Введение к работе
Актуальность проблеми.
Внутрисистемный- контроль за функционированием различных попу ляций лимфоцитов и клеток моноцитарно-ыакрофагального ряда осі -ществляют регуляторкые клетки иммунной системы либо непосредствен но, в результате контакта с клетками-мишенями, либо с пометы; гуморальних,медиаторов. Часть регуляторних клеток входит в состнп различных комлартмонтов, на территорші которых вдет пролиферация и созревание предшественников иммуноцитов, разворачиваются иммунные реакции, происходиг распознавашю и переработка антигена. А другая их часть мигрирует в организме в составе периферической крови.
В настоящее время доказана и интенсивно изучается регуляторная, функция костного мозга, приоритет в исследовании которой принадлежит отечественным исследователям, Петров Р.Б. и Михайлова 4.А. (1969-1989) показали, что клетки костного мозга, принадлвгеа-цие к моноцитврио-макрофагальному ряду, продуцируют -регулятори!» іептида, стимулирующие аитителопродукцию; На -основе этих пептидов зоздан лекарственный препарат - миелопид, широко применяемый в ишнике. Помимо стимуляторного, костный мозг оказывает иягибирую-іее влияние на иммунные реакции к различным антигенам (Потрон '.В.', Хаитов P.M. 1973 -1974, Duwe А.К., Singiial S.X., 1975).
Работы последних лет убедительно свидетельствуют, что осуществление костным мозгом регуляторной функции зависит от фізиолопг еского состояния организма (Новиков В.И., Сидорович И.Г., 1990), ак, у животных, иммунизированных различными антигенами, наОлада-гея антигензависимая утрата стимуляторней активности . а усиление пгрессорных свойств костного мозга. .Однако, непосредственно г. ром органе вводимый антиген не. обнаруживается. Первой преградой з пути антигена является регионарные лимфатические узлы и окя жже вовлечены в процесс регуляции иммунного ответа. Показано. 'О клетки этих органов, выделенные из организма через 4-6 часоп еле иммунизации, продуцируют медиаторы, названные ФИЛУ (фактору мунных лимфатических узлов). Эти факторы циркулируют с токг.м ови и лимфы и вызывают вышеупомянутые изменения В КОСТНОМ МОЗГ'-' araskevas P. et. ai, 1985-1888, Новиков В.И. и соав-д , 87-1990). Одновемэнно, в тех же условиях обнаруживаются зпткгон-эцифическиэ продуценты фактора подавления миграции ітаіроф'лго,.'. горые обеспечивают локализации клеток ршмуной сиенита я мєсї'. їтакта с антигеном (Суслов А.П. и соавт., I9-3S}.
Исследование факторов, регулирущях nvz'/jtvpiF/sr}//! :v<:"j-;:y
- г -
!.. її г.;і-.:л;>й і-.ллюцііїйрно-ірагоцш'іірурлей системи, ослошяется гете-: .. ди.к:-їів исходных популяций клеток-продищантов и ыудьтифушсцио-,:::,.L!i jjjti) оишх ыедлаторов. Для преодоления этих трудностей наи-;>.u;.uj пдршак'іішішмп представляются метода иммунной ОИОТВХНОЛОГИИ і; "іШлаиорпой иммунологии". Подхода молекулярной биологии, генной ііь:.г.аі)ріін( пибридомноц техники позволяют нарабатывать гомогенные цроліірь'ш к.тунологачески значимых веществ, в том число - мадиато-1)..а шшушэй системи ц ыоноклональных антител к шім.
"йосемартіше" популяции клеток являются наиболее удойным ио-иочп.шом для получения цитоышов ь количествах, достаточных для га о'ьи-.тк!.! и молекулярного клонирования. В настоящае время с успехом теполизуш'ся клеточніів клоїш, линии опухолевых клеток і! функциональный, в том числе 'Г-Т-кле точные, гибридаш, продуцирующие желаемый фаістор спонтанно или поело стимуляции каким-либо агентом (антигеном, нитоі'еноц). Анализ рецепторного. аппарата и поверхностных іііірінров, хромосомного набора и функціональних свойств таких кле-vuc позволит подробнее изучить механизмы функционировадая рогуля-'юрШі'х клеток in ui tu. Необходимый этапом исследования медиаторов іінл.'іогся получение к ним моноклонэдишх антител, что поиволяет определять sis. активность в биологических еэдкостях и тканях органио-м:) при различных состояниях.
Ш'Ш Е.4ШШ ~ разработать имыуиобиотехнологичаекпе способи получении и исследования факторов, регулирующих взаимодействие' „'.'Шфодитов и клеток моноідатарно-фагоцдтирущей системы.
ЗАКАЛИ ШШШШШ-
Дня ынюлнешя'' намочвішой цели были поставлены следующие
оііцичи;
\. Исследовать мадиаторную активность культивируемых клеток лимфатических узлов мшим в ранние сроки развития иммунного ответа и изучить влияние продуцируемых медиаторов на мононуклеарные фагоцитирующие клетки.
2. Отобрать клони.линии опухолевых клеток человека СЕМ, продуциру-адио .фактор, подавляющий миграцию макрофагов;
а. Подобрать оптимальные условия для получения Т-Т-клеточкых гибридом человека, продуцирующих лимфокины с действием, направленным на регуляцию активности моноцитарішх фагоцитов;
\. На осново клеток'шітактного костного мозга получить мышиную ш-орй.дому, продуцирующую иммунорегулагорннп .нрессоршн фактор;
Б. ІІОЛУ'ШТЬ МШШІУГО ГИбрИДОМУ. ПрОДуїЦфУгауЮ МРІЮКЛОЇПЛІ,'-'.^ »": тело к иммупостимуляториш мпелопептидэм;
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ-~В результате селекции на среде с 8-анагуанинон получона мутлтч""; лишія клеток человека CEM-AgR и ее оубклол, продуціфуїзкпл frir.\i\<, регулирующий функции мононуклеарных фагоцдтсп;
-На основе одного из субклонов данной линии - 0EM-Ag.R--Kl2 іклуч*1"'і клонн Т-Т-гибридомы человека с аналогичной специфичности); -Исследована природа и функциональные свойства фактора иі.иунг:." лимфатических узлов мыши, полученного в ранние сроки поело итт'.уі"*. защш, не являющегося ИЛ-І, ИЛ-2, гагтерферопом-гамма, и енярлєн.' эго стимулирующее влияние на клетки монопуклеорней Фагоцитируй?" Л зистемн;
-ВПВрВНе ПОЛуЧеН КЛОН ГИбрИДОМННХ КЛеТОК ИНИИ, СОКретаруЩКХ Ї'ЧД;'-
з'тор, по ряду физико-химических и биологических свойств сходный с :упрессорным фактором костного мозга;
-Впервые ПОЛуЧеН КЛОН ГИбрИДОШШХ' КЛеТОК_ МЫШИ; арОДуІїЛруІОЇЇЧХ №1
юклональнио антитела, отменяющие биологическую активность, преня-)ата "миелогаїд".