Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Оценка транскрипционного профиля в кумулюсных клетках как метод диагностики качества ооцитов и эмбрионов и прогнозирования результатов программ вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) 13
1.1 Взаимодействие между ооцитом и стромальными клетками в фолликуле 14
1.2 Гены внеклеточного матрикса и их роль в регуляции женской репродуктивной системы
1.2.1 Ген гиалуронан - синтаза 2 (HAS2) 17
1.2.2 Ген версикан (VCAN) 19
1.2.3 Молекула клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM) .21
1.2.4 Инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF1) 22
1.3 Гены, регулирующие передачу внутриклеточной информации, и их роль в регуляции женской репродуктивной системы 25
1.3.1 Ген простагландин-синтаза 2 (PTGS2) 25
1.3.2 Ган гремлин (GREM1) 28
1.3.3 Ген амфирегулин (AREG) 30
1.4 Гены, стабилизирующие мембраны клеток, и их роль в регуляции женской репродуктивной системы 32
1.4.1 Ген инозитол 1,4,5-трифосфат 3-киназа А (ITPKA) 32
1.4.2 Ген кальмодулин (CALM2) .35
1.4.3 Временный рецептор потенциал-зависимых катионных каналов седьмой в подсемействе М (TRPM7) 36
1.5 Ген, регулирующий убиквитинирование – супрессор цитокиновой сигнализации, содержащий SPRY-домен (SPSB2) и ген, регулирующий клеточный цикл – p53 индуцируемый опухолевый белок 3 (TP53I3), и их роль в регуляции женской репродуктивной системы 38
1.6 Ген, регулирующий метаболизм клеток – тромбоцитарная фосфофруктокиназа (PFKP), его роль в регуляции женской репродуктивной системы .41
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 45
2.1. Материал исследования 45
2.2. Дизайн исследования 46
2.3. Методы исследования
2.3.1 Общеклинические методы исследования 51
2.3.2 Гормональное исследование 52
2.3.3 Ультразвуковое исследование органов малого таза 53
2.3.4 Спермиологическое исследование эякулята 54
2.3.5 Специальные методы исследования 55
2.3.6 Протокол стимуляции функции яичников 56
2.3.7 Трансвагинальная пункция яичников 57
2.3.8 Метод оплодотворения и культивирования дробящихся эмбрионов in vitro 58
2.3.9 Предимплантационный генетический скрининг 2.3.10 Перенос эмбрионов в полость матки 60
2.3.11 Поддержка лютеиновой фазы и посттрансферного периода 61
2.3.12 Диагностика наступления беременности 61
2.3.13 Статистический анализ полученных данных 61
ГЛАВА 3. Результаты исследований 63
3.1. Клинико-анамнестическая характеристика включенных в исследование пациенток 63
3.1.1. Возрастная характеристика пациенток 63
3.1.2. Антропометрическая характеристика пациенток .64
3.1.3. Характеристика менструальной функции женщин 66
3.1.4. Репродуктивный анамнез пациенток .68
3.1.5. Характеристика женщин по перенесенным гинекологическим заболеваниям и оперативным вмешательствам 74
3.1.6. Гормональный профиль пациенток, включенных в исследование 80
3.2. Особенности лечения в программе ЭКО у женщин в исследуемых группах .83
3.2.1. Особенности стимуляции суперовуляции, фолликуло- и оогенеза у пациенток в исследуемых группах 83
3.2.2. Характеристика эмбриогенеза у пациенток в исследуемых группах 86
3.2.3. Особенности стимуляции суперовуляции, фолликуло-, оогенеза и эмбриогенеза у пациенток, проходивших программу ЭКО/ИКСИ + ПГС 90
3.3. Анализ уровня экспрессии мРНК генов в кумулюсных клетках включенных в исследование пациенток 92
3.3.1. Ассоциация уровня экспрессии мРНК генов в кумулюсных клетках с вероятностью наступления беременности 92
3.3.2. Ассоциация уровня экспрессии мРНК генов в кумулюсных клетках с вероятностью наличия хромосомных аномалий в эмбрионах 95
3.3.3. Ассоциация уровня экспрессии мРНК генов в кумулюсных клетках с наличием дисморфизмов ооцитов и качеством развивающихся эмбрионов 98
3.4. Клинико-экономический анализ эффективности оценки уровня экспрессии мРНК в кумулюсных клетках для предикции получения эуплоидных эмбрионов удовлетворительного и плохого качества 103
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 107
Заключение 124
Выводы 126
Практические рекомендации
- Молекула клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM)
- Общеклинические методы исследования
- Антропометрическая характеристика пациенток
- Особенности стимуляции суперовуляции, фолликуло-, оогенеза и эмбриогенеза у пациенток, проходивших программу ЭКО/ИКСИ + ПГС
Молекула клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM)
Одним из главных компонентов внеклеточного матрикса является гиалуроновая кислота – линейный полисахарид семейства гликозамингликанов, синтезирущийся широким спектром организмов от бактерий до млекопитающихся. Гиалуроновая кислота состоит из повторяющихся фрагментов d-глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина, формируя до 25000 дисахаридов с молекулярной массой до 10 млн. Дальтон [213]. Известно, что гиалуроновая кислота играет важную роль в процессах овуляции [209], оплодотворения [122] и эмбриогенезе [74].
