Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ,посвященного анализу популяций зо-зинофилов в норие и при некоторых формах "палых зозннофилий",определяется ванной рольа данной линии клеток в патогенезе развития достаточно распространенных в настоящее время аллергических и паразитарных заболеваний.По имевшимся данным,разные проявления аллергии ииеет до 10-20% населения,а среднее число глистных инвазий на одного человека составляет в Европе 0.33,в Азии - 1.23, нередким является их сочетание (К.П.Торопова с соавт.,1993; Б.Т.Велич-ковский.1991; В.П.Сергиев,1991; Krause, 1986).
Обцей чертой в патогенезе таких разнородных по этиологии заболеваний,как атопический дерматит и хронический описторхоз явля-этся воздействие чуаеродного антигена как пускового момента инициации иммунопатологии и в развитии клинической картины заболевания, йнтиген In situ взаимодействует с макрофагами,лимфоцитами и запускает ряд реакций,направленных на уничтояение и элиминации чуаеродного антигена,наруаавщего икаунный гомеостаз.Одной из вазнейяих оставлявших цитотоксического и злиаинационного процесса при этом звляптся реакции,опосредованные эозннофилами,которые обладапт бо-пее моцныы цитотоксическии потенциалои в сравнении с другими клетками крови,что объясняет первостепенное значение зозинофилов в ан-гипаразитарных реакциях и их повреідапцуз роль при аллергии :Н.Д.Беклемиаев, 1986; Х.В.Кит, 1988; Hardlau е.а..1987).
Зирокое внедрение в практику современных методов дифференциального центрифугирования з непрерывных градиентах плотности поз-50ЛЯ8Т в настояцее время проводить не только сепарация отдельных іиний клеток периферической крови на основе их различий по удель-юыу весу, но и выявить плоткостнуп неоднородность клеток з преде-іах одной линии. Популяционный анализ полиаорфноадерннх лейкоцитоз із основе разделения з градиентах плотности оказался плодотворним три изучении патогенеза воспалительных и аллергических зайолева-шй, при которых виявленії существеннее изменения з распределении
- 4 -нейтрофилов на разных градиентах плотности (Mlyagava,199i; Harvat е.а., 1982). при пшерзозинофильных состояниях, при которых установлено появление зозинофилов легкой плотности, в норме не встречавшихся у человека в периферической крови (Kloprogge е.а., 1989; Hardlau е.а., 1987).Сделано предположение,что легкоплотные эозине Филы, которые отличаются от нормоплотных своим более низким удель ним весом могут быть недостаточно зрелыми клетками, активно мигри рующими в кровоток при гиперэозинофилии. Имеется альтернативное предположение,что легкоплотные эозинофилы являются вполне зрелыми клетками, опустошенными в результате предшествующей дегрануляции зозинофилов при их вовлечении в патологический процесс (Kroeeel е.а., 1994; Fukuda е.а., 1989). Б свете этих данных, изучение раз личных по плотности популяций зозинофилов, их фенотипических и Функциональных характеристик представляется целесообразным не только при гиперэозинофилии, но и при глистных инвазиях и аллергн ческих состояниях, не сопровождающихся резким возмущением 303ИН0-филопоэза и выходом этих клеток в циркуляцию, когда число зозинофилов периферической крови, а, следовательно, темп миграции этих клеток в кровоток и кинетика зозинофилов практически не отличавтс или мало отличаются от нормы.
