Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Эндометрий нормального менструального цикла и окно имплантации 11
1.2. Эндометрий при бесплодии и вспомогательныерепродуктивные технологии 17
1.3. Допплерометрические показатели кровотока в сосудах матки в оценке рецептивности эндометрия 25
1.4. Иммунологические маркеры рецептивности эндометрия 32
Глава 2. Материалы и методы исследования 48
2.1. Материалы исследования 48
2.2. Методы исследования
2.2.1. Общеклинические, гормональные и инструментальные методы обследования женщин перед проведением процедуры ЭКО 49
2.2.2. Ультразвуковое исследование органов малого таза и допплерометрическая оценка кровотока в сосудах матки в цикле ЭКО 50
2.2.3. Гистологическое и иммуногистохимическое исследование эндометрия 56
2.2.4. Исследование факторов роста в цервикальной слизи методом мультиплексного анализа 58
2.2.5.Морфологическая оценка качества перенесенных в полость матки эмбрионов 62
2.3. Статистический анализ результатов исследования 61
Глава 3. Результаты собственных исследований 63
3.1. Клинико-анамнестическая характеристика обследованных женщин 63
3.2. Результаты клинико-лабораторного обследования женщини проведенного протокола ЭКО з
3.3. Результаты ультразвукового исследования органов малого таза и допплерометрической оценки кровотока в сосудах матки в цикле ЭКО 71
3.4. Результаты гистологического и иммуногистохимического исследование эндометрия 78
3.5. Результаты исследования факторов роста в цервикальной слизи методом мультиплексного анализа 83
3.6. Разработка математической модели оценки рецептивности эндометрия 88
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 92
Выводы 103
Практические рекомендации 105
Список сокращений 107
Список литературы
- Допплерометрические показатели кровотока в сосудах матки в оценке рецептивности эндометрия
- Общеклинические, гормональные и инструментальные методы обследования женщин перед проведением процедуры ЭКО
- Результаты клинико-лабораторного обследования женщини проведенного протокола ЭКО
- Результаты исследования факторов роста в цервикальной слизи методом мультиплексного анализа
Допплерометрические показатели кровотока в сосудах матки в оценке рецептивности эндометрия
Объективная оценка состояния эндометрия - один из решающих факторов, обеспечивающих успешное проведение процедуры ЭКО. Важной проблемой в лечении бесплодия и развитии ВРТ является идентификация периода максимального соответствия развития эмбриона и рецептивности эндометрия.
Имплантация эмбриона - сложный процесс взаимодействия между трофобластом и эндометрием, в который вовлечены многочисленные про- и противовоспалительные цитокины, специфические молекулы клеточной адгезии, эндокринные, паракринные и аутокринные факторы.
В секреторной фазе цикла имплантации предшествуют определенные процессы, происходящие в эндометрии. В соответствии с этим представлением, реакция эндометрия в ходе имплантации делится на три взаимосвязанных и условно выделяемых фазы, в результате которых происходит слияние двух разных по происхождению эпителиев (трофобластический и эпителий эндометрия).
Процесс имплантации начинается после попадания эмбриона в полость матки на 5-6 сутки (110-120 часов после овуляции) или после переноса эмбрионов в циклах ЭКО [54]. «Вылупление» бластоцисты из блестящей оболочки (хэтчинг), способствует вовлечению в процесс имплантации многих рецепторов, цитокинов, факторов роста, молекул клеточной адгезии (интегрины, селектины, кадгерины и муцины), матриксных металлопротеиназ и компонентов внеклеточного матрикса, которые в дальнейшем будут участвовать в различных этапах процесса имплантации [248]. Над поверхностным эпителием эндометрия появляются микро-выступы, получившие называние «незрелые пиноподии», которые в дальнейшем созревают («зрелые пиноподии») или регрессируют в случае отсутствия имплантации («регрессивные пиноподии») [163]. Также, под действием прогестерона и хорионического гонадотропина человека стромальные клетки эндометрия начинают постепенно превращаться в децидуальноподобные клетки и, в случае имплантации, в децидуальные с трансформацией функционального слоя в децидуальный.
