Введение к работе
Актуальность темы. В последние 20 лет наблюдается устойчивый рост заболеваемости злокачественными лимфомами (Harris N., 1999). Основным методом лечения данной патологии является современная программная химиотерапия (XT), позволяющие получить полные ремиссии у 40-90% больных. Улучшение результатов лечения, в частности, преодоление лекарственной резистентности и достижение длительных ремиссий при неблагоприятных вариантах лимфом, связывают с интенсификацией режимов XT (Cheson В., 1998). Однако высокодозные программы XT характеризуются выраженной миело- и иммунотоксичностью. С внедрением в клиническую практику колониестимулирукяцих факторов и трансплантации стволовых кроветворных клеток с целью восстановления кроветворения при его лекарственном повреждении, проблема миелотоксичности стала менее острой. В то же время вопросы, связанные с иммунотоксичностью, остаются во многом не решенными (Mackall С, 1999). Это касается и поиска путей профилактики инфекционных осложнений, и разработки методов усиления контроля за минимальной остаточной опухолью после окончания XT (Mackall С, 2000, Bomberger С, 1998). Поэтому характеристика иммунных дисфункций и механизмов их развития при проведении XT, в том числе связанных не только с прямым повреждающим, но и опосредованным действием цитостатиков, является актуальным направлением исследований.
В настоящее время известно, что XT приводит к истощению Т-клеточной популяции. Наиболее выраженные изменения наблюдаются при проведении высокодозной XT и трансплантации стволовых кроветворных клеток и проявляются деплецией преимущественно СГ>4+ Т-лимфоцитов (Miller R., 1991) Истощение Т-клеточной популяции связывают с усилением спонтанного и активационного апоптоза под действием цитостатиков (Stahnke К., 2001). В качестве еще одного механизма Т-клеточных дисфункций обсуждается функциональная ареактивность Т-клеток (Schwartz R., 2003). Однако вопрос об анергии Т-лимфоцитов, в том числе субпопуляционной принадлежности энергичных Т-клеток, остается открытым. Развитие Т-клеточной недостаточности может также быть связано с активной супрессией, опосредованной моноцитами (Agehos А., 1999, 1по К., 2001). Так, согласно полученным нами ранее данным, а также данным литературы моноциты больных со злокачественными лимфомами способны подавлять митоген-стимулированный пролиферативяый ответ Т-клеток (Шевела Е., 2000) Теоретически ингябярующий эффект моноцитов на Т-клетки может быть обусловлен различными механизмами, например повышенной экспрессией и/или продукцией Fas лиганда (FasL), и соответственно запуском Fas-зависимого пути Ілрзда U>yW^JjL J ^і" Дефект экспрессии
| dlerepfwr ^ 1
на моноцитах костимуляторных молекул или снижение продукции интерлейкина-1 могут обусловливать индукцию анергии Т-клегок (Wells А., 2001). Супрессорная активность моноцитов по отношению к Т-клеткам может быть обусловлена повышенной продукцией простагландина Е2 (PGE2), активных метаболитов кислорода и оксида азота (NO) или иммуносупрессивных цитокянов, например интерлейкина-10 (IL-10) (Chouaib S., 1985, Wesch D., 1998, Bogdan С, 1998, Groux H., 1996). Указанные механизмы описаны при различных патологиях, но практически не исследованы у больных лимфомами на фоне проведения программной XT Исходя из этого, были определены цель и задачи исследования.
Цель исследования - на основании изучения механизмов Т-клеточных дисфункций оценить роль моноцитов в развитии функциональных нарушений Т-лимфоцитов и инфекционных осложнений у больных лимфомами при проведении химиотерапии.