Гиалуроновая кислота (ГК) синтезируется ферментом гиалуронан-синтазой (HAS), расположенной на внутренней поверхности плазматической мембраны [211]. Выделяют 3 фермента HAS (HAS1, HAS2, HAS3), которые синтезируют цепочки гиалуроновой кислоты различной длины, что и определяет выполняемые ими биологические функции [221]. Функция высокомолекулярной гиалуроновой кислоты ( 1000-5000 дисахаридов) главным образом определяется ее гидродинамическими свойствами. Высокомолекулярная ГК является гидротирующей молекулой и функционирует как так называемая “гидротирующая губка”. Она подавляет клеточную дифференцировку и обладает антиангиогенными и иммунносупрессивными свойствами [221].
Однако, главным ферментом, необходимым для синтеза гиалуроновой кислоты кумулюсными клетками, является HAS2 [186]. По результатам ранее проведенных исследований была выявлена значимая корреляция между уровнем экспрессии HAS2 и синтезом гиалуроновой кислоты, а также степенью экспансии клеток кумулюса [144]. Функция гиалуроновой кислоты реализуется за счет взаимодействия с ее рецепторами, такими как CD44. HAS2, связываясь с рецептором CD44, стимулирует клеточную пролиферацию [84], индуцирует передачу внутриклеточной информации [135], а также обладает ангиогенным и иммунностимулирующим действиями [154]. Также были проведены исследования, продемонстрировавшие повышенный уровень экспрессии рецепторов CD44 в эндометрии в период имплантации [24], что свидетельствует об участии CD44 в созревании и трансформации эндометрия, способствуя прикреплению бластоцисты и дальнейшей ее инвазии в эндометрий [256].
Секреция HAS2 контролируется ооцит-секретируемым паракринным GDF9 и является необходимым ферментом для финального созревания ооцита, а также для его связывания со сперматозоидом [123]. Гиалуроновая кислота также является важным компонентом секрета маточной трубы, где, как известно, происходит оплодотворение и раннее развитие эмбрионов [87]. Вышеприведенные данные подтверждают тот факт, что продукция гиалуроновой кислоты является необходимой для нормального созревания ооцита, а также может играть важную роль в пролиферации клеток на этапе раннего эмбриогенеза [157]. По данным иследования Marei и др. в условиях сниженного синтеза гиалуроновой кислоты происходит остановка развития эмбриона до момента достижении им стадии бластоцисты [156].