Вопрос о популяционном составе зозинофилов при патологиях, н сопровождающихся значительным увеличением этих клеток в циркуляции, при которых трудно получить популяции клеток в достаточных количествах, остается мало исследованным. Одним из направлений в анализе популяционного разнообразия зозинофилов в этих условиях может быть определение их фенотипических особенностей на основе экспрессии клетками различных мембранных рецепторов, которых на зозинофилах описано около 30. В наиих исследованиях в качестве та кого рецептора избран рецептор к эритроцитам барана, который виро ко представлен на популяциях разных клеток крови: лимфоцитах, нейтрофилах и, как было показано в настоящем исследовании, на не-
- 5 -орых популяциях зозинофндов. Лаяния рецептор во многой является логом CD2, который, как предполагавт. воспринимает наряду с ре-торами CD28, CD66 и другими, не столько специфические стимулы 3), сколько фоновые воздействия, возникающие при межклеточных тактах и отравает способность клеток, экспрессируацих рецепто-к клеточно-клеточным адгезивным взаимодействиям (Nishikaua ., І992; Pluaas е.а.. 1991; Hartnell е.а., 1990; firangette ., 1989). Анализ спонтанного и индуцированного фармакологи-кими и биологическими стимулами Е-РОК-образования также был ользован нами для изучения фенотипической и функциональной не-ородности эозинофилов в норме и патологии.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ: анализ количества и свойств популяций эозннофи- ; , полученных на основе градиентного центрифугирования вместе с гими лейкоцитами, в норме, при обострении атопического дериа-з и.при хроническом описторхозе.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ: 1. Оценка популяций эозинофилов и других {оцитов. полученных на непрерывных градиентах плотности фикол-зерографина у больных атопическим дерматитом, хроническим лорхозоы в отсутствии выраженной эозинофилии, а такає у здоро-лиц.
-
Оценка количества ДНК в обцих популяциях лейкоцитов, полных при градиентном центрифугировании, в расчете на одну ку.
-
Тестирование ответа эозинофилов различных градиентных поший на фармакологические и биологические стимули в реакции ткообразования с эритроцитами барана.
-
Установление обцих и специфических особенностей популяци-го распределения эозинофилов у больных атопическим дерматн-
хроническим описторхозом и здоровых лиц. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Установлено, что зозинофилы. подобно другим ям клеток крови, являются неоднородными н состоят из популзций,
- б -
отличавшихся дрдг от друга по своей плотности, другий фенотипич кны и функциональный свойствам. Новыми является данные, что в уі ловиях норны наиболее функционально активной является популяция зозинсфилов нормальной плотности (1.120 г/нд), содержав^ клеткі способные к спонтанному Е-РОК-образованив и выраженноиу ответу і понижаючеє и повывавчее воздействие фармакологических и биологических стимулов.
Впервые показано, что при атопическок дерматите и, осооенш хронической описторхозе, при которых число эозинофилов в циркулі ции,соответственно,было несколько увеличенный и нормальным,проис ходит нарастание популяционной гетерогенности эозинофилов за счі клеток с малой плотностью. Впервые показано, что при хроническое описторхозе при отсутствии выраженного возмужания эозинофилопоэг что отражает нормальный уровень эозинофилов в кровотоке, появляется самая легкая по плотности популяции (1.082 г/мл), которая ь обнаруживалась у здоровых и у больных атопическим дерматитом, со держачая больсое число спонтанно образующих Е-РОК и минимальное число эозинофилов, способных к индуцированной экспрессии мембран них рецепторов, что может подтверждать существующее предположени о происхождении части легкоплотных эозинофилов из дегранулировав энх десенситизированных клеток,участвувчих в развитии хроническо процесса, либо об особом дефекте зозинофилопоэза в этих условиях
ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы состоит в обосновании попула-ционних различий в градиентной распределении эозинофилов в норне к особенно в патологии, характеризующихся превалированием нормоп лотннх зспшофилов и нарастанием в патологии гетерогенности за счет достоверного увеличения доли легкоплотных клеток.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы заключается в обосновании попу ляцконных изменений эозинофилов при хрокическои описторхозе. при кх нормальной количественном содержании в периферической крови, отличавшейся от уровне здоровых лиц, что, с одной сторони, монет
- ? -
свидетельствовать об участии аозкнофнлов легкой плотности в патогенезе развития данного заболевания, а, с дрдгой, иояет быть диагностический ааркерои латентно текдцего хронического опнсторхоза, который в насих исследованиях всегда обнаруанвался случайно с по-иоцьи копрологических методов.
Практический интерес представляет обнаруяениа высокой проли-феративной активности лейкоцитов,выделенных на различных градиентах плотности,при хронической описторхозе в отсуствие ЭОЗИНОфНЛИИ.
ВНЕДРЕНИЕ. Методы исследования внедрены в практику ГКБ Н 6 г.Екатеринбурга, иимунологического отдела ЦНИЛ Нральского ыеди-цинского института.