра иммунологии и отдела иммунологии Ш|К 2-го МОЛГШ им.Н.И.Пи-рогоза /Москва,1991г./,
Пібликации, По материалам диссертации опубликовано 8 работ, получено авторское свидетельство на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диооертация изложена на //О страницах машинописного текста и соотоит из введения, четырех глав; "Обзор литературы", "Материалы и методы исследования", "Результаты ооботвенных иооледований", "Обоуждение результатов" и выводов.. Список использованной литературы содержит 198 ссылок» из них 35 - отечественных и 163 - иностранных автаров. Диссертация содержит 7 таблиц и 19 рисунков