Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные представления о хирургическом лечении тазового пролапса . 12
1.1. Патоморфологические аспекты дисфункции тазового дна. 12
1.2. Современное представление о методах хирургическом лечении тазового пролапса 17
1.3. Применение современных биотехнологий в хирургическом лечении пролапса тазовых органов. 22
Глава 2. Материалы и методы. 30
2.1. Общая характеристика экспериментального материала 30
2.1. Хирургические имплантаты как каркасы для тканеинженерных конструкций фасции 34
2.1.1. Характеристики бионедеградируемых имплантатов, используемых при хирургических вмешательствах в гинекологии. 35
2.1.2. Характеристики композитных имплантатов, используемых при хирургических вмешательствах в гинекологии 38
2.1.3. Характеристики биодеградируемых имплантатов, используемых при хирургических вмешательствах в гинекологии. 40
2.2. Способ экспериментального моделирования восстановления фасциального дефекта у крыс. 41
2.3. Технология получения культур мезенхимальных стромальных клеток костного мозга (МСК КМ) и дермальных фибробластов (ДФ) 55
2.3.1. Получение и культивирование мезенхимальных стромальных клеток костного мозга (МСК КМ) 55
2.3.2. Получение и культивирование дермальных фибробластов (ДФ) 57
2.4. Технологические этапы создания тканеинженерных конструкций фасции 60
2.4.1. Подготовка хирургических имплантатов для заселения культурами клеток 60
2.4.2. Подготовка клеточного компонента ТИК 60
2.4.3. Иммобилизация культур клеток на подготовленном материале имплантата 60
2.4.4. Динамическая оценка пролиферации клеток в составе ТИК 61
2.4.5. Оценка жизнеспособности клеток в составе ТИК 61
2.5. Методы исследования полученных тканеинженерных конструкций 61
2.5.1. Морфологический метод исследования 61
2.5.2. Микроскопический метод исследования (световая и конфокальная микроскопия) 62
2.6. Иммуногистохимический метод исследования материалов, полученных in vivo . 63
Глава 3. Результаты исследования 67
3.1. Характеристика тканеинженерной конструкции 67
3.1.1. Динамика пролиферации клеток in vitro. 69
3.1.2. Оценка жизнеспособности клеток в тканеинженерной конструкции фасции 76
3.2. Динамическое сравнение тканевых реакций на имплантаты и ТИК на их основе 78
3.3. Иммуногистоимическое исследование имплантированных тканеинженерных конструкций 3.3.1. Оценка пролиферации 96
3.3.2. Оценка апоптотических процессов 100
3.3.3. Оценка васкуляризации ткани 104
3.3.4 Оценка тканевой реакции 104
3.3.5. Оценка тканевой реакции 107
3.4. Создание тканеинженерной конструкции с применением аутологичного клеточного компонента человека на бионедеградируемых матрицах . 108
Глава 4. Обсуждение 112
Практические рекомендации 118
Выводы 117
Список сокращений и условных обозначений 119
Список литературы 121
- Современное представление о методах хирургическом лечении тазового пролапса
- Иммуногистохимический метод исследования материалов, полученных in vivo
- Динамическое сравнение тканевых реакций на имплантаты и ТИК на их основе
- Создание тканеинженерной конструкции с применением аутологичного клеточного компонента человека на бионедеградируемых матрицах
Современное представление о методах хирургическом лечении тазового пролапса
Использование синтетических материалов началось в 1950-х гг. в общей хирургии, они применялись в основном в пластике послеоперационных грыж. В нашей стране первыми применили капроновую сетку при хирургическом лечении выпадений матки Д. П. Чухриенко (1960), Е. И. Захаров и Л. С. Ковтун (1961) [112, 92]. В настоящее время с развитием научно-технического прогресса удалось синтезировать новые синтетические материалы, используемые в операциях для лечения пролапса.
Развитию методик с применением сетчатых протезов, которые могли бы создать надежный каркас для органов малого таза, способствовали низкая эффективность хирургического лечения и высокая частота рецидивов пролапса гениталий. Явление дисплазии соединительной ткани послужило фактором объяснения использования синтетических имплантатов для замещения фасциальных структур тазового дна. Синтетические материалы, которые используются в хирургии, различаются по химическому составу, микроструктуре (моно и полифиламентные) и по размеру пор.