Гены и белки, вовлеченные в синтез гиалуроновой кислоты и их рецептора CD44, экспрессируются клетками кумулюса различных млекопитающих, в том числе человека [96], и по данным проведенных исследований могут являться маркерами для оценки качества ооцитов и развивающихся эмбрионов [120, 127]. McKenzie и др. в своем исследовании показали, что уровень экспрессии мРНК гена HAS2 был в 6 раз выше в кумулюсных клетках ооцитов, развившихся до эмбрионов высокого качества на 3 сутки по сравнению эмбрионами низкого качества [120]. Также более поздние исследования Аdriaenssens и др., продемонстрировали, что снижение уровня экспрессии мРНК гена HАS2 коррелирует с плохим качеством ооцитов [229]. Это подтверждают результаты исследований Assidi и др., выявившими существенную взаимосвязь между уровнем экспрессии мРНК гена HАS2 и качеством ооцитов и развивающихся эмбрионов [127]. Результаты исследования Cillo и др. показали существенную взаимосвязь между уровнем экспрессии данного гена и качеством эмбрионов согласно морфологическим критериям оценки, а также продемонстрировали значимую корреляцию с показателями оплодотворения [35]. Однако по результатам исследования Anderson и др. [64] не было выявлено значимой корреляции между уровнем экспрессии мРНК гена HAS2 и частотой наступления беременности.
Ген версикан (VCAN), относящийся к семейству протеогликанов, также является одним из компонентов внеклеточного матрикса [37]. Он вовлечен в процесс клеточной адгезии, а также принимает участие в пролиферации и миграции клеток, ангиогенезе, апоптозе и играет ключевую роль в построении тканей и стабилизации белков внеклеточного матрикса [23, 227].
Данный белок по структуре разделен на 3 домена: глобулярный N-терминальный домен (G1), центральный домен (G2), где происходит присоединение гликозамингликановых цепей, и С-терминальный домен (G3) [227]. Такая доменная организация определяет широкий спектр различных клеточных взаимодействий, в том числе взаимодействие с компонентами внеклеточного матрикса за счет глобулярного N-терминального домена (гиалуроновой кислотой, коллагеном 1 типа, тенаскином и фибронектином), а также с другими белками на поверхности клеток за счет С-терминального домена (CD 44, интегрином бета 1, рецептором эпидермального фактора роста) [23, 231]. Т.о., при связывании с гиалуронаном за счет глобулярного N терминального домена, версикан принимает непосредственное участие в формировании внеклеточного матрикса, модулируя процессы клеточной пролиферации, адгезии, и миграции клеток [76, 231, 238]. При этом некоторые из данных функций приписывают определенным доменам в молекуле. Таким образом, повышение экспрессии G1 домена усиливает клеточную пролиферацию и уменьшает адгезию клеток [116]. G3 также участвует в ряде процессов, включая клеточную пролиферацию и инвазию [100, 237], а центральный домен (G2), наоборот, ответственнен за антиадгезивные свойства версикана [99]. Т.о. доменная организация версикана позволяет ему оказывать различное влияние на клеточную адгезию [76].
Общеклинические методы исследования
До проведения стимуляции суперовуляции всем пациенткам проводился сбор анамнеза, изучались данные о перенесенных инфекционных и соматических заболеваниях, а также оперативных вмешательствах по поводу генитальной и экстрагенитальной патологии. Изучались особенности менструальной функции (возраст менархе, продолжительность менструального цикла и кровотечения, болезненность и интенсивность менструального кровотечения, наличие «мажущих» выделений до и после менструации), половой функции (начало половой жизни, регулярность половых актов, методы применяемой ранее контрацепции), а также социальных характеристик – образа жизни и условий труда.
Тщательно анализировались данные о ранее перенесенных заболеваниях органов малого таза, клинических проявлениях заболеваний и методах и длительности их лечения. В случае оперативного вмешательства на органах малого таза особое внимание уделялось виду и объему проведенной операции, а также результатам гистологического исследования.
Особенно тщательно производился анализ репродуктивной функции супругов (количество беременностей как в настоящем, так и в предыдущих браках, исходы беременностей – количество медицинских абортов, неразвивающихся беременностей и самопроизвольных выкидышей, в том числе на поздних сроках, количество родов, здоровье родившихся детей и их дальнейшее развитие). Уделялось внимание течению беременностей, родов, наличию осложнений, в том числе в послеродовом периоде. Также анализировались данные о продолжительности бесплодия, выявленных причинах и эффективности проводимого ранее лечения. Особое внимание уделялось наличию в анамнезе попыток ЭКО (анализировалось их количество, схема протокола стимуляции функции яичников, количество и качество полученных ооцитов, метод их оплодотворения, количество и качество полученных эмбрионов, количество перенесенных в матку эмбрионов, исход программы). Уточнялось, проводился ли предимплантационный генетический скрининг на полученных эмбрионах, особенно в случае старшего репродуктивного возраста супружеских пар и наличия 2-х и более неудачных попыток ЭКО в анамнезе, оценивался результат проведенного исследования.