1-я фаза - аппозиция или фаза нестабильной адгезии. Эта фаза находится под контролем эстрогенов и прогестерона и характеризуется изменениями в покровных и железистых эпителиальных клетках эндометрия, в результате чего происходитего подготовка к адгезии бластоцисты. Аппозиция определяется как неустойчивая адгезия бластоцисты к поверхности эндометрия и проявляется началом «диалога» между бластоцистой и рецептивным эндометрием, посредством локального действия гормонов, паракринных регуляторов: ряда цитокинов (LIF, IL-1, IL-6), факторов роста (GM-CSF, VEGF, TGF, HB-EGF, IGF), простагландинами [41, 56, 156].
2-я фаза - адгезия или фаза стабильной адгезии. Эта фаза проявляется усилением функциональных взаимодействий между бластоцистой и поверхностным эпителием. Контакт осуществляется между трофобластом и поверхностным эпителием эндометрия в месте образования к этому времени «зрелых пиноподий» и опосредуется множественными молекулами адгезии: интегринами, селектинами, кадгеринами и муцинами [94, 10, 126]. Однако на этом этапе имплантации не происходит слияния бластоцитсы с клетками эндометрия и стромальным компонентом. Первые признаки адгезии эмбриона появляются на 20-21 день 28 дневного менструального цикла и они совпадают с локальным повышением проницаемости сосудов стромы в месте прикрепления бластоцисты [240].
3-я фаза - инвазия трофобласта в слизистую оболочку матки. В течение этой фазы происходит проникновение трофобласта между эпителиальными клетками в строму. В процессе инвазии участвует множество протеолитических ферментов (протеазы, катепсины, металлопротеиназы (ММР)), синтезируемых клетками эндометрия. Эти ферменты, среди которых наиболее значимыми являются металлопротеиназы,инициируют разрушение внеклеточного матрикса (в том числе базальной мембраны децидуального слоя), облегчая, таким образом, процесс инвазии эмбриона. Параллельно в ответ на инвазию бластоцисти усиливается превращение фибробластоподобных стромальных клеток эндометрия в более крупные, округлые децидуальные клетки [135], происходит децидуализация эндометрия, напоминающая воспалительную реакцию [86]. Одновременно усиливается секреторная трансформация маточных желез, идет перестройка гладкомышечных клеток и эндотелия кровеносных сосудов, тем самым создается первая сосудистая связь между эмбрионом и материнским организмом [8 5, 156].
Синхронизация процессов децидуализации и инвазии необходима для совершения успешной имплантации и дальнейшего развития беременности. Имплантацияопосредуется множественными иммунологическими молекулами, основные из известных на сегодняшний день можно представить полокализацииследующим образом (рис.1).
Общеклинические, гормональные и инструментальные методы обследования женщин перед проведением процедуры ЭКО
При исследовании аркуатных, радиальных и базальных артерий, миометрий условно делили на 3 зоны соответствующие расположению исследуемых сосудов.
Исследование аркуатных артерий проводилось на уровне первой зоны исследования, расположенной по всему периметру продольного сечения тела матки на небольшом расстоянии от его наружного контура и представляющей примерно 1:5 часть толщины миометрия (рисунок 4).
Исследование радиальных артерий проводилось во второй зоне, которая представляет среднюю, наибольшую часть миометрия и составляет примерно 3:5 части его толщины (рисунок 5).
Проведено 111 пайпель-биопсий эндометрия у обследованных женщинв период предполагаемого «окна имплантации» на 20-23 д.м.ц. с помощью аспирационной кюретки PipelledeCornier («JiangsuCo., Ltd.», КНР) в цикле, предшествующем проведению ЭКО. Гистологическое и иммуногистохимическое исследование проводилось в отделе патоморфологии ФГБУ «НИИАГ им. Д.О. Отто» СЗО РАМН (руководитель отделаз.д.н. РФ, д.м.н., профессор И.М. Кветной).Полученные биоптаты эндометрия были окрашены гематоксилин-эозином и разделены гистологическив соответствии со стандартными критериями Noyes [267] на 4 группы в зависимости от стадии развития эндометрия: пролиферативная (п=3), ранняя секреторная (п=33), средне-секреторная (п=64) и поздне-секреторная стадия (п=11).Для иммуногистохимического исследования были отобраныбиопсии ранней и средне-секреторной фазы (п=97). В течение 24 часов материалы биоптатов эндометрия фиксировали в 10% растворе формалина, после чегоихстандартнообрабатывалии заключали в парафин. Для иммуногистохимического окрашиваниясерийные парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм. помещали на предметные стекла, покрытые поли-Ь-лизином (Sigma). Исследования проводились на депарафинизированных и дегидротированных срезах с использованием авидин-биотинового иммунопероксидазного метода. Температурная демаскировка антигенов проводилась с использованием 0,01М цитратного буфера рН6,0 под давлением. Для инактивации эндогенной пероксидазы стекла помещали в 3% раствор перекиси водорода на 10 минут. Для промывки использовался TpHC-NaCl-буфер рН 7,6. Уровень экспрессии LIF в эндометрии определяли с использованием поликлональные антитела Anti-LIF (Rabbit polyclonal Anti-LIF antibody,abl35629,"Abcam" Великобритания) разведение 1:100, для выявления VEGF использовали моноклональные антитела Anti-VTGF(Monoclonal Mouse Anti-VTGF antibody,ab28775, "Abeam" Великобритания) разведение 1:50, а для TGF-Pi- моноклональные антитела AntiGF-РІ (MonoclonalMouseAntiransformingGrowthFactorBeta, "Novocastra" Великобритания) разведение 1:40. В качестве вторичных антител использовали антитела,конъюгированные с полимером, маркированным пероксидазой (универсальный набор DAKOEnvision+ System). Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса DAB+и субстратного буфера.