Было проведено множество рандомизированных исследований эффективности и безопасности применения. Одной из первых работ в урологии стала работа Julian, которая была опубликована в «The efficacy of Marlex mesh in the repair of sever, recurrent vaginal prolapsed of the anterior mid vaginal wall» (1996). Julian T.M., рассматривая попытку снижения частоты послеоперационного рецидива пролапса гениталий после проведения передней кольпоррафии, составляющей около 20% - 40%, решил разделить 24 женщин с рецидивом цистоцеле в группу хирургической пластики цистоцеле с использованием сетчатого имплантата, и группу пациенток, которым была выполнена повторная кольпорафия. Через 2 года после хирургического лечения, было проведено повторное исследование с подтверждением частоты рецидива цистоцеле. В результате в первой группе (с использованием синтетического протеза) частота рецидива составила 0% по сравнению с 33% в группе кольпоррафии (P 0.05). А также отмечалась эрозия импланта у 3 (25%) пациенток группы с пластикой синтетического протеза [45].
По данным Luijendijk R., Hop W.(2004г.) применение синтетических протезов позволяет снизить частоту рецидивов с 43% до 24% [59].Об эффективности использования сетчатых протезов в хирургической коррекции тазового пролапса сообщили Canis М., Botchorishvili R., Wattiez A. Etall (2000г), который вместе с коллегами провел лапароскопическую коррекцию выпадения культи влагалища или шейки матки с помощью мерсиленовых протезов. Использовались сетчатые импланты Gynecare GynemeshR PS (Ethicon, INC)[20]. Азиев О.В., Мусткиви Н.А. (2007) в своей работе оценили эффективность лапароскопической сакрокольпопексии в отношении апикального пролапса по данным наблюдений за женщинами, перенесшими оперативное вмешательство спустя 1, 2, 5 и 8 лет. Эффективность операции составила 99%, при этом частота эрозий влагалища не превышала 4,1%[85].
В 2001 году проведены 2 вне зависимости друг от друга рандомизированных исследования двумя группами ученых: 1) Sand P., Koduri S., Lobel R., et al. (2001)[67]; 2)Weber A., Walters M.D., Piedmonte M.R, Ballard L.A. (2001)[76].
В основе исследований лежало сравнение рецидивов пролапсов гениталий после проведения традиционной кольпоррафии и имплантации синтетического протеза (использовались Polyglactin 910, Ethicon, Sommerville, NJ). Оба исследования показали более высокую эффективность применения сетчатого имплантата.
Неудачу в использовании из-за высокой частоты рецидивов потерпела синтетическая петля mesh kit, которая была одобрена ассоциацией урологов и гинекологов в США (Posterior IVS Tunneller, Tyco Healthcare LP, Norwalk, CT). Результаты использования были описаны в работе Farnsworth B.N.«Posterior intravaginals lingplasty (infracoccygealsacropexy) for severe posthysterectomy vaginal vault prolapsed - a preliminary report on efficacy and safety» [29].
Большой интерес у специалистов вызвала статья опубликованная, Carey M., Higgs P., Goh J. (2009) [21]. В рандомизированном клиническом исследовании приняло участие 139 женщин, разделенных на 2 группы. В первую группу вошли 70 женщин, которым была проведена передняя кольпоррафия, а во вторую группу - 69 женщин с пластикой тазового дна, с использованием синтетического полипропиленового сетчатого протеза (Gynemesh PS; Ethicon). Спустя 12 месяцев после операции авторы отметили клиническое излечение у 81% (51 из 63) в группе с использованием сетчатого имплантата Gynemesh и у 65.6% (40/61) в группе после кольпоррафии. Осложнение в виде эрозии слизистой с протрузией протеза составила 5.6% в группе Gynemesh.