В рамках подготовки к программе ЭКО объективно оценивали общее состояние пациентки, измеряли длину и массу тела, на основании чего производили расчет ИМТ по формуле: ИМТ = масса тела/рост2 (кг/м2). Также проводилась комплексная оценка состояния органов и систем: дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем, органов пищеварения и мочевыделения для выявления возможных противопоказаний для проведения стимуляции функции яичников.
При оценке гинекологического статуса пациенток проводился осмотр наружных половых органов, а также бимануальное исследовании органов малого таза для определения размера, формы и консистенции матки, ее подвижности и болезненности при пальпации, а также наличия объемных образований органов малого таза.
В рамках подготовки к программе ЭКО на 3-5 день менструального цикла (д.м.ц.) для сравнения с нормативными показателями пациенткам проводилась оценка гормонального профиля в плазме крови: АМГ, ФСГ, ЛГ, Е2, ПРЛ, Тсв, кортизол (К), ДЭА-С, 17-ОП, СТГ, ТТГ, Т4св. На 20-22-й д.м.ц. оценивалась концентрация гормона прогестерона (П).
С целью выявления возможных противопоказаний для стимуляции суперовуляции всем пациенткам перед вступлением в протокол ЭКО проводили ультразвуковое исследование (УЗИ) органов малого таза на 5-7 д.м.ц. Исследование выполнялось с помощью ультразвукового аппарата компании «BK Medical» (Дания) с использованием трансвагинального датчика с частотой 7,5 МГц.
В процессе исследования анализировались размеры, форма и положение матки, структура миометрия, размер и структура эндометрия, объем яичников, выраженность фолликулярного аппарата, оценивалось наличие косвенных признаков перенесенного воспалительного процесса в эндометрии и яичниках.
Частота проведения ультразвукового исследования в процессе стимуляции функции яичников определялась в зависимости от выбранной схемы протокола стимуляции суперовуляции. Первое ультразвуковое исследование осуществлялось на 2-3 день менструального цикла для выбора оптимального препарата для стимуляции и его дозировки, определяемого возрастом, гормональным профилем и количеством антральных фолликулов пациентки. УЗ-контроль динамики роста фолликулов и эндометрия проводился на 5 день стимуляции функции яичников, при необходимости осуществлялась коррекция дозы применяемых препаратов. После введения антГнРГ ультразвуковой мониторинг проводился один раз в 2-3 дня с целью динамического контроля роста фолликулов и эндометрия и определения даты введения триггера овуляции.
Оценка показателей сперматогенеза производилась дважды: при предварительном обследовании в рамках подготовки к программе ЭКО и в день трансвагинальной пункции яичников (ТВП). Перед проведением исследования пациенты соблюдали предписанные рекомендации (половой покой от 3-5 дней, исключение алкоголя, перегревания (бани,сауны)). Сбор материала производился в стерильный пластмассовый контейнер. Оценка параметров эякулята производилась в соответствии с нормативами ВОЗ от 2010 г. (таблица 2) [58].
