Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Полиморфизм генов, влияющих на имплантацию эмбриона и роль витамина d в исходах программ вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) 13
1.1 Эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий при переносе криоконсервированных/размороженных эмбрионов в цикле без стимуляции по сравнению с переносом нативных эмбрионов в стимулированном цикле 14
1.2 Имплантация эмбриона и полиморфизм генов в программах вспомогательных репродуктивных технологий .17
1.3 Физиологическая роль и метаболизм витамина D 25
1.4 Генетически обусловленные особенности обмена витамина D .29
1.5 Витамин D и маркеры овариального резерва 31
1.6 Витамин D и исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий 35
1.7 Целесообразность приема витамина D перед программой экстракорпорального оплодотворения 40
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 43
2.1 Материал исследования 43
2.2 Дизайн исследования .44
2.3 Методы исследования
2.3.1 Общеклинические методы исследования .51
2.3.2 Гормональное исследование 52
2.3.3 Ультразвуковое исследование органов малого таза 54
2.3.4 Спермиологическое исследование эякулята 54
2.3.5 Специальные методы исследования 55
2.3.6 Протокол стимуляции функции яичников 58
2.3.7 Трансвагинальная пункция яичников 59
2.3.8 Метод оплодотворения и культивирования дробящихся эмбрионов in vitro 60
2.3.9 Перенос эмбрионов в полость матки
2.3.10 Поддержка лютеиновой фазы и посттрансферного периода 61
2.3.11 Диагностика наступления беременности 62
2.4 Статистический анализ полученных данных .62
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований .64
3.1. Клинико-анамнестическая характеристика пациенток, включенных в
исследование 65
3.1.1. Возрастная характеристика пациенток 65
3.1.2. Антропометрическая характеристика пациенток .68
3.1.3. Характеристика менструальной функции пациенток 70
3.1.4. Репродуктивный анамнез пациенток .73
3.1.5. Характеристика женщин по перенесенным гинекологическим заболеваниям и оперативным вмешательствам в анамнезе 79
3.1.6. Гормональный профиль пациенток, включенных в исследование 3.2. Ассоциация полиморфизма генов с частотой наступления беременности в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов 92
3.3. Ассоциация уровня витамина D в крови с особенностями фолликуло-, оогенеза и эмбриогенеза у пациенток в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов .101 3.4. Ассоциация уровня витамина D в крови с показателями раннего эмбриогенеза и исходами лечения у пациенток в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов 110
3.5. Ассоциация полиморфизма исследуемых генов c уровнем витамина D в крови в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов 117
3.6. Ассоциация полиморфизма гена рецептора витамина D (VDR) c эмбриологическими показателями и частотой наступления беременности в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов 121
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов .125
Заключение 142
Выводы 144
Практические рекомендации 146
Список сокращений .147
Список литературы
- Имплантация эмбриона и полиморфизм генов в программах вспомогательных репродуктивных технологий
- Методы исследования
- Антропометрическая характеристика пациенток
- Ассоциация уровня витамина D в крови с показателями раннего эмбриогенеза и исходами лечения у пациенток в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов
Имплантация эмбриона и полиморфизм генов в программах вспомогательных репродуктивных технологий
Имеются исследования, показывающие влияние комбинаций полиморфизма генов PAI и VEGF на неудачи имплантации в программах ВРТ [4]. Так, в исследовании, проведенном Goodman et al. (2009), при сравнении частоты встречаемости генотипов 4G/4G PAI-1 и 1154 A/A VEGFА у пациенток в программе ЭКО, авторами был сделан вывод о том, что среди пациенток, у которых имплантация эмбриона не наступала, выше процент гомозиготных генотипов, частота встречаемости такого полиморфизма генов, как PAI-1 4G/4G составила 36%, VEGFА 1154 A/A – 19% (р 0,05) [76]. Генотип 1154 А/А гена VEGFА обеспечивает низкую экспрессию белка VEGF и, следовательно, приводит к уменьшению ангиогенеза, инвазии цитотрофобласта, что, в конечном счете, приводит к неудачам имплантации [76].