Самые крупные отчеты о результатах хирургического лечения выпадения тазовых органов у женщин принадлежит группе Cochrane, которая провела анализ 22 рандомизированных клинических исследований. В мета-анализе приняло участие 2 368 женщин. Были получены следующие результаты. Абдоминальная сакрокольпопексия была ассоциирована с более высокими показателями клинического излечения (ОР=0.23, 95% ДИ = 0.07 - 0.77) и меньшей частотой диспареунии, чем при проведении влагалищной сакрокольпопексии (ОР = 0.39, 95% ДИ = 0.18 - 0.86). Однако, влагалищная сакрокольпопексия требовала меньше операционного времени и меньших затрат, а также отмечалась более ранняя реабилитация пациенток. При проведении пластики цистоцеле традиционными хирургическими методами наблюдалась более высокая частота рецидива цистоцеле по сравнению с группой пациенток, которым при коррекции цистоцеле применялся полигалактиновый синтетический имплантат или свиной дермальный лоскут (ОР= 2.72, 95% ДИ = 1.20 - 6.14). 10 % женщин от общего числа испытуемых отмечала у себя повторное возникновение недержание мочи при напряжении после операции. Авторами было отмечено, что симмулянтное выполнение таких операций, как имплантация свободной влагалищной петли, пликации эндопельвикальной фасции (ОР = 5.5, 95% ДИ = 1.36 - 22.32) или кольпосуспензия Берча при абдоминальной сакрокольпопексии (ОР= 2.13, 95% ДИ = 1.39 - 3.24) позволили снизить частоту возникновения de - novo недержания мочи при напряжении.
Синтетические материалы имеют возможность замещения «поврежденной» тазовой фасции на новую, и являются прочным каркасом для органов малого таза (влагалище, мочевой пузырь, прямая кишка).В исследованиях Радзинского В.Е. вместе с соавторами (2003) показана наибольшая эффективность от проводимых операций TVM (trans-vaginal mesh) с использованием сетчатого имплантата Gynecare GynemeshR Prolife system для реконструкции тазового дна[104]. По данным различных авторов Collinet (2006), Fatton (2007), Hinoul (2008)отмечается высокая эффективность операции Prolift и безопасность метода, основываясь на полученных результатах[23, 30, 38]. В сравнительном исследовании, описанном Valentim-Lourenc A., Henriques A., Ribeirinho А. (2006) отмечено преимущество данной операции перед передней или задней кольпоррафией [74].
Группа исследователей Nordic Transvaginal Mesh Group (Elmer С., Altman D., Engh M.) в 2009 г выполнила когортное исследование, в котором приняло участие 232 пациентки, с выполненной пластикой тазового дна методом передний, задний и тотальный Prolift. у 79% и 82% пациенток, перенесших передний и задний Prolift соответственно, была достигнута полная анатомическая коррекция. В группе операции тотальный Prolift, этот показатель составил 81%, а полная анатомическая коррекция ректоцеле отмечена у 86% пациенток. Интраоперационно хирурги столкнулись в 2 случаях с кровотечениями, превышающими 500 мл, и в 9 случаях (3.4%) с перфорацией мочевого пузыря и прямой кишки. Эрозия сетчатого протеза по результатам данного исследования отмечена у 26 пациенток, что составило 11% от всех пациенток [28].
В отечественной хирургии за последние годы разработано много комбинированных методик по профилактике опущения и выпадения стенок и купола влагалища с использованием синтетических имплантатов [2, 3, 4, 5, 6, 7, 8]. Проведенные исследования показали высокую эффективность предложенных методик, низкое количество осложнений и рецидивов [9, 10, 11, 12].
Mesh-ассоциированные осложнения обусловлены реакцией организма на внедрение инородного тела, которые выражаются в нарушении заживления послеоперационных ран (протрузия или эрозия имплантата), либо к снижению эластичности тканей за счет формирования рубцовой деформации. Клинические проявления осложнений выражаются в появлении хронических тазовых болей или диспареунии. Таким образом, применение сетчатых имплантатов снижает риск развития рецидива пролапса, но может оказывать негативное влияние на качество жизни в связи с развитием ассоциированных с данным протезом осложнений.
Barski D., Otto Т. (2014) отметили в своем исследовании, что необходимо учитывать факторы риска при развитии эрозии влагалища в месте установки сетчатого протеза такие, как: возраст пациентки старше 55 лет, сахарный диабет в стадии декомпенсации, длительное применение стероидных препаратов и лучевой терапии на область таза в анамнезе. Наличие данных факторов способствует ухудшению заживления послеоперационной раны, а в дальнейшем возможно инфицирование [16].