Изучение препаратов проводилось на исследовательском микроскопе NikonE400c использованием камеры NikonDXM 1200. Для оценки результатов иммуногистохимического окрашивания проводили морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений Морфология 5.2. В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении 400+.
Относительную площадь экспрессии рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Оптическую плотность экспрессии выявленного продуктаизмеряли в условных единицах (у.е.). Оптическая плотность отражает интенсивность синтеза илинакопления исследуемых молекул.
Забор цервикальной слизи (ЦС) с использованием флоковых тампонов фирмы «Сорап» (Италия) производили дважды: в день ТВП фолликулов и в день переноса эмбрионов. Терминальную часть флоковых тампонов с полученным материалом помещали в одноразовые 1,5мл. стерильные пробирки (ЕррепсІогі),содержащие 1 мл теплого физиологического раствора (38-40). Образцы с примесью крови (п=8) были исключены из исследования. Далее проводили заморозку образцов при температуре -20 градусов.При накоплении достаточного для проведения исследования количества образцов их одновременно размораживали при комнатной температуре. Далее образцы центрифугировали при 200g в течение 10 мин. Для определения содержания GM-CSF, VEGF и TGF-pi использовали мультиплексный анализ. Определение содержания факторов роста в цервикальной слизи проводили в лаборатории клинической иммунологииФГБУ «FfflMAT им. Д.О. Отто» СЗО РАМН, (руководитель д.м.н., профессор С.А. Сельков). Для стандартизации содержания исследуемых факторов в полученном материале в каждом образце определяли общее количествобелка. Определение микропротеинов осуществлялось в лаборатории биохимии ФГБУ «ФМИЦ им. В.А. Алмазова», (руководитель лаборатории, д.м.н. СВ. Анисимов). Метод определения общего содержания белка в образцах
Оценка общего количества белка в полученных образцах проводилась с помощью спектрофотометрического методас использованием аппарата «NanoDrop 1000 Spectrophotometer», способного определять микроконцентрации протеинов. В качестве контроля служила нулевая концентрация белка, определяемая аппаратом в физиологическом растворе. С помощью лабораторной пипетки наносили одну каплю образца на поверхность, предусмотренную для определения белка на аппарате. Результаты рассчитывались в мг/мл с помощью системы компьютерного анализа «Protein А280» для определения микроконцентрации протеинов в образцах. В двух образцах не удалось определить содержания общего белка, необходимого для расчёта содержания определяемых цитокинов в исследуемом материале, в связи с чем они были исключены из анализа.