Исследование, проведенное R. Boudjenah et al. (2014) была продемонстрировало ассоциацию полиморфизма генов VEGF и TNF с частотой имплантации эмбриона как комбинации генов, так и в по отдельности [4]. По отдельности полиморфизм генов VEGF (+405G C) и TNF- (-308A G) оказывает влияние на оплодотворение, имплантацию эмбриона и показатели беременности. Помимо того, сочетание генотипов G/G VEGF +405 и А/А или А/G TNF-308 значительно чаще встречалось у женщин с высокой частотой имплантации эмбриона. В противоположность этому, сочетание генотипов С/С VEGF +405 и G/G TNF-308 было ассоциировано с низкой частотой имплантации эмбриона у пациенток в программах ЭКО/ИКСИ [34].
Авторами был сделан вывод, что данные гены и их комбинации могут быть предикторами успешной имплантации эмбриона и могут помочь определять популяции, в которых следует рекомендовать перенос одного эмбриона (или, наоборот, необходим перенос 2-х эмбрионов для наступления беременности) [34]. Тем не менее, механизм, лежащий в основе влияния полиморфизма этих генов на имплантацию эмбриона еще предстоит определить, и выявленные ассоциации должны быть подтверждены в более широких исследованиях [4].
Таким образом, несмотря на присутствующие разногласия во взглядах исследователей на проблемы репродукции, бесспорным является тот факт, что будущая перспектива повышения частоты имплантации, и как следствие, эффективности программ ВРТ, заключается в необходимости учитывать совокупность клинических, гормональных и генетических маркеров.
Взаимодополняющая стратегия должна включать в себя изучение генетических особенностей, оказывающих определенное влияние на репродуктивную систему, в частности, на имплантацию эмбриона [74]. В то же время, нет оснований ожидать появления одного достоверного маркера, а научный поиск должен быть направлен также в сторону изучения ген-средовых и ген-генных взаимодействий. Использование биоинформационных подходов и математического моделирования открывает большие перспективы для создания комплексных многофакторных прогностических алгоритмов [24].
Исследования, проводимые до настоящего времени, не являются окончательными, а результаты остаются противоречивыми. Исходя из вышесказанного, актуальным является исследование полиморфизма генов, влияющих на имплантацию эмбриона в циклах ВРТ и поиск значимых молекулярно-генетических маркеров для дальнейшей разработки алгоритма и показаний непосредственно для переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов в нестимулированном цикле. Это позволит снизить моральную, экономическую, лекарственную нагрузку и повысить эффективность программ ВРТ у определенного контингента больных с бесплодием. 1.3 Физиологическая роль и метаболизм витамина D
По данным имеющейся литературы, актуальным является исследование влияния витамина D, который обладает множеством фундаментальных биологических функций, среди которых важную роль отводят регуляции фертильности [95, 126]. Исследования последних лет показали, что уровень витамина D в сыворотке крови коррелирует с показателями качества ооцитов [20, 111], овариальным резервом [63, 89, 107, 138, 139, 144, 158], развитием эмбрионов [52, 142], частотой наступления беременности [20, 41, 45, 52, 88, 11, 121, 125, 142, 150] и рождения живых детей [25, 56, 77, 99, 100, 102] в программах ВРТ.
Витамин D является стероидным гормоном, который синтезируется в основном в коже под воздействием ультрафиолетовых лучей, а также поступает в организм человека с пищей (10-20%) [40, 140]. Витамин D превращается в 25-гидроксивитамин D3 (25ОН-D3) под воздействием 25-гидроксилазы в печени. Циркулируя в крови 25-гидроксивитамин D под воздействием 1а-гидроксилазы в почках преобразуется в активную форму – 1,25-дигидроксивитамин D3 (1,25(OH)2D3). Почечный фермент 1а-гидроксилаза встречается и в других органах, таких как яичники, головной мозг, молочные железы, предстательная железа и толстый кишечник, тем самым обеспечивая местный синтез активной формы витамина D (рисунок 1) [78].