Иммуногистохимический метод исследования материалов, полученных in vivo
Иммуногистохимическое исследование проводилось стрептавидин биотиновым методом (George L. Kumar, Lars Rudbeck, 2011) [89]. Цель окрашивания состоит в выявлении какого-либо антигена на срезе ткани при помощи специфически связывающихся с ним меченых антител [113], в результате чего на исследуемом срезе происходит связывание в единое целое антигена и антитела. В настоящее время фиксация конечного продукта реакции производится при помощи ферментной метки (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза), которая конъюгируется с молекулой антитела. Добавление хромогена осуществляется с целью выявления активности фермента в субстрате, в результате реакции фермент-субстрат образует цветной нерастворимый осадок, который выпадет в местах локализации антигена. Чаще всего антигеном является белковая молекула, к которой подбираются специфические антитела. В настоящей работе были использованы коммерческие моноклональные антитела фирм DAKO, Abcam, Bechman (Таблица 2): к CD 31 и CD 51/61- мембранным белкам (маркерам эндотелия); к Col3A1 - гену, кодирующему аминокислотную цепь протеида альфа-1 и белковой основы соединительной тканей – коллагена; к каспазам (Caspase 3 и Caspase 9) – белкам протеолитической системы, являющихся центральным звеном в механизме апоптоза (Caspase 9 – одна из каспаз обратимого апоптоза, необходимая для узнавания и передачи сигнала клеточной гибели; Caspase 3 – вовлекается в процесс необратимого расщепления структурных компонентов жизнеобеспечения клетки, участвует в регуляции межгенных взаимодействий, восстановлении ДНК и ядерной мембраны) [114]; к Bcl 2 – антиапоптотическому маркеру (Всl 2 – один из основных регуляторов апоптоза, может останавливать апоптоз, опосредуемый белком р53 или иными механизмами; Bcl 2 белок, локализован в митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме и перинуклеарной мембране. Он подавляет естественно происходящую клеточную гибель предположительно путем регуляции транспорта кальция в клетке).
Полуколичественная шкала, использованная для оценки результатов иммуногистохимических исследований, представлена в таблице 3.
Депарафинирование срезов и тепловое демаскирование антигенов проводилось при помощи автоматической системы иммунного окрашивания Bench Mark (Ventana, США).
Динамическое сравнение тканевых реакций на имплантаты и ТИК на их основе
На двух этапах исследования сравнивалась тканевая реакция, возникающая на контрольные имплантируемые хирургические сетки из полипропилена и опытные тканеинженерные конструкции из различных материалов в условиях in vivo (конструкции устанавливались в подапоневротическое пространство на передней брюшной стенке и в пространство под собственной фасцией трапециевидной мышцы в межлопаточной области).
Методика первого этапа исследования: полипропиленовые сетки размером 10х10 мм имплантировали под кожу крысам справа и слева от средней линии на животе под апоневроз. Первая группа – контроль (нативная сетка), вторая группа – опыт – (сетка с аутологичными МСК КМ). Через 2 и 4,5 месяца образец вырезался, парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивались гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван - Гизону, изучались в микроскопе Olympus BX51, фотографировались с помощью видеокамеры фирмы Спецтехника (Москва) и программы Launch CAM VIEW.
Первый контрольный срок - 2 месяца после имплантации.
В контрольном препарате визуализируется полипропиленовая сетка, нити которой окружены со всех сторон зрелой соединительной тканью. Сами нити выпали при резке препарата, оставив лишь округлую или овальную полость взамен. Зрелая соединительная ткань с обеих сторон сетки состоит из коллагеновых волокон, окрашивающихся по Ван - Гизону фуксинофильно, и фибробластов (рисунок 53). Каждая из нитей сетки окружена собственной тонкой капсулой, причём на границе этой капсулы и нити видны скопления макрофагов и гигантских многоядерных клеток инородных тел (рисунок 54). В соединительную ткань, окружающую сетку, включены отдельные мышечные волокна, что свидетельствует о распространении фиброза на близлежащие мышцы. Следует отметить, что воспалительная инфильтрация соединительной ткани на этот срок минимальна. Только в отдельных участках отмечается небольшие инфильтраты, состоящие из лимфоцитов, макрофагов и единичных плазматических клеток (рисунок 55)
Так же как и в контроле, в области имплантации полимерной сетки, покрытой мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга крысы, образуется соединительная ткань, в которую вмурованы нити этой сетки (рисунок 56). Между соединительной тканью и отдельными нитями сетки кроме макрофагов и лимфоцитов видны нейтрофильные лейкоциты, местами многочисленные (рисунок 57). В соединительной ткани, окружающей сетку, воспалительная инфильтрация выражена также сильнее, чем в контроле. Среди воспалительного инфильтрата увеличивается содержание макрофагов и плазматических клеток с примесью нейтрофилов, что свидетельствует о более активной воспалительной реакции на сетку с мезенхимальными стромальными клетками костного мозга (рисунок 58). Окраска по Ван-Гизону свидетельствует о том, что соединительная ткань вокруг сетки менее зрелая: плотность фуксинофильных коллагеновых волокон там меньше, чем в контроле (рисунок 59).