Задачи исследования:
-
Охарактеризовать количественные и функциональные нарушения Т-лимфоцитов у больных лимфомами при проведении химиотерапии
-
Оценить субпопуляционную принадлежность Т-клеток, подверженных апоптозу и анергии
-
Изучить роль моноцитов в развитии функциональных нарушений Т-лимфоцитов
-
Исследовать возможные механизмы супрессорной активности моноцитов (роль простагландина Е2, оксида азота, продуктов окислительного стресса, цитокинов с супрессорной активностью (TL-10), Fas-лиганда)
5. Охарактеризовать частоту развития и тяжесть инфекционных осложнений у больных лимфомами в зависимости от наличия или отсутствия супрессорной активности монолитов
Научная новизна. В работе впервые показано, что причинами формирования индуцированных XT количественных и функциональных нарушений Т-лимфоцитов у больных лимфомами являются повышенный уровень апоптоза, состояние Т-клеточной анергии и активная супрессия со стороны моноцитов Установлено, что реализация супрессорной активности моноцитов происходит или в результате выраженного снижения уровня провоспалительных цитокинов и увеличения продукции IL-10, или через усиление продукции NO. Вместе с тем супрессорная активность моноцитов не является следствием повышенной продукции активных метаболитов кислорода и FasL и у большинства больных
не связана с усилением продукции PGE2 Впервые продемонстрировано, что наличие у больных лимфомами феномена супрессорной активности моноцитов ассоциировано с развитием инфекционных осложнений и является новым клинически значимым фактором риска развития тяжелых форм мукозига, индуцированного XT.
Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования расширяют представления о механизмах развития индуцированных XT функциональных нарушений Т-лимфоцитов и дают экспериментальные обоснования для разработки программ иммунотерапии, направленной на нейтрализацию супрессорной активносги моноцитов и коррекцию этих нарушений у больных лимфомами при проведении XT. Выявление феномена супрессорной активности моноцитов, вследствие высокой вероятности развития тяжелых форм цитостатического повреждения слизистых, обусловливает необходимость проведения активных мер профилактики данного осложнения XT.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Причинами угнетения пролиферативной активности Т-лимфоцитов у больных лимфомами при проведении химиотерапии, наряду с повышенным уровнем спонтанного и активапионного апоптоза Т-лимфоцитов, являются индукция анергии Т-клеток и генерация супрессорной активности моноцитов.
2 Супрессорная активность моноцитов в отношении пролиферативного ответа Т-лимфопитов регистрируется у 50% больных лимфомами и обусловлена растворимыми факторами. Реализация супрессорной активности моноцитов происходит с участием различных механизмов: с одной стороны, в результате выраженного снижения уровня провоспалительных цетокинов и увеличения продукции интерлейкина-10, а с другой, через усиление продукции NO. Вместе с тем супрессорная активность моноцитов не является следствием повышенной продукции активных метаболитов кислорода и FasL и у большинства больных не связана с усилением продукции простагландина Е2. 3. Наличие супрессорной активности моноцитов у больных лимфомами ассоциировано с развитием инфекционных осложнений, увеличением частоты и степени тяжести мукозита, индуцированного цитостатической терапией, частоты вторичного инфицирования слизистых вирусной и/или грибковой флорой.
Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации были представлены на научно-практических конференциях врачей г. Новосибирска (2000 г.), на заседаниях общества гематологов и трансфузиологов (2001 г.), на Научной Отчетной сессии НИИ
Клинической Иммунологии (2003 г ) Апробация диссертации состоялась 14 апреля 2005 г на семинаре клинического отдела ГУ НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 2 статьи в центральной печати.
Объем и структура диссертации. Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Материал изложен на 115 страницах машинописного текста, включающего 31 таблицу и 2 рисунка. Прилагаемая библиография содержит ссылки на 136 литературных источников, из них 132 зарубежных.
Работа выполнена на базе лаборатории клеточной иммунотерапии ГУ НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН (руководитель лаборатории - д.м н. профессор Черных Е.Р.) и на базе отделения гематологии и трансплантации костного мозга ГУ НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН (руководитель отделения - д.м.н. профессор Лисуков И.А.).