Антропометрическая характеристика пациенток
Среди экстрагенитальной патологии в исследуемых группах встречались заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как хронический гастрит или язва двенадцатиперстной кишки в стадии ремиссии, заболевания мочеполовой системы, а именно хронический пиелонефрит и хронический цистит в стадии ремиссии. Среди заболеваний гепато-биллиарной системы встречались хронический гепатит, холецистит в стадии ремиссии и желче-каменная болезнь в анамнезе. Среди заболеваний дыхательной системы отмечался хронический бронхит в стадии ремиссии, среди ЛОР-патологии – хронический тонзиллит и хронический отит в стадии ремиссии. Также наблюдалась патология щитовидной железы в виде аутоиммунного тиреоидита и гипотиреоза, медикаментозно скорректированных до начала стимуляции суперовуляции. По частоте встречаемости вышеописанной экстрагенитальной патологии пациентки в исследуемых группах между собой не отличались. При оценке наличия аллергической реакции на лекарственные препараты, данные группы между собой также не различались. Однако, при оценке наличия в анамнезе детских инфекций, таких как корь, краснуха, эпидемический паротит, скарлатина и ветряная оспа, отмечались значимые различия между исследуемыми группами (2-тест, p=0,003). В группе беременных женщин наличие детских инфекций в анамнезе наблюдалось в 95 % случаев. При отсутствии детских инфекций в анамнезе наступление беременности отмечалось в 10,5% случаев, отсутствие беременности в 89,5% случаев (рисунок 15).
В группе пациенток, проходивших программу ЭКО/ ИКСИ + ПГС, отмечались заболевания желудочно-кишечного тракта в виде хронического гастрита в стадии ремиссии, заболевания гепато-биллиарной системы, а именно хронический гепатит в стадии ремиссии, и заболевания ЛОР-органов -хронический тонзиллит в стадии ремиссии. Также наблюдалась патология щитовидной железы в виде аутоиммунного тиреоидита, медикаментозно скорректированного до начала стимуляции суперовуляции. Заболеваний дыхательной, сердечно-сосудистой и мочеполовой систем у пациенток в исследуемой группе не наблюдалось. 3.1.6. Гормональный профиль пациеток, включенных в исследование
С целью оценки функционального состояния репродуктивной и эндокринной систем всем пациенткам перед вступлением в программу ЭКО/ИКСИ производилась оценка гормонального профиля в период ранней фолликулиновой фазы (3-5 день менструального цикла (д.м.ц.)) в одном из циклов, предшествовавших стимуляции суперовуляции (таблица 13).
Принимая во внимание ненормальное распределение показателей уровня гормонов ЛГ, ПРЛ, Е2, ТТГ, Т4св, Т, АМГ и П, для анализа данных был применен непараметрический статистический критерий. На основании проведенного теста Манна-Уитни были выявлены статистически значимые различия показателя уровня тестостерона (р=0,013) в исследуемых группах. Нормативные Р – уровень значимости Группа 1(Беременные женщины)n=40 Группа 2(женщины с отсутствиембеременности) n=60 Показатель ФСГ, МЕ/л 3,0-10,0 МЕ/л 6,46±2,01 6,70±1,83 0,546 ЛГ, МЕ/л 3,0- 8,0 МЕ/л 4,6 (3,8-6,3) 4,4 (3,5-5,9) 0,725 Пролактин, мМЕ/л 120-500 мМЕ/л 327,0 (262,0-368,8) 316,5 (232,8-430,5) 0,883 Е2, пмоль/л 150-450 пмоль/л 142,0 (102,5-216,2) 157,4 (104,9-208,3) 0,891 Тестостерон, нмоль/л 1,0 -2,5 нмоль/л 1,00 (0,33-1,40) 1,30 (0,70-1,80) 0,013 Кортизол, нмоль/л 200-500 нмоль/л 380,1±203,3 370,0±146,4 0,818 ДЭА-С,мкмоль/л С ,9-11,7 мкмоль/л 5,0±2,7 5,3±3,5 0,932 СТГ,мМЕ/л 0,15-13,0мМЕ/л 2,9±4,5 1,3±2,1 0,264 ТТГ, мМЕ/л 1,0-3,0 мМЕ/л 1,45 (1,03-2,03) 1,45 (1,03-2,10) 0,578 1 Т4 св, пмоль/л 0,0-25,0 пмоль/л 14,1 (12,8-15,4) 13,6 (12,7-15,3) 0,615 17-ОП, нмоль/л 0,3-3,0 нмоль/л 2,0±1,0 1,8±1,1 0,618 АМГ, нмоль/л 1,0- 4,5 нг/мл 2,05 (1,20-3,44) 2,45 (1,41-4,13) 0,290 Прогестерон, нмоль/л 16-95 нмоль/л 24,9 (16,5-34,9) 26,3 (15,8-36,5) 0,789 данные представлены как медиана, 25 - 75 процентили, тест Манна-Уитни; данные представлены как средние ± стандартное отклонение, t-критерий Стьюдента. Учитывая нормальное распределение показателей гормонов ФСГ, ДГЭА-С, 17-ОП, К и СТГ исследуемые группы сравнивались между собой при помощи t-критерия Стьюдента для независимых выборок. Статистически значимых различий по уровню данных гормонов в плазме крови между исследуемыми группами выявлено не было (р 0,05).