В контрольных образцах, как и в сроке 2 месяца, полипропиленовая сетка замурована в соединительной ткани. Однако значительным отличием является резко выраженная воспалительная инфильтрация этой ткани (рисунок 60). Инфильтрат состоит в основном из макрофагов, в меньшей степени лимфоцитов и плазматических клеток с примесью нейтрофилов. Сосуды в этой соединительной ткани резко расширены и полнокровны. Ткань очень рыхлая, отёчная, коллагеновые волокна либо пикринофильны, либо фуксинофильны по Ван-Гизону, но сильно разрыхлены. Количество макрофагов и гигантских клеток вокруг полипропиленовой сетки приблизительно такое же, как и через 2 месяца после операции. Отмечается также крупные участки кровоизлияния в соединительную ткань. По-видимому, в этом случае имелось экструзия сетки и возможно инфицирование раны. В других образцах того же срока: соединительная ткань, окружающая сетку, становится более тонкой, чем через 2 месяца после операции. При этом она достаточно рыхлая, полнокровная, отёчная и диффузно инфильтрирована макрофагами и лимфоцитами с примесью немногочисленных нейтрофилов (рисунок 61). Видны скопления сидерофагов и диапедезные кровоизлияния.
При сравнении опытной сетки с контрольной сеткой через 4.5 месяца после имплантации можно отметить следующие моменты: соединительная ткань вокруг сетки уплотнена вокруг нитей и рыхлая в отдалении от них (рисунки 62, 63). Воспалительная инфильтрация относительно слабая, она выражается в очаговой лимфомакрофагальной инфильтрации с небольшой примесью плазматических клеток и нейтрофилов
Гистологическое изучение имплантированной в подапоневротическое пространство крысам полипропиленовой сетки с культивированными на ней мезенхимальными стволовыми клетками (опытная сетка) и с отсутствием клеток (контроль) позволяет прийти к следующим выводам.
1) В контроле через 2 месяца после имплантации сетки у животного с отсутствующими хирургическими осложнениями вокруг сетки имелась новообразованная зрелая (фиброзная) ткань, прорастающая поры сетки. Воспалительная инфильтрация в этом случае была минимальной. У 2-х животных произошла экструзия сетки через эпидермис в области оперативного вмешательства и расхождение краев хирургической раны. В этом случае соединительная ткань вокруг сетки отличалась наличием отечности и выраженной воспалительной инфильтрацией, что может быть связано с инфицированием при хирургическом осложнении.
2) В опыте через 2 месяца после имплантации, соединительная ткань вокруг сетки имела меньшую степень зрелости по сравнению с контролем, при этом несколько сильнее был выражен отек ткани и лимфо-макрофагальная инфильтрация.
3) Через 4,5 месяца в контрольной группе результаты различались в зависимости от хирургических осложнений. При наличии экструзии сетки и расхождения швов имелась не только лимфо-макрофагальная, но и нейтрофильная инфильтрация соединительной ткани, что было связано с инфицированием. В трёх случаях в этой группе инфицирование отсутствовало, и воспалительная инфильтрация образующейся соединительной ткани была минимальной. Однако, соединительная ткань отличалась большей выраженностью отёка и меньшей зрелостью по сравнению с аналогичной группой через 2 месяца. 4) Через тот же срок в опытной группе воспалительные изменения были только в том случае, если происходила экструзия сетки и расхождение швов (одно животное). В остальных случаях, где хирургических осложнений не было, соединительная ткань вокруг сетки отличалась зрелостью и минимальной воспалительной реакцией (в отличии от контрольной сетки у того же животного).
