Введение к работе
Актуальность проблемы. Общепризнанным является участие полиморфиоядерных лейкоцитов (ПЯЛ) в патогенезе аллергических процессов в качестве клеток-эффекторов (Беклемишев Н.Д., 1986; Гущин И.С., 1998; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Пыцкий В.И. и др., 1999;JagerL, 1988).
При этом отмечается как количественное изменение этих клеток в тканях, так и изменение их функциональной активности (хемотаксис, способность поглощать и переваривать бактерии, ферментативная активность и т.д.) (Аравийский Р.А.,1975; Барсуков А.А. и др., 1985; Гончарук З.Н., 1975; Kubo А et al, 1987; Miklaszewska М. Et al, 1988). Особое внимание уделяется способности ПЯЛ секретировать активные формы кислорода (АФК), поскольку именно с ними во многом связана способность этих клеток осуществлять завершенный фагоцитоз, цитотоксичность и бактерицидность (Babior В.М., 1978; Dallegri F et al, 1987; Humphreys I.M. et al, 1987; Iyer G.Y. et al, 1961). АФК могут способствовать также изменению секреции некоторых медиаторов аллергии, что также модифицирует течение аллергического процесса (Гущин И.С. и др., 1989). Чаще всего для исследования способности клеток секретировать АФК используется метод измерения хемилюминесценции (ХЛ), поскольку этот метод весьма точно отражает динамику секреции этих метаболитов (Владимиров Ю.А. и др., 1989; Allen R.C. et al, 1972; Aquilar A.D.; Serrono E., 1989; Westman J.A., 1986). При этом при аллергических процессах наблюдалось как увеличение ХЛ так и ее угнетение, что свидетельствует о неоднозначности изменения секреции АФК (Даниляк И.Г. и др., 1992; Казначеева Л.Ф. и др., 1998;
Филатов О.Ю. и др. , 1989; Jenkins F.M. et al, 1987; Lindberg R.E. et al, 1982).
Определяющую роль в изменении ХЛ ПЯЛ при аллергических процессах играет аллерген, воздействие которого приводило к развитию специфического угнетения ХЛ ПЯЛ (Пыцкий В.И. и др., 1985; Пыцкий В.И., Филатов О.Ю., 1992). Очевидно, что в основе этого феномена лежит изменение секреции АФК ПЯЛ, однако закономерности этого явления остались недостаточно изученными. Не ясно, как изменяется секреция АФК лейкоцитами в зависимости от стадии аллергического процесса, изменение активности каких ферментов обуславливает изменение секреции АФК ПЯЛ под действием аллергенов и какими механизмами вызываются эти изменения. Не ясно также, как изменяется секреция АФК лейкоцитами крови при псевдоаллергических процессах, и какое влияние на эти изменения оказывают вещества, вызывающие псевдоаллергию. Поскольку метод ХЛ достаточно прост в постановке и безопасен, возникла необходимость оценить возможность использования этого феномена в диагностических целях.
Цель исследования. Целью настоящей работы явилось установить общие закономерности и некоторые механизмы изменений образования активных форм кислорода лейкоцитами крови при аллергических и псевдоаллергических процессах, оценить диагностическое значение этих изменений.
Задачи исследования. Выполнение поставленной цели потребовало решения следующих задач:
- определить характер изменения секреции АФК лейкоцитами крови под воздействием аллергена при некоторых аллергических заболеваниях (поллиноз, атоническая бронхиальная астма, непереносимость пенициллина);
определить характер изменения секреции АФК лейкоцитами крови при некоторых псевдоаллергических заболеваниях (непереносимость ненаркотических анальгетиков);
определить характер изменения секреции АФК лейкоцитами под влиянием аллергена при экспериментальных аллергических процессах I и III типов ( анафилактический шок, феномен Артюса);
- оценить вклад НАДФН-оксидазной и миелопероксидазной
систем клетки в изменение секреции АФК лейкоцитами крови при
аллергических и псевдоаллергических процессах;
- определить возможность прямого и опосредованного воздействия
аллергена на ПЯЛ, приводящего к изменению секреции АФК
лейкоцитами крови при аллергических процессах;
- определить роль гистамина в изменении секреции АФК
лейкоцитами крови при аллергических и псевдоаллергическнх
процессах;
- оценить диагностическое значение изменения секреции АФК
лейкоцитами крови под влиянием аллергена при аллергических и
псевдоаллергичесюгх процессах.
