Введение к работе
Актуальность теми. Одной из важнейших задач при осуществлении генетический трансформации растений является создание удобных векторов длн введения и последующей экспрессии чужеродных генов в растительных клетках. Возможность использования того или иного вектора онределлется методом генетической трансформации, видом растения,, требованиями к акспрессии вводимого гена, способом селекции трансгенных растений и т. д. Поатому число разнообразных векторов постоянно увеличивается. Получены векторы на основе ДНК-содержащих [Be Zoeten et al., 1989; Ward et al., 1988J и FHK- содержащих [Cakamatsu et al., 1987] вирусов, бактериальных плазмид, предназначенные для непосредственного введения в протопласты растений [Fromm et al., 1986] и для генетической трансформации с помощьв агробактерий fHorsch et al., 1985]. Для обеспечения експрессии чужеродных генов в гетерологичном генетическом окружении используются различные промоторы: конститутивные и индуцируемые, ткане специфичные и тканенезависимые, сильные и слабые и т. д. Расширяется перечень селективных маркеров, используемых в векторах.
Однако, по смотря на многочисленность появившихся в последнее время растительных векторов, многие из них недоступны из-за ограничений, связашшх с их коммерческим использованием, другие же предназначены для решения узких специальных задач. Поэтому по-прежнему актуальной остается проблема создания универсальных векторов с широким спектром применения. Цель и задами исследования. Делыо данной работы являлось
создание новой векторной системы, осуществление с ее помощью трансформации растений табака и картофеля, и использование полученного вектора для введения в вти растешхя гена рекомбинант— ного ci-интерферона человека. .
Научная новизна и практическая ценность работы. Сконструирован новый аксирессионный вектор, позволяющий встраивать различные гены ыод контроль сильного конститутивного промотора 35S из генома вируса мозаика цветной капусты [Ргоши et al., 198б]. Полученный вектор несет селективный маркер устойчивости к канамицину, что дает возможность вести прямой отбор трансгенных растений, а такли биохимическим методом определять наличие гена неомицднфосфотрацсфэраэы [Relss et al., 1984]. Включение и вектор правого и левого окаймляющих Т-ДНК повторов размером 20 ші обеспечивает возможность его использования с разными типами їі-плазмид агробактерий, что не исключает применение данного вектора для трансформации протопластов in vitro. Впервые осуществлено введение гена рекомбинантного а-интерферо-на человека в растения табака и картофеля и показана его акс-нрессия в трансгенных растениях.
Полученные результаты могут быть использованы для конструирования устойчивых к вирусным заболеваниям важных сельскохозяйст-венных культур, в частности, картофеля.
Апробация работы. Результаты- работы были представлены на У Международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнодогия" (Новосибирск, 1988), YII Всесоюзном симпозиуме "Молекулярные механизмы генетических процессов" (Москва, 1990), Симпозиуме Индийского общества генетиков и селекционеров рас-' тений (Ньм Дели, 1991).
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 57 страницах машинописного текста, содержит 17 рисунков и 146 назнаний библиографии.