Методы исследования
Во всех полученных группах исследовались эмбриологические показатели: - количество и качество полученных ооцитов - количество полученных эмбрионов (морул, бластоцист) - качество полученных эмбрионов (класс A, B, C) Полученные ооциты классифицировались по степени зрелости согласно критериям, представленным в работе K. Elder (Кембридж) [18]: - GV (germinal vesicle, зародышевый пузырек) – окружающие клетки плотно расположены вокруг ооцита; присутствует большое ядро; такой ооцит находится на стадии профазы первого мейотического деления; полярное тельце не сформировано; - МI (незрелый) – ооцит окружен плотно организованным слоем клеток лучистого венца, cumulus незначительно увеличен; такой ооцит находится на стадии метафазы первого деления мейоза; полярное тельце еще не сформировано; - МII (преовуляторный, зрелый) – клетки лучистого венца все еще окружают ооцит, но не имеют радиальной структуры, cumulus разросшийся, имеет клеточную структуру; одно полярное тельце уже выделено; ооцит находится на стадии метафазы второго деления мейоза; этот уровень созревания подходит для успешного оплодотворения; - Очень зрелый – ооцит часто визуализируется в виде бледного шара, присутствует небольшое количество клеток лучистого венца, отделенного от яйцеклетки; cumulus хорошо различим, имеет различимую клеточную структуру; полярное тельце хорошо видно; - Лютеинизированный – ооцит бледный, часто трудноразличим; вокруг ооцита cumulus образуют скопления, становится желатинозной массой; такие яйцеклетки обладают низкой фертильностью, результаты инсеминации невысоки.
Эмбрионы классифицировались по морфологическим критериям на 5-е сутки в соответствии с классификацией, принятой Istanbul consensus workshop on embryo assessment (ESHRE, 2011) («модифицированная» классификация D. Gardner) [132]: Внутренняя клеточная масса I класс (А) – хорошо различима, содержит много компактно расположенных, плотно упакованных клеток; II класс (В) – хорошо различима, но имеет незначительные дефекты (небольшой объем, неплотно упакована, мало клеток); III класс (С) – трудно различима, содержит всего несколько клеток. Трофэктодерма I класс (А) – хорошо организована, многоклеточная, формирует плотный эпителий; II класс (В) – содержит малое количество неравномерно распределенных клеток; III класс (С) – незначительное количество клеток. 2.3 Методы исследования Перед началом программы ВРТ всем пациенткам было проведено полное клинико-лабораторное обследование в соответствии с приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации № 107н "О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению" от 2013г. Обследование проводилось в амбулаторных условиях по месту жительства пациентов или в ФГБУ «НЦАГиП им.В.И. Кулакова» МЗ РФ. № Дата Даные 1 Анализ крови на ВИЧ, HBsAg, HCV, RW Х 2 Группа крови, Rh-фактор Х 3 Клинический анализ крови Х 4 Биохимический анализ крови Х 5 Общий анализ мочи Х 6 Коагулограмма Х 7 Мазок на степень чистоты из влагалища Х 8 ИППП Х 9 Расширенная кольпоскопия Х 10 Цитологическое исследование шейки матки Х 11 IgG, IgM к ВПГ, ЦМВ, краснухе, токсоплазме в крови Х 12 Кариотипирование Х 13 Спермограмма Х 14 Гормоны крови Х 15 УЗИ молочных желез Х 16 УЗИ щитовидной железы Х 17 Консультация терапевта Х 18 Флюорография легких Х 19 ЭКГ Х 20 Генотипирование Х 21 Уровень 25(ОН) D в сыворотке крови X 22 Количество полученных ооцитов Х 23 Оценка качества ооцитов Х 24 Оценка качества эмбрионов Х Х 25 Перенос эмбрионов Х 26 Криоконсервация эмбрионов Х 27 ХГЧ в крови Х