Научная новизна исследования: Нами впервые установлено, что:
1. Инкубация крови больных аллергическими заболеваниями
(поллиноз, атоническая бронхиальная астма, лекарственная аллергия) с
аллергенами в различных диапазонах доз приводит к развитию фазового
изменения ХЛ ПЯЛ. Малые дозы атлергенов усиливают ХЛ ПЯЛ, а
большие - угнетают.
2. Характер изменения ХЛ лейкоцитов под влиянием аллергенов
при аллергических заболеваниях зависит от их стадии. В стадию
ремиссии аллергического заболевания аллергены усиливают ХЛ ПЯЛ, а
в стадию обострения - угнетают.
-
Инкубация крови экспериментальных животных, у которых был воспроизведен аллергический процесс, с аллергеном в разных диапазонах доз приводит к специфическому фазовому изменению ХЛ.
-
Инкубация анальгина и салицилата натрия с кровью больных , страдающих непереносимостью анальгина и аспирина приводит к дозозависимому угнетению ХЛ лейкоцитов крови.
-
В патогенезе изменения секреции АФК при аллергических и псевдоаллергических процессах играет роль изменение активности НАДФН-оксидазы и миелопероксидазы ПЯЛ.
6. В механизмах изменения ХЛ под действием аллергена и
псевдоаллергена при аллергических и псевдоаллергических процессах
принимает участие гистамин.
Научно-практическая значимость и внедрение работы.
Полученные результаты легли в основу разработки диагностического теста in vitro, который может быть использован для выявления аллергена, ответственного за сенсибилизацию, что особенно важно в случае лекарственной аллергии, где диагностика in vivo приводит к развитию осложнений. Этот тест может быть использован для выявления лекарственных препаратов, вызывающих псевдоаллергические реакции. Диагностический тест используется в медицинской практике 1 ГКБ г. Москвы, поликлиник МВД и МО. Тест защищен авторским свидетельством на изобретение за №1436643.
Полученные результаты в значительной степени расщиряют существующие сегодня представления об участии полиморфноядерных лейкоцитов в патогенезе аллергических и псевдоаллергических процессов, что создает основу для разработки новых подходов к патогенетически обоснованному лечению аллергических и псевдоаллергических заболеваний. Полученные данные используются в
лекциях и на практических занятиях, проводимых на кафедре общей патологии МБФ РГМУ и факультета социальной медицины Государственной Академии им. Маймонида.
Апробация работы. Диссертация выполнена в соответствии с планом нау»тых исследований Российского государственного медицинского университета и апробирована на совместной научной конференции кафедр иммунологии, нормальной физиологии, патологической физиологии, общей патологии РГМУ и отдела иммунологии МЛК РГМУ.
Основные положения работы были доложены на Всесоюзной конференции « М.В.Ломоносов и Север « ( Архангельск, Россия, 1986), 1 Национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (Москва, Россия, 1997), XVI Международном конгрессе по аллергологии и клинической иммунологии (Канкун, Мексика, 1997), 1 Международном симпозиуме по фундаментальным проблемам и применению современных хеми- и биолюминесцентных исследований в химии, биохимии, медицине и образовании (Дрезден, Германия, 1997), Международном симпозиуме « Человек и катастрофы: проблемы обучения новым технологиям и подготовки специалистов к действиям в чрезвычайных ситуациях « ( Москва, Россия, 1999).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. При экспериментальных аллергических процессах и
атонических заболеваниях вследствие действия аллергена па
полиморфноядерные лейкоциты в этих клетках развивается изменение
секреции АФК, носящее фазовый характер в зависимости от диапазона
концентраций аплергена.
2. Проявление фазового характера изменения секреции АФК
лейкоцитами определяется стадией аллергического процесса. В стадию
обострения аллергических процессов развивается угнетение секреции АФК под действием аллергена, а в стадию ремиссии - активация секреции АФК.
-
При воздействии на лейкоциты крови ненаркотических анальгетиков, вызывающих псевдоаллергические реакции, дозозависимо угнетается их способность секретировать АФК.
-
Изменение секреции АФК под воздействием аллергена и псевдоаллергена возникает как результат изменения активности НАДФН-оксидазы и миелопероксидазы в ПЯЛ.
5. Изменение секреции АФК лейкоцитами крови при
аллергическом и псевдоаллергическом процессах вызывается в
значительной мере действием гистамина, высвобождающегося из
базофилов.
6. Изменение ХЛ, развивающееся под действием аллергена, может
быть использовано для диагностики, а именно для выявления
сенсибилизирующего аллергена или псевдоаллергена.
Публикации результатов и исследований.
По материалам диссертации опубликовано 22 печатные работы.
Структура и объем диссертации.