В результате проведенного анализа обнаружены статистически значимые более высокие показатели уровня базального тестостерона в группе пациенток с отсутствием беременности по сравнению с группой пациенток, у которых беременность наступила (p=0,013). Однако, эти различия минимальны и находятся в пределах референсных значений (рисунок 16). отрицательно положительно Клиническая беременность
Линия в середине «ящика» представляет собой медиану (50-й процентиль), границами «ящика» служат первый и третий квартили (25-й и 75-й процентили). Концы «усов» соответствуют минимальному и максимальному значениям. Крайние точки (выбросы) - данные, выходящие за границы «усов». - p=0,013 (тест Манна-Уитни).
При анализе гормонального профиля женщин, проходивших программу ЭКО/ИКСИ + ПГС, был сделан вывод о нормальном характере распределения показателей гормонов ФСГ, АМГ, ДГЭА-С, 17-ОП, К и СТГ (основываясь на графическом анализе и достигнутом уровне значимости в тесте Шапиро-Уилка). Гормональный статус пациенток представлен в таблице 14. Особенности стимуляции суперовуляции, фолликуло- и оогенеза у пациенток в исследуемых группах Всем пациенткам, вошедшим в исследование, был проведен протокол с препаратами рФСГ и антагонистами ГнРГ. В группе женщин с наступившей беременностью продолжительность стимуляции составила 9,0 (8,5-10,0) дней, в группе с отсутствием беременности – 9,0 (8,0-11,0) дней. На основании проведенного сравнительного анализа продолжительности стимуляции, было обнаружено, что исследуемые группы по данному показателю статистически значимо между собой не различались (тест Манна-Уитни, p=0,357). Также не было выявлено статистически значимых различий между группами при оценке суммарной дозы препарата, затраченной на лечение (тест Манна-Уитни, p=0,067). В 1 группе доза препарата составила 1350,0 (1165,0-1527,5) МЕ, во 2 группе – 1350,0 (1200,0-1650,0).
Для анализа данных об особенностях проведения программы ЭКО у пациенток в исследуемых группах применяли непараметрический тест Манна-Уитни, по результатам которого были обнаружены статистически значимые различия по количеству аспирированных ооцитов с преобладанием данного показателя в группе беременных женщин (р=0,05) (рисунок 17).
Особенности стимуляции суперовуляции, фолликуло-, оогенеза и эмбриогенеза у пациенток, проходивших программу ЭКО/ИКСИ + ПГС
В ходе оценки гормонального статуса пациенток были обнаружены различия по уровню тестостерона в крови между исследуемыми группами. В группе женщин с отсутствием беременности наблюдались статистически значимые более высокие показатели уровня базального тестостерона в крови по сравнению с группой женщин с наступившей беременностью. Однако данные различия минимальны, и показатели данного гормона в обеих группах находились в пределах референсных значений.
Анализ перенесенных гинекологических заболеваний выявил статистически значимые различия с преобладанием частоты встречаемости миомы матки в группе пациенток с наступившей беременностью. Также по результатам проведенного исследования были выявлены статистически значимые различия в характере перенесенных оперативных вмешательств. В группе пациенток с наступившей беременностью в большем проценте случаев проводилась консервативная миомэктомия, что вполне объяснимо, учитывая большую частоту встречаемости миом матки у данной группы пациенток. Необходимо заметить, что в структуре перенесенных гинекологических заболеваний в обеих группах наблюдается высокая частота распространения хронического воспаления придатков матки (суммарно 35,9%), что может быть связано с относительно большим процентом включенных в исследование пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия (суммарно 32,5%).
