Введение к работе
КТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В основе многих им-мунодефицитных состояний лежит недостаточность лимфоцитов, проявляющаяся в снижении их численности и/или нарушении функциональной активности. Наиболее универсальным показателем функционального состояния лимфоцитов является их пролиферативный ответ на внешние сигналы, главным, но не единственным из которых является связывание рецепторов для антигена. Это обусловлено тем обстоятельством, что пролиферация клонов лимфоцитов служит условием развития любых форм иммунного ответа. Поэтому оценка пролиферативной активности лимфоцитов на действие митогенов используется для определения их функциональных потенций. Считается, что эта реакция моделирует в поликлональном варианте проли-феративную экспансию клеток под влиянием антигенов. Однако, лектины, обычно используемые для стимуляции Т-лимфоцитов, взаимодействуют с углеводной частью различных молекул клеточной поверхности, а не только комплекса CD3-TcR, распознающего антиген.
Изучение путей активации Т-лимфоцитов оказалось весьма плодотворным при анализе пусковых механизмов стимуляции клеток, функционального взаимодействия мембранных макромолекул, его изменений в процессе созревания Т-клеток и при изучении других вопросов, имеющих фундаментальное значение. В частности, дифференцированная оценка активации Т-клеток, вызванная действием на анти-генраспознающие рецепторы (классическая активация) и на другие (костимулирующие, адгезивные) молекулы их мембраны (альтернативная активация), может представлять как теоретический так и практический интерес, поскольку эти пути активации Т-лимфоцитов могут запускаться с участием разных механизмов и повреждаться в разной степени при заболеваниях, сопровождающихся развитием иммунодефи-цитов. Помимо важности для оценки иммунного статуса данные такого рода могут оказаться существенными при
разработке принципов и методов иммунотерапии. Кроме того, оценка активации Т-клеток путем воздействия на конкретные мембранные молекулы позволит объединить два относительно автономных подхода к изучению лимфоцитов, один из которых основан на характеристике мембранного фенотипа, а другой на оценке их функций.
Наконец, данный подход может прояснить ситуации, когда в результате накопления в сыворотке патологических метаболитов изменяется состояние мембраны лимфоцитов, что влияет как на восприятие, так и на передачу митогенных сигналов.
К настоящему времени имеются лишь единичные сведения о дифференцированном повреждении классического и альтернативного путей активации лимфоцитов при ревматоидном артрите, ряде других заболеваний, связанных с аутоиммунным компонентом, при некоторых первичных иммунодефи-цитах. В нашей лаборатории были проведены подобные исследования у больных с хроническими заболеваниями легких. Однако, механизмы нарушений различных путей активации до сих пор недостаточно изучены.
ЕЛЬЮ РАБОТЫ является сравнительное изучение нарушения путей активации Т-лимфоцитов, обусловленных связыванием рецептора для антигена и адгезией клеток, в сопоставлении с уровнем экспрессии функционально значимых поверхностных молекул при первичных и вторичных иммунодефицитных состояниях.
ля осуществления данной цели предполагалось решение следующих ЗАДАЧ:
1. Изучение пролиферативного ответа Т-клеток, активированных по классическому (СВЗ-зависимому) и альтернативному (СВ2-зависимому) путям, у здоровых доноров и детей с первичными и вторичными иммунодефицитными состояниями, а также у людей, подвергшихся действию малых доз ионизирующей радиации.
:. Оценка влияния сыворотки больных и облученных людей на классическую и альтернативную активацию Т-лимфоцитов здоровых доноров.
. Моделирование влияния ионизирующих излучений на классическую и альтернативную активацию МНПК здоровых доноров in vitro.
МГАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые выявлена ГХразная степень поражения классического и альтерна-ивного путей активации при иммунодефицитных состояни-х у детей. При этом выявлено четыре категории поражения ктивационных процессов: 1) с нормальным ответом на >ГА, МАТ к CD3 и адгезивные стимулы (лимфопролифера-ивный синдром, бронхиальная астма, ревматизм, неспеци-ический лимфаденит); 2) с нормальным ответом на класси-ескую и пониженным ответом на альтернативную актива-ию (хронические неспецифические воспалительные роцессы); 3) с нормальным ответом на альтернативную и ониженным на классическую активацию (синдром Вискот-1-Олдрича, атаксия-телеангиэктазия, нейтропения); 4) с на-ушением обоих типов ответа (агаммаглобулинемия,общая іриабельная иммунная недостаточность, агаммаглобули-емия с нормальным или повышенным IgM).
становлено, что нарушение активации клеток перифериче-(ой крови при первичных и вторичных иммунодефицитных )стояниях связано с клеточными дефектами, а не с влияни-л сывороточных факторов.
оказано, что ионизирующее излучение приводит к нару-ению как классического, так и альтернативного путей ак-івации. Только угнетение классической активации может лть обусловлено влиянием накапливающихся в сыворотке одей факторов; выраженность ингибирующего эффекта .торотки зависит от лучевой нагрузки (он наиболее выра-ен при использовании сывороток ликвидаторов).
первые дана количественная оценка радиационного пора-ения CD3- и CD2- зависимой активации Т-клеток in vitro.
РАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Модифицирована тест-система для оценки пролиферативных реакций Т-лимфоцитов, что позволяет дифференцированно оценивать митогенный ответ лимфоцитов на действие агентов, моделирующих антигенное воздействие и адгезивные стимулы. Разработанный подход используется в Институте иммунологии МЗ РФ, Республиканской детской больнице, Нижнегородском НИИ эпидемиологии и микробиологии при оценке функций Т-лимфоцитов. Данная разработка включена в качестве составной части в Методические рекомендации (А.А.Ярилин, Н.И.Шарова, М.Ф.Никонова, О.И.Кузьме-нок, Н.И.Кочергина, М.М.Литвина, ЛД.Титова, И.В.Ора-довская, Комплекс методов оценки состояния тимуса и ти-мусзависимого звена иммунной системы человека при действии радиационного фактора; в кн. «Экологическая иммунология», Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин, Х.И.Истамов, ВНИРО, М., 1995, с. 132-145).
Данные о различном характере поражения процессов классической и альтернативной активации Т-лимфоцитов при различных заболеваниях и иммунодефицитных состояниях позволяют уточнить их иммунопатогенез и оптимизировать подходы к иммунокоррекции. Оценка активации Т-клеток путем воздействия на конкретные мембранные молекулы дает возможность объединить два подхода к изучению лимфоцитов, один из которых основан на характеристике мембранного фенотипа, а другой - на оценке функции клеток.
По теме диссертации опубликовано 14 работ.
Результаты доложены на I съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992 г.), обсуждались на научных конференциях отдела клеточной иммунологии Института иммунологии Минздрава России.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