Метод определения GM-CSF, VEGF и TGF-pi в цервикальной слизи с помощью мультиплексного анализа
Для определения указанных факторов роста в цервикальной слизи использовали соответствующие наборы «Flexset» (BDBioscience). Входящие в их состав микрочастицы с конъюгированными антителами к исследуемым веществам смешивали, исходя из расчета 50 микролитров смеси на один образец и вносили в пробирки, содержащие 50 микролитров анализируемого образца и растворов GM CSF, VEGF и TGF-pi известной концентрации (стандартные растворы), после перемешивания инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение одного часа.Затем в пробирки вносили по 50 микролитровпредварительноперемешаннойсмесиспецифичных к исследуемым аналитам антител, конъюгированных с фикоэритрином, и после встряхивания инкубировали в течение двух часов в темноте при комнатной температуре. После инкубации в пробирки вносили по одномумиллилитру отмывающего буфера, встряхивали и центрифугировали при 200 g в течение пяти минут, надо садочную жидкость удаляли, вносили по 300 микролитров отмывающего буфера, встряхивали и анализировали на проточном цитофлуориметре. Полученные результаты обрабатывали с помощью компьютерной программы "СВААггау" (BDBioscience). Результаты выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Содержание факторов роста в образцах вычислялось с применением следующей формулы:
Результаты клинико-лабораторного обследования женщини проведенного протокола ЭКО
Для оценки рецептивности эндометрия, всего было исследовано 69 переменных, которые вошли в логистический регрессионный анализ: относительная площадь и оптическая плотность экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии эндометрия, и в строме эндометрия; относительная площадь и оптическая плотность экспрессии TGF-pi в поверхностном и железистом эпителии эндометрия ив строме эндометрия; относительная площадь и оптическая плотность экспрессии VEGF-A в строме эндометрия; содержание GM-CSF, VEGF и TGF-pi в цервикальной слизи в день ТВП и в день ПЭ; толщина эндометрия (М-эхо) на 2-3 день менструального цикла, в день введения триггера овуляции и в день ПЭ; S/D,IR и PI правой и левой маточных артерий, аркуатных и радиальных артерий на 2-3 день менструального цикла; S/D,IR и PI правой и левой маточных артерий, аркуатных, радиальных, базальных и спиральных артерийв день введения триггера овуляции и в день ПЭ.
В ходеисследования был проведен анализ сопряженности всех исследуемых параметров с фактом наступления беременности в результате ЭКО. Опираясь на данные корреляционного анализа, было установлено, что наиболее значимыми признаками, связанными с последующим наступлением беременности в цикле ЭКО являются: относительная площадь и оптическая плотность экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии, а также в строме эндометрия,оптическая плотность экспрессии VEGF-A в строме эндометрия, полученного в период предполагаемого «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению ЭКО; систолодиастолическое отношение, индекс резистентности и пульсационный индексбазальных и спиральных артерий в день введения триггера овуляции и в день ПЭ в полость матки; содержание VEGF и GM-CSF в цервикальной слизи в день проведения пункции фолликулов и в день ПЭ в полость матки.
Был проведен многофакторный логистический регрессионный анализ, в список потенциальных предикторов которого вошли все переменные имеющие уровень значимости р 0,05. Была построена математическая модель, определяющая вероятность наступления беременности в результате ЭКО у обследованных женщин, которая включала 4 наиболее значимые переменные (в порядке снижения уровня значимости): оптическая плотность экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии эндометрия, полученного в период предполагаемого«окна имплантации» в цикле перед проведением ЭКО, содержание VEGF в ЦС в день ТВП, S/D и IR спиральных артерий в день введения триггера овуляции. Полученную модель отличал достаточно высокий коэффициент Нейджелкерка, равный 0,74. Оптимальное значение этого коэффициента, применяемого для оценки качества модели, должно находиться в пределах от 0,5 до 0,9.
Таким образом, была получена регрессионная функция, в виде следующего уравнения: Z = (LIFx44,832) + (VEGFxO,006) + (S/D х 40,379) - (IR х 152,351) - 15,799, гдеЬШ - оптическая плотность экспрессии лейкемия ингибирующего фактора в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период предполагаемого «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению ЭКО (у.е.); VEGF - содержание сосудистого эндотелиального фактора роста в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов (пг/мг); S/D - систоло-диастолическое отношение спиральных артерий в день введения триггера овуляции; IR- индекс резистентностиспиральных артерий в день введения триггера овуляции. При Z 0 прогнозируем, что эндометрий рецептивен, а при Z 0 - эндометрий нерецептивен.
Для установленной модели частота истинно-положительного результата (чувствительность) составила 82% (у 41 из 50 женщин беременность наступила после ЭКО, у остальных 9 был получен ложноположительный результат). Таким образом, ложноположительный результат был получен в 18% случаев.Частота истинно-отрицательного результата (специфичность) составила 89,4% (у 42 из 47 женщин беременность не наступила после ЭКО, у остальных 5 был получен ложноотрицательный результат). Следовательно, ложноотрицательный результат был получен в 10,6% случаев. В биомедицинских исследованиях допустимым порогомложноположительных и ложноотрицательных результатов является уровень в 20% [28]. Таким образом, чувствительность прогнозирования беременности с помощью предложенной модели и установленной регрессионной функции составляет 82%. Специфичность - 89,4%. Предсказательная ценность положительного результата-89,1%, предсказательная ценность отрицательного результата - 82,3%, общая точность предсказания - 85,6%.
