Введение к работе
- Актуальность проблемы. Общее снижение уровня заболеваемости лепрой еще не говорит о полном ее исчезновении. Существуют регионы в мире с высоким риском заражения лепрой. Так, по данным всемирной организации здравоохранения, в настоящее Ере-мл в мире зарегистрировано 3,7 млн больных лепрой и 1,4 млрд человек подвержены риску заболевания этим недугом.
Лепра, как и туберкулез - хронические гранулемзтаэные инфекции человека, в ізьшаеі.іі.г кислотоустойчивыми микобактериями.
Несмотря на усіехи в области химиотерапии лепры и контроля за ее распростр-кённостыо, лепра остается первостепенной ыедико-социальной лроблемой в странах Юго-Восточной Азии, Африки, Латинской Америки. Такое положение связано с отсутствием способов ее специфической профилактики, несовершенством биологических моделей, недоступностью культивирования возбудителя на искусственных питательных средах, а отсюда, трудностями наработки бактериальной массы для методов микробиологической и серологической диагностики М.leprae.
Единственным источником биомассы М.leprae, в настоящее время, являются экспериментально зараженные девятипоясные броненосцы, на которых удается воспроизводить лепрозную инфекцию (Kircheimer W.F. et al.y 1971), а в дальнейшем и бактериальную массу, необходимую для разработки диагностических препаратов и ' вариантов специфической протиьолепроэной вакцины.
Методы диагностики и профилактики лепры, основанные на применении очищенных ,ог тканей организма-хозяина U.leprae, оказались недостаточно совершенными для раннего прогнозирования и борьбы с лепрой. Эти методы также не совершенны для «оценки.иммунологического состояния больных лепрой и экспериментально зараженных М.leprae животных,- определения антигенов М.leprae, и антител к ним в органах и тканях Сольного организма (Ющенко А.А. с coast.,- 1978; Abe М, . et al., 1985). Поэтому эпидемиологические исследования при лепре основаны до сих пор на поиске клинически выраженных случаев заболевания и подтверждении : - данными бактериологических и гистологических исследований при достаточно запущенном процессе.
Необходимость разработки новых высокочувствительных мето--дов иммунодиагностики лепры диктуется задачами,.стоящими перед современной лепрологией. Иммунологические методы могут Сыть использованы для раннего выявления больных, оценки иммунологи-" ческой реактивности контактных лиц, изучения механизма патогенеза при лепре, прогнозирования клинических форм заболевания, оценки эффективности химиотерпии и решения других задач.
В области иммунодиагностики лепры неоднократно изучались возможности использования различных методов, основанных на фе- , номене связывания антигена с антителами] это такие .методы как радиоиммунологический анализ (РИА),' гель-иммунодиффузия, перекрестный иммуноэлектрофорег. метод флуоресцентных лепроэных антител (FLA-ABS) (Harboe М. et al., 1978; Abe М. et al., 1980, 1985, 1987;, ; Однако эти методы,' основанные на применении антигенов-экстрактов из М. leprae, имели рядсущественных недостатков, -связанных с низкой чувствительностью или специфичностью, ограничением количественной регистрации антигенов и антител и необходимостью использования специального, часто дорогостоящего, оборудования. '
Подобных недостатков лиаен метод иммуноферментного анализа (ИФА), который кроме высокой чувствительности и специфич-. ности обладает экономичностью, возможностью количественной оценки биологических проб, стабильностью применяемых реагентов, возможностью полной автоматизации - процесса . (Stek М., 1978; Stanford J.L. et al., 1980; Сухенко Л.Т. с соавт., і982, 1984, 1S85; Дячина М.Н. с соавт. 1235). В сообщениях ряда авторов публикуются сведения об использовании ИФА для выделения антител к М.leprae, комплексов антиген-антитело, антител к сульфонам, к мурамилдилептиду у больных лепрой (Alonso J.M. et , al., 1978; Валг G.M. et al., 1986). С помощью'теста'ИФА проведены сероэпидемиологические исследования,больных- и ик семей на наличие антител к юыплексу внутриклеточных" цитоплазматических антигенов из М. leprae и к поверхностным антигенам целой шко-бактериальной клетки (Douglas J.Т., 1984, 1987). Известно также об использовании ЛСА для. идентификации, и изучения серологи-ческой активности специфичесясго фенольного глпкслипзда -1 - и ионоклональных антител кз этст иммукодсмкнакгнь::: антигенный
.-4-зпитоп в М.leprae (Aquado Sanchez G. et al., 1986; Mitchison N. et al., 19S3; Douglas J.T. et al., 1987; Agis F. et al., 1988).
Новые возможности в разработке иммунсдиагкостических
тестов открылись после обнаружения и выделения в 1982 голу Фе-
. нолыгого гликодгашда І (ФГЛ-І), представляющего собой трисаха-
. рид, соединенный через фенольное кольцо с дипидным компонентом
клеточной стенки микобактерий лепры (Hunter S.W. et al., 1981,
1982).
Опубликованы сообщения о синтезе его аналогов - три, ди или моносахаридов ФГЛ-І, ,;;ммобидизироваяных на белковые носители (ЕСА, БІТ). Сої/'иалооь о перспективности этих полусинте-тических конъюгатов, имитирующих ФГЛ-І, для применения в серодиагностике лепры (Fijiwara Т. et al., 1S84, 1986; Hasan R. et al., 1989).
Учитывая достижения в области иммунодиагностики лепры, представляется перспективным разработка новых эффективных подходов к использованию в ишуноферментной диагностике антигенов природного и искусственного происхождения, особенно для раннего распознавания различных форм лепры.
ЦЕЛЬ НАСТОЯЩЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ Разработка на основе твердофазного ИФА, с использованием искусственных моноспецифеских и природных полиспецифических антигенов, эффективных диагностических тест-систем для раннего обнаружения противолепроэных антител, и бактериальной насыщенности организма М.leprae, а также для контроля за развитием лепроэного процесса, у больных лепрой и экспериментальных животных, эффективностью химиотерапии, стабильностью регресса заболевания, контроля эффективности вакцинопрофилактики лепры.
-
Разработать иммуноферменткый метод диагностики лепры на основе искусственных антигенов со специфичностью природного ФГЛ-І из М.leprae.
-
Изучить чувствительность и специфичность методов ИФА о использованием искусственных антигенных препаратов в сравнении с природны.... антигенами иа М. leprae.
-
Использовать методы ИФА на основе искусственных 'антигенов для исследования динамики изменения уровня антител у иммунизированных животных и больных лепрой лиц.
-
Изучить возможности использования методов ИФА, ОСНО-' ванных на природных и искусственных антигенах, для диагностики и сероэпидемиологии микобактериозов (лепры).
-
Апробировать диагностические ЙФА тест-системы, при се-роэпидемшлогяческих обследованиях населения в' эндемичных по лепре зонах.