Введение к работе
Актуальность проблемы. Многочисленные факта нпруїтсний в иммунной еме, выявленные при вирусных гепатитах, является достаточными для признания участия иммунопатологических реакций в развитии воспалительно-деструктивных процессов в печени (А.Ф.Бяюгер.Х.М.Еокслер, 1988; Г.М.Власихина с соавт.,1985; В.й.Покровсюій,І98Гз; J/..І^ЛЧЛ «У аЄ.,1$88і<ҐМ-$г"С">еМ0 1Ь86 и др.). К числу возможных механизмов развили гепатоцеллюлярного повреждения относят питотокснчоские реакции, играющие ваюгуга роль в осуществлении иммунологического надзора. Способность лимфоцитов разрушать зараташшо вирусом клетки обеспечивает удаление из организма инфицированных клеток и вируса, приводя к выздоровлению. С другой сторони, иммунный цитолиз, вызывая гибель значительного количества гепатоцитов, может привести к нарушению функция -печении и усугубить инфекционный процесс (Б.Ф.Семенов,1983 и др.).
На экспериментальных моделях в системе гепагоциг-лимфоциг показано, что элиминация гепатоцитов, экспрессирущих вирусный антиген, может осуществляться как цитотоксяческиш T-лвмфоцитами, так и по Т~ клетками, проявляющими активность антителозависимкх или натуральних киллеров (Ю.П.ГичевД.П.Граудияя,1986}^^^^^«/.,1584 и др.).
Изучение in. Шп? клаточноопосредованяой цитотоксичностя затруднено из-за отсутствия доступных для широкого, применения методов.Результати исследований относительно роли клеточных цитотоксических реакций в патогенезе острых л хронических гепатитов неоднозначны,чти объясняется большим разнообразием применяемых для анализа клеток-мишеней и методов учета результатов. По мнении ряда авторов, существенная роль в повреждении гепатоцитов при вирусных гепатитах принадлежит лимфоцитам, сенсибилизированным к вирусным или вирусиндуциро ~ ванным антигенам (A.G,Логинов,Ю.Э.Блок,І9В7; iFSba/vtara ffaiiobM**/a'.Ab83iA./5ftfaeM*f«$.$ea и др.). Другие исоледова-
ти ліі прискам' большее значении в и том процессе зависимой от антител клеточной цптотокепчносш (UJi.Зимин с соавт.,1984;Б.С.Каганов,1984; ЛЗлгІоІоіа eh\?,lV№\M.3z«fr>i Ua!.,V5\&\$Alig&(>det.,V№ и др.), IIojiijjartoiy.IlccjieAuiiarL особенности изменений клеточных цитоток-сичоских реакций при вирусных гепатитах, определить роль клеточно -опосредованной цитотокскчности в патогенеза заболевания.
йгаачц иселодог.лш.я,
-
Разработать сиектрофотометрические методи определения алтителоза-внсимой клеточной цмотокекчности ( АЙКЦ ) її щітотоксической ак -тішности ( ЦТА ) лимфоцитов, сенслйилизированних к поверхностному антигену вируса гепатита Б ( H%Aj ).
-
Изучить характер изменений ЦТА лимфоцитов, сенсибилизированных к Ifflj'Au, у больных острш н хроническим гепатитом В ( ГВ ).
-
Виявить особенности изменений АЗКЦ у больных при разной форме патологии ыечени.
-
Установить связь выявленных клеточных цитотоксических реакций с нозологическими формами болезни, стадиями патологического процесса, степенью его выраженности.
Научная новизна работы. Разработан снектрофотсметрический метод определения ЦТА лпьфоцитов, сенсибилизированных к 11Ау, с использованием в качестве клеток-мшаней ( Ш ) нативных эритроцитов барана ( ЭБ ), конъюгированных с ШЗ^Ал при помощи хлорного хрома.
Модифицирован спектрофотоыетрический метод оцєііки АЗКЦ с зашноИ солянокислого бензвдииа на ортофешишндмашш ( ОЩ ), используемый в качестве хромогена.
Впервые проведено комплексное исследование двух типов клеточной 'цитотоксичности (ІШ лшліліипюв,сенсибилизированных к НЬч-Ал, и л8КЦ ) и показан пх разнонаправленный" характер при остром и хронической 1.