Методика второго этапа исследования заключалась в получение тканеинженерных конструкций размером 10х10 мм на основе бионедеградируемых (полипропиленовая хирургическая сетка и титановая сетка), композиционной хирургической сетке (Пролен + Викрил) и биодеградируемых (викриловая сетка и биологический имплантат, состоящий из свиного дермального коллагена) матриксах с нанесением на них аутологичного клеточного компонента - дермальных фибробластов крысы. Имплантация полученных ТИК производилась в подапоневротическое пространство в межлопаточной области у лабораторных животных. Через 7, 14, 21 сутки образцы вырезались, парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивались гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван - Гизону, изучались в микроскопе Olympus BX51, фотографировались с помощью видеокамеры фирмы Спецтехника (Москва) и программы Launch CAM VIEW.
Рассмотрим тканевую реакцию, полученную на ТИК с полипропиленовой сеткой на 7, 14 и 21 сутки в условиях in vivo:
На 7 сутки происходило формирование соединительнотканного каркаса вокруг материала, при этом волокна и формирующиеся фибробласты располагались хаотично. Часть коллагеновых волокон, прилежащих к материалу, была резко истончена и разрыхлена, что указывало на их частичный лизис сохранением фуксинофилии. Отмечались воспалительные изменения: нейтрофильная, лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация. Фибробласты имели веретеновидную или звездчатую форму, фибрин отсутствовал, сосуды были полнокровными (рисунок 64).
Создание тканеинженерной конструкции с применением аутологичного клеточного компонента человека на бионедеградируемых матрицах
Подводя итоги двух этапов исследования, можно констатировать, что использование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга и дермальных фибробластов равнозначно. Но для клинической практики забор клеточной культуры дермальных фибробластов менее травматичен, сопровождается меньшим количеством осложнений и целесообразнее с экономической точки зрения. Это обосновывает использование в качестве клеточного компонента дермальных фибробластов кожи человека. Матриксами для создания ТИК были выбраны полипропиленовая и проленовая сетки. Основная задача третьего этапа – создание прототипа ТИК с аутологичным клеточным компонентом человека в условиях in vitro для дальнейшего использования клинических условиях.
На последнем этапе исследования клеточную культуру (дермальные фибробласты) выделяли из образца кожи размером 2х3х1 мм. Забор производился у исследователя в условиях процедурного кабинета. Для исключения возможных воспалительных и инфекционных заболеваний заранее подопытный проходил клинико-лабораторную диагностику.
Полученные тканевые образцы помещали в транспортную среду с 3-х кратным добавлением антибиотиков (3% раствор пенициллина/стрептомицина, Invitrogen). В лаборатории производилась тщательная промывка в изотоническом забуференным фосфатом растворе (PBS). Далее ферментативная диссоциация полученных после характеризации человеческих дермальных фибробластов проводилась в течение 1 часа при температуре 370С при помощи добавления коллагеназы II типа (Gibco) до конечной концентрации 0,075%. Затем равным объемом питательной среды DMEM/F12 (Gibco), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS, HyClone) с добавлением 1% раствора пенициллина/стрептомицина (Invitrogen) инактивировали коллагеназу. После центрифугирования суспензию, находящейся в 15 мл культуральной среды, культивировали на культуральный флакон (25см2, Corning). Полученную первичную клеточную культуру инкубировали в атмосфере, содержащей 5% СО2 с повышенной влажностью при температуре 370 С. Замена питательной среды производилась каждые 48 часов. Пассаж клеток производили с добавлением 0,25% раствора трипсина/EDTA (Gibco) (рисунок 83).
На данном этапе оценивалась динамика покрытия полипропиленовых хирургических сеток дермальными фибробластами человека в условиях in vitro Оценка производилась при помощи светового микроскопа. Через сутки фиксировали начало адгезии клеток с волокнами проленовой сетки (рисунок 84). К 12 суток происходило полное покрытие нитей имплантата клетками и начало заполнения мелких ячеек в углах пересечения волокон (рисунок 85).
К 30 суткам культивирования дермальных фибробластов на хирургические матрицы отмечали постепенный рост колоний клеток, частично полное закрытие пространств между волокнами в обеих сетках (рисунок 86).
К 60 суткам наблюдения на полипропиленовой сетке ДФ располагались в несколько слоев, нити матрикса были полностью покрыты клетками, а промежутки между нитями – не возможно было дифференцировать за счет клеточного роста (рисунок 87).