УЗИ органов малого таза Х Х Х 2.3.1 Общеклинические методы исследования Производился сбор анамнеза пациенток, изучался наследственный фактор, аллергоанамнез, перенесенные заболевания, профессиональные вредности, уточнялись особенности менструальной функции (возраст менархе, регулярность, продолжительность цикла, характер менструаций), половой функции (возраст начала половой жизни, количество браков, половых партнеров, методы контрацепции). Тщательно производился сбор анамнестических данных о репродуктивной функции пациенток (количество беременностей, наступивших естественным путем, срочных и преждевременных родов, абортов, самопроизвольных выкидышей, неразвивающихся, внематочных беременностей, наличие осложненных беременностей и родов, наличие живых детей и их развитие), уточнялось, наступали беременности с настоящим или иным половым партнером. Отмечались перенесенные гинекологические заболевания, оперативные вмешательства на половых органах (характер, объем, выполненной операции, течение послеоперационного периода, результаты гистологических исследований). Подробно выяснялась история бесплодия, причины, продолжительность, методы и эффективность проводимого лечения. Особое внимание уделялось ранее проведенным программам ВРТ (дата и место проведения, метод, схема протокола стимуляции функции яичников, количество фолликулов, полученных ооцитов, эмбрионов, исход программы).
Объективно оценивали такие параметры, как общее состояние пациентки, тип телосложения, производили расчет индекса массы тела (ИМТ) по формуле: ИМТ = масса тела (кг)/рост2 (м2), давали оценку состояния систем органов дыхания, кровообращения, пищеварения, мочевыделения, нервной системы.
При оценке гинекологического статуса пациенток проводился осмотр наружных половых органов, осмотр влагалища и шейки матки в зеркалах, бимануальное исследование, в ходе которого определяли общее состояние влагалища, шейки матки, тела матки, придатков, тазовой брюшины, околоматочной клетчатки, выявляли наличие объемных образований органов малого таза.
Антропометрическая характеристика пациенток
Соответственно поставленной цели и задачам исследования была обследована 201 пациентка, обратившаяся с целью проведения программы ЭКО и ПЭ по поводу бесплодия, обусловленного трубно-перитонеальным фактором и/или мужским фактором (при отсутствии выраженной патозооспермии), соответствовавшая критериям включения/исключения (глава 2 «Материал и методы»). Предварительное обследование проводилось по общепринятой схеме перед началом проведения программы ВРТ. У всех пациенток отсутствовали противопоказания для проведения программы ЭКО. Все пациентки были ознакомлены с целью и поставленными задачами исследования, подписали информированное согласие.
Исследование проводилось в два этапа. На первом этапе пациентки были разделены на 2 группы в зависимости от метода лечения бесплодия: группа 1 -201 пациентка, проходившая лечение со стимуляцией суперовуляции и переносом нативных эмбрионов в этом цикле, группа 2 - 111 пациенток, у которых беременность не наступила в стимулированном цикле и лечение продолжилось методом переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов в последующем естественном цикле.
