Введение к работе
Актуальность теш. Современные метода биотехнологии,позволяющие получать эмбрионы крупного рогатого сісота для трансплантации,а также для целей клеточной и генетической инженерия,были разработаны благодаря научным достижениям в области исследования механизмов регуляции фолликулогэкеза и дайоза оогатов у' млзкопитаэдих. Однако значительная вариабельность результатов экспериментов по оплодотворению яйцеклеток, созревших in vitro, обусловливает необходимость более углубленного изучения этих
. провесов, в том числе на молекулярно-клеточном уровне.
В результате многочисленных исследований было показано,что пролактин (ПРЛ) наряду с фолликул оотимулируюшим и лютеинизиру-ющим гормонами выполняет у млекопитающих гонадотропную функ-див .участвуя в регуляция фолликуле- и оогенеза (Никитин, Воробьева,1988; Воробьева,1990). Механизм действия ПРЛ на половые я соматические клетки фолликулов сложен и до сих пор мало понятен. Особый интерес представляет влияние этого гормона на мейоз п фолликулогекез у коров,поскольку одной из причин пони-
жения фергалькооги во время лактации у некоторых групп млекопитающих может олужйть повышение секреций ПРЛ в этот период (Карш и др.,1987). Учитывая тот фзкт.что фолликулогепеэ у жвачных имеет существенные отличия от такового у большинства изученных млекопитающих (Driancotirt, 1991). гокадотропная функция ПРЛ у коров является предметом научного исследования.
Цель и задачи исследований. Цель настоящего исследования -изучить роль ПРЛ в фолликулогенезе в завершении мейоза ооцп-тов у коров. Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:
изучить связывание ПРЛ с клетками гранулезы: в динамике фолликулоге.неза;
определить концентрацию ПРЛ в жидкости нормальных и атре-тических антральных фолликулов различного диаметра;
охарактеризовать митогенкый эффект ПРЛ в культурах клеток гранулезы из разных по размеру фолликулов;
изучить, эффект ПРЛ на содержание мембраносвязанного кальция в овариалышх клетках;.
исследовать влияние ПРЛ на мейоз,ооцитов, их оплодотворение и развитие эмбрионов in vitro. ''.'.' ,-"..
Научная новизна. Показано наличие специфического связывания
бычьего IJPJI (6ПРЛ) с клетками гранулезы коров и определены значения констант диссоциации ПРЛ-рецвпторнкх комплексов и концентрации рецепторов на клетках гранулезн о различной степенью дифференцировки. Обнаружено снижение содержания ПРЛ в жидкости атретических антральных фолликулов диаметром 10-20мм по сравнению с'нормальными фолликулами того же диаметра.'Выявлен стимулирующий, эффект ПРЛ на пролиферативнуга активность клеток гранулезы,зависящий от уровня дифференцировки клеток. Определены оптимальные концентрации гормона,при которых он благоприятно влияет на созревание ооцитов. Показано снижение содержания мамбраносвязанного' кальция в половых и соматичеа-ких фолликулярных клетках коров при воздействии 6ПРЛ.
Практическая значимость. Полученный экспериментальные дан-' ные могут быть использованы для дальнейших исследований меха- . низмов регуляции фолликулогенеза и мейоза ооцитов коров, что будет способствовать совершенствованию биотехнологии внефол-ликулярного дозревания ооцитов и их оплодотворения вне организма.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на отчетных аесоиях аспирантов (ВНИИГЕЕ, 1993- -1994), на.1-й Международной научной конференции молодых ученых и специалистов (Киев,1994),на Международном симпозиуме "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении, геномов сельскохозяйственных животных".(Санкт-Петербург,1994) ,на 1-м оъезде ВОГиС.(Саратов, 1994). . .
Публикации..По теме исследований опубликовано 7 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из вве
дения, обзора литературы, материала и. методов исследований,
результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и.
предложений, списка использованной литература, вхлючапцего
194 источника, в т.ч. 151 иное транши. Работа изложена на \ЪЪ
страницах машинописного текста и содержит 16 таблиц, 5 рисун
ков, -/'/микрофотографий. ' ...' ,