На основании полученных данных была построена кривая ROC (рисунок 26). При этом AUC (площадь под кривой) составила 0,987, что показывает высокую точность прогнозирование результатов при применении данной модели.
Как известно имплантация является многофакторным процессом и зависит от качества эмбриона и рецептивности эндометрия. Несмотря на большое количество проведенных научных работ, направленных на изучение рецептивности эндометрия, поиск надежных маркеров определяющих рецептивность эндометрия и методов их оценки остается актуальной задачей. На сегодняшний день не выявлен универсальный фактор, определяющий рецептивность эндометрия, но были выделены группы факторов, нарушение экспрессии которых может приводить к снижению частоты имплантации. К данным иммунологическим факторам относят: LIF, VEGF, GM-CSF и TGF-pi. В то же время было доказано, что адекватное кровообращение матки также играет важную роль в обеспечении рецептивности эндометрия. Однако большинство исследований, оценивающих рецептивность эндометрия, были выполнены в естественных циклах и полученные результаты характеризовались противоречивостью. В связи с этим продолжаются поиски оптимальных методов и факторов оценки рецептивности эндометрия, а также оптимального периода для их исследования, что является весьма актуальным при проведении программ ЭКО.
В соответствии с целью исследования и поставленными задачами нами впервые была проведена много факторная оценка рецептивности эндометрия в циклах стимуляции суперовуляции с использованием показателей КСК в сосудах матки, уровня экспрессии цитокинов и факторов роста в цервикальной слизи и тканевых структурах эндометрия на наиболее значимых этапах для протокола ЭКО. Для этого было обследовано 97 бесплодных пар с мужским, трубно-перитонеальным фактором бесплодия и бесплодием, обусловленным наружным генитальным эндометриозом I и II степени распространённости, проходивших лечение бесплодия методом ЭКО или ЭКО/ИКСИ.
Результаты исследования факторов роста в цервикальной слизи методом мультиплексного анализа
Доказано, что выработка многих цитокинов и факторов роста стимулируется стероидными гормонами и, в большей степени,хорионическим гонадотропином [146, 194, 247]. В нашей работе было показано, что содержание в ЦС GM-CSF, VEGF и TGF-pi преобладало в день ТВП над их содержанием в ЦС в день ПЭ (в 1,8 раза, в 1,4 раза и в 1,4 раза, соответственно), что, вероятнее всего, зависит от действия максимальных концентраций гормонов в день ТВП (вследствие проводимой стимуляции суперовуляции и введенного триггера овуляции за 36 часов до ТВП) на клетки эндометрия, которые вырабатывают в этот период максимальное количество факторов роста.
Содержание GM-CSF и VEGF в ЦС, как в день ТВП, так и в день ПЭ у женщин с наступившей беременностью в результате ЭКО было гораздо больше (в 1,6 раз), чем в группе женщин, у которых беременность не наступила. Полученные результаты отражают прогностическую ценность указанных параметров и согласуются с ранее полученными выводами других авторов, которые отметили снижение уровня этих факторов у женщин с привычным невынашиванием [171, 186], идиопатическим бесплодием [186] и неудачными попытками ЭКО [138] в различном биологическом материале (ткань эндометрия, фолликулярная жидкость, венозная кровь). При этом материал был получен не в циклах стимуляции суперовуляции, поскольку подобные работы в циклах ЭКО не проводились [183].
Исходя из результатов проведенного нами исследования можно заключить, что у женщин с наступившей после ЭКО беременностью отмечалась тенденция к повышению экспрессии TGF-pi всеми структурами эндометрия и увеличению его содержания в ЦС, как в день ТВП, так и в день ПЭ, что свидетельствует о благоприятном влиянии TGF-pi на имплантацию эмбриона и наступление беременности. Однако эти различия не были статистически достоверными (р 0,05) и поэтому, на наш взгляд, оценка экспрессии TGF-pi в структурах эндометрия, полученного в период предполагаемого «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению ЭКО, и его содержание в ЦС на ключевых этапах протокола ЭКО не являются прогностическим критериями оценки рецептивности эндометрия.