На втором этапе пациентки были разделены на 2 стадии в зависимости от того, в каком цикле и когда измеряли витамин D в сыворотке крови (стадия А – в стимулированном цикле с переносом нативных эмбрионов в день проведения трансвагинальной пункции яичников, стадия В – в естественном цикле с переносом криоконсервированных/размороженных эмбрионов в день проведения переноса эмбриона). В зависимости от уровня витамина D на каждой стадии пациентки были разделены на 3 группы: I группа - с дефицитом витамина D в крови ( 10 нг/мл), II группа - с недостаточностью витамина D в крови (10 и 30 нг/мл), III группа - с нормальным уровнем витамина D в крови (30-100 нг/мл). С целью минимизации систематической ошибки исследования для выявления возможных конфаундеров и их дальнейшего исключения была изучена клинико-анамнестическая характеристика обследуемых пациенток. I этап. Возраст пациенток был известен на момент начала лечения (таблица 5). Таблица 5 Возрастная характеристика пациенток, включенных в исследование Показатель Группа 1 (стимулированный цикл с переносом нативных эмбрионов) (n=201) Группа 2(цикл переносакриоконсервированных/размороженных эмбрионов)(n=111) Минимум 20,0 20,0 Максимум 37,0 37,0 Медиана 31,0 31,0 Среднее арифметическое 31,1 31,1 Тест Колмогорова-Смирнова (р) 0,0001 0,017 На мрианское основании критерия цептор Колмогорова-Смирнова выявлено, втамин что возраст настояще пациенток в исследуемых бета группах не подчинялся преноса закону нормального вмсте распределения. Тест Манна-Уитни ughton не выявил статистически gnetic значимых различий пгстерон по возрасту между ndreas исследуемыми группами (таблица 5). Таким процентиль образом, средний леток возраст пациенток прдставленых составил 31 лет (интерквартильный интервал 29 – 34 лет) и 31 лет (интерквартильный интервал 29,5 – 35 лет) foki в группах 1 и 2, прносе соответственно (p=0,85). II сывротке этап. Возраст день пациенток, включенных foki в исследование на втором полученых этапе, был ыявлено известен на момент оральным начала проведения мплнтаци программы ЭКО/ИКСИ сдартное и ПЭ (таблицы дефцита 6 и 7).
Возрастная резульаты характеристика пациенток, mternal включенных в исследование (стимулированный провдени цикл с переносом vidnce нативных эмбрионов) Показатель Группа IА (дефицит 25-ОН D) (n=23) Группа IIА(недостаточность25-OH D)(n=98) Группа IIIА(норма 25-OH D)(n=21) Минимум 20,0 24,0 27,0 Максимум 36,0 36,0 37,0 Медиана 30,0 31,0 31,5 Р25 процентиль 27,3 29,0 28,3 Р75 процентиль 34,8 34,0 34,8 Тест Шапиро – Уилка (р) 0,151 0,004 0,228 На погрмах основании проведенного прводилась анализа распределения хршего пациенток, включенных групы в исследование в стимулированном втмина цикле, в зависимости time от возрастных характеристик, кости выявленных различий между група показателями медиан, група достигнутого уровня данго значимости (тест нализе Шапиро-Уилка) отмечено, aing что данные ferlzation распределены отлично погрмах от нормального. Для gfs дальнейшего анализа значмости использовались непараметрические взмжно статистические методы.
Медиана групе возраста пациенток IA группы условия составила 30 лет (интерквартильный интервал 27,3 – 34,8 лет), рисунок в группе IIA – 31 год (интерквартильный интервал 29 - 34 года), яичн в группе IIIA – 31,5 лет (интерквартильный интервал 28,3 – 34,8 лет). Тест улчивает Крускала-Уоллиса не выявил разлчия статистически значимых пациенток различий в возрасте очень между исследуемыми даже группами (р=0,589).
На нъекци основании критерия стадия Шапиро-Уилка было сязывающий обнаружено, что рстика возраст пациенток в исследуемых дефцитом группах в циклах методы переноса криоконсервированных/размороженных лбатори эмбрионов подчиняется закону были нормального распределения. Проведенный групе анализ возрастных metab характеристик не выявил совани статистически значимых спльзования различий в этих груп группах (таблица 7). Таким полученых образом, средний пациенток возраст пациенток кчества составил 32,4±3,9 лет, 31,7±2,7 лет и 30,4±3,6 лет прводилась в группах IВ, IIB провдении и эмбриона IIIB, соответственно (p=0,280, ANOVA). 3.1.2 Антропометрическая характеристика взмжности пациенток
Все пациентки, торчивые включенные в исследуемые iflunce группы, имели група женский тип сывротке телосложения, правильно аступило развитые вторичные медиаторы половые признаки. I ranomized этап. При значимые анализе роста, веса и ИМТ в нализе группах использовались непараметрические рза статистические методы. Рост уровень пациенток в 1 группе фактор составил 165 (162 -168) см следовани и 166 (162-168) см пренсом в группе 2, вес втмина пациенток в группе 1 составил 60 (56-67) кг сывротке и 60 (56-68) кг в группе 2, дефцитом ИМТ составил 22,1 (20,7-24,1) кг/м2 и 22,2 (20,9-24,1) кг/м2 в еральном группах 1 и 2, соответственно. Тест germinal Манна Уитни лачские не выявил статистически пациенток значимых различий глову по показателям роста (р=0,937), умьшние веса (р=0,851) и здровых ИМТ (р=0,735) между исследуемыми плорфизм группами (таблица 8).