Ьыявлени особенности динамики ГОЛ сенсибилизированных к 1 IBjAn лимфоцитов 4ЛЗКЦ в зависимости от формы гепатита, тяжести течения болезни ч периода обследования, активности патологического процесса и сое -тояния иммунологического статуса организма.
Впервые проведен сравнительный анализ динамики АЗІЩ при острых ІЛ и ГВ, хроническом ГВ и хронических заболеваниях желчевыводящих путей ( ЖВП }. Выявлены общие закономерности изменений уровня АЗКЦ, заключающиеся в снижении активности К-клоток, более выраженном при вирусных гепатитах.
Практическое и теоретическое значение работы. Исследование ЦТА лимфоцитов, сенсибилизированных к НВ^Аа, и АЗКЦ позволяет расширить возможности лабораторной диагностики иммунологических нарушений при вирусных гепатитах и забот;ваниях печени иной этиологии.Полученные данные об особенностях клгг очных цитотоксических реакций и их связи с другими иммунологическими и биохимическими показателями активности патологического процесса в печени могут быть полезны для углубления представлений о патогенезе вирусных гепатитов. Установленная связь частоты выявления и степени изменения ЦТА лимфоцитов,сенсибилизированных к KBjAg, и АЗКЦ с тяжестью течения острых ГА и ГВ позволяет рекомендовать определение клеточноопосредованной цитотоксичности в качестве дополнительного теста для оценки активности патологического процесса.
Разработанные спектрофотометрические методы определения ЦТА лимфоцитов, не требующие дорогостоящих реактивов, оборудования и Применения радиоактивных изотопов, могут быть использованы для оценки сое-тоянияклеточного иммунитета больных вирусными гепатитами и другими заболеваниями печени. По материалам работы составлены методические рекомендации "Использование стантрофотометрического метода для определения цитотоксической активности сенсибилизированных к НВ^Аолимфо-цилшв",утверждены МЗ РСФСР 16 марта 1989 г, и опубликованы в 1989г.
Принцип метода может бить использован при изучении ЦТА лимфоцитов, еонсиоплизировашшх к другим антигенам.
ІЗиедрешш результатов В практику. Но ходи определения ЦТА лим
фоцитов, сенскбшшзировашшх к HByAg, и АЗКЦ внедрены в клинике Ни -
жогородского 1ШЭЫ и Нижегородской клинической инфекционной больни -
це И2, а также использованы в учебном процессе на биологическом фа -
кулътоте Нижегородского государственного университета.
Основина положения, вино'сише на защиту.
-
С'пектрофотоыетрический метод определения ЦТА лимфоцитов, сенсибилизированных к НВуА^, может быть использован для оценки активности эффектороногс звена при вирусном гепатите В,
-
При остром и хроническом ГВ с высокой частотой установлено новы -шешш ЦТА сенсибилизированных к Ш$ Ад лимфоцитов, свидетельствую -щое о значительной активации аффекторного звена клеточного ишу -иитета и патогенетической роли сениебилизированних к НБ^Аолимфо -цитов при этой инфекции.
Li. При ьирусних ГА и ГВ установлено закономерное снижение АЗКЦ, связанное с нозологической формой заболевания, тяжестью и стадией патологического процесса и свидетельствующее о нарушении носпевд-ij[.u4eских иммунологических реакций при данной патологии. 4. Изучение показателей клеточноолосредоваїшой цитотоксичностії у сольних вируенши гепатитами может бить использовано в качества дополнительного критерия оценки тяжести болезни, полноты выздоровления и прогноза заболевания. Дисоерташя аягюбирована на совместном заседании межотделенчес-к:лі конференции проблемного сешінара "Иммунология и инфекционная патология" к Ученого совета Нижегородские НІНШ 1.ІЗ РО-ІОР 26.04,1991г.
Гіуоішкрлціи.Основное содержание работы отражено ь 7 научных. аитшх в центральной и республиканской печати.
Структура и объем работи.Диссерташя написана по обычному плану и включает следующие разделыгвведепие, обзор литературы,3 главы с описанием результатов собственных исследований, включая " Материаш и матодн", заключение, выводы, список литературы ( 363 источника, в том числе 165 - на русском языка ). Работа изложена на ІВЗ страницах , включая 99 страниц текста, 27 таблиц и 17 рисунков.