Введение к работе
№:туальность проблемы.Поверхностные антигены бактериальной клетки даеют исключительно важное значение в стимуляции специфического и їв специфического иммунитета против инфекции. Среди поверхностных знтигенов велика иммунологическая значимость белісов клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Белки клеточной стенки гредставляют значительный интерес для создания новых 5актериальшх вакцин. Иммунологическое изучение белковых сомпонентов клеточной стенки P. aeruginosa было проведено Homma с ^авторами (1976), а также Чеканом Л.В. (1980) в лаборатории іротективннх антигенов НИИВС им. Мечникова.
По данным Homma, белок, выделенный из эндотоксина Р. ieruginosa, обладает свойствами общего протективного антигена, [сследованиями, проведенными Чеканом Л.В., было показано, что іетодами двумерного иммунноэлектрофореза в клеточной стенке швлено до 28 белковых антигенов, общих для вида P. aeruginosa.
Данные, полученные Едвабной Л.С, Зайднер И.Г., Макаренко '.А. и др. (1986), а также результаты экспериментов Gilleland et ,1.(1987) и Speot et а1.(1987) позволяют предположить, что белки леточной стенки могут быть использованы для создания эффективных акции против синегнойной инфекции. Однако протективные свойства елков клеточной стенки P. aeruginosa окончательно не выяснены.
Известно, что в борьбе с синегнойной инфекцией нтибиотикотерапия часто оказывается не эффективной, поэтому ажное значение приобретают исследования, направленные на азработку иммуноігрепаратов против, данной нозокомиальной нфвкции.
Начиная с 1986 года в Лаборатории ггротективных антигенов
И/ІИВС им. Мечникова проводятся исследования с целью получения новой вакцины на основе очищенных белков клеточной стенки Р. aeruginosa без примеси эндотоксина (липополисахарида).
Настоящая работа является частью плана НИР лаборатории по разработке этой вакцины.
Цель данного исследования - изучить ггротективные свойства изолированных белков P. aeruginosa с разной молекулярной массой и экспериментально обосновать возможность использования этих клеточных белков для создания эффективной малотоксичной вакцины против синегнойной инфекции.
Для достижения указанной цели нами были поставлены следующие задачи:
, I. Провести сравнительную оценку методов выделения белков клеточной -стенки P. aeruginosa на основе данных химического и иммунохимического анализа.
2. Изучить в опытах активной и пассивной защиты мышей изолированные Оелки клеточной стенки P. aeruginosa.
3 Приготовить экспериментальные серии белковой псевдомонас-вакцины и провести ее испытания в эксперименте на животных.
4.Изучить безвредность и иммунологический ответ у добровольцев, иммунизированных экспериментальными сериями псевдомонас-вакцины.
Полученные нами данные могут стать основой для разработки технологии приготовления новой очищенной Оесклеточной псевдомонас-вакцины.
Научная новизна и практическая значимость проведенных
исследований.
В результате проведенных исследований установлено, что в клеточной стенке P.aeruginosa локализованы белки с молекулярной массой:9,14,21,25,30,38,44,46 и 55 кД,которые стимулируют у лабораторных животных формирование протективного иммунитета к заражению различными иммунотипами P.aeruginosa.
Разработан способ выделения очищенных белковнх протективных антигенов клеточной стенки P.aeruginoea с использованием комбинации методов водно-солевой экстракции, солевого фракционирования и жидкостной хроматографии.На основе результатов химического, физико-химического и иммунологического анализа впервые разработана Оесклеточная псевдомонас-вакцина (Ш), содержащий видоспецифические белковые протективные антигены P.aeruginosa.
В эксперименте на животных вакцина мало токсична и вызывает специфический иммунитет к синегнойной инфекции.
Результаты клинико-иммунологических испытаний ПВ на добровольцах свидетельствуют о низкой токсичности и высокой иммуногенности препарата.
Полученные данные могут стать осиоеой для .разработки технологии получения новой псевдомонас-вакцины.
Положения, выносимые на защиту.
В клеточной стенке P.aeruginosa локализованы протективные антигены белковой природа с молекулярной массой в пределах от 9 до 55- кД.
Разработан способ выделения очишенных протективных белковых антигенов P.aeruginoza, основанный на водно-солевой экстракции, солевом фракционировании и жидкостной хроматографии.
Изученные белки обладают видоспецифической активностью и могут Сыть использованы для создания эффективной и малотоксичной вакцины против P.aeruginosa инфекции.
Клияико-иммунологические испытания ПВ показали высокую эффективность разработанного препарата.
Апробация работы.
Результаты исследований, представленных в данной работе, доложены на Ученых Советах ШМВС им. Мечшшова РАМН (Москва,1988,1993), на всероссийских и международных конференциях:на всесоюзной конференции по прблемам медицинской технологии (Санкт-Петербург, 1988), на конференции в Ташкенском НМИВС (1989), на международной конференции по вакцинам (Борстел, ФРГ, 1991).
Диссертация апробирована на научной конференции отдела средств к методов иммунопрофилактики и иммунодиагностики НИИ вакцин и сывороток им И.И.Мечникова РАМН.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста состоит из введения, обзора литературы,'шести глав собственных исследований, обсуждения,' выводов, указателя литературы, включающего 141 источник. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 18 рисунками.