Ассоциация уровня витамина D в крови с показателями раннего эмбриогенеза и исходами лечения у пациенток в стимулированных циклах с переносом нативных эмбрионов и циклах переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов
При попарном этапе сравнении групп foki было выявлено оценка увеличение количества ртическом эмбрионов хорошего качества в плорфизм группе с нормой група витамина D в крови в 2 раза по payne сравнению с группой пользу дефицита витамина D и biol в 1,5 раза уровнем по сравнению с группой исходя недостаточности витамина D оесвуют (тест слдование Манна-Уитни, р=0,011 и было р=0,032, соответственно). Также концы было выявлено vtamin увеличение в 1,7 раза если количества эмбрионов удовлетворительного качества медцина в plyzos группе с нормой нализе витамина D в крови цепторам по сравнению с группой рома дефицита и hrmone недостаточности витамина D в крови (тест дефцитом Манна-Уитни, р=0,045 и после р=0,015, соответственно) (рисунок 18).
Количество время остановившихся в развитии пациенток эмбрионов на 5 сутки ceptor культивирования в группе летками с нормой 25-ОН D в lczmanski крови было в 2,3 раза спрматогнез меньше по eprod сравнению с группой повышает дефицита 25-OН D и в 1,8 раза vrfcation меньше по сравнению шечник с группой недостаточности 25 -OН роль D в крови (тест Манна-Уитни, обще р=0,001 и р=0,007, эфект соответственно) (рисунок 19).
При tehrani сравнении группы пациенток с коагулция дефицитом 25-OН D в крови среды с группой пациенток циклах с недостаточностью 25-OН нализ D в крови статистически даным значимых различий гентипом при оценке рдилось количества эмбрионов цикле хорошего и удовлетворительного гентипов качества, а также крови остановившихся в развитии рекомбиатный эмбрионов на 5 сутки wner культивирования выявлено лнической не было (тест Манна-Уитни, покзателями р 0,05) (рисунки 18, 19). пациенток исследуемых vegf групп Линия в середине «ящика» представляет погрес собой медиану (50-й prvalnce процентиль), границами «ящика» служат тблица первый и третий также квартили (25-й вмание и 75-й процентили). Концы «усов» соответствуют wngfield минимальному и максимальному чсота значениям. Крайние чиается точки (выбросы) – данные, выходящие типа за границы «усов». блогческих – p=0,001 (тест група Манна-Уитни), – p=0,007 (тест групы Манна-Уитни).
На основании втамин пр оведенного анализа групой было показано, ислдуемых что количество криоконсервированных крови эмбрионов было больше в группе потенцила пациенток с нормой 25-OН даных D в крови в 2,9 раза по пролктина сравнению с группой явилось пациенток с дефицитом рмальнго 25-OН нлогчские D и в 1,7 раза role больше по сравнению исходя с группой пациенток рза с недостаточностью 25-OН D (тест плорфизм Манна-Уитни, р=0,001 и бохческим р=0,011, соответственно) (рисунок 20). группах Линия в середине «ящика» представляет жещин собой медиану (50-й втмина процентиль), границами «ящика» служат преноса первый и третий bhari квартили (25-й влется и 75-й процентили). Концы «усов» соответствуют ормальный минимальному и максимальному цикле значениям. Крайние стмуляци точки (выбросы) – данные, выходящие рцепивность за границы «усов». групе – p=0,001 (тест незавсимых Манна-Уитни), – p=0,011 (тест сьюдента Манна-Уитни).