Анализ репродуктивного анамнеза пациенток с вторичным бесплодием показал статистически значимые различия между группами по количеству эктопических беременностей с преобладанием данного показателя в группе пациенток с наступившей беременностью. Однако, при анализе этиологии бесплодия у пациенток с наличием эктопических беременностей в анамнезе преобладал трубно-перитонельный фактор (76,7%), что и объясняет большую частоту развития внематочных беременностей. Также, проводя оценку репродуктивного анамнеза пациенток в программе ЭКО/ИКСИ + ПГС, в 100% случаев у пациенток в наличием эктопических беременностей в анамнезе наблюдался трубно-перитонеальный фактор бесплодия.
В ходе проведенного исследования было выявлено, что в группе пациенток, у которых не наступила клиническая беременность, количество аспирированных ооцитов было меньше в 1,6 раз (р=0,05). При оценке раннего эмбриогенеза на следующие сутки после оплодотворения наблюдается тенденция к снижению количества полученных эмбрионов в группе женщин с отсутствием беременности (р=0,075), что можно связать с получением меньшего количества аспирированных ооцитов у данной группы пациенток.
Также в ходе данного исследования была проведена оценка наличия морфологических аномалий строения ооцита (дисморфизмов). Известно, что дисмофизмы ооцитов классифицируются на 2 группы: цитоплазматические и экстрацитоплазматические.
К цитоплазматическим дисморфизмам относят повышение гранулярности цитоплазмы, повышение вакуолизации, наличие аномальных агрегатов ГЭР, а также рефрактерных телец. Считается, что наличие данных аномалий свидетельствует о цитоплазматической незрелости клетки, что приводит к нарушению дальнейшего созревания ооцита и последующего эмбрионального развития. Действительно, по данным проводимых исследований, наличие вакуолей и рефрактерных телец в ооцитах приводит к формированию эмбрионов плохого качетва [182, 185]. Наличие агрегатов ГЭР в ооцитах также коррелирует с низким качеством эмбрионов и отсутствием наступления клинической беременности [250]. Остается спорным вопрос, оказывает ли влияние наличие гранулярности цитоплазмы на качество развивающихся эмбрионов, однако по данным ряда исследований, наличие данного дисморфизма отрицательно коррелирует с показателями наступления клинической беременности [6, 131]. При оценке зоны пеллюцида не было получено данных о влиянии данного дисморфизма на развитие эмбрионов и частоту имплантации [75].
Среди экстрацитоплазматических аномалий ооцитов выделяют: изменение ширины перивителлинового пространства и наличие в нем гранулярности, наличие аномалий первого полярного тельца, а также изменение толщины зоны пеллюцида. Несмотря на множество проводимых в данной области исследований, до сих пор остается неясным, влияют ли экстрацитоплазматические аномалии на созревание ооцита, последующее эмбриональное развитие и способность эмбриона к имплантации. По данным одних исследований изменение толщины перивителлинового пространства и наличия дебриса в нем не влияет на развитие эмбриона и его способность к имплантации [6]. Это противоречит данным исследования Chamayou и др., продемострировавших, что наличие данной аномалии ооцитов коррелируют с развитием эмбрионов низкого качества на 5-е сутки культивирования, однако не влияют на частоту имплантации и показатель наступления клинических беременностей [161]. Также ранее проведенные исследования продемонстрировали более низкую частоту имплантации и развития клинических беременностей при переносе эмбрионов, развившихся от ооцитов с увеличенным перивителлиновым пространством и наличием в нем дебриса [60]. По данным проведенного исследовании не было выявлено взаимосвязи между наличием исследуемых дисформизмов и качеством эмбрионов согласно морфологическим критериям оценки (2-тест, p=0,689).
Также не было выявлено взаимосвязи между наличием любого из исследуемых дисморфизмов и показателем наступления беременности (2-тест, p=0,451). Однако, было выявлено, что наличие 2 и более дисморфизмов ооцитов у пациенток ассоциировано с низкой частотой наступления беременности (2-тест, p=0,005). Ассоциации наличия 2 и более дисморфизмов ооцитов у пациенток с качеством эмбрионов на 5 сутки культивирования также выявлено не было (2-тест, p=0,411).