Известно, что TGF-pi способен усиливать синтез (in vitro) эпителиальными клетками эндометрия различных молекул, участвующих в процессе имплантации, таких как VEGF, LIF , IGFBP-1 [147, 163, 188]. Отмеченные нами положительные корреляционные связи между содержанием в ЦС GM-CSF, VEGF и TGF-pi в день ТВП (1=0,50, р 0,05; г=0,38, р 0,05, соответственно) и в день ПЭ (г=0,47, р 0,05; г=0,36, р 0,05, соответственно) свидетельствуют о способности TGF-pi усиливать синтез VEGF и GM-CSF клетками эндометрия. Более выраженная сопряженность была выявлена в отношении содержания VEGF и GM-CSF в ЦС в день ТВП (г=0,72, р 0,05), что, вероятнее всего, свидетельствует об их контролируемой секреции клетками эндометрия общими факторами или целыми системами регуляции процесса имплантации. Хотя TGF-pi экспрессируется различными структурами ткани эндометрия (поверхностный, железистый эпителии и строма эндометрия), на наш взгляд, он является более универсальным (регуляторным)фактором роста, который способен усиливать синтез клетками эндометрия других молекул, имеющих прямое влияние на успешность процесса имплантации.
В последние годы проводятся попытки использования рекомбинантных форм LIF, VEGF и GM-CSF с целью улучшения качества эмбрионов и имплантационных свойств эндометрия [38, 44, 80, 227], однако на сегодняшний день их клиническое применение в естественных циклах и в циклах ЭКО с целью улучшения рецептивности эндометрия крайне ограничено. Учитывая, что синтез молекул, участвующих в процессе имплантации, находится под действием стероидных гормонов, выработка и соотношение которых, в течение менструального цикла часто бывают нарушены у женщин с бесплодием, на наш взгляд, для максимальной коррекции иммунологических нарушений на локальном уровне (ткань эндометрия) следует в течение 2-3 месяцев провести 2-3 курса гормональной терапии.
В нашем исследовании не было выявлено значимых отличий исследуемых факторов среди групп беременных и небеременных в результате ЭКЮ женщин в зависимости от факторов бесплодия (НГЭ I степени, мужской и трубно-перитонеальный фактор бесплодия). Полученные результаты свидетельствуют о незначительном влиянии факторов бесплодия в исследуемых группах на процесс имплантации и о том, что исследуемые нами молекулы не являются характерными для конкретного фактора бесплодия.
В результате проведенного исследования была построена математическая модель и установлена регрессионная функция, которая позволяет нам прогнозировать наступление беременности в цикле ЭКО с вероятностью 82% или ее отсутствие с вероятностью 89,4%. Данная модель построена на основании оценки широкого спектра признаков (69 признака) рецептивности эндометрия у достаточного количества женщин и отличается высоким коэффициентом Нейджелкерка (равным 0,74), была построена кривая ROC, с AUC (площадь под кривой) 0,987, что показывает высокую точность прогнозирование результатов при применении данной модели. Это дало возможность заключить, что достаточно четырех признаков (относительная плотность экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии эндометрия, полученного в период предполагаемого «окна имплантации» в цикле перед проведением ЭКО, содержание VEGF в ЦС в день ТВП фолликулов, S/D и IR спиральных артерий в день введения триггера овуляции), чтобы уже на этапе трансвагинальной пункции фолликулов провести оценку рецептивности эндометрия в цикле ЭКО и принять решение о переносе эмбрионов в полость матки или его отсрочке с последующим проведением курса подготовительной этиотропной терапии.
В заключении необходимо отметить, что в настоящее время, по-прежнему отсутствует полное понимание координации взаимодействий между разными факторами, участвующими в физиологическом процессе имплантации эмбриона и последующем развитии беременности. Лучшее понимание механизмов, лежащих в основе формирования рецептивности эндометрия и имплантации, позволит оптимизировать подходы к индивидуальной стратегии лечения бесплодия методами ВРТ, что закономерно приведет к повышению их результативности. Существует острая необходимость в дальнейших исследованиях для разработки алгоритма предиктивнои оценки рецептивности эндометрия, определяющей успешность имплантации в циклах ЭКО и возможность коррекции этого процесса на ранних этапах развития эмбриона.