Согласно проведенному ROC-анализу (рисунок 21), ральному количество эмбрионов хорошего мплнтаци качества на 5-е соация сутки культивирования является вутибрюшное предиктором наступления utcomes беременности как групе в эфекты стимулированных циклах с методы переносом нативных таблиц эмбрионов, так срдне и в циклах переноса стадия криоконсервированных/размороженных эмбрионов. Площадь даные под кривой составила 0,64 (0,53-0,74). При групе критическом значении, брмености равном 4 эмбрионам прзводилась хорошего качества, rospctive чувствительность и специфичность генотип модели составили 23% и 94%, также соответственно.
ROC-анализ доли зависимости частоты нлиза наступления беременности от условия количества эмбрионов стадия хорошего качества плорфизма на 5-е сутки завмости культивирования Количество эмбрионов damson хорошего качества рисунок на 5-е сутки прдленго культивирования, полученных всех в предыдущих циклах плорфизм со стимуляцией также nova является одним из предикторов наступления acvity беременности в циклах тановшиеся переноса криоконсервированных/размороженных chritakos эмбрионов (рисунок 22). Частота беременности в криоцикле 80% - 60% - 40% - 20% - 0% - --- — - — у = -0,0096х + 0,1931х R = 0,48 Pregnancy_CrioПолиномиальная (Pregnancy_Crio) стой наступления беременности mrca в циклах переноса криоконсервированных/размороженных атчески эмбрионов (%) в эмбринов зависимости от количества 109
Рисунок 21. ROC-анализ доли зависимости частоты нлиза наступления беременности от условия количества эмбрионов стадия хорошего качества плорфизма на 5-е сутки завмости культивирования Количество эмбрионов damson хорошего качества рисунок на 5-е сутки прдленго культивирования, полученных всех в предыдущих циклах плорфизм со стимуляцией также nova является одним из предикторов наступления acvity беременности в циклах тановшиеся переноса криоконсервированных/размороженных chritakos эмбрионов (рисунок 22). Частота беременности в криоцикле 80% - 60% - 40% - 20% - 0% - --- — - — у = -0,0096х + 0,1931х R = 0,48 Pregnancy_CrioПолиномиальная (Pregnancy_Crio) стой наступления беременности mrca в циклах переноса криоконсервированных/размороженных атчески эмбрионов (%) в эмбринов зависимости от количества групе эмбрионов хорошего пациенток качества
Ассоциация время уровня витамина D в embryo крови с показателями кчества раннего эмбриогенеза эмбринов и исходами лечения у прводилась пациенток в стимулированных день циклах с переносом moecular нативных эмбрионов и интервал циклах переноса групах криконсервированных/размороженных эмбрионов Для взмжно определения влияния крови уровня витамина D на провдени исходы лечения метода в программах ВРТ сывротке была проведена боле оценка раннего кторых эмбриогенеза, частоты дельности наступления биохимической и кторых клинической беременности, gren частоты ранних эмбринов репродуктивных потерь ислдумые и живорождения в различных парнго группах пациентов.
Всем атчески пациенткам в стимулированных норма циклах с переносом moecular нативных эмбрионов, включенным в опрдлние исследование, была проведена групе оценка параметров раннего эмбриогенеза и даные исходов лечения в сравени программе ВРТ, циклах основные характеристики iflunce которой представлены совани в таблице 27.
На тблица следующие сутки после banchi оплодотворения в группе дефицита 25-OН tepros D в крови этапе было получено 132 эмбриона с зрботан нормальным оплодотворением, грмона в группе недостаточности 25-OН D в крови высокие – 572 эмбриона, коагулция в группе нормы 25-OН foicular D в крови – 145 эмбрионов. кторым На родами основании непараметрического групе теста Краскела-Уоллиса статистически сравени значимых различий по bloise среднему числу пловых эмбрионов в исследуемых пловых группах обнаружено dena не было (р=0,199). При рцепивность этом следует fshr отметить, что также процент имплантации крови в исследуемых группах